全 文 ：植物生理学通讯 第 40卷 第 5期，2004年 10月 585
中黑防杨(美洲黑杨×青杨)的组织培养与植株再生
程贵兰 姜静* 蔡智军
东北林业大学林学院，哈尔滨 150040
Tissue Culture and Plantlet Regeneration of Populus deltoides × P. cathayana
CHENG Gui-Lan, JIANG Jing*, CAI Zhi-Jun
College of Forestry, Northeast Forestry University, Haerbin 150040
收稿 2003-12-16 修定 　 2004-03-22
资助　 国家转基因植物研究与产业化专项(J Y 0 3 A 1 8 和
J2002-B-004)。
* 通讯作者(E-mail:jiangjing1960@126.com，Tel:0451-
82191627)。
1 植物名称 中黑防杨(Populus deltoides×P.
cathayana)。
2 材料类别 叶片。
3 培养条件 (1)诱导愈伤组织培养基： MS+6-BA
0.5 mg·L-1(单位下同) ；(2)愈伤组织分化培养基：
MS+6-BA 0.5+NAA 0.1；(3)抽茎培养基：MS+6-BA
0.3+NAA 0.1；(4)生根培养基：MS+IBA 0.3。以上
培养基均添加20 g·L-1蔗糖、5.0~6.0 g·L-1琼脂，
pH 6.0。培养温度为(25±2)℃，光照时间为12 h·d-1，
光照度1 500~2 000 lx。
4 生长与分化情况
4.1 无菌材料的获得 2002年11月下旬将长有饱
满冬芽的一至二年生中黑防杨枝条采回，用清水
将枝条上的灰尘冲洗干净，然后放到(25±2)℃的
培养室中水培。14 d左右幼叶开始萌发，待叶片
长至宽 2 cm 左右时，采集叶片。先用自来水洗
2~3次，再用蒸馏水洗2~3 次，滤纸吸干水分后，
在超净工作台上用 75% 的酒精浸泡漂洗 1 min，
5% 的次氯酸钠水溶液浸泡漂洗3 min，然后用无
菌水漂洗 4~6 次，最后用无菌滤纸吸干叶片表面
水分，获得无菌叶片外植体。
4.2 愈伤组织的诱导及分化 将无菌叶片切成1 cm×
1 cm 大小，接种到培养基(1)上。培养 7 d 左
右可看到叶片伤口处长出绿色膨大的愈伤组织。
将愈伤组织转移到培养基(2)中，8~10 d后愈伤组
织上有绿色的小芽点长出，15~20 d后分化出大量
的丛生芽。
4.3 再生苗的抽茎培养 当丛生芽长至0.5 cm左右
时，切下转入培养基(3)中诱导其抽茎。21 d 后
丛生芽抽茎长成无根苗。
4.4 生根与移栽 将无根苗转移到培养基(4)中，
10~14 d 左右，从无根苗基部长出白色小根，20
d 后 95% 的无根苗长出许多 1~2 cm 较粗壮的根，
同时苗也进一步长壮(图 1)。
移栽时选择根系发达、主茎高达 2~3 cm 且
木质化程度高的幼苗。揭去培养瓶上的封口膜，
在塑料大棚中炼苗3~5 d，小心洗去附着在根部的
培养基，移栽到经过除菌剂代森锌(沈阳农药有限
公司生产，80% 可湿性粉剂，浓度为 4 g·L-1)处
理 3 d 后的草碳土与沙子按 1∶1 混合的基质中。
移栽苗木应放在塑料大棚中遮荫培养，10 d内保
湿淋水，相对湿度 90% 左右。约 14 d 后新根长
出即可成活，移栽成活率达 6 2 % 。
5 意义与进展 中黑防杨是美洲黑杨与青杨的杂交
种，雄株，其特点是树干通直圆满，速生性、
抗寒性较强，已成为东北地区广泛栽培的优良速
生树种。但其抗盐碱、抗病虫害能力较差，在
大于0.6%氯化钠盐胁迫下即死亡，从而限制了此
品种的推广进程。中黑防杨高效再生组培系统的
建立，可为通过叶盘转化法将耐盐碱基因或抗虫
基因导入中黑防杨基因组内以获得优良新品种奠定
基 础 。
图1 中黑防杨的生根培养