全 文 ：植物生理学通讯 第 44卷 第 3期，2008年 6月 529
湿唇兰的无菌播种和快速繁殖
方中明 1,2，吴坤林 1，陈之林 1，曾宋君 1,*，段俊 1
1中国科学院华南植物园，广州 510650；2中国科学院研究生院，北京 100049
Asepsis Sowing and in vitro Propagation of Hygrochilus parishii (Rchb. f.) Pfitz.
FANG Zhong-Ming1,2, WU Kun-Lin1, CHEN Zhi-Lin1, ZENG Song-Jun1,*, DUAN Jun1
1South China Botanical Garden, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510650, China; 2Graduate University of Chinese
Academy of Sciences, Beijing 100049, China
收稿 2008-04-09 修定 2008-04-21
资助 广州市科技计划(2007Z3-E0631)和中国科学院知识创
新工程重要方向(k scx2 -sw-319 )。
* 通讯作者(E-ma i l：zengsongju n@scib .a c.cn；T el：
02 0-37 25 29 90 )。
1 植物名称 湿唇兰[Hygrochilus parishii (Rchb. f.)
Pfitz.]。
2 材料类别 成熟种子。
3 培养条件 种子萌发培养基：(1) 1/2MS；(2) 1/
2MS+100 mL·L-1椰子乳；(3) KC；(4) KC+100
mL·L-1椰子乳；(5) VW；(6) VW+100 mL·L-1椰子
乳；(7) 1.5 g·L-1花宝 1号 +1.5 g·L-1花宝 2号；
(8) 1.5 g·L-1花宝1号+1.5 g·L-1花宝2号+100 mL·L-1椰
子乳。原球茎增殖培养基：(9) 1/2MS+6-BA 0.5
mg·L-1 (单位下同)+NAA 0.05+1.5 g·L-1活性碳 +50
g·L-1香蕉汁；(10) 1.5 g·L-1花宝 1号 +1.5 g·L-1花
宝 2号 +6-BA 0.5+NAA 0.05+1.5 g·L-1活性碳 +50
g·L-1香蕉汁。原球茎分化培养基：(11) 1/2MS+6-
BA l+NAA 0.25+1.5 g·L-1活性碳+50 g·L-1香蕉汁；
(12) 1.5 g·L-1花宝 1号 +1.5 g·L-1花宝 2号 +6-BA
l+NAA 0.25+1.5 g·L-1活性碳 +50 g·L-1香蕉汁。生
根和壮苗培养基：(13) 1/2MS+2 g·L-1蛋白胨 +1.5
g·L-1活性炭+IBA 0.5+NAA 0.5+100 mL·L-1椰子乳+
50 g·L-1香蕉汁；(14) 1.5 g.L-1花宝 1号 +1.5 g·L-1
花宝2号+2 g·L-1蛋白胨+1.5 g·L-1活性炭+IBA 0.5+
NAA 0.5+100 mL·L-1椰子乳 +50 g·L-1香蕉汁。以
上培养基均附加 2.0%蔗糖、0.6%琼脂，pH 5.2~
5 . 4，培养温度为( 2 5 ± 2 ) ℃，光照度 3 0 ~ 4 0
µmol·m-2·s-1，光照时间 12 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 材料的无菌处理 将湿唇兰进行人工授粉，150 d
左右荚果成熟，取湿唇兰蒴果用自来水洗净后，
在超净工作台上，用含 70%酒精的棉球擦拭干净
蒴果表面，接着浸泡于 70%酒精中 30 s，再用
0.1%升汞消毒 15 min，无菌水冲洗 5次，吸干
蒴果表面水分，剪除上下两端，沿中缝线纵向切
开蒴果，刮出种子于无菌水中制成悬浮液，并将
其摇匀后吸取 1 mL滴入 培养基(1)~(8)上并使之
均匀分布。每处理小瓶播种 20瓶，于光照下培
养。
4.2 种子萌发 1个月后，种胚长出细小的绿点，
再经 1个月的培养，小绿点长成 2~3 mm的原球
茎，20 d后原球茎上端出芽。培养基(3)上的萌
发率 20%左右，培养基(1)上的萌发率在 30%左
右，培养基(6)上的萌发率 40%左右，培养基(4)
上的萌发率 50%左右，培养基(2)上的萌发率70%
左右，培养基(7)上的萌发率 80%。其中培养基
(5)上仅少数种子萌发；而培养基(9)的萌发率最
高，达到 95%。培养基(2)、(4 )、(6 )、(8)中的萌
发和生长速度比(1 )、(3 )、(5 )、(7 )快，说明添加
椰子乳能提高湿唇兰种子的萌发率。光下培养表
明，花宝培养基最有利于湿唇兰种子的萌发。
4.3 原球茎增殖与分化 将 2~3 mm的湿唇兰原球
茎转入培养基(9)和(10)进行增殖培养，30 d后，
增殖倍率达 3.5倍。将增殖的原球茎转入培养基
(11)和(12)上，20 d后，分化出幼嫩的芽，并从
四周长出丛芽。
4.4 生根与壮苗 45 d后，将培养基(11)和(12)上
高 2~3 cm的壮苗转入培养基(13)和(14)，1个半
月后，苗长高为 5~6 cm，每株生根大约 4~6条，
根长 3~5 cm，根粗壮，生根率达 100%。培养
基(13)上根系发达，生长健壮(图 1)。
4.5 炼苗与移栽 出瓶时，将培养瓶置于温棚中炼
苗 1 周后，取出生根苗，洗净根部附着的培养
基，以 1 000倍多菌灵溶液浸泡 1 h的白水苔为基
质，挤下水分，包裹出瓶苗根部，种植于小盆
植物生理学通讯 第 44卷 第 3期，2008年 6月530
图 1 湿唇兰的生根壮苗
中。保持适宜湿度，置于阴凉通风处，1周内不
浇水，2 周后移入温棚栽培，进行正常水、肥、
药管理，成活率达 9 5 % 以上。
5 意义与进展 湿唇兰是兰科湿唇兰属植物，此
属仅此一种，附生兰，分布于我国云南西双版
纳、印度东北部、缅甸、泰国、老挝、越南
等地，生于海拔 700~1 300 m的山地疏林中大树
干上，属于中国物种红色名录( h t t p : / / w w w .
chinabiodiversity.com/redlist/search /index.shtm)中的
易危物种(VU)。湿唇兰花期 6~7月，花大，艳
丽，萼片和花瓣黄色带暗紫色斑点，蕊柱白色，
具有较高的观赏价值(图 2)，也是重要的兰花育种
亲本。目前仅有拟万带兰和湿唇兰的杂交种无菌
播种和组织培养的报道(兰芹英等 2000)，有关湿
唇兰的无菌播种和快速繁殖尚未见报道。
图 2 湿唇兰的开花植株
参考文献
兰芹英 , 何惠英 , 方春研 , 黄文(2 0 00 ) . 拟万带兰和湿唇兰杂
交种子胚的组织培养和植株再生 . 植物生理学通讯 , 3 6
(1 ): 4 0