全 文 ：植物生理学通讯 第 41卷 第 1期，2005年 2月 55
杏黄兜兰胚培养与快速繁殖
丁长春1,2,* 虞泓2,** 刘方媛3 魏兴强3
1 云南文山师范高等专科学校，文山 663000；2 云南大学生命科学学院生态遗传学实验室，昆明 650091；3 云南英茂
生物农业有限公司，昆明 650301
Embryo Culture and Rapid Propagation of Paphiopedilum armeniacum
DING Chang-Chun1,2,*, YU Hong2,**, LIU Fang-Yuan3, WEI Xing-Qiang3
1Wenshan Teachers College, Wenshan 663000; 2Laboratory of Ecological Genetics, College of Life Science, Yunnan University,
Kunming 650091; 3Yunnan Yingmao Bio-Agriculture Company Limited, Kunming 650301
1 植物名称 杏黄兜兰 ( Paphiopedilum armeniacum )。
2 材料类别 蒴果内的胚。
3 培养条件 (1)播种培养基(液体浅层静置培养):
1/4MS+1 g·L-1 胰蛋白胨 +15%(V/V)椰乳 +KT 0.5
mg·L-1(单位下同)+15 g·L-1 蔗糖 +1 g·L-1 活性碳；
(2)增殖培养基：1/3MS+2 g·L-1胰蛋白胨+10%(V/V)
椰乳+ 6-BA 1+Ad 5+NAA 0.5+20 g·L-1蔗糖；(3)原
球茎分化培养基：MS+2 g·L-1 胰蛋白胨+6-BA 0.5+
NAA 0.2+20 g·L-1 蔗糖；(4)壮苗及生根培养基：
1/2MS+ 3 g·L-1 胰蛋白胨 +NAA 1+6-BA 0.2+10%
(W/V)香蕉泥+20 g·L-1 蔗糖+1 g·L-1 活性碳。以上
培养基 pH 均为 5.2~5.4，培养温度为(25±2)℃。
4 生长与分化情况
4.1 启动培养 将成熟果荚内的种子取出，用滤纸
包好后，置于 1% 次氯酸钠溶液中消毒，并以磁
力搅拌器搅拌，直至种子明显变白为止(时间为
15 min~3 h，依种子成熟度而定)。然后将种子
刮入无菌水中清洗，接着用无菌漏斗过滤。再
将种子刮入少量无菌水中，摇匀。最后用吸管
将胚带水吸出，接种于培养基(1)上进行黑暗培
养。约 20 d 后可看到种子吸水膨大，50 d 发育
形成原球体。
4.2 增殖培养 将如上获得的原球体接种到培养基
(2)上，弱光照培养(约500 lx)。7 d后原球体开
始萌动，70 d时原球体明显增殖。增殖系数3~4，
以 80 d 为 1 个继代周期。
4.3 小苗诱导及生根 将增殖的原球体切割分离，转
入培养基(3)，光照度加强至1 000~2 000 lx。约
40 d后，叶原基出现，生长加快。约90 d时发育
形成完整的小植株。待植株长至2~3 cm 高时，将
其移至培养基(4)，光照度加强至3 000~5 000 lx。
经过 60~90 d，试管苗的生根率达95% 以上。植
株高4~5 cm，根长1.5~2.0 cm，可准备炼苗移栽。
4.4 小苗移栽与养护 移栽前2周，在超净工作台
上将塞子取去，换上 2 层牛皮纸封口，然后移至
温室苗床上摆放。移栽时先往瓶里灌入少量水，
将培养基摇散后，用镊子轻轻取出小苗，注意不
要伤及根部。用水洗去根部附着的培养基，将根
部放入 70% 甲基托布津药液中消毒 4 h，药液浓
度为 1 500 倍。然后将植株凉干，置于背阴处定
植。定植材料以优质水苔为佳。定植后，初期
温度为 18~25℃，空气湿度 70%~90%，光照度
3 000~6 000 lx。1个月后统计移栽成活率，达到
8 5 % 以上。健壮、高大的苗适应力更强，成活
率更高些。
5 意义与进展 杏黄兜兰为兰科兜兰属植物。花形
奇特且色彩艳丽，曾多次在国际大型兰花展览中
获金牌奖。近几十年来，由于原生地理环境的破
坏及人为滥采乱挖，野生资源已十分稀少。杏黄
兜兰种子在自然状态下萌发需要共生真菌存在，
且萌发率极低；而采用其他外植体(如茎段、茎尖)
培养，目前仍然无可操作性强的操作流程。本文
采用人工授粉技术，然后收集适龄蒴果进行繁
殖。由于蒴果内含有大量的种子，用以培养可实
现大量繁殖，这不仅可以解决杏黄兜兰资源面临
枯竭的问题，且对建立迁地保护技术体系也有一
定的意义。因此，这可能是一条值得考虑的繁殖
途径。国内外尚无该种植物组培成功的报道。
收稿 2003-10-16 修定 2004-06-16
资助 云南大学省级生物技术人才培养基地项目和云南大学植
物学博士点基金项目。
* E-mail: cc_ding@yahoo.com.cn，Tel: 0876-2622210
** 通讯作者(E-mail: fisher@public.km.yn.cn, Tel: 0871-
8327767)。