全 文 :植物生理学通讯 第42卷 第1期,2006年2月 79
桃儿七的组织培养
杨晖1 王治业1 陆栋2 赵小峰1 周剑平1,*
1 甘肃省科学院生物研究所,兰州 730000;2 兰州大学生命科学学院,兰州 730000
Tissue Culture of Sinopodophyllum emodi (Wall.) Ying
YANG Hui1, WANG Zhi-Ye1, LU Dong2, ZHAO Xiao-Feng1, ZHOU Jian-Ping1,*
1Institute of Biology, Gansu Academy of Sciences, Lanzhou 730000, China; 2School of Life Sciences, Lanzhou University, Lanzhou
730000, China
收稿 2005-06-23 修定 2005-10-08
资助 甘肃省科技攻关项目(GS012-A52-059)。
*通讯作者(E-mail:zhjianp@tom.com, Tel: 0931-
8613554)。
1 植物名称 桃儿七[Sinopodophyllum emodi (Wall.)
Ying]。
2 材料类别 成熟种子胚。
3 培养条件 基本培养基为MS。(1)胚萌发培养基:
改良MS (1/2MS大量元素,无激素) ;(2)幼苗增殖
培养基:MS+6-BA 2~3 mg·L-1 (单位下同) ;(3)生根培
养基:MS+NAA 0.5+IBA 0.5。培养基加3%蔗
糖和0.7%琼脂,pH 5.8。培养温度(23±2)℃,光照
时间10 h·d-1,光强为 40 mmol·m-2·s-1。
4 生长与分化情况
4.1 种子处理 取当年收获的饱满新种子,放入烧
杯,缓缓加入浓硫酸,用玻璃棒不断搅动数分
钟,以种皮变黑为度。自来水大量冲洗至硫酸完
全去除。换用300 mg·L-1的赤霉素溶液浸泡48 h。
4.2 胚的获得 处理后的种子在超净工作台上用0.1%
的升汞浸泡 5 min,无菌水多次冲洗,无菌滤纸
拭去水分。用解剖刀切开种子,取带胚的半粒种
子接种于改良 M S 培养基。
4.3 胚的培养 接种3 d的胚即可观察到萌动,6 d
时 2 片子叶张开,10 d 时子叶呈绿色,25 d 左
右可看到胚根、胚轴明显伸长,35~40 d 时长成
完整、健壮的无菌幼苗。
4.4 无菌幼苗的增殖 将培养35~40 d的无菌幼苗
移入增殖培养基,75 d 左右幼苗胚轴部位膨大,
生成许多叶丛芽以及具叶柄的真叶。分割叶芽转
入同一培养基,可以繁殖出更多具叶丛芽和真叶
的植株。
4.5 无菌苗的生根和移栽 将增殖后的无菌苗移入
生根培养基,20 d 后平均每株发出1条侧根,40
d 时达 4~5 条,生根率 90% 以上。此时打开瓶盖
炼苗 2~3 d,洗去苗根部的残留培养基,栽入蛭
石、珍珠岩各半的基质(经过消毒)中培养。避免
阳光直晒,常规管理,成活率达 8 0 % 以上。
5 意义与进展 桃儿七是小檗科桃儿七属多年生草
本植物,其根和根茎中含有的鬼臼毒素是几种临
床抗癌药物的前体(Giri和Narasu 2000)。市场的
需求造成对野生资源的掠夺性索取,桃儿七已被
列入《中国珍稀濒危植物名录》。桃儿七主要靠
根茎繁殖,其种子在野生条件下需经过 6~8 个月
的休眠才能萌发(王梦林等1988)。而本文建立的
种子胚培养方法在6个月之内可使1粒种子至少增
殖为2株幼苗。幼苗有以下用途:(1)作为桃儿七
人工培植的幼苗,成为商品苗后用于提取鬼臼毒
素;(2)以此法提供的无菌幼苗为外植体经愈伤组
织诱导后,再通过植物细胞大规模培养的方式获
得鬼臼毒素,从而为鬼臼毒素的工业化生产提供
了可能。桃儿七种子组织培养和快速繁殖尚未见
报 道 。
参考文献
王梦林, 郝继荣, 樊永清(1988). 桃儿七野生变家种初步研究. 中
药材, 11 (3): 3~5
Giri A, Narasu ML (2000). Production of podophyllotoxin from
Podophyllum hexandrum: a potential natural product for
clinically useful anticancer drugs. Cytotechnology, 34: 17~26