全 文 ：植物生理学通讯 第 44卷 第 3期，2008年 6月 513
寒兰的组织培养与试管开花
朱国兵 1,2,*，杨柏云 1，敖爱艳 2
1南昌大学生命科学学院，南昌 330031；2广西农业职业技术学院，南宁 530007
Tissue Culture and in vitro Flowering of Cymbidium kanran Makino
ZHU Guo-Bing1,2,*, YANG Bo-Yun1, AO Ai-Yan2
1College of Life Sciences, Nanchang University, Nanchang 330031, China; 2Guangxi Vocational College of Agriculture, Nanning
530007, China
收稿 2008-02-22 修定 2008-04-08
资助 江西省农业重点攻关项目(20 061b0 20020 2)。
﹡ E-mail：zgbing007@163.com；Tel：0771-3278615
1 植物名称 寒兰(Cymbidium kanran Makino)。
2 材料类别 种子。
3 培养条件 种子萌发培养基：(1) 1/2B5+6-BA 0.6
mg·L-1 (单位下同)+NAA 0.4；根状茎增殖培养
基：(2) B5+6-BA 0.6+NAA 1.5；芽分化培养基：
(3) B5+6-BA 1.0+NAA 0.2；生根培养基：(4) 1/2B5+
NAA 0.2；试管开花培养基：(5) B5+6-BA 1.0+
NAA 0.2；(6) B5+6-BA 2.0+NAA 0.2。其中培养
基(1)~(4)添加 35 mg·L-1蔗糖、1 g·L-1水解酪蛋白
和 0.5 g·L-1活性炭；(5)、(6)添加 45 g·L-1蔗糖。
上述各培养基均附加 6.8 g·L-1琼脂，pH 5.6~5.8。
培养温度(25±2) ℃，光照强度 30~40 µmol·m-2·s-1，
光照时间 12 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 实生苗的获得 八成熟未开裂的蒴果在洗衣粉
溶液浸泡 15 min，自来水冲洗干净表面后用无菌
水清洗 3次，用 70%酒精中表面消毒 40 s，0.1%
的升汞溶液灭菌 7~8 min，且反复摇动，最后用
无菌水洗多次。将蒴果表面水份用无菌纸吸干，
剖开蒴果将粉末状的种子均匀接种到培养基(1)。
培养 95 d左右，种子萌发成绿色类原球茎，附
有表皮毛，呈桑果状；120 d时种子萌发率为29.3%。
种子萌发期不一致，16个月之后仍可见种子萌发
(图 1)。将类原球茎接种到培养基(2)上，其顶端
迅速伸长，形成色泽鲜绿多分支、表皮根毛浓密
的根状茎，30 d时根状茎增殖系数达 3.7 (图 2)。
根状茎在分化培养基(3)中则停止生长 ，其顶端分
生组织分化成带有数片苞叶和 1~2片幼叶的芽，
当芽长至3 cm左右时接种到培养基(4)上进行生根
壮苗培养，40~45 d，芽分化出 1~4条根从而形
成植株，生根率 100% (图 3)。当苗高 7~8 cm，
根系粗壮时，于温室中炼苗 5 d后移栽至珍珠岩:
锯末:火烧土(1:1:1)的介质中，用1/2B5的营养液每
周浇灌一次，环境温度保持 20~25 ℃，相对湿度
75%，植株成活率 85% 以上。
4.2 试管开花的诱导 将培养 50~60 d的实生苗接
种到培养基(5)、(6)上，25~30 d后花芽从假鳞茎
苞叶的叶腋中诱导出来，花芽的横切面呈椭圆形
且饱满，与根状茎分化出来的营养芽有显著的区
别。在花芽分化速度上，培养基(5)中的植株出现
花芽比培养基(6)要慢。约 50 d时花芽形成达到高
峰期，花芽诱导率在培养基(5)上为 46.3%，培养
基(6)上为 78.2%。花芽伸长发育形成花葶，约 25 d，
花葶上长出细小的花梗，花梗顶端分化出 1个花
蕾。部分花蕾的后期停止发育而黄化死亡，其中
培养基(5)中死亡严重，死亡率达 75%左右，培
养基(6)中死亡率约为 12%，说明 6-BA对试管成
花很重要；部分花蕾经过 60 d发育形成完整的花
朵且顺利开花，花朵顶生(图 4)，花朵在解剖结
构、色泽大小与野生自然状态的花一致，且花期
长达 2 个月。
5 意义与进展 寒兰为兰科兰属中的地生兰，花
色丰富，花香清醇，叶姿优雅，极具观赏价值，
但因过度开采，加上种子无胚乳，自然条件下极
难萌发，野生寒兰濒临灭绝。本文中采用种子无
菌萌发获得大量实生苗，且种子萌发率高。自然
界中寒兰从种子萌发到进行生殖生长通常要 5~7
年，而本文由种子萌发到开花只用了 13~14个月
时间，这些结果对寒兰的快速繁殖和培育有价值
的试管花卉有一定参考意义。寒兰的组织培养已
植物生理学通讯 第 44卷 第 3期，2008年 6月514
图 1 寒兰种子的萌发
图 2 寒兰根状茎的增殖
图 3 寒兰的实生苗
图 4 寒兰的试管开花
有过报道(段金玉和谢亚红 1 9 8 2；朱国兵等
2006)，日本和韩国研究报道相对较多(Kokubu等
1980；Lee等 1986；Kim等 1996)，但从种子无
菌播种产生实生苗再到试管开花的整个生理过程的
报道迄今尚未见。
参考文献
段金玉, 谢亚红(19 82 ) . 在无菌条件下，激素和种子处理对兰
属十种植物种子萌发的影响. 云南植物研究, 4 (2): 197~201
朱国兵, 杨柏云, 蔡奇英, 罗丽萍, 管毕才(2006). 寒兰的快速繁
殖技术. 热带亚热带植物学报, 14 (2): 151~156
Kim KH, Ko TS, So IS (1996). Seed pod formation in cross- and
self-pollinated Cymbidium kanran native to Cheju and the
rhizome formation on various media. J Korean Soc Hortic
Sci, 37 (1): 152~157
Kokubu T, Kaieda Y, Higashi Y, Kitano T, Fukamizu K (1980).
Organogenesis in Sterile Culture of Oriental Cymbidium,
Cymbidium kanran Makino. Memoirs of the Faculty of
Agriculture, Kagoshima University (Japan), 16: 53~64
Lee JS, Shim KK, Yoo MS, Lee JS, Kim YJ (1986). Studies on
rhizome growth and organogenesis of Cymbidium kanran
cultured in vitro . J Korean Soc Hortic Sci, 27 (2): 174~
180