全 文 ：植物生理学通讯 第 45卷 第 8期，2009年 8月 797
收稿 2009-03-17 修定 2009-05-09
资助 “十一五 ” 国家科技支撑计划项目(2006BAD 08A16)。
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菊花品种 “ 日本红 ” 的脱毒和组织培养
王仁睿, 李明福 *, 李桂芬, 马洁, 韩林波
中国检验检疫科学研究院, 北京 100121
Viruses Elimination and Tissue Culture of Dendranthema morifolium (Ramat.)
Tzvel.
WANG Ren-Rui, LI Ming-Fu*, LI Gui-Fen, MA Jie, HAN Lin-Bo
Chinese Academy of Inspection and Quarantine, Beijing 100121, China
1 植物名称 菊花[Dendranthema mor ifol ium
(Ramat.) Tzvel.] “日本红 ”品种。
2 材料类别 茎段。
3 培养条件 (1)腋芽诱导培养基: MS+6-BA 0.5
mg·L-1 (单位下同)+NAA 0.5; (2)丛生芽诱导培养基:
MS+6-BA 1.0+NAA 0.5; (3)茎尖萌发培养基: MS+6-
BA 0.5+NAA 0.1; (4)增殖培养基: MS+6-BA 2.0+NAA
0.1; (5)生根培养基: MS+NAA 0.8+1.0 g·L-1活性炭。
以上培养基均添加30 g·L-1蔗糖和6 g·L-1琼脂粉, pH
5.6~6.0。培养温度为(23±2) ℃, 光照时间为 12 h·d-1,
光照强度为 30~40 μmol·m-2·s-1。
4 生长与分化情况
4.1 病毒鉴定 采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验
(double antibody sandwich ELISA, DAS-ELISA), 分
别使用番茄不孕病毒(Tomato aspermy virus, TVA)
和菊花B病毒(Chrysanthemum virus B, CVB)的抗血
清对 “日本红”品种母株进行病毒检测。选取TVA
和CVB血清学鉴定结果都呈阳性的母株作为试验
材料。
4.2 无菌材料的获得 采集生长旺盛的茎段, 放入洗
洁精溶液中浸泡数分钟, 然后置于流水下冲洗1 h。
去掉小叶, 用 75%酒精浸泡 30 s, 无菌水冲洗 1次,
置于0.1%升汞溶液(加2滴Tween-80)中消毒8 min,
无菌水冲洗 5次, 切去切口后接种于培养基(1)上。
接种 2周后, 顶芽及腋芽开始萌发。
4.3 丛生芽的诱导 顶芽及腋芽萌发(图 1)15 d后,
切割腋芽和顶芽接种到培养基(2)上进行丛生芽诱
导, 经过 2周后产生不定丛芽, 平均每个外植体有
4 个芽。
4.4 热处理结合茎尖脱毒 待丛生芽生长至2~3 cm
高后, 转移到培养基(2)上, 置于恒温恒湿箱中进行
热处理(图 2), 光照强度为 30 μmol·m-2·s-1, 湿度为
70%。起始温度设置为 9:00~21:00, 28 ℃; 21:00~9:00,
25 ℃。以后每隔1 d升高1 ℃。温度升至9:00~21:00,
36 ℃; 21:00~9:00, 30 ℃, 继续处理 28 d。热处理
后将组培苗置于双筒显微镜下, 用解剖针小心地剥
掉包住茎尖的幼叶, 切取只带1~2个叶原基的茎尖,
放入培养基(3)上。
4.5 脱毒苗的检测 茎尖生长7 d后开始萌发(图3),
1个月后芽即长至 2~3 cm, 取其叶片, 用 DAS-
ELISA方法检测TVA和CVB病毒, 重复2次, 检测
结果呈阴性的即为脱毒苗, 脱毒率为 87%。
4.6 脱毒苗的增殖培养 将脱毒苗接种到培养基(2)
上进行丛生芽的诱导, 随后将丛生芽切割下转至培
养基(4)上进行增殖培养(图4), 接种1个月后, 丛生
芽增殖, 增殖系数为 5.5左右, 丛芽茁壮。
4.7 脱毒苗的生根培养 芽长至 6~8 cm后, 切取单
芽接种到培养基(5)上进行生根培养, 培养 10 d后,
基部开始生根, 35 d后生根率达到 90%, 每苗生根
4~6条(图 5), 根系粗壮, 根长 4~8 cm。
4.8 脱毒苗的移栽 将生根苗瓶盖打开, 在室内自然
光照射下炼苗 4~5 d, 每天向叶面喷水 4次。取出
苗后洗去根部培养基, 移栽于已灭过菌的河沙苗床
上, 适当遮荫, 每天喷水 2~3次。约 10 d后移栽
苗成活, 长出新叶, 成活率为 100%。
5 意义与进展 菊花 “日本红 ”品种为市场畅销花
卉, 但在生产中常因携带病毒而导致植株长势明显
减弱、叶片黄化、花朵逐年变小。本文与经常
植物组织培养简报 Brief Communications of Plant Tissue Culture
植物生理学通讯 第 45卷 第 8期，2009年 8月798
采用的直接以带毒母株进行物理减毒处理, 然后采
取茎尖脱毒获得脱毒母本, 再进行组培快速繁殖的
方式不同, 而是通过母株前期检测、带病母株扩增
繁殖、热处理结合茎尖脱毒、脱毒苗后期检测以
及脱毒苗的快速繁殖等一系列程序建立了该品种的
图 4 菊花 “日本红 ”的增殖培养
图 3 菊花 “日本红 ”的茎尖萌发
图 5 菊花 “日本红 ”的生根阶段
图 1 菊花 “日本红 ”的腋芽萌发
图 2 菊花 “日本红 ”的热处理
高效脱毒组培体系。这对菊花其他品种建立脱毒
快速繁殖体系有一定的参考价值, 也对来源稀少的
植物进行脱毒快繁操作具有参考价值。目前, 菊科
菊花植物的组织培养已见报道(建德锋等2007), 但
组织培养结合脱除病毒相关报道甚少(刘鹏等
2005), 菊花品种 “日本红 ”的脱毒和组织培养尚未
见报道。
参考文献
建德锋, 赵文若, 赵海锋, 陈刚(2007). 菊花组织培养技术研究. 北
方园艺, (9): 200~201
刘鹏, 刘金, 赵艳红, 刘庆秀, 张卫国(2005). 菊花的组织培养、
脱毒与快繁技术研究. 内蒙古民族大学学报(自然科学版), 20
(4): 410~413