全 文 ：植物生理学报 Plant Physiology Journal 2016, 52 (5): 645–652 doi: 10.13592/j.cnki.ppj.2016.0099 645
收稿 2016-03-08 修定 2016-04-12
资助 广东省省级科技型中小企业技术创新专项(2014A010101097)
和广东省省级科技计划项目(2014A030304004)。
* 通讯作者(E-mail: dxmei2006@scau.edu.cn)。
云南樱桃优良单株的组织培养与快速繁殖
叶小玲1, 胡晓敏2, 叶超宏3, 唐伟洲4, 沈荔荔5, 邓小梅4,*
1广州天适集团有限公司, 广州510335; 2广东天适樱花悠乐园有限公司, 广州510920; 3广州旺地园林工程有限公司, 广州
510335; 4华南农业大学林学与风景园林学院, 广东省森林植物种质创新与应用重点实验室, 广州510642; 5英德市旺地樱花
种植有限公司, 广东英德513000
摘要: 以云南樱桃优株‘广州’樱的半木质化嫩枝为外植体, 采用丛生芽发生途径, 建立其组培快繁体系。结果表明: 最佳腋
芽诱导培养基为改良MS (针对云南樱桃组织培养配制的基本培养基)+1.0 mg·L-1 6-苄氨基嘌呤(6-BA)+0.1 mg·L-1萘乙酸
(NAA)+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1琼脂, 诱导率高达100%; 最适增殖培养基为改良MS+1.0 mg·L-1 6-BA+0.05 mg·L-1 NAA+0.2
mg·L-1吲哚丁酸(IBA)+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1琼脂, 继代周期15 d, 增殖系数达4.72; 最适生根培养基为1/2改良MS+0.5 mg·L-1
NAA+0.5 mg·L-1 IBA+15 g·L-1蔗糖+6 g·L-1琼脂, 15 d生根率达100%, 平均每株苗生根5条以上。炼苗后, 移栽于泥炭土:珍珠
岩:蛭石=2:1:1 (V/V/V)的混合基质中, 成活率达90%以上。
关键词: 云南樱桃; 组织培养; 基本培养基; 快速繁殖
云南樱桃(Cerasus yunnanensis)为蔷薇科(Ro-
saceae)樱属落叶乔木, 原产我国云南、四川和广
西, 是重要园林观赏和绿化树种。其树形优美, 花
白色, 近伞房总状花序, 花叶同开或花近先叶开放
(中国科学院中国植物志编辑委员会1986; 黄珂等
2011)。‘广州’樱是从野生云南樱桃中选育出来的
一个优良、速生成年单株 , 其花色粉嫩、花瓣
大、耐热性好、抗逆性强, 在广东地区的花期为2
月下旬至3月中旬, 是适合华南地区种植的新优速
生樱花观赏品种, 开发前景广阔(叶超宏等2014)。
樱花常规繁殖主要通过种子繁殖、嫁接繁殖
及少量扦插繁殖, 而樱花组织培养研究较晚, 主要
集中在食用樱桃及其砧木树种上, 占多数的观赏樱
花上则少有报道, 且大多尚处于初步研究和探索阶
段, 仅福建山樱花(Cerasus campanulata) (王光萍和
黄敏仁2002; 吕月良等2006; 闰道良等2006; 王贤荣
和荣冬青2008; 徐楠2008; 贾利娜2010; 李勇等
2015)、早樱(Cerasus subhirtella) (荣冬青和王贤荣
2008)等少数几个种的组培技术有报道, 取得了较好
的成果。但和其他木本植物一样, 种(品种)、种
源、取材部位等对樱花组培影响很大, 且初次培养
的褐变死亡和继代培养中玻璃化苗大量产生是普
遍存在的问题, 还没找到彻底解决的方法。目前尚
未见云南樱桃的组培快繁报道, 已有报道的樱花相
关组培技术不适用于‘广州’樱, 而常规繁殖速度慢,
严重制约了‘广州’樱的快速推广应用。本研究所建
立的‘广州’樱组培快繁技术体系为其规模化高效快
繁提供了有效途径, 以期加快其推广应用进程。
材料与方法
1 植物材料
云南樱桃[Cerasus yunnanensis (Franch.) Yu et
Li]优株‘广州’樱定植于广州天适集团有限公司韶
关大布基地, 为五年生实生植株。
2 外植体处理
采集外植体前, 每隔7 d用多菌灵和百菌清交
替喷洒萌枝4~5次。于天气晴朗的上午10:00左右,
从‘广州’樱母株上剪取生长健壮、无病虫害的半
木质化嫩枝为外植体。将枝条剪成4 cm左右长的
带叶腋茎段, 在超净工作台上先用无菌水擦洗干
净, 再用1% (m/V)新吉尔灭溶液浸泡6 min。倒掉
新吉尔灭溶液后 , 用无菌水冲洗3次 , 然后加入
0.1% (m/V)升汞(HgCl2)溶液, 根据外植体幼嫩程度
浸泡1~6 min, 其间不断摇动, 倒掉升汞溶液后, 再
用无菌水冲洗6次。用无菌滤纸吸干无菌材料表
面水珠, 再用无菌刀片切除叶柄和茎段两端受伤
部位, 将茎段切成2 cm左右带1~2个节间, 接种到
诱导培养基上。
3 腋芽诱导
采用以下10种培养基进行腋芽诱导: (1) MS+
0.5 mg·L-1 6-苄氨基嘌呤(6-BA); (2) MS+0.5 mg·L-1
6-BA+0.1 mg·L-1萘乙酸(NAA); (3) MS+0.5 mg·L-1
植物生理学报646
6-BA+0.1 mg·L-1吲哚丁酸(IBA); (4) 1/2MS+0.5
mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 NAA; (5) 1/4MS+1.0 mg·L-1
6-BA+0.1 mg·L-1 NAA; (6)改良MS (组成为1 200
mg·L-1 NH4NO3、600 mg·L
-1 KNO3、90.6 mg·L
-1
CaCl2、305.8 mg·L
-1 Ca(NO3)2、0.17 mg·L
-1
CuSO4、0.1 mg·L
-1 VB1、0.2 mg·L
-1烟酸和0.2
mg·L-1 VB6, 文中若无特殊说明均同此)+1.0 mg·L
-1
6-BA+0.1 mg·L-1 NAA; (7)改良MS+1.0 mg·L-1
6-BA+0.5 mg·L-1 NAA; (8)改良MS+1.0 mg·L-1
6-BA+1.0 mg·L-1 NAA; (9)改良MS+1.5 mg·L-1
6-BA+0.1 mg·L-1 NAA; (10)改良MS+2.0 mg·L-1
6-BA+0.1 mg·L-1 NAA; 以上各种培养基均添加
30 g·L-1蔗糖和6 g·L-1琼脂, pH 5.8。每瓶接种1个
外植体, 每个处理60瓶。培养条件(文中若无特殊
说明均同此): 培养温度(25±2)°C, 光照时间12 h·d-1,
光强60 μmol·m-2·s-1。20 d后, 观察腋芽生长状况,
统计诱导率: 诱导率=萌芽外植体数/接种外植体数
×100% (污染外植体剔除)。
4 增殖培养
4.1 基本培养基的筛选
待诱导出的腋芽长至2 cm左右时, 接入丛生
芽诱导培养基。采用B5 (Gamborg等1968)、MS
(Murashige和Skoog 1962)、改良MS、3/4改良MS
(大量减1/4)、1/2改良MS (大量减半)、WPM
(Lloyd和McCown 1980)和MT (Wang和Chang
1978)共7种不同的基本培养基, 均添加1.0 mg·L-1
6-BA、0.1 mg·L-1 NAA、30 g·L-1蔗糖和6 g·L-1琼
脂。每处理6瓶, 每瓶接种6个芽段, 重复3次。
4.2 植物生长调节剂水平及配比的筛选
采用L16(4
3)正交试验设计, 以改良MS为基本
培养基, 设置6-BA (0.1、0.5、1.0和1.5 mg·L-1)、
NAA (0、0.05、0.1和0.2 mg·L-1)和IBA (0、0.05、
0.1和0.2 mg·L-1) 3因素4水平共16个处理, 每个处
理6瓶, 每瓶接种6个芽丛, 重复3次。培养15 d后统
计增殖系数(增殖倍数), 并记录增殖情况。
5 生根培养
选取生长健壮、高2 cm的继代芽进行生根培
养, 培养温度(25±2)°C, 光照时间12 h·d-1, 光强80
μmol·m-2·s-1。采用L9(3
2)正交试验设计, 以1/2改良
MS作为基本培养基, 添加15 g·L-1蔗糖和6 g·L-1琼
脂。设置NAA (0.2、0.5和1.0 mg·L-1)和IBA (0.2、
0.5和1.0 mg·L-1) 2因素3水平共9个处理, 每处理5
瓶, 每瓶10个芽, 重复3次。15 d后统计生根率和生
根苗情况。
6 炼苗和移栽
将生根瓶苗移到温室中适应外界环境5~7 d,
然后将组培瓶盖从半开到全开炼苗1 d, 炼苗后将
瓶中的幼苗小心取出, 洗净黏在苗上的培养基, 移
植到填满泥炭土:珍珠岩:蛭石=2:1:1 (V/V/V)混合基
质的育苗杯中, 覆土深度刚好盖住根系, 移植完成
后淋透定根水、覆膜并加盖遮阳网, 5 d后移去遮
阳网并逐步增加光照强度, 直到进行全光照常规
管理, 一个月后统计移栽成活率: 移栽成活率=存
活苗数/移栽苗数×100%。
实验结果
1 腋芽诱导
如表1所示, 改良MS适合作为‘广州’樱腋芽诱
导的基本培养基, 不定芽的诱导效果最好; 1/2MS
基本培养基不利于诱导芽的后期生长, 后期叶色
偏黄, 不适合作为‘广州’樱不定芽诱导培养基; MS
基本培养基诱导腋芽长势一般, 诱导率较低, 主要
是由于褐化现象比较严重。在只添加6-BA的培养
基上, 腋芽也能萌动, 但萌动慢, 诱导率较其他处
理低, 可见6-BA与NAA或IBA配合使用比6-BA单
独使用诱导腋芽效果好, 其中6-BA与NAA组合效
果优于6-BA与IBA组合。‘广州’樱的最佳诱导培
养基为改良MS+1.0 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 NAA,
接种3 d后腋芽开始萌动, 12 d左右为出芽最盛期,
第20日腋芽抽出嫩枝长至3 cm左右, 顶芽抽出嫩枝
长至1.0 cm左右, 芽健壮, 叶色浓绿(图1-A), 诱导率
可达100% (污染外植体剔除)。
2 增殖培养
2.1 基本培养基对增殖的影响
如表2所示, 以B5、WPM和1/2改良MS为基本
培养基, ‘广州’樱的增殖系数低, 芽细小、长势弱,
后期甚至死亡, 表明这3种基本培养基不适合‘广
州’樱的增殖培养; 在3/4改良MS、MS和MT基本
培养基上, 增殖系数仅略低于改良MS, 但增殖芽长
势差。改良MS为‘广州’樱丛芽诱导最适基本培养
基, 增殖系数最高, 达3.92, 丛芽生长健壮, 叶片浓
绿而开展, 芽粗壮、长势良好。方差分析结果(表
叶小玲等: 云南樱桃优良单株的组织培养与快速繁殖 647
表1 不同诱导培养基对‘广州’樱不定芽诱导及生长的影响
Table 1 Effects of different culture media on adventitious bud induction of C. yunnanensis ‘Guangzhou’
培养基/mg·L-1 接种后无菌数/个 诱导数/个 诱导率/% 诱导情况
MS+0.5 6-BA 50 3 6 易发生褐化, 芽萌发慢、长势一般
MS+0.5 6-BA+0.1 NAA 50 15 30 易发生褐化, 芽较粗壮、长势一般
MS+0.5 6-BA+0.1 IBA 52 11 21.2 易发生褐化, 芽一般壮、长势一般
1/2MS+0.5 6-BA+0.1 NAA 46 16 34.8 几无褐化, 芽长势渐弱, 叶偏黄、稍卷曲
1/4MS+1.0 6-BA+0.1 NAA 48 14 29.2 无褐化, 芽长势弱, 叶色较黄、卷曲
改良MS+1.0 6-BA+0.1 NAA 44 44 100 无褐化, 芽长势旺盛, 叶色浓绿
改良MS+1.0 6-BA+0.5 NAA 49 36 73.5 无褐化, 芽长势旺盛, 叶浓绿, 基部愈伤较多
改良MS+1.0 6-BA+1.0 NAA 51 30 58.8 无褐化, 芽长势旺盛, 叶绿色, 基部愈伤多
改良MS+1.5 6-BA+0.1 NAA 51 26 51.0 芽细弱, 长势一般, 部分叶片玻璃化
改良MS+2.0 6-BA+0.1 NAA 53 22 41.5 芽细弱, 长势差, 玻璃化现象严重
表2 不同基本培养基对‘广州’樱增殖的影响
Table 2 Effects of different basal media on proliferation of C. yunnanensis ‘Guangzhou’
基本培养基 增殖系数 生长情况
B5 1.72Ee 叶发黄、皱缩, 茎较细, 芽不良
1/2改良MS 2.54Dd 叶浅绿、不伸展, 茎细, 芽良好但生长慢
3/4改良MS 3.17Cc 叶较绿、伸展, 茎粗一般, 芽较好
改良MS 3.92Aa 叶浓绿、伸展, 茎粗壮, 芽生长快且好
MS 3.61Bb 叶黄绿、伸展, 茎粗一般, 芽良好
WPM 1.83Ee 叶淡绿、较小, 茎较细, 芽不良、偏黄
MT 3.53Bb 叶黄绿、伸展, 茎粗一般, 芽良好
同列数据用不同小写字母标识表示差异显著(P<0.05), 用不同大写字母标识表示差异极显著(P<0.01), 表5和7同。
图1 ‘广州’樱的不定芽诱导和植株再生
Fig.1 Adventitious buds induction and plant regeneration of C. yunnanensis ‘Guangzhou’
A: 不定芽诱导; B: 增殖培养; C: 增殖芽; D: 生根培养; E: 组培生根苗; F: 生根苗移栽。
植物生理学报648
3)表明, 不同基本培养基对‘广州’樱的增殖系数的
影响均达到极显著水平。从Duncan多重比较分析
(表2)可以看出, 使用改良MS与使用其他培养基间
均达到了极显著差异。综上所述, ‘广州’樱增殖效
果最理想的基本培养基为改良MS培养基。
2.2 不同植物生长调节剂及配比对增殖的影响
如表4所示, 整体上, 随着培养基中6-BA浓度
的增高, ‘广州’樱有效芽率呈下降趋势, 增殖系数
先增高后降低。在6-BA浓度较低(0.1 mg·L-1)时,
增殖系数虽然较低, 但增殖苗生长旺盛, 茎段节间
伸长明显, 茎段较粗, 叶大、浓绿、舒展, 有效芽
率高; 随着6-BA浓度的升高, 腋芽萌发能力增强,
且芽基部有大量丛芽出现, 增殖系数因而迅速增
高, 当6-BA浓度上升至1.0 mg·L-1时, 增殖系数整体
较其他水平上高; 但当6-BA浓度升至1.5 mg·L-1时,
丛芽生长一般, 叶片明显增厚且有些成水渍状, 叶
黄绿色、略有卷曲, 茎较细弱, 茎段节间明显缩短,
从而使有效芽率明显降低, 主要是因为随着6-BA
浓度升高, 芽增多, 芽间生长对养分和空间的竞争
也随着增大, 影响了芽的生长, 从而降低了增殖系
数和有效芽率。由此可见, 6-BA浓度在1.0 mg·L-1
为宜。综合增殖系数和芽生长情况, 改良MS+1.0
mg·L-1 6-BA+0.05 mg·L-1 NAA+0.2 mg·L-1 IBA为
‘广州’樱的最适增殖培养基, 增殖系数平均可达
4.72, 长度适中, 植株健壮。
极差分析结果(表5)表明, 从极差(R)值来看,
影响‘广州’樱增殖系数因素的主次顺序为6-BA>
NAA>IBA, 影响‘广州’樱有效芽率因素的主次顺
序为6-BA>IBA>NAA, 其中, 6-BA对‘广州’樱增殖
系数和有效芽率作用最为显著, 极差分别达到2.31
和54。以不定芽增殖系数为参考指标, 以均值来
选优得出适合‘广州’樱增殖的最佳激素水平组
合是1.0 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 NAA+0.2 mg·L-1
IBA。
表3 不同基本培养基对‘广州’樱增殖的影响方差分析
Table 3 Variance analysis of the effects of different basal media on proliferation of C. yunnanensis ‘Guangzhou’
指标 变异来源 平方和 自由度 均方 F P
增殖系数 处理间 14.043 6 2.34 413.73 <0.001
处理内 0.079 14 0.01
总计 14.123 20
F和P分别为统计量的观测值和概率, 表6和9同。
表4 不同植物生长调节剂配比对‘广州’樱增殖的影响
Table 4 Effects of different plant growth regulator levels on proliferation of C. yunnanensis ‘Guangzhou’
培养基/mg·L-1 增殖系数 有效芽率/% 生长情况
改良MS+0.1 6-BA 1.67Ih 95.7Aa 芽少、长、粗壮
改良MS+0.1 6-BA+0.05 NAA+0.05 IBA 2.05Hg 93.9ABab 芽少、长、粗壮
改良MS+0.1 6-BA+0.1 NAA+0.1 IBA 2.53Gf 91.7ABab 芽少、长、粗壮
改良MS+0.1 6-BA+0.2 NAA+0.2 IBA 2.01Hg 90.2ABCa 芽少、长、粗壮
改良MS+0.5 6-BA+0.05 IBA 2.57Gf 78.7Ee 芽较多、较长、粗
改良MS+0.5 6-BA+0.05 NAA 2.69Fe 81.4DEe 芽较多、较长、粗
改良MS+0.5 6-BA+0.1 NAA+0.2 IBA 2.97DEd 86.8BCDdc 芽较多、较长、粗
改良MS+0.5 6-BA+0.2 NAA+0.1 IBA 2.74FGe 83.9CDEde 芽较多、较长、粗
改良MS+1.0 6-BA+0.1 IBA 4.21BCc 48.8FGHfg 芽较多、长一般、粗
改良MS+1.0 6-BA+0.05 NAA+0.2 IBA 4.72Aa 49.3FGf 芽较多、长一般、粗
改良MS+1.0 6-BA+0.1 NAA 4.18Cc 51.1Ff 芽较多、长一般、粗
改良MS+1.0 6-BA+0.2 NAA+0.05 IBA 4.39Bb 41.5HIJhi 芽较多、长和粗一般
改良MS+1.5 6-BA+0.2 IBA 2.81EFe 42.5HIJhg 芽多、小、弱
改良MS+1.5 6-BA+0.05 NAA+0.1 IBA 2.68FGe 39.9IJhi 芽多、小、弱
改良MS+1.5 6-BA+0.1 NAA+0.05 IBA 3.09Dd 36.2Ji 芽多、小、弱
改良MS+1.5 6-BA+0.2 NAA 2.77Fe 37.1GHIgh 芽多、小、弱
叶小玲等: 云南樱桃优良单株的组织培养与快速繁殖 649
方差分析结果(表6)显示, 细胞分裂素6-BA对
‘广州’樱增殖系数和有效芽率的影响均达到极显
著水平; NAA和IBA对‘广州’樱增殖系数和有效芽
率均无显著影响; 影响‘广州’樱增殖系数因素的主
次顺序为6-BA>NAA>IBA, 影响‘广州’樱有效芽率
因素的主次顺序为6-BA>IBA>NAA, 所得结果与
表5 不同植物生长调节剂配比对‘广州’樱增殖的影响极差分析
Table 5 Range analysis of the effects of different plant growth regulator levels on proliferation of C. yunnanensis ‘Guangzhou’
指标 因子 6-BA NAA IBA 指标 因子 6-BA NAA IBA
增殖系数 水平1 2.07 2.82 2.83 有效芽率 水平1 92.9 66.5 66.3
水平2 2.74 3.04 3.03 水平2 82.7 66.1 62.3
水平3 4.38 3.19 3.04 水平3 47.7 66.5 66.1
水平4 2.84 2.98 3.13 水平4 38.9 63.2 67.2
极大值 4.38 3.19 3.13 极大值 92.9 66.5 67.2
极小值 2.07 2.82 2.83 极小值 38.9 63.2 62.3
R 2.31 0.37 0.3 R 54 3.3 4.9
极差分析(表5)一致。
综上可知 , 6-BA对‘广州’樱增殖作用最明
显。综合考虑增殖系数、有效芽率和腋芽生长情
况, 最适合‘广州’樱的增殖培养基为改良MS+1.0
mg·L-1 6-BA+0.05 mg·L-1 NAA+0.2 mg·L-1 IBA (图
1-B和C)。
表6 不同植物生长调节剂配比对‘广州’樱增殖的影响方差分析
Table 6 Variance analysis of the effects of different plant growth regulator levels on proliferation of C. yunnanensis ‘Guangzhou’
指标 变异来源 III型平方和 自由度 均方 F P
增殖系数 6-BA 11.43 3 3.81 90.017 <0.001
NAA 0.292 3 0.097 2.297 0.178
IBA 0.193 3 0.064 1.516 0.303
误差 0.134 6 0.045
总计 156.648 16
有效芽率 6-BA 8 276.737 3 2 758.912 560.493 <0.001
NAA 30.187 3 10.062 1.166 0.397
IBA 49.797 3 16.599 1.923 0.227
误差 51.779 6 8.63
总计 77 144.23 16
3 生根培养
如表7所示, ‘广州’樱的生根率随着NAA浓度
的升高先增高后降低, 最适宜的NAA浓度为0.5
mg·L-1, 植株生长健壮, 叶色翠绿, 生根效果好。结
果表明‘广州’樱最佳生根培养基为1/2改良MS+0.5
mg·L-1 NAA+0.5 mg·L-1 IBA, 当芽接入培养基后第
5日, 基部开始直接形成根突起, 之后根系迅速生
长, 第10日可长至2~3 cm, 15 d最佳诱导培养基的
生根率高达100% (图1-D和E)。表8极差值表明, 影
响‘广州’樱生根的因素主次顺序为NAA>IBA; 其
中对‘广州’樱生根效果最明显的是NAA, 极差为
25.10; 由极差分析结果所得的‘广州’樱最佳生根培
养基组合为NAA (水平2)和IBA (水平3), 即0.5
mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-1 IBA。方差分析结果(表9)
显示, NAA对‘广州’樱的生根影响达到显著水平,
而IBA对‘广州’樱生根的影响不显著。综合生根效
果及苗生长情况选优, ‘广州’樱最佳的生根培养基
为1/2改良MS+0.5 mg·L-1 NAA+0.5 mg·L-1 IBA。
4 移栽
从表10可以看出, 不同时间移栽成活率不小
于90%, 9~12月移栽成活率高达97%, 接下来依次
是3~6月、1~2月、7~8月。从苗生长情况看, 除
1~2月小苗需要7 d左右新根萌动, 其他时间段, 小
苗移栽后3~5 d新根萌动, 苗生长快, 8 d左右新叶
萌发, 一个月后苗高达5~6 cm (图1-F), 可见, ‘广州’
樱瓶苗移栽受自然条件影响不大, 可终年生产。
植物生理学报650
表8 不同植物生长调节剂配比对‘广州’樱生根的影响极差分析
Table 8 Range analysis of the effects of different plant growth regulator levels on rooting of C. yunnanensis ‘Guangzhou’
因子 水平1 水平2 水平3 极大值 极小值 R
NAA 71.13 96.23 89.33 96.23 71.13 25.10
IBA 80.67 87.80 88.23 88.23 80.67 7.56
表9 不同植物生长调节剂配比对‘广州’樱生根的影响方差分析
Table 9 Variance analysis of the effects of different plant growth regulator levels on rooting of C. yunnanensis ‘Guangzhou’
变异来源 III型平方和 自由度 均方 F P
NAA 1 008.86 2 504.43 58.496 0.017
IBA 108.327 2 54.163 6.281 0.137
对照 53.527 2 26.763 3.104 0.244
误差 17.247 2 8.623
总计 67 082.85 9
表10 不同移栽时间对‘广州’樱组培苗移栽效果的影响
Table 10 Effects of various periods on transplanting survival
rate of C. yunnanensis ‘Guangzhou’
移栽时间/月份 成活率/% 苗生长情况
1~2 95 7 d左右新根萌动, 苗生长较慢
3~6 91 4~5 d新根萌动, 苗生长较快
7~8 90 3~4 d新根萌动, 苗生长快
9~12 97 4~5 d新根萌动, 苗生长快
表7 不同植物生长调节剂配比对‘广州’樱生根的影响
Table 7 The effects of different plant growth regulator levels on rooting of C. yunnanensis ‘Guangzhou’
浓度/mg·L-1
生根率/% 生长情况
NAA IBA
0.2 0.2 62.0Fg 植株矮小, 叶绿色, 生根慢、不整齐, 根少、一般粗
0.2 0.5 72.7Ef 植株矮小, 叶绿色, 生根慢、不整齐, 根少、一般粗
0.2 1 79.3De 植株矮小, 叶绿色, 生根较整齐, 根少、一般粗
0.5 0.2 92.0Bc 植株健壮, 叶翠绿, 生根较整齐, 根系粗壮
0.5 0.5 100Aa 植株健壮, 叶翠绿、平展, 生根快、整齐, 根多、粗壮
0.5 1 96.7Ab 植株健壮, 叶翠绿、平展, 生根较整齐, 根粗壮
1 0.2 88.0Cd 植株高一般, 叶绿色, 根多而细
1 0.5 90.7BCcd 植株高一般, 叶绿色, 根多而细
1 1 89.3BCcd 植株高一般, 叶绿色, 根多而细
讨 论
‘广州’樱组织培养在初代培养中污染及褐化
问题较严重, 控制污染与褐化是其组织培养的关
键。本文所选母本‘广州’樱定植于户外, 由于长期
暴露于自然条件下, 外植体带菌较多, 为减少外植
体带菌, 在采集外植体前, 每隔7 d用多菌灵和百菌
清交替喷洒萌枝4~5次, 可有效降低污染率。研究
发现‘广州’樱外植体最佳采集时间为4月, 5月以后
采集外植体污染率高、褐化现象严重。消毒过程
中, 不宜选用75%乙醇, 否则褐化严重。较好的消
毒组合为1%新吉尔灭溶液6 min+0.1%升汞溶液
1~6 min (据外植体幼嫩程度定), 污染率在26.7%
以内。
目前, 樱花组培采用的基本培养基为1/4~1MS
(李勇等2015; 荣冬青和王贤荣2008; 徐楠2008; 吕
月良等2006; 王光萍等2002), 大多数诱导和继代培
养以MS为主, 生根以1/2MS为主。研究发现, MS
不适合‘广州’樱的组织培养, 因其无机盐浓度过高
导致外植体褐变, 这与高国训(1999)的观点一致。
本研究通过改良MS, 有效地解决了‘广州’樱组织
培养过程中的褐化问题。基本培养基只能保证培
叶小玲等: 云南樱桃优良单株的组织培养与快速繁殖 651
养目标的生存和最低生理活动所需, 只有配合适
当的植物生长调节剂才能启动细胞分裂、形态建
成、器官分化、发育等。所报道樱花组织培养研
究中, 常用细胞分裂素和生长素组合为6-BA与IBA
组合或与NAA组合。在‘广州’樱的诱导中, 6-BA
单独使用腋芽诱导效果没有6-BA与NAA或IBA配
合使用腋芽诱导效果好, 且6-BA与NAA组合诱导
不定芽的效果要优于6-BA与IBA组合。
大部分的植物组织培养在光下进行, 但暗培
养可以活化伤口细胞, 减少外植体酚类物质的溢
出, 有利于芽的分化。本研究发现, 在‘广州’樱增
殖培养中, 前期的短期(2~4 d)暗处理有利于‘广州’
樱茎的伸长。报道中, 大多数樱花的继代周期为1
个月左右, 而‘广州’樱增殖芽生长速度快, 继代周
期为15 d, 但其转接周期不能超过20 d, 否则易出现
黄叶和烂顶现象, 且带黄叶的芽生根较慢, 植株叶
色发黄、瘦弱甚至死亡。故在规模化生产时, 为
保证芽的质量和有效利用空间, 要及时转接。
大多数樱花组培生根中, NAA和IBA配合使
用的效果优于单独使用(荣冬青和王贤荣2008; 吕
月良等2006), 这一点在‘广州’樱生根中同样适
用。‘广州’樱芽接入合适的生根培养基后第5日,
基部开始直接形成根突起, 第10日根可长至2~3
cm, 15 d后生根率高达100%, 其生根速率和效果优
于所报道的其他樱花品种。‘广州’樱瓶苗移栽受
季节性影响小, 但考虑到广州7~8月天气炎热, 补
水杀菌工作较重, 这期间可适当减少移栽数量。
综上, 本研究以云南樱桃成年优良单株‘广州’
樱的半木质化枝条为外植体, 经腋芽诱导、腋芽
增殖和生根培养, 形成完整植株, 移栽到基质后,
得到生长整齐、表型一致的健壮苗木, 具有繁殖
系数高、培育周期短、不受季节限制等优点, 可
周年规模化快速育苗, 应用前景广阔。
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Tissue culture and rapid micropropagation of superior individual of Cerasus
yunnanensis
YE Xiao-Ling1, HU Xiao-Min2, YE Chao-Hong3, TANG Wei-Zhou4, SHEN Li-Li5, DENG Xiao-Mei4,*
1Tianshi Group Co., Ltd., Guangzhou 510335, China; 2Tianshi Cherry Amusement Garden Co., Ltd., Guangzhou 510920, China;
3Wangdi Landscape Architecture Co., Ltd., Guangzhou 510335, China; 4College of Forestry and Landscape Architecture, Guang-
dong Key Laboratory for Innovative Development and Utilization of Forest Plant Germplasm, South China Agricultural Universi-
ty, Guangzhou 510642, China; 5Yingde Wangdi Cerasus Plantation Co., Ltd., Yingde, Guangdong 513000, China
Abstract: In this paper, an economic and high effective technology system for rapid propagation of Cerasus
yunnanensis was established, through multiple-shoots proliferation. The explants were taken from the late and
half lignificational stems with shoot in the adult selected trees. The results show that the optimal inducing medi-
um was modified MS+1.0 mg·L-1 6-BA +0.1mg·L-1 NAA+30 g·L-1 sucrose+6 g·L-1 gelatin; the optimal multi-
plication medium was modified MS+1.0 mg·L-1 6-BA+0.05 mg·L-1 NAA+0.2 mg·L-1 IBA+30 g·L-1 sucrose+6
g·L-1 gelatin, the subculture cycle was 15 d, and the highest multiplication rate was 4.72; the optimal rooting
medium was 1/2 modified MS+0.5 mg·L-1 NAA+0.5 mg·L-1 IBA+15g·L-1 sucrose+6 g·L-1 gelatin, and the root-
ing rate has reached 100% within 15 d. The transplanting matrix were peat, pearlite and vermiculite (3:1:1, V/V/
V), and its corresponding transplanting survival rate was over 90%.
Key words: Cerasus yunnanensis; tissue culture; basal medium; rapid propagation
Received 2016-03-08 Accepted 2016-04-12
This work was supported by the Technology Innovation Special Funds for SME of Guangdong Province (Grant No. 2014A010101097), and the
Science and Technology Projects of Guangdong Province (Grant No. 2014A030304004).
*Corresponding author (E-mail: dxmei2006@scau.edu.cn).