全 文 ： 热带亚热带植物学报 1997，5(3)：53—56
Journal of Tropical and Subtropical Botany
； 王)
影响四季桔器官发生的因素
． 篮 潘瑞炽
(华南师范太学生暂系，广州 510631)
何亚文 ／张兰英 李耿光
— — —
华南植物研究所，广州 5l065叶
／
^H 摘要 对四季桔胚轴直接出芽
、 愈伤组织诱导及植株再生能力的研究表明：上、下胚 轴在古有 BA的
MT培养基上，均能直接出芽，但上胚轴出芽能力明显高于下胚轴，最高出芽率为96 9％ 外植体在培
养基上的接种方式，对出芽也有一定影响，上胚轴切段以形态学下端垂直括^，出芽率高，且在培养前
期表现尤为突出。胚轴愈伤诱导的适宜培养基为MT+IBA 0 5 mg L +BA 1 mg L ．禽伤组织分化
时，上、下胚轴愈伤组织所要求的BA浓度分别为4 nag L 及2 mg L～．在根的诱导中，附加的生长
素种类，不仅影响生根率的高低，而且影响上部茎叶的生长，其中以加^1 mg L IBA的效果最好，生
根率达84 4％。
关键词 四季桔：离体培养
— — —
一
- — — 一
器官发生
FACToRS AFFECTING oRGANoGENESIS OF
CITRUs M ICROCARPA BUNGE
He Hong Pan Ruichi
(Department of Biology，South China Normal University，Guangzhou 510631)
He Yawen Zhang Lanying Li Gengguang
(South China Institute of Botany，Academia Sin~a．Guangzhou 510650)
Abstract Hypocotyls and epicotyls from sterile seedling of Citrus microcarpa Bunge were ex-
amined for direct shoot formation，callus induction and plant regeneration．The ability of
shoot induction from epicotyl WaS much higher than that from hypocotyl，with the highest
shoot production frequency of 96．9％．Epicotyl segments oriented with their apical ends
protruding from the medium(t)produced more shoots than that when they were placed
with their basal end upwards(+)or placed horizontaly(一)．Optimal calus induction
medium was MT+IBA 0．5 mg L +BA 1 mg L一．MT me dia with BA 4 mg L for epicotyl
callus，and BA 2 mg L～for hypocotyl callus ，gave higher plant regeneration frequencies．
W hen individual shoot was rooted on a rooting medium suppleme nted with IBA 1 mg L～，
a root induction rate 0f 84．4％ was obserred．
Key words Citrus microcarpa Bunge；／n vitro culture；Organogenesis
1996-1O—o7 收稿；I997-06-09 罄回
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热带亚热带植物学报 第5卷
利用组织培养技术进行柑桔快速繁殖，可概括为外植体直接出芽、愈伤组织和胚状体三种途
径lI】。体细胞胚状体的诱导在柑桔中已获得成功12-31，但主要局限于胚性材料。外植体直接出芽，
通过产生不定芽，再生根成完整植株+已从酸橙、甜橙、枳橙、金柑、柠檬等获得了再生体系H-。 ，
而四季桔还未见报道。愈伤组织途径，即经愈伤组织阶段、再经器官发生再生植株，这方面的
研究很少。柑桔愈伤组织的诱导不受基因型和外植体类型的限制，研究其器官发生与植株再生具
有更广泛的意义。由胚性材料到利用营养器官为材料，无疑更前进了一步，因而能更快、更好地
运用到育种实践中去。本文以四季桔胚轴为材料，研究胚轴直接出芽及经愈伤组织再分化芽两种
再生途径，为快速繁殖、诱变育种及遗传转化，提供参考。
1 材料与方法
植物材料 四季桔(Ci~rus microcarpa Bunge)种子经表面消毒培养无菌苗，当苗长至20 d
左右，取上、下胚轴为试验材料。以下每个处理一般接种 4O块。
直接出芽试验 将无菌苗上胚轴切成约l cm长，下胚轴约O 5 cm长，接种于附加一定浓
度 BA的MT培养基中。
愈伤组织诱导 切取上、下胚轴约0．5 cm长的小段，接种于愈伤组织诱导培养基。
愈伤组织分化 当愈伤组织生长一个月左右，从外植体上切下，转至分化培养基
培养条件 培养温度为26 4-1℃，每天光照16 h。
2 结果与分析
2．1 胚轴培养诱导直接出芽
不同BA浓度的影响 BA对
四季桔胚轴出芽效果较好．以MT
为基本培养基加入不同浓度的 BA．
试验结果可见(表 1)，上胚轴出芽率
普遍高于下胚轴，培养 50 d时，上胚
轴最高出芽率可达96．9％，下胚轴仅
为32．3％。上胚轴培养中， 培养至
30 d时，BA对芽的发生有一定的延
缓作用。以不加BA的MT培养基
裹 1 不同RA浓度对出芽率的影响
Table 1 Efect of BA concentration Oil frequency of shoot formation
at 30 and 50 days after inoculation
的出芽率最高(65．3％)，加入BA出芽率反而降低，而且这种下降趋势随BA浓度的升高而越明显．但
培养至 50 d时，MT培养基出芽率变化不大，而加入BA后，出芽数大增，尤以2—4 mg L BA
突出。下胚轴培养中，30 d和5O d出芽率无明显变化，培养基以不加BA或 l nag L BA为好，
随着BA浓度升高，出芽率下降。
外植体在培养基中放置方式的影响 用上胚轴以3种接种方式，即形态学下端垂直插入
(})，形态学上端朝下垂直插入( )和外植体水平放置(一)于培养基MT+BA 2 mg L (图版I：l，
2)。结果表明(表2)， } 放置的上胚轴切段出芽率最高。 放置，培养30 d时，出芽水平极
低，仅为 l2．1％，但随着培养时间的延长，出芽率则大大提高，与 一 放置的外植体达到接近的
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第3期 贺红等：影响四季桔器官发生的因素
水平(60％ 以上) 这说明“ 放置的外植体，在培养
时，体内激素有一个再分配的过程，表现前期出芽速
度慢
2．2 胚轴愈伤组织的诱导及分化
愈伤组织的诱导 基本培养基附加 1 mg L 的
BA，并分别配合不同生长素类：2，4-D、IAA、NAA
和IBA，浓度均为 0．5 mg L 试验结果显示：四种
培养基均能成功诱导胚轴愈伤组织发生(图版 I：3)，
表2 外檀体在培养基中放置方式对出芽的影响
T~b[e 2 Efect of plant poEtuTe or ta n
in medium On shoot formatiou frequcncy
但从后期分化试验中观察到，在诱导愈伤组织的培养基中，附加的生长素种类可直接影响分化能
力，例如在附加2，4-D培养基上生长的愈伤组织难以分化；而IBA处理中获得的愈伤组织却能
得到较多分化芽；IAA、NAA处理次之
不同BA浓度对分化的影响 几种激素组合
的比较试验表明，BA与IBA结合，有利于四季
桔愈伤组织的分化(表 3)
愈伤组织转至分化培养基经一段时何后，愈
伤组织开始变绿，表面变粗糙，长出许多小突起，
进而长成小芽点，再生长成茎芽，有单生，也有
丛生，有的芽多达 1O个以上 (图版I：4，5)。上胚
轴愈伤组织分化率普遍高于下胚轴，BA浓度 3—
5 mg L 时，上胚轴愈伤组织均有较高的分化率，
表 3 RA浓度对立伤组织分化辜(％)的影响
Tahie 3 Efect of BA co~~~ntration 0n the
dif~rcntiation rate(％)of ca[1us
MT+IBA 0 54-BA l I4 3
MT+IBA O 5+BA 2 54．6
MT+IBA 0．5 4-BA 3 4g 2
MT+IBA 0．5 4-BA 4 40 0
MT+m A 0 5+BA 5 22．5
21 4
5O|3
70 3
74 7
64．5
其中 BA 4 mg L 的分化率最高(74．7％)。下胚轴适宜的BA浓度为2 mg ，分化率为
54．6％ 试验中还观察到，BA为4—5 mg L 时，下胚轴愈伤组织均有部分变黄、死亡，说明
该浓度对愈伤组织本身造成了毒害，而在上胚轴愈伤组织培养中，未发现此现象 由此说明，来
源于不同外植体的愈伤组织，在分化时，所要求的BA浓度是不同的
2 3 根的诱导
胚轴培养直接出芽及胚轴愈伤组织分化得到的芽，长出茎叶后，在原培养基上一般不能形成
根，或仅形成少量根，必须将已形成茎叶的无根苗，切下转人生根培养基，才能成功诱导生根
f图版 I：6)
不同生长素类化合物对生根的效果不同 将具有数片真叶的无根苗，转至附加 1 mg L 不
同生长素类的MT培养基中，一般转管后20 d左右即开始生根，一个月可达到较高的生根率
结果表明，四季桔无根苗的生根以IBA效果最好，生根率达84．4％；IAA次之(75．9％)；不加
任何生长素的MT培养基，也有较高的生根率(57．4％)；NAA效果最差，仅为 40．6％ 试验中
还观察到，在附加IAA、IBA及无激素的MT培养基上生长的根，形态相似：较稀疏、细长，
苗的生长也都较好，茎叶生长旺盛，叶片颜色深绿 NAA处理中，根的生长更为旺盛，一般成
簇状，且在根部形成少量愈伤组织，这在一定程度上抑制上部茎叶的生长，表现为植株长势不良，
茎杆纤细，叶片小而色淡
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热带亚热带植物学报 第5卷
3 讨论
四季桔胚轴培养诱导直接出芽，在MT基本培养基上，不加任何激素，也有较高的出芽率；
无根苗在MT培养基上也能部分生根，这说明外植体及其再生芽，含有较多内源激素，本身具有
较强的再生能力，这对于四季桔组织培养是一个有利条件。
在四季桔愈伤组织的器官发生再生植株过程中，植物激素起着重要作用。一定的外源激素水
平，可能调节内源激素配比，从而有利于愈伤组织的诱导与分化。植物激素的作用在于引起细胞
发育途径的改变，使得离体组织的细胞经历一个脱离原状态而进入到分生状态的过程，以恢复分
裂增生的能力，在新的培养条件下，开始新的分化发育过程，最终形成新的组织、器官，再发育
成完整植株．从脱分化到再分化，在植株个体发育过程中出现的顺序前进以此完成生活周期，这
种离体培养较之于活体提供了一个更为一致和可控的系统，这对于遗传学的研究、培育新品种及
获得新种质，具有重要意义．
从柑桔离体培养现有的文献看到，诱导不定芽生根的生长素，一般是选择NAA刚，而本试
验中，NAA对于四季桔生根并不理想，生根率低，且上部茎叶生长不良，但IBA却表现出明显
优势。IBA不仅能成功诱导生根，而且有利于愈伤组织诱导及分化，对于四季桔外植体器官发生
具有良好的效果。
参考文献
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图版说明
1．上胚轴垂直放置出芽：2．上胚轴承平放置出芽；3 上胚轴培养诱导的禽伤组织；4 愈伤蛆级开始分化：5．愈伤组
织分化出多个芽；6．无根苗诱导出根
Explanation of plate
1．Shoots from epicotyl verticaⅡy put into the medium；2．Shoots from epico【y1 horiaotaUy laid o]I the medium；
3．Calus from epiaotyl；4．1nitial diferentiation from calus；5 Shoots diferentiated from calus；6．Root induced from
shoot
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