全 文 ：菜 心[Brassica campestris L. ssp. chinensis (L.)
Makino var. utilis Tsen et Lee]是我国华南地区的特
色蔬菜之一，在广东和广西栽培历史悠久，品种资
源尤为丰富[1]。目前菜心主要是通过常规育种来
进行选育的，常规育种由于周期长、见效慢，受到表
观生长状态的影响，很难选育出优良的品种，而且
在抗病性育种方面，常规育种的弱势更明显，由于
抗病性状很难在后代中保持，所以很难确定与抗病
收稿日期： 2013–11–28　　　　接受日期： 2013–12–31
基金项目： 广东省特色蔬菜现代产业技术体系菜心创新团队岗位体系项目和广州市科信局应用基础项目(2010Y1-C831)共同资助
作者简介： 乔燕春，女，博士。E-mail: qyc19790128@163.com
* 通讯作者 Corresponding author. E-mail: zhanghuagz@tom.com
热带亚热带植物学报　2014， 22(4)： 399 ~ 405
Journal of Tropical and Subtropical Botany
菜心组织培养技术初探
乔燕春, 黄红弟, 张华*, 李光光, 郑岩松, 刘自珠
(广州市农业科学研究院， 广州 510308)
摘要： 为建立菜心(Brassica campestris ssp. chinensis var. utilis)的快繁技术体系，以花药和子叶-子叶柄为外植体进行组织培养
研究。结果表明，花药培养以选取未开放的花蕾为宜，且花柱略高于花瓣，此时小孢子多数处于单核靠边期。菜心花粉的萌发
率不高，且秋冬季的花粉比夏季的萌发率高。菜心花药愈伤组织诱导培养基为 : MS + 1.0 mg L–1 KT + 1.0 mg L–1 2,4-D + 3%
糖 + 6 g L–1 琼脂 + 8% 椰乳，不定芽诱导培养基为：MS + 2.0 mg L–1 6-BA + 0.5 mg L–1 NAA + 1.0 g L–1 活性炭 + 2% 糖 + 6 g L–1
琼脂或 MS + 2.0 mg L–1 ZT + 0.5 mg L–1 IAA + 0.5 g L–1 AgNO3 + 1.0 g L
–1 活性炭 + 2% 糖 + 6 g L–1 琼脂。花药培养的不定芽诱
导率为 36.7%，不定芽培养出现褐化现象，不能形成再生植株；而以子叶-子叶柄为外植体培养获得的植株再生率可达 80%。
关键词： 菜心； 花药； 子叶-子叶柄； 组织培养
doi: 10.3969/j.issn.1005–3395.2014.04.011
Preliminary Study on Tissue Culture Technique in Brassica campestris
L. ssp. chinensis var. utilis
QIAO Yan-chun, HUANG Hong-di, ZHANG Hua*, LI Guang-guang, ZHENG Yan-song, LIU Zi-zhu
(Guangzhou Academy of Agricultural Sciences, Guangzhou 510308, China)
Abstract: In order to establish rapid propagation system of Brassica campestris ssp. chinensis var. utilis, the
anthers as explants were in vitro cultured. The results showed that the anthers should be selected from unopened
buds, which stigma was slightly higher than petal, and most of microspores were at uninucleate stage. The pollen
germination rate was not high, and that in autumn and winter was higher than that in summer. The callus induction
medium for anthers was MS + 1.0 mg L–1 KT + 1.0 mg L–1 2,4-D + 3% sugar + 6 g L–1 agar + 8% coconut milk
(pH=5.8). The adventitious bud differentiation medium was MS + 2.0 mg L–1 6-BA + 0.5 mg L–1 NAA + 1.0 g L–1
active carbon + 2% sugar + 6 g L–1 agar or MS + 2.0 mg L–1 ZT + 0.5 mg L–1 IAA + 0.5 g L–1 AgNO3 + 1.0 g L
–1
active carbon + 2% sugar + 6 g L–1 agar (pH=5.8). The adventitious bud rate inducted from anthers was 36.7%, and
the regeneration plantlet rate was low owing to adventitious buds browning, while the regeneration plantlet rate
reached to 80% induced from cotyledon or petioles.
Key words: Brassica campestris ssp. chinensis var. utilis; Anther; Cotyledon or petiole; Tissue culture
400 第22卷热带亚热带植物学报
性相关的指标参数。单倍体育种自 20 世纪 70 年
代应用以来，已经在 50 多种植物上获得了单倍体
植株[2]。十字花科(Cruciferae)作物中已有多种通
过花药培养或小孢子培养获得了再生植株，如油
菜(Brassica campestris)[3]、青 花 菜(B. oleracea var.
botrytis)[4]、甘蓝(B. oleracea)[5]、白菜(B. chinensis)[6]、
萝卜(Raphanus sativus)[7]、青梗菜(B. rapa ssp. chin-
ensis)[8]、红菜薹(B. compestris var. purpurea)[9]、芥蓝
(B. alboglabra)[10]等。目前有关菜心的花药培养技
术也有一些报道[11–14]，但技术还不够成熟，多数研
究仍停留在胚状体阶段，而且组织培养操作因人而
异，关键技术不能复制。本实验试图从菜心花粉、
花药的形态上确定适于花药培养的最佳时期和状
态，通过组织培养的途径，探寻菜心花药组织培养
可操作的技术条件和方法，为菜心的优良品种选育
提供科学依据。
1 材料和方法
1.1 材料
供试材料均取自广州市农业科学研究院花都
基地，供试菜心[Brassica campestris L. ssp. chinensis
(L.) Makino var. utilis Tsen et Lee]种质资源共32份，
其中由广州市农业科学研究院选育的菜心品种有
6 份：49-19 菜心、油绿 50 天、绿宝 70 天、油绿 702、
油绿 801 和迟心 4 号菜心；其余 26 份菜心材料包
括早熟菜心 4 份、中熟菜心 6 份、晚熟菜心 4 份、宽
叶菜心 6 份和细叶菜心 6 份。供试材料在表型上存
在显著的差异，为本研究提供了丰富的基因型材料。
1.2 花粉活力的测定
菜心花粉活力参照刘会超等[15]的培养基萌发
法测定，培养基为100 mg L–1 蔗糖 + 30 mg L–1 硼酸。
1.3 花药培养
1.3.1 愈伤组织诱导
对不同基因型材料，在不同培养基、不同生长
调节剂水平下进行花药愈伤组织培养，基本培养基
为 MS 培养基，所有培养基均添加 3% 糖、6 g L–1
琼脂和 8% 椰乳，生长调节剂选用 KT 和 2,4-D，采
用单因子试验设计对生长调节剂用量进行筛选，
KT 分别设置 0.5、1.0 和 2.0 mg L–1; 2,4-D 分别设
置 1.0 和 2.0 mg L–1。
1.3.2 芽分化培养
将比较紧实的愈伤组织接种到不定芽分化培
养基，以 MS + 2% 蔗糖 + 6 g L–1 琼脂为基本培养
基，采用双因子设计筛选生长调节剂组合和添加物
(表 1), 每种培养基均接种 30 块愈伤组织。
1.4 子叶-子叶柄组织培养
1.4.1 材料的准备和愈伤组织诱导
将经过 70% 酒精消毒 30 s, 0.1% 升汞消毒 6~
8 min的菜心种子(49-19菜心)直播在MS培养基中，
暗培养 15 d 左右。选取菜心子叶-子叶柄为外植体，
接种在愈伤组织诱导培养基中，培养基为 MS 培养
基+ 1.0 mg L–1 KT + 1.0 mg L–1 2,4-D + 3%糖 + 6 g L–1
琼脂 + 8% 椰乳。每瓶接种 3 个外植体，3 次重复，
暗培养约 15 d 后，统计愈伤组织诱导率。
1.4.2 不定芽的诱导
将菜心子叶-子叶柄愈伤组织接种在不定芽
诱导培养基中，培养基为 MS + 2.0 mg L–1 6-BA +
0.5 mg L–1 NAA + 1.0 g L–1 活性炭 + 2% 糖 + 6 g L–1
琼脂或MS + 2.0 mg L–1 ZT + 0.5 mg L–1 IAA + 0.5 g L–1
AgNO3 + 1.0 g L
–1 活性炭 + 2% 糖 + 6 g L–1 琼脂。
每个处理接种 10 瓶，3 次重复，光照培养 15 d 后
统计不定芽诱导率。
1.4.3 生根培养
将诱导的不定芽转入生根培养基中(1/4MS 或
1/8MS + 0.1 mg L–1 IBA + 2% 糖 + 6 g L–1 琼脂)，接
种 10 瓶，每瓶接种 2 株，3 次重复，光照培养 15 d
后观察生根情况。
2 结果和分析
2.1 菜心单核靠边期的花粉形态
在花药和花粉培养中，花粉的发育时期是提
高植株再生率的重要因素，准确鉴定花粉的发育时
期，适时接种是花药、花粉培养中十分重要的操作
技术。采用显微镜观察确定花粉的发育时期，花药
培养多选择花粉处于单核靠边期，此时花蕾还未开
放，且花柱头略高于花瓣，大部分花粉细胞是单倍
体或自然加倍的二倍体和多倍体(图 1)。
2.2 花粉活力
采用萌发法对花粉活力进行测定，以确定花粉
活力较强的时期。从表 2 可见，2012 年 9 月 7 日
第4期 401
表 1 芽分化培养基的筛选
Table 1 Selection of bud differentiation medium for Brassica campestris ssp. chinensis var. utilis
编号
No.
生长调节剂 Growth regulator (mg L–1) AgNO3
(g L–1)
活性炭 Active
carbon (g L–1)
芽分化率 Bud
differentiation rate (%)6-BA NAA ZT IAA BR TDZ
1 0 0 0 0 0.05 0.5 0 0 0
2 0 0 0 0 0.1 0.5 0.5 0 0
3 1.0 0 0 0 0.15 0.5 0.5 0 3.3
4 1.0 0.5 0 0 0.15 0 0.5 0 20.0
5 1.0 1.0 0 0 0.20 0 0.5 0 10.0
6 1.0 1.5 0 0 0.20 0 0.5 1.0 16.7
7 1.5 1.5 0 0 0 0 1.0 1.0 20.0
8 1.5 1.5 0 0 0 0.5 1.0 1.0 23.3
9 2.0 1.5 0 0 0.10 0.5 1.0 1.0 30.0
10 2.0 0.0 0 0 0.05 0.5 1.0 1.0 6.0
11 2.0 0.5 0 0 0.05 0.5 0 1.0 33.3
12 2.0 0.5 0 0 0 0 0 1.0 36.7
13 0 0 0 0 0 0 0 1.0 0
14 0 0 0.1 0.1 0 0 0 1.0 10.0
15 0 0 0.5 0.5 0 0 0 1.0 10.0
16 0 0 1.0 0.5 0 0 0.5 0 16.7
17 0 0 0.5 0.5 0 0.5 0.5 0 20.0
18 0 0 0.5 1.0 0 0 0.5 0 20.0
19 0 0 0.5 1.5 0 0 0.5 1.0 16.7
20 0 0 1.0 2.0 0 0 0.5 1.0 13.3
21 0 0 2.0 2.0 0.05 0 0.5 1.0 20.0
22 0 0 2.0 0.5 0 0 0.5 2.0 33.3
23 0 0 1.0 0.5 0.10 0 0.5 2.0 30.0
24 0 0 2.0 0.5 0.10 1.5 0.5 2.0 30.0
25 0 0 2.0 0.5 0.15 1.5 0.5 1.0 20.0
26 0 0 2.0 0.5 0 0 0.5 1.0 36.7
乔燕春等：菜心组织培养技术初探
和 11 月 15 日分别进行采样，菜心花粉的萌发率均
处于中等水平，说明供试菜心材料的花粉活力一
般，2012 年 9 月 7 日采样的花粉萌发 4 h 的萌发
率约高于 50%；而 11 月 15 日采样的花粉萌发 4 h
的萌发率可达 70% 左右，说明在菜心最适生长期
的 11 月份，其花粉的活力也相对较强，更适合进行
花药培养。接种到培养基上的花粉呈密密麻麻的
椭圆形(图 2: A)，25℃培养 2 h 后椭圆的花粉粒外
部有了小小的突起(图 2: B)，培养 4 h 后小突起慢
慢伸长，花粉粒呈小蝌蚪状(图 2: C)，这时期最适合
观察统计花粉的萌发情况。进一步培养 8 h 后，萌
发的长长的花粉管互相缠绕在一起，不利于统计花
粉萌发率。
2.3 花药愈伤组织的诱导及芽分化
对菜心花药的愈伤组织诱导进行统计观察，结
果表明，在 MS + 1.0 mg L–1 KT + 1.0 mg L–1 2,4-D +
3% 糖 + 6 g L–1 琼脂 + 8% 椰乳培养基上诱导的愈
伤组织较为紧实，为适宜的愈伤培养基。不定芽分
化培养基以 MS + 2.0 mg L–1 6-BA + 0.5 mg L–1 NAA +
1.0 g L–1 活 性 炭 + 2% 糖 + 6 g L–1 琼 脂 或 MS +
2.0 mg L–1 ZT + 0.5 mg L–1 IAA + 0.5 g L–1 AgNO3 +
402 第22卷热带亚热带植物学报
图 2 菜心花粉的萌发过程。A: 0 h; B: 2 h; C: 4 h.
Fig. 2 Pollen germination of Brassica campestris ssp. chinensis var. utilis. A: 0 h; B: 2 h; C: 4 h.
表 2 菜心花粉的萌发率(%)
Table 2 Pollen germination rate (%) of Brassica campestris ssp. chinensis var. utilis
编号
No.
材料
Material
时间
Hour
日期 Date (D/M)
7/9 15/11
1 49-19 菜心 49-19caixin 0 0 0
2 32 48
4 56 72
2 油绿 50 天 Youlv50tian 0 0 0
2 30 47
4 53 70
3 绿宝 70 天 Lvbao70tian 0 0 0
2 27 40
4 52 68
4 油绿 801 Youlv801 0 0 0
2 31 44
4 57 74
图 1 花蕾和花粉形态。A: 花蕾； B: 小孢子； C: 单核靠边期的小孢子。
Fig. 1 Buds and pollen morphology. A: Buds; B: Microspores; C: Microspores at uninucleate stage.
第4期 403
图 3 菜心花药愈伤组织的诱导
Fig. 3 Callus induction from anther of Brassica campestris ssp. chinensis var. utilis
图 4 菜心不定芽的分化
Fig. 4 Differentiation of adventitious buds for Brassica campestris ssp. chinensis var. utilis
图 5 茎尖培养再生体系的建立。A: 不定芽的分化； B: 不定芽的增殖； C: 再生植株。
Fig. 5 Regeneration system of stem tip culture. A: Differentiation; B: Adventitious bud proliferation; C: Plantlets.
1.0 g L–1 活性炭 + 2% 糖 + 6 g L–1 琼脂较适宜(表
1，分化率为 36.7%)。培养过程中，我们观察到菜心
花药诱导的愈伤组织较容易发生分化，有许多毛状
物生成(图 3)。将结构紧实的愈伤组织转接到分化
培养基中，愈伤组织开始转绿，且有许多芽点生成，
但仅有个别芽点能分化出幼芽(图 4)。随着幼芽的
长大，褐化情况越来越严重，在培养基中添加 Vc 也
不能改善幼芽的褐化，这可能是材料本身的自毒作
用，使得幼芽不能进一步分化，出现褐化死亡。
2.4 菜心外植体培养与再生体系的建立
由于菜心通过花药诱导愈伤组织获得的芽分
化率较低，而且分化质量较差，本研究进一步以子
叶-子叶柄为外植体进行组织培养来获得再生植
株，目的是为以后改进花药培养过程中的芽分化率
提供思路。以菜心子叶-子叶柄为外植体进行组织
培养，结果表明多数外植体组织不进入愈伤组织阶
段而直接分化成不定芽(图 5: A， B)，不定芽诱导
率达到 85%，且芽增殖的速率比较快，将发育较好
乔燕春等：菜心组织培养技术初探
404 第22卷热带亚热带植物学报
的不定芽转到生根培养基中，即 1/4MS 或 1/8MS +
0.1 mg L–1 IBA + 2% 糖 + 6 g L–1 琼脂，可获得完整
植株(图 5: C)，生根率达到 80%。可见，以菜心子叶-
子叶柄为外植体直接分化不定芽可能是菜心材料
的特性，而花药培养经愈伤组织阶段到形成再生植
株比较困难，今后研究思路需要进一步调整。
3 讨论
利用花药和花粉培养获得单倍体或纯合二倍
体植株，省去了常规杂交育种中由于遗传性状的
分离而必需的多代自交程序，并且可作为自交系用
于杂种优势的利用，大大缩短了育种周期，因而一
直是育种工作者研究的一个重点[16]。有关十字花
科蔬菜的花药培养和花粉培养的研究进行得较为
深入，如白菜、小白菜(B. pekinensis)、抱子甘蓝(B.
oleracea var. gemmifera)、皱叶甘蓝(B. oleracea var.
capitata)、花椰菜(B. oleracea var. botrytis)、青花菜、
芥菜(B. juncea)和芜菁(B. rapa)等，有的已被用于育
种实践[17]。虽然有关菜心花药培养和花粉培养也
有一些研究报道，但技术还不是很成熟。福建农业
科学研究所曾开展菜心花粉培养的技术研究，但未
见相关文献。肖旭峰等观察了菜心小孢子发生及
雄配子体的发育[18]；沈阳农业大学的冯辉教授对大
部分十字花科蔬菜开展了小孢子培养的技术研究，
但菜心的小孢子培养技术一直不成熟，还在摸索之
中[12]。
本研究结果表明，菜心花粉处于单核靠边期的
形态特征为花蕾未开放，且花柱头略高于花瓣。秋
冬季的花粉萌发率较夏季的高。菜心花药诱导愈
伤组织的培养基为 : MS + 1.0 mg L–1 KT + 1.0 mg L–1
2,4-D + 3% 糖 + 6 g L–1 琼 脂 + 8% 椰 乳，不 定 芽
分化培养基为 MS + 2.0 mg L–1 6-BA + 0.5 mg L–1
NAA + 1.0g L–1 活 性 炭 + 2% 糖 + 6 g L–1 琼 脂 或
MS + 2.0 mg L–1 ZT + 0.5 mg L–1 IAA + 0.5 g L–1
AgNO3 + 1.0 g L
–1 活性炭 + 2% 糖 + 6 g L–1 琼脂，
花药培养获得的不定芽诱导率为 36.7%，本研究
增加外源激素 BR 和 TDZ 并没有提高芽的诱导
率。以子叶-子叶柄为外植体培养获得的植株再生
率可达到 80%。生根培养基为 1/4 MS 或 1/8MS +
0.1 mg L–1 IBA + 2% 糖 + 6 g L–1 琼脂。本研究通过
菜心花药培养并没有获得完整再生植株，但通过子
叶-子叶柄培养获得了再生植株。不经过愈伤组织
而直接分化不定芽是菜心组织培养的一个特征[19]。
可见用菜心材料通过花药培养途径获得单倍体植
株存在一定困难。
花药培养除了受培养基、生长调节物质影响
之外，还受环境因素影响较大。据报道，花药和
花粉培养技术对供体植株生长的环境条件要求
比较严格，尤其以温度和光照比较敏感，张凤兰[20]
在大白菜小孢子培养中 , 在 14~16 h d–1 的日照及
15℃~20℃的温度下，胚状体的发生率和植株再
生率较高。在花椰菜的花药培养中，以采自春天
10℃~20℃温室中的供体植株的花药培养效果最
好。我们的菜心材料均生长在田间，而菜心的最适
生长期为秋冬季，10–12 月份室外的光照时数较短，
可能使得菜心的花粉活力不够强。可见花药和花
粉培养除了受培养条件，培养基、生长调节物质的
影响之外，供体植株生长的环境也很重要，菜心对
光照可能更敏感。综上所述，影响菜心花药和花粉
培养的因素较多，而且菜心较其他十字花科蔬菜的
培养条件更严格，如何筛选适合菜心花药和花粉培
养的因素、培养基和生长调节物质水平等，建立一
套适合菜心单倍体育种的完善体系，还有待于进一
步深入研究。
参考文献
[1]　 Li G G, Zhang H, Huang H D, et al. Research progress on
flowering Chinese cabbage breeding in Guangdong Province [J].
China Veget, 2011(20): 9–14.
李光光, 张华, 黄红弟, 等. 广东省菜薹(菜心)育种研究进展 [J].
中国蔬菜, 2011(20): 9–14.
[2]　 Zhang L, Wang J. Progress of haploid breeding in Cruciferae
crops [J]. J Anhui Agri Sci, 2003, 31(2): 231–234.
张丽, 王静. 十字花科作物单倍体育种研究进展 [J]. 安徽农业
科学, 2003, 31(2): 231–234.
[3]　 Keller W A, Armstrong K C. Embryogenesis and plant regeneration
in Brassica napusanther cultures [J]. Can J Bot, 1977, 55(10):
1383–1388.
[4]　 Farham M W, Caniglia E J, Thomas C E. Efficient ploidy
determination of anther-derived broccoli [J]. HortScience, 1988,
33(2): 323–327.
[5]　 Gorecka K. Obtaining of homozygous lines of head cabbage
(Brassica oleracea L. var. capitata L.) with aid of anther culture
[J]. Prace Habilitacyjne, 1998(14): 1–71.
[6]　 Geng J F, Yuan Y X, Zhang X W, et al. A new Chinese cabbage:
Yuyuan 50 [J]. Acta Hort Sin, 2002, 29(1): 89.
耿建峰, 原玉香, 张晓伟, 等. 利用游离小孢子培养技术育成抗
第4期 405
热大白菜新品种豫园50 [J]. 园艺学报, 2002, 29(1): 89.
[7]　 Mei S Y, Yang B G, Yao F, et al. Study on anther culture technique
of the radish [J]. China Veget, 2002(1): 35–36.
梅时勇, 杨保国, 姚芳, 等. 萝卜花药培养实验 [J]. 中国蔬菜,
2002(1): 35–36.
[8]　 Feng H, Yang S, Wang C N, et al. Obtaining and utilization of DH
lines in pakchoi (Brassica rapa L. ssp. chinensis L.) [J]. Sci Agri
Sin, 2009, 42(9): 3195–3202.
冯辉, 杨硕, 王超楠, 等. 青梗菜优异DH系的创制与利用 [J]. 中
国农业科学, 2009, 42(9): 3195–3202.
[9]　 Wang T T, Li H X, Zhang J H, et al. Isolated microspore culture
and plant regenerationin purple flowering stalk (Brassica compestris
ssp. chinensis var. pupurea Hort.) [J]. J Wuhan Bot Res, 2004,
22(6): 569–571.
王涛涛, 李汉霞, 张继红, 等. 红菜薹游离小孢子培养与植株再
生 [J]. 武汉植物学研究, 2004, 22(6): 569–571.
[10]　 He H J, Wang X W, Wang B L. Embryogenesis and plant
regeneration of Chinese Kale via isolated microspore culture [J].
Acta Hort Sin, 2004, 31(2): 239–240.
何杭军, 王晓武, 汪炳良. 芥蓝游离小孢子培养初报 [J]. 园艺
学报, 2004, 31(2): 239–240.
[11]　 Zhu Y H, Liu Q, Wu C L, et al. Study on embryoid induction of
Brassica parachinensis Bailey anther culture [J]. Biotechn Bull,
2008(2): 136–139.
朱允华, 刘清, 吴朝林, 等. 菜薹花药培养诱导胚状体的研究
[J]. 生物技术通报, 2008(2): 136–139.
[12]　 Liu R E. Research on the anther culture techniques for several
vegetable crops in Brassica campestris [D]. Shenyang: Shenyang
Agricultural University, 2008: 8–65.
刘如娥. 芸薹属芸薹种几种主要蔬菜作物花药培养技术研究
[D]. 沈阳: 沈阳农业大学, 2008: 8–65.
[13]　 Wu Y F, Ding Z Y, Xiao J, et al. Affecting factors for embryo
rate of anther culture of flowering Chinese cabbage [J]. Hunan
Agri Sci, 2012(7): 8–10,11.
吴艺飞, 丁茁荑, 肖杰, 等. 菜薹花药培养出胚率的影响因素研
究 [J]. 湖南农业科学, 2012(7): 8–10,11.
[14]　 Liu S H, Zeng M H, Liang H, et al. Study on some factors of
culture of Brassica napus CMS lines and flowering Chinese
cabbage hybrid anther [J]. Crops, 2007(3): 58–60.
刘胜洪, 曾慕衡, 梁红, 等. 甘蓝型油菜不育系与菜心杂交后代
花药培养中若干因素的研究 [J]. 作物杂志, 2007(3): 58–60.
[15]　 Liu H C, Jia W Q, Jia G R. Studies on pollen viability and
storage characteristics of Prunus ceraifera [J]. J Anhui Agri Sci,
2010, 38(9): 4507–4508.
刘会超, 贾文庆, 贾国瑞. 紫叶李花粉生活力及贮藏特性研究
[J]. 安徽农业科学, 2010, 38(9): 4507–4508.
[16]　 Guo J Y, Shen S X, Chen X P, et al. Progress of isolated microspore
cultures of Cruciferae vegetabale crops [J]. J Agri Univ Hebei,
2002, 25(S1.): 122–124.
郭金英, 申书兴, 陈雪平, 等. 十字花科蔬菜游离小孢子培养研
究进展 [J]. 河北农业大学学报, 2002, 25(增刊): 122–124.
[17]　 Wu J, Gong Y Q, Liu L W, et al. Advances on plantlet induction
from pollen of Cruciferae vegetables [J]. J Anhui Agri Sci, 2000,
28(6): 747–749,754.
武剑, 龚义勤, 柳李旺, 等. 十字花科蔬菜花粉植株诱导技术研
究进展 [J]. 安徽农业科学, 2000, 28(6): 747–749,754.
[18]　 Xiao X F, Tang J, Zhou Q H. Research and development of male
gametophyte of flowering Chinese cabbage microspore [J]. Mod
Gard, 2013(3): 7–9.
肖旭峰, 唐杰, 周庆红. 菜心小孢子发生及雄配子体发育的研
究 [J]. 现代园艺, 2013(3): 7–9.
[19]　 Cheng Y J, Ai K F, Huang Y Q, et al. Plant regeneration of
Brassica parachinensis cultured in vitro [J]. J S China Agri Univ
(Nat Sci), 2002, 23(4): 89.
程玉瑾, 艾珂飞, 黄颖茜, 等. 菜心离体培养植株再生的研究
[J]. 华南农业大学学报: 自然科学版, 2002, 23(4): 89.
[20]　 Zhang F L, Kuginuki Y, Yoshikawa H. The influence of growth
conditions of donor plants on the microspore culture in Chinese
cabbage [J]. Acta Agri Boreali-Sin, 1994, 9(1): 95–100.
张凤兰, 钉贯靖久, 吉川宏昭. 环境条件对白菜小孢子培养的
影响 [J]. 华北农学报, 1994, 9(1): 95–100.
乔燕春等：菜心组织培养技术初探