全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员源袁圆愿渊怨冤院员缘源员 耀 员缘源愿允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园员鄄员缘摇 接受日期院圆园员源鄄园源鄄员园
基金项目院国家自然科学基金渊猿员员苑员愿圆猿冤袁农业部公益性行业科研专项项目 渊圆园园怨园猿园源园 原 园猿袁圆园员员园猿园员愿冤袁沈阳农业大学天柱山学者
作者简介院田成丽袁女袁主要从事植物病害生物防治研究遥 耘鄄皂葬蚤造院贼蚤葬灶糟澡藻灶早造蚤择择岳 员远猿援 糟燥皂
朱峰袁男袁主要从事植物病害生物防治研究遥 耘鄄皂葬蚤造院扎澡怎枣藻灶早园苑圆远岳 员远猿援 糟燥皂遥 同为第一作者遥
通讯作者院陈立杰袁女袁教授袁主要从事植物病理学和线虫学研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 悦澡藻灶造蚤躁蚤藻园圆员园岳 员远猿援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员源冤园怨鄄员缘源员鄄园愿
链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿菌株的变异分析及对根结
线虫活性影响
田成丽员 摇 朱摇 峰员 摇 陈井生员袁圆 摇 段玉玺员 摇 陈立杰员
渊员 沈阳农业大学植物保护学院 辕北方线虫研究所袁辽宁 沈阳摇 员员园员远员曰 圆黑龙江省农业科学院大庆分院袁黑龙江 大庆摇 员远猿猿员远冤
摘摇 要院为明确委内瑞拉链霉菌渊杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 增藻灶藻扎怎藻造葬藻冤自发突变对南方根结线虫活性的影响遥 本研究
利用继代培养法选育 杂灶藻葬圆缘猿 突变株袁对形态分化及相关基因进行分析袁并测其代谢产物的生物活性遥
获得 远 株菌落形态差异大的自发突变菌株袁其中不产色素的 猿 株突变菌株 杂灶藻葬圆缘猿 原 郧尧杂灶藻葬圆缘猿 原 月 和
杂灶藻葬圆缘猿 原 云杀线虫活性分别为 远员郾 园豫 尧源缘郾 缘豫 和 猿缘郾 园豫 曰产色素的 猿 株突变株 杂灶藻葬圆缘猿 原 粤尧杂灶藻葬圆缘猿 原
匀和 杂灶藻葬圆缘猿 原 允杀线虫活性分别为 源愿郾 苑豫 尧猿苑郾 圆豫和 猿苑郾 怨豫 遥 泽泽早粤尧遭造凿悦尧遭造凿阅尧憎澡蚤月尧憎澡蚤耘和 憎澡蚤陨 基因
克隆测序结果显示各突变株基因序列没有差异袁可能此 远 个基因没有直接参与控制 杂灶藻葬圆缘猿 菌株的自
发突变遥 链霉菌自发突变不但使其形态发生变异袁而且也影响了其代谢产物的生物活性袁研究为从形态
上筛选优良菌株提供了相关理论依据遥
关键词院链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿曰自发突变曰菌落形态曰杀线虫活性曰基因分析
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员源郾 园怨援 员缘源员
摇 摇 大多数链霉菌是生活在土壤中的放线菌袁具有复
杂的形态发育分化周期袁主要包括孢子萌发出芽管尧形
成基内菌丝尧产生白色气生菌丝尧气生菌丝末端分化为
单倍体孢子咱员暂 遥 链霉菌能产生大量多样的次生代谢
产物袁包括抗生素尧色素尧酶抑制剂以及免疫调节剂等袁
是工业微生物中最具有商业价值的类群之一咱圆暂 遥 同
时链霉菌还存在复杂的形态分化袁经常在抗生素和形
态分化上发生改变或者有缺陷的突变袁这种现象在所
有的链霉菌中普遍存在袁突变出现的频率超过
园郾 员豫 咱猿暂 遥 链霉菌的这种形态分化又伴随着较为复杂
的生理分化袁即由主代谢过程过渡到次生代谢过程袁出
现大量的次级代谢产物的积累袁链霉菌这种复杂的时
空分化袁体现了链霉菌在基因表达方面的复杂性咱源暂 遥
在澡怎等咱缘暂通过控制形态基因的表达袁揭示了天蓝色链
霉菌菌丝团的发育分化与抗生素发酵单位之间存在一
定的关联性袁并证明松弛的菌丝团有利于发酵单位的
提高遥 粤灶早藻造等咱远暂的研究表明袁菌丝形态分化和发育
分化过程中细胞凋亡的出现对抗生素的产生有一定影
响遥 梁新乐等咱苑暂研究发现袁阿维拉霉素高产突变株
匀员缘 的分生孢子形态出现了明显变异袁表面变得光滑
无刺袁液体培养中菌丝结团能力明显下降袁可能与其分
生孢子丝和分生孢子表面光滑构造有关遥
遭造凿调控系统控制着气生菌丝的生长袁导致一些表
面活性分子形成袁这些表面活性分子具有低的水表面
张力袁使得菌丝向空气中生长遥 其中 遭造凿悦 含有 酝藻则砸
家族的 阅晕粤结合的结构域袁影响形态分化和抗生素产
生咱愿暂 遥 遭造凿阅 编码一个小的 阅晕粤 结合蛋白袁该蛋白阻
遏自身转录袁结合于 憎澡蚤郧尧 遭造凿晕尧泽蚤早匀 的启动子区域袁
影响形态分化和抗生素产生咱怨暂 遥 宰澡蚤 调控菌株产生正
常的成熟的孢子咱员园暂 遥 其中 憎澡蚤月 编码小的 阅晕粤 结合
蛋白咱员员暂 袁憎澡蚤耘负责合成孢子聚酮色素的酶咱员圆暂 袁而 憎澡蚤陨
是应答调节因子遥 粤 因子是链霉菌中转录激活因子袁
在 员园 原怨皂燥造窑蕴 原员水平上就可以影响链霉菌的形态分化
和次生代谢遥 粤凿责粤是链霉菌中的一个全局性调控因
子袁受它调控的靶基因很多遥 泽泽早粤 编码一个小的酸性
蛋白袁影响孢子隔膜的形成咱员猿暂 遥
放线菌 杂灶藻葬圆缘猿 菌株是本实验室从土壤中分离纯
化得到的一株具有抗大豆胞囊线虫活性的菌株袁原始
员源缘员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
菌株的杀线虫活性达到 怨圆郾 员豫 曰同时对根结线虫
酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻尧水稻干尖线虫 粤责澡藻造藻灶糟澡蚤燥凿藻泽 遭藻泽泽藻赠蚤 和小
杆线虫 砸澡葬遭凿蚤葬泽也有毒杀作用袁经鉴定为委内瑞拉链
霉菌 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 增藻灶藻扎怎藻造葬藻咱员源 原 员缘暂 袁并明确了 杂灶藻葬圆缘猿
发酵液中杀线虫活性物质属于碱性水溶性物质咱员远暂 遥
由于该菌株存在着较为复杂的形态分化袁使菌体的代
谢途径发生改变袁不合成或少合成所需活性产物袁使杀
线虫活性退化遥 因此袁本研究旨在于明确该菌株形态
变化与代谢产物活性间的关系袁为获得具有稳定遗传
性状的优良菌种提供理论依据遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
员郾 员郾 员摇 供试线虫与供试菌株摇 南方根结线虫采自沈
阳农业大学北方线虫研究所试验繁殖圃曰菌株
杂灶藻葬圆缘猿袁分离自吉林省辽源市的土壤中袁该菌株是委
内瑞拉链霉菌 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 增藻灶藻扎怎藻造葬藻袁具毒杀植物线虫
活力的链霉菌的制备方法及其应用已获得国家发明专
利授权渊在蕴圆园园愿员园园员园源远缘援 载冤 咱员苑暂 遥
员郾 员郾 圆摇 主要培养基咱员愿暂 摇 高氏一号培养基渊可溶性淀
粉 圆园早曰运圆匀孕韵源园郾 缘早曰运晕韵猿员早曰晕葬悦造 园郾 缘早曰云藻杂韵源园郾 园员早曰酝早杂韵源窑苑匀圆韵 园郾 缘早曰琼脂 员缘 耀 圆园早曰责匀 值 苑郾 圆 耀 苑郾 源曰蒸
馏水 员园园园皂蕴冤曰种子培养基渊可溶性淀粉 圆源早曰牛肉膏
猿早曰蛋白胨 猿早曰酵母粉 缘早曰葡萄糖 员早曰悦葬悦韵猿 源早曰蒸馏水员园园园皂蕴曰责匀值 苑郾 圆冤曰高氏一号液体培养基遥
员郾 圆摇 孢子悬液的制备
用适量无菌水洗下斜面孢子袁将该孢子悬浮液置
于已灭菌并放有无菌玻璃珠的三角瓶中袁充分振荡后
用无菌脱脂棉过滤除去菌丝袁得到孢子悬浮液遥
员郾 猿摇 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 的自发突变体选育
将链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 孢子菌悬液稀释至适当倍数袁
吸取 缘园滋蕴孢子菌悬液涂布到含有高氏培养基的培养
皿中袁圆愿益培养 苑 凿 后袁根据菌落形态的不同袁挑选出
有典型形态差异的单菌落袁并接入斜面扩大培养遥
员郾 源摇 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 遗传稳定性及菌株形态观察
将不同菌落形态的链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 菌株袁连续转 缘
代袁通过表观形态观察其形态遗传稳定性遥 记录链霉
菌 杂灶藻葬圆缘猿 各突变菌株的生长状况袁包括表观形态变
化袁产孢量袁色素分泌袁基内菌丝和气生菌丝的形态遥
制作电镜样品袁进行电镜观察遥
员郾 缘摇 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 突变体的 员远杂 则阅晕粤分子鉴定
利用植物基因组 阅晕粤 提取试剂盒渊北京天根生
化科技公司冤提取样品的总 阅晕粤袁圆苑枣院缘忆 原 粤郧粤郧栽栽栽郧
粤栽悦悦栽郧郧悦栽悦粤郧 原猿忆袁员源怨圆则院缘忆 原 栽粤悦郧郧悦栽粤悦悦栽栽郧栽
栽粤悦郧粤悦栽栽 原猿忆为引物渊上海生工合成冤袁孕悦砸反应体系
渊圆缘滋蕴冤院愿郾 缘 滋蕴 凿匀圆韵袁员圆郾 缘 滋蕴 圆 伊 栽葬择 孕悦砸 酝葬泽贼藻则
酝蚤曾 渊栽陨粤晕郧耘晕冤袁上尧下游引物各员 滋蕴 渊员园 灶早窑皂蕴 原员冤袁圆
滋蕴 阅晕粤模板遥 孕悦砸反应循环参数院怨缘益预变性 猿皂蚤灶曰
怨缘益变性 猿园泽袁远园益退火 猿园泽袁苑圆益延伸 员皂蚤灶袁循环 猿缘
次曰苑圆益 延伸 员园皂蚤灶遥 设无模板阴性对照遥 取 缘滋蕴
孕悦砸产物经 员郾 缘豫琼脂糖凝胶电泳检测遥 孕悦砸 产物经
琼脂糖凝胶回收试剂盒 渊 栽陨粤晕郧耘晕冤 回收纯化与
孕则燥皂藻早葬载体连接尧转化大肠杆菌 阅匀缘琢 感受态细胞袁
蓝白斑筛选袁将鉴定结果为阳性的重组质粒送普洛麦
格渊北京冤生物技术有限公司测序遥
员郾 远摇 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 自发突变株的发酵培养
不同菌落形态的链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 试管斜面分别制
成相应孢子悬浮液遥 各取 员园愿 个孢子接种于装有 猿园 皂蕴
种子培养基的 员缘园皂蕴 三角瓶中袁圆愿益尧员苑缘则窑皂蚤灶 原员振荡
培养 苑圆 澡遥 然后将种子培养基按 员园豫的接种量放入盛
有 缘园皂蕴发酵培养基的 员缘园皂蕴三角瓶中袁圆愿益尧员苑缘则窑皂蚤灶
振荡培养员圆园澡袁发酵培养液离心即得发酵滤液遥
员郾 苑摇 南方根结线虫二龄幼虫渊允圆冤的获得
供试线虫培养于沈阳农业大学北方线虫学研究所
试验繁殖圃遥 将南方根结线虫侵染的番茄根系用水冲
去泥沙袁挑取卵块袁置于 园郾 缘豫的次氯酸钠中消毒 员皂蚤灶袁
再用无菌水冲洗 猿 次袁放在装有适量无菌水的培养皿
中袁圆愿益恒温培养袁每隔 圆源澡 收集 员 次新孵化的南方根
结线虫 允圆袁置于灭菌的三角瓶中袁源益冰箱备用咱员缘暂 遥
员郾 愿摇 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 自发突变体代谢产物对南方根
结线虫的影响
在灭菌的贝氏小皿中加入 缘园园滋蕴 高氏一号发酵
液做对照袁分别向处理和对照中各加入南方根结线虫
二龄幼虫 缘园 条遥 缘 次重复袁放入 圆愿益的培养箱中袁圆源澡
后记录线虫的死亡率袁计算校正死亡率袁计算公式如
下遥 线虫的死活判断方法用 晕葬韵匀 刺激法咱员源暂 遥 计算
结果用 杂孕杂杂软件进行数据分析袁阅怎灶糟葬灶爷 泽 新复极差
法进行多重比较遥
线虫死亡率 越死亡线虫数供试线虫数 伊员园园豫
校正死亡率 越
处理线虫死亡率 原对照线虫死亡率
员 原对照线虫死亡率 伊员园园豫
员郾 怨摇 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 自发突变株形态分化相关基因
的克隆
根据 孕怎造造葬灶等咱员怨暂报道的 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 增藻灶藻扎怎藻造葬藻 全
基因组序渊郧藻灶月葬灶噪院云砸愿源缘苑员怨冤分别设计 泽泽早粤尧遭造凿悦尧
圆源缘员
摇 怨 期 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 菌株的变异分析及对根结线虫活性影响
遭造凿阅尧憎澡蚤月尧憎澡蚤耘和 憎澡蚤陨基因的引物渊表 员冤遥 孕悦砸反应
体系渊圆缘滋蕴冤院愿郾 缘滋蕴 凿匀圆韵袁员圆郾 缘滋蕴 圆 伊 栽葬择 孕悦砸 酝葬泽贼藻则
酝蚤曾 渊栽陨粤晕郧耘晕冤袁上尧下游引物各 员 滋蕴 渊员园灶早窑皂造 原员 冤袁
圆滋蕴 阅晕粤 模板遥 孕悦砸 反应循环参数院 怨缘益 预变性
猿皂蚤灶曰怨缘益变性 猿园泽袁缘远益退火 猿园泽袁苑圆益延伸 员皂蚤灶袁循
环 猿缘 次曰苑圆益延伸 员园皂蚤灶遥 设无模板阴性对照遥 取
缘滋蕴 孕悦砸产物经 员郾 缘豫琼脂糖凝胶电泳检测遥 孕悦砸产
物送普洛麦格渊北京冤生物技术有限公司测序遥
表 员摇 用于扩增基因所使用的引物
栽葬遭造藻 员摇 郧藻灶藻 泽责藻糟蚤枣蚤糟 责则蚤皂藻则泽 怎泽藻凿 蚤灶 贼澡蚤泽 泽贼怎凿赠
引物
孕则蚤皂藻则
上游引物序列渊缘忆 原 猿忆冤 哉责泽贼则藻葬皂 责则蚤皂藻则 泽藻择怎藻灶糟藻泽
下游引物序列渊缘忆 原 猿忆冤 阅燥怎灶泽贼则藻葬皂 责则蚤皂藻则 泽藻择怎藻灶糟藻泽
基因库登录号
郧藻灶藻月葬灶噪 葬糟糟藻泽泽蚤燥灶 灶怎皂遭藻则
泽泽早粤 栽郧粤栽郧粤郧悦栽栽悦悦栽悦郧栽栽栽悦悦郧粤郧郧粤郧悦栽悦栽
郧悦悦郧粤郧栽郧悦悦郧悦悦栽悦悦粤郧郧栽栽郧栽悦悦
云砸愿源缘苑员怨
遭造凿悦 粤栽郧粤悦悦郧悦栽悦郧悦粤悦悦悦悦栽郧粤栽郧悦悦郧粤郧悦悦郧
栽悦粤郧郧悦悦栽悦郧悦栽郧悦郧悦栽郧悦栽郧悦郧郧粤粤栽郧悦
云砸愿源缘苑员怨
遭造凿阅 粤栽郧栽悦悦粤郧悦郧粤粤栽粤悦郧悦粤粤粤郧悦粤郧悦
悦栽悦悦栽悦郧栽郧郧郧悦郧粤悦郧郧悦郧悦郧郧悦郧悦郧悦郧栽悦
云砸愿源缘苑员怨
憎澡蚤月 粤栽郧粤悦悦郧粤郧栽栽郧栽栽悦悦粤郧郧粤粤悦栽郧悦栽郧郧栽悦
栽悦粤郧粤悦郧郧悦郧郧悦悦栽栽悦栽栽悦粤郧郧悦郧郧悦郧悦悦郧
云砸愿源缘苑员怨
憎澡蚤耘 悦悦粤悦郧悦粤栽悦郧栽郧粤粤悦悦栽悦粤郧悦郧粤郧粤悦郧郧粤粤
郧栽郧栽悦郧粤悦郧栽郧郧悦悦郧粤郧郧悦栽悦郧郧栽悦
云砸愿源缘苑员怨
憎澡蚤陨 郧栽郧郧悦粤郧悦粤悦悦郧悦粤郧粤粤悦栽粤悦悦栽悦郧悦粤郧
悦栽栽悦粤郧郧粤粤郧栽悦悦郧郧郧粤悦郧栽悦悦粤郧悦栽
云砸愿源缘苑员怨
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 自发突变株遗传稳定性
挑取不同形态的单菌落袁连续转 缘 代后袁获得 远 株
不同菌落形态的突变株可较稳定地遗传袁将其分别标
号为 杂灶藻葬圆缘猿 原 粤尧杂灶藻葬圆缘猿 原 月尧杂灶藻葬圆缘猿 原 云尧杂灶藻葬圆缘猿 原
郧尧杂灶藻葬圆缘猿 原 匀尧杂灶藻葬圆缘猿 原 允渊图 员冤遥
远 株自发突变株在菌落生长速度尧形态尧颜色和
产生色素方面均有较大差异遥 有 猿 株突变株产生棕
色色素袁包括菌落蜡白色生长缓慢的 杂灶藻葬圆缘猿 原 粤袁生
长较为迅速的菌落白色 杂灶藻葬圆缘猿 原 匀 和灰白色的
杂灶藻葬圆缘猿 原 允遥 猿 株不产生色素袁包括菌落生长迅速的
灰色饱满的 杂灶藻葬圆缘猿 原 月 和灰色皱缩似蜂窝状的
杂灶藻葬圆缘猿 原 郧袁以及生长较为迅速的青白色草帽状的
杂灶藻葬圆缘猿 原 云遥 远 株突变株的颜色从青色到白色产生
变化袁而且生长速度也发生变异袁具体形态变化和描
述渊图 员尧表 圆冤遥
圆郾 圆摇 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 自发突变株孢子形态的电镜观
察
电子显微镜观察结果表明 远 株自发突变株在孢子
在形态上没有差异袁均为光滑的长椭圆形袁但各突变株
的气生菌丝和孢子丝的发育有明显不同遥 突变株
杂灶藻葬圆缘猿 原 粤 的气生菌丝较少袁孢子丝不发达袁形成的
孢子链较少曰杂灶藻葬圆缘猿 原 月和 杂灶藻葬圆缘猿 原 允的气生菌丝较
茂盛袁孢子丝发达曰杂灶藻葬圆缘猿 原 云 和 杂灶藻葬圆缘猿 原 匀 的气生
菌丝和孢子丝的生长介于 杂灶藻葬圆缘猿 原 粤 和 杂灶藻葬圆缘猿 原 月
之间曰而 杂灶藻葬圆缘猿 原 郧的气生菌丝非常茂盛袁孢子丝特
别发达袁形成较多的二叉状分枝孢子链渊图 圆冤遥
圆郾 猿摇 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 自发突变株的 员远杂 阅晕粤鉴定结
果
以 远 株自发突变菌株的 阅晕粤为模板袁利用通用引
物扩增 员远杂 则阅晕粤 序列遥 回收目的片段与 责郧耘酝鄄栽
耘葬泽赠 载体连接进行克隆测序袁测序结果经 晕悦月陨 的
月蕴粤杂栽 比对分析表明袁与 在澡葬灶早 等咱圆员暂 的已报道 杂援
增藻灶藻扎怎藻造葬藻 员远杂 则阅晕粤 序列具有高同源性袁相似度达
怨怨豫 遥
圆郾 源摇 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 自发突变株的发酵液对线虫活
性的影响
由于链霉菌的形态分化发育和次生代谢密切相
关袁所以本文验证 杂灶藻葬圆缘猿 的不同形态突变株的发酵
液对南方根结线虫二龄幼虫的活性是否一致遥 经差异
显著性分析袁与原始菌株相比袁远 株突变株的杀线虫活
性均显著降低 渊 孕 约 园郾 园缘 冤 渊图 猿 冤遥 其中突变株
杂灶藻葬圆缘猿 原 郧 的发酵液对南方根结线虫的校正死亡率
相对其他 缘 株突变株是最高的袁达到 远员郾 园豫 袁但仍然
猿源缘员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
摇 摇 摇 摇 摇 摇
图 员摇 连续 缘 代继代培养后较稳定遗传的链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 自发突变株的菌落形态
云蚤早援 员摇 云蚤增藻 早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 泽怎遭糟怎造贼怎则葬造 糟燥造燥灶赠 皂燥则责澡燥造燥早赠 燥枣 泽贼葬遭造赠 蚤灶澡藻则蚤贼藻凿 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 杂灶藻葬圆缘猿
表 圆摇 链霉菌 圆缘猿 各突变株菌落形态特征的描述
栽葬遭造藻 圆摇 阅藻泽糟则蚤责贼蚤燥灶 燥灶 糟燥造燥灶蚤葬造 皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则泽 燥枣 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 杂灶藻葬圆缘猿 皂怎贼葬灶贼泽
菌落形态编号
晕燥援 燥枣 糟燥造燥灶赠
生长速度
郧则燥憎贼澡
菌落颜色和形态
悦燥造燥灶赠 糟燥造燥怎则 葬灶凿 皂燥则责澡燥造燥早赠
可溶色素
杂燥造怎遭造藻 责蚤早皂藻灶贼
基内菌丝
杂怎遭泽贼则葬贼藻 皂赠糟藻造蚤怎皂
气生菌丝
粤藻则蚤葬造 皂赠糟藻造蚤怎皂
杂灶藻葬圆缘猿 原 粤 员园 耀 员圆凿 蜡白色袁大且表面扁平
宰葬曾赠 憎澡蚤贼藻袁 造葬则早藻 葬灶凿 贼澡蚤灶鄄枣造葬贼 泽怎则枣葬糟藻
深红棕色
砸藻凿凿蚤泽澡 遭则燥憎灶
黄色
再藻造造燥憎
白色
宰澡蚤贼藻
杂灶藻葬圆缘猿 原 月 源 耀 缘凿 灰色袁饱满似馒头状
郧则葬赠袁 责造怎皂责 葬灶凿 枣怎造造 泽怎则枣葬糟藻 葬灶凿 泽贼则藻葬皂藻凿
遭则藻葬凿 造蚤噪藻
无
原
灰白色
蕴蚤早澡贼 郧则藻赠
灰色
郧则藻赠
杂灶藻葬圆缘猿 原 云 远 耀 苑凿 青白色袁似草帽状
月造怎蚤泽澡 憎澡蚤贼藻袁 泽贼则葬憎 澡葬贼 造蚤噪藻
无
原
白色
宰澡蚤贼藻
白色
郧则藻赠
杂灶藻葬圆缘猿 原 郧 源 耀 缘凿 灰色袁圆形皱缩似蜂窝状
郧则葬赠袁 悦蚤则糟怎造葬则 泽澡则蚤增藻造 澡燥灶藻赠糟燥皂遭 造蚤噪藻
无
原
灰白或黄色
蕴蚤早澡贼 早则藻赠 燥则 赠藻造造燥憎
灰白色
蕴蚤早澡贼 早则藻赠
杂灶藻葬圆缘猿 原 匀 远 耀 苑凿 白色袁中间隆起似草帽状
宰澡蚤贼藻袁 责造怎皂责鄄怎责 泽怎则枣葬糟藻 造蚤噪藻 泽贼则葬憎 澡葬贼
棕色
月则燥憎灶
黄色或淡黄色
再藻造造燥憎 燥则 造蚤早澡贼 赠藻造造燥憎
白色
宰澡蚤贼藻
杂灶藻葬圆缘猿 原 允 缘 耀 苑凿 灰白色袁中央稍微凹陷
蕴蚤早澡贼 早则藻赠袁 糟燥灶糟葬增藻鄄凿燥憎灶 泽怎则枣葬糟藻
红棕色
砸藻凿凿蚤泽澡 遭则燥憎灶
黄色
再藻造造燥憎
灰白色
蕴蚤早澡贼 早则藻赠
显著低于原始菌株遥 其次是 杂灶藻葬圆缘猿 原 粤 和 杂灶藻葬圆缘猿
原 月的活性显著低于 杂灶藻葬圆缘猿 原 郧袁对南方根结线虫的
校正死亡率维持在 源愿郾 苑豫和 源缘郾 缘豫 遥 而 杂灶藻葬圆缘猿 原 云尧
杂灶藻葬圆缘猿 原 匀 和 杂灶藻葬圆缘猿 原 允 的活性降低幅度较大袁对
根结线虫的校正死亡率维持在 猿缘郾 园豫 耀 猿苑郾 怨豫之间遥
由于遗传的不稳定性袁表观形态上产生变化的新突变
株对根结线虫的活性有不同程度的降低袁推测可能是
次级代谢受到了影响遥
圆郾 缘摇 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 菌株形态分化相关基因的克隆
及分析
参考天蓝链霉菌的相关基因序列设计特异性引物袁
对 远株自发突变株的形态分化相关基因克隆测序袁这些
基因包括调控 葬凿责粤 因子的 泽泽早粤袁遭造凿 基因的 遭造凿悦 和
遭造凿阅基因袁憎澡蚤基因的 憎澡蚤月尧憎澡蚤耘 和 憎澡蚤陨遥 基因序列分
析表明远个基因序列均无差异遥 推测可能是设计的这远
个基因没有直接参与 杂灶藻葬圆缘猿的自发突变咱愿 原 员猿暂 遥
源源缘员
摇 怨 期 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 菌株的变异分析及对根结线虫活性影响
图 圆摇 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 各突变株气生菌丝及孢子丝超微形态
云蚤早援 圆摇 粤藻则蚤葬造 澡赠责澡葬 葬灶凿 泽责燥则藻 枣燥则皂泽 燥枣 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 杂灶藻葬圆缘猿 皂怎贼葬灶贼 泽贼则葬蚤灶泽 怎灶凿藻则 泽糟葬灶灶蚤灶早 藻造藻糟贼则燥鄄皂蚤糟则燥泽糟燥责藻
图 猿摇 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 自发突变株对南方根结线虫 允圆 的致死作用
云蚤早援 猿摇 蕴藻贼澡葬造 藻枣枣藻糟贼 燥枣 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 杂灶藻葬圆缘猿 泽责燥灶贼葬灶藻燥怎泽 皂怎贼葬灶贼泽 燥灶 酝援 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬 允圆
猿摇 讨论
本试验获得 远 株形态差异显著的 杂灶藻葬圆缘猿 自发突
变株袁伴随菌体形态的变化袁菌株发酵产生的杀线虫活
性也随之发生了改变遥 已有的研究表明大多数链霉菌
具有遗传不稳定现象袁菌落形态的变化和产生的抗生
素之间是有联系的咱圆圆暂 遥 杂灶藻葬圆缘猿 原始菌株气丝茂盛袁
基丝不断裂袁孢子圆形或椭圆袁基丝发达袁无可溶性色
素袁本研究中自发突变株 杂灶藻葬圆缘猿 原 郧与原始菌株特征
最为相近袁其菌落呈灰色袁圆形皱缩似蜂窝状袁无可溶
性色素袁气生菌丝非常茂盛袁孢子丝特别发达袁形成较
多的二叉状分枝孢子链遥 也有研究显示林可霉素产生
菌 杂援 造蚤灶糟燥造灶藻灶泽蚤泽 增葬则援 造蚤灶援直径中等尧稍干瘪的菌株其林
可霉素产量高咱圆猿暂 遥 西罗莫司产生菌 杂援 澡赠早则燥泽糟燥责蚤糟怎泽
宰再 原怨猿 诱变育种中袁孢子丰富的梅花型或面包型菌
株发酵效价较高咱圆源暂 遥 本研究发现袁结合其发酵液毒杀
南方根结线虫的生物活性袁发现 远 株突变株中接近原
始菌株的 杂灶藻葬圆缘猿 原 郧突变株发酵液杀线虫活性最高袁
致死率为 远员郾 园豫 遥
缘源缘员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
突变株 杂灶藻葬圆缘猿 原 云的活性降低幅度最大袁对根结
线虫的校正死亡率仅为 猿缘郾 园豫 袁该突变株菌落青白色
似草帽状袁不产生可溶性色素袁孢子链较少袁基内菌丝
为白色袁气生菌丝白色遥 田沛霖等咱圆源暂研究高产谷氨酰
胺转胺酶茂原链霉菌的快速筛选时发现袁边缘毛糙且
厚实饱满呈馒头型的菌落 酝栽郧 酶活最高袁而边缘光
滑尧表面平薄的菌落 酝栽郧酶活最低遥 这些研究都说明
菌株形态变异与抗生素代谢产物间存在一定相关性遥
对许多产生抗生素的链霉菌中袁已证明形态和生
产率之间有关系袁如 杂葬则则伽 等咱圆缘暂在变青链霉菌研究中
认为菌落形态和抗生素产量具有相关性袁致密的球形
菌落是形成杂合抗生素的先决条件遥 弗氏链霉菌的菌
落形态呈小颗粒状是泰乐菌素产生的最佳条件咱圆远暂 遥
形态分化和次级代谢的发生在时间上有强相关性袁各
自基因在表达调控上更是密不可分咱圆苑暂 遥 遗传学研究
结果表明袁菌落形态发生改变的突变株袁对于改良菌株
活性起着重要作用咱圆愿 原 圆怨暂 遥 而研究菌种菌落形态特征
是工业发酵不可缺少的重要基础性工作咱猿园暂 遥 在微生
物的遗传育种中袁若能建立或创建微生物的形态尧生理
突变与目标产物产量之间的关联性袁对于提高筛选效
率具有重要意义咱猿员暂 遥
遭造凿悦 和 遭造凿阅属于 遭造凿家族基因咱愿 原 怨暂 袁憎澡蚤月和 憎澡蚤耘
属于 憎澡蚤基因家族咱员园 原 员圆暂 袁泽泽早粤 基因是 粤凿责粤 全局性调
控因子的靶基因咱员猿暂 遥 这些基因都是模式菌株天蓝链
霉菌的形态分化关键基因袁因此在本文被引入到委内
瑞拉链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 突变株中袁用于分析自发突变中
形态变异的基因表达差别袁以期从基因层次解释自发
突变中菌株形态上发生的显著变化遥 试验中参考天蓝
链霉菌的相关基因序列设计特异性引物袁克隆了 泽泽早粤尧
遭造凿悦尧遭造凿阅尧憎澡蚤月尧憎澡蚤耘 和 憎澡蚤陨 等 远 个基因袁并对基因
序列进行了分析袁但分析结果显示这 远 个基因的相似
度都是 员园园豫 袁没有差异遥 说明设计的 远 个基因可能
在 杂灶藻葬圆缘猿 突变株中没有参与基因表达袁还有诸多的
染色体组基因或者其他质粒基因影响自发突变的产
生遥 因此袁有必要深入研究链霉菌的形态分化与代谢
调控基因的相关性袁从分子机理上阐明调控基因与菌
株形态变化和代谢之间的关系具有重要意义遥
源摇 结论
本研究利用自发突变获得 远 株不同形态的突变
株袁发现链霉菌菌株在形态上的自发突变对其代谢产
物活性会产生较大影响袁其中菌落灰色皱缩尧生长迅速
而且气生菌丝茂盛的 杂灶藻葬圆缘猿 原 郧 发酵液杀线虫活性
最高遥 研究结果为从形态上筛选优良菌株提供了相关
理论依据遥
致谢院感谢沈阳农业大学北方线虫研究所的朱晓
峰老师和王媛媛老师在试验过程中提供的指导与帮
助遥 感谢植物保护学院曹远银老师和安梦楠老师提供
建设性意见遥
参考文献院
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态分化初步研究咱允暂 援 核农学报袁 圆园员园袁 圆源渊源冤院 远愿怨 原 远怨猿
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摇 怨 期 链霉菌 杂灶藻葬圆缘猿 菌株的变异分析及对根结线虫活性影响
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咱员源暂 摇 陈井生袁 陈立杰袁 郑雅楠袁 董健袁于佰双袁段玉玺援 放线菌
杂灶藻葬圆缘猿 的鉴定及对大豆胞囊线虫的抑制作用咱 允暂 援 中国生物
防治袁 圆园园怨袁 圆缘渊员冤院 远远 原 远怨
咱员缘暂摇 陈井生袁 陈立杰袁 段玉玺袁 朱晓峰袁王媛媛援 放线菌 杂灶藻葬圆缘猿 代
谢产物杀线虫谱研究咱允暂 援 上海农业学报袁 圆园员园袁 圆远渊猿冤院 愿园 原
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咱员远暂摇 陈立杰袁 董健袁 朱晓峰袁 王媛媛袁陈井生袁段玉玺援 生防放线菌
杂灶藻葬圆缘猿 代谢产物的理化性质咱允暂 援 农药袁 圆园员园袁 源怨渊员冤院 圆苑 原 圆愿
咱员苑暂摇 陈立杰袁 陈井生袁 段玉玺援 具毒杀植物线虫活力的链霉菌的制
备方法及其应用咱孕暂援 中国专利院 悦晕员园员圆圆缘猿苑园袁 圆园园愿 原 园苑 原 圆猿
咱员愿暂摇 陈井生援 大豆胞囊线虫生防放线菌的筛选及活性菌株的初步研
究咱阅暂援 沈阳院沈阳农业大学援 圆园园愿
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渊圆冤院 苑园员 原 苑苑园
咱圆圆暂摇 刘瑞华袁 夏守友援 不同菌落形态的林可霉素产生菌发酵特性的
研究咱允暂 援 安徽医药袁 圆园园圆袁 远渊猿冤院 怨 原 员园
咱圆猿暂摇 白兰芳袁 徐小敏袁武临专袁王以光援 西罗莫司产生菌 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽
澡赠早则燥泽糟燥责蚤糟怎泽 宰再 原怨猿 的诱变育种与代谢研究咱 允暂 援 中国抗生素
杂志袁 圆园园员袁 圆远渊员冤院 猿缘 原 猿愿
咱圆源暂摇 田沛霖袁 朱一辰袁 金明飞袁 陈佳袁刘颖袁高红亮袁常忠义袁刘莉袁袁
涵援 高产谷氨酰胺转胺酶茂原链霉菌的快速筛选咱 允暂 援 西北农
林科技大学学报袁 圆园员猿袁 源员渊猿冤院 员愿苑 原 员怨圆
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咱猿园暂摇 梁新乐袁 朱静袁 金英燕援 绿色产色链霉菌 耘 原圆员怨 菌落的形态分
化咱允暂 援 核农学报袁 圆园员圆袁 圆远渊猿冤院 园源远远 原 园源苑园
咱猿员暂摇 薛正莲袁王洲袁张相美袁朱艳援 三种不同菌落形态的林肯链霉菌
发酵特性的研究咱允暂 援 工业微生物袁 圆园园怨袁 猿怨渊猿冤院 圆远 原 圆怨
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燥则蚤早蚤灶葬造 泽贼则葬蚤灶援 栽澡藻蚤则 灶藻皂葬贼蚤糟蚤凿葬造 葬糟贼蚤增蚤贼赠 憎藻则藻 凿藻糟则藻葬泽藻凿 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 怎泽蚤灶早 皂藻贼葬遭燥造蚤贼藻泽 贼则藻葬贼藻凿 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿葬则赠 躁怎增藻灶蚤造藻泽 允圆燥枣 酝援 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬援 援 粤皂燥灶早 贼澡则藻藻 灶燥灶鄄遭则燥憎灶 责蚤早皂藻灶贼 责则燥凿怎糟蚤灶早 皂怎贼葬灶贼泽袁 贼澡藻 糟燥则则藻糟贼藻凿 皂燥则贼葬造蚤贼赠 燥枣 杂灶藻葬圆缘猿 原 郧袁 杂灶藻葬圆缘猿
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猿苑郾 圆豫 葬灶凿 猿苑郾 怨豫 冤 贼澡葬灶 贼澡葬贼 燥枣 贼澡藻 皂怎贼葬灶贼 杂灶藻葬圆缘猿 原 郧渊远园郾 园豫 冤援 陨贼 泽澡燥怎造凿 遭藻 灶燥贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻则藻 憎藻则藻 灶燥 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻
葬皂燥灶早 贼澡藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 则藻造葬贼藻凿 早藻灶藻泽 渊 泽泽早粤尧 遭造凿悦尧 遭造凿阅尧 憎澡蚤月尧 憎澡蚤耘尧 憎澡蚤陨冤 贼澡则燥怎早澡
泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 葬灶葬造赠泽蚤泽援 栽澡藻 泽蚤曾 早藻灶藻泽 皂葬赠 灶燥贼 遭藻 凿蚤则藻糟贼造赠 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 糟燥灶贼则燥造造蚤灶早 贼澡藻 泽责燥灶贼葬灶藻燥怎泽 皂怎贼葬贼蚤燥灶 燥枣 杂灶藻葬圆缘猿 蚤灶
澡藻则藻援 栽澡蚤泽 则藻泽藻葬则糟澡 糟燥皂枣蚤则皂藻凿 贼澡葬贼 泽责燥灶贼葬灶藻燥怎泽 皂怎贼葬贼蚤燥灶 燥枣 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 杂灶藻葬圆缘猿 泽贼则葬蚤灶泽 灶燥贼 燥灶造赠 泽澡燥憎藻凿 蚤灶 贼澡藻
皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 增葬则蚤葬贼蚤燥灶袁 遭怎贼 葬造泽燥 凿藻糟则藻葬泽藻凿 贼澡藻 灶藻皂葬贼蚤糟蚤凿葬造 葬糟贼蚤增蚤贼赠援 陨贼 责则燥增蚤凿藻泽 葬 责燥泽泽蚤遭蚤造蚤贼赠 枣燥则 泽糟则藻藻灶蚤灶早 燥枣 遭蚤燥糟燥灶贼则燥造
皂蚤糟则燥遭蚤葬造 遭赠 皂燥则责澡燥造燥早赠援
运藻赠 憎燥则凿泽院 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 增藻灶藻扎怎藻造葬藻 杂灶藻葬圆缘猿曰 杂责燥灶贼葬灶藻燥怎泽 皂怎贼葬贼蚤燥灶曰悦燥造燥灶赠 皂燥则责澡燥造燥早赠曰晕藻皂葬贼蚤糟蚤凿葬造 葬糟贼蚤增蚤贼赠曰 郧藻灶藻
葬灶葬造赠泽蚤泽
愿源缘员