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A selective medium facilitating isolation of litchi downy blight pathogen Peronophythora litchii

一种适于分离荔枝霜疫霉的选择性培养基



全 文 :第 源员 卷摇 第 缘 期
圆园员源 年 员园 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源员摇 晕燥援 缘
韵糟贼援 摇 圆园员源

基金项目院 国家现代农业产业技术体系渊悦粤砸杂鄄猿猿鄄园苑冤袁广东省现代农业产业技术体系渊粤农咱圆园园怨暂猿愿园号冤
作者简介院 凌金锋袁男袁员怨愿猿年生袁助理研究员袁研究方向为果树病害防控研究袁 耘鄄皂葬蚤造院 造躁枣愿猿园员园怨岳 员远猿援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则泽 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 责藻灶早葬蚤贼岳 员远猿援 糟燥皂袁 扎凿躁蚤葬灶早岳 泽糟葬怎援 藻凿怎援 糟灶
收稿日期院 圆园员源 原 园猿 原 圆圆
一种适于分离荔枝霜疫霉的选择性培养基
凌金锋员袁圆 摇 习平根圆 摇 何摇 平猿 摇 宋晓兵员 摇 彭埃天员鄢摇 姜子德圆鄢
渊员援广东省农业科学院植物保护研究所袁 广东省植物保护新技术重点实验室袁 广州 缘员园远源园曰
圆援华南农业大学资源环境学院袁 广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室袁
广州 缘员园远源圆曰 猿援璧山县农业技术推广中心袁 重庆 源园圆苑远园冤
摘要院 为提高荔枝霜疫霉 孕藻则燥灶燥责澡赠贼澡燥则葬 造蚤贼糟澡蚤蚤 悦澡藻灶 藻曾 运燥 藻贼 葬造援的分离成功率袁筛选一种适于分离
该病原菌的选择性培养基袁采用菌丝生长速率法测定了 猿 种杀菌剂和 愿 种抗生素对荔枝霜疫霉及
怨种常见非目标真菌菌丝生长的抑菌活性遥 结果表明袁以 孕杂粤 为基础培养基袁在其中添加多菌灵尧
咪鲜胺尧异菌脲尧利福平和制霉菌素使其浓度分别至 员园尧圆尧圆园园尧员园 和 缘园 滋早 辕 皂蕴 所配制成的选择性
培养基袁可有效抑制非目标真菌炭疽菌 悦燥造造藻贼燥贼则蚤糟澡怎皂 泽责援 尧拟茎点霉 孕澡燥皂燥责泽蚤泽 泽责援 尧链格孢菌
粤造贼藻则灶葬则蚤葬 泽责援 尧镰刀菌 云怎泽葬则蚤怎皂 泽责援 尧拟盘多毛孢 孕藻泽贼葬造燥贼蚤燥责泽蚤泽 泽责援 尧毛霉 酝怎糟燥则 泽责援 尧地霉 郧藻燥贼则蚤糟澡怎皂
泽责援 尧酵母菌 杂葬糟糟澡葬则燥皂赠糟藻泽 泽责援 尧裂褶菌 杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造怎皂 泽责援的生长袁但对荔枝霜疫霉的生长影响较小遥
分离实践表明袁采用该选择性培养基袁不管病组织是否经表面消毒袁均可成功分离获得荔枝霜疫霉
纯菌落袁大大提高了分离的成功率和效率遥
关键词院 荔枝霜疫霉病曰 荔枝霜疫霉曰 组织分离曰 选择性培养基
粤 泽藻造藻糟贼蚤增藻 皂藻凿蚤怎皂 枣葬糟蚤造蚤贼葬贼蚤灶早 蚤泽燥造葬贼蚤燥灶 燥枣 造蚤贼糟澡蚤 凿燥憎灶赠
遭造蚤早澡贼 责葬贼澡燥早藻灶 孕藻则燥灶燥责澡赠贼澡燥则葬 造蚤贼糟澡蚤蚤
蕴蚤灶早 允蚤灶枣藻灶早员袁圆 摇 载蚤 孕蚤灶早早藻灶圆 摇 匀藻 孕蚤灶早猿 摇 杂燥灶早 载蚤葬燥遭蚤灶早员 摇 孕藻灶早 粤蚤贼蚤葬灶员鄢摇 允蚤葬灶早 在蚤凿藻圆鄢
渊员援 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻袁 郧怎葬灶早凿燥灶早 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽曰 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 匀蚤早澡
栽藻糟澡灶燥造燥早赠 枣燥则 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 郧怎葬灶早凿燥灶早 孕则燥增蚤灶糟藻袁 郧怎葬灶早扎澡燥怎 缘员园远源园袁 郧怎葬灶早凿燥灶早 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬曰
圆援 悦燥造造藻早藻 燥枣 晕葬贼怎则葬造 砸藻泽燥怎则糟藻泽 葬灶凿 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼袁 杂燥怎贼澡 悦澡蚤灶葬 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠曰 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣
酝蚤糟则燥遭蚤葬造 杂蚤早灶葬造泽 葬灶凿 阅蚤泽藻葬泽藻 悦燥灶贼则燥造 燥枣 郧怎葬灶早凿燥灶早 孕则燥增蚤灶糟藻袁 郧怎葬灶早扎澡燥怎 缘员园远源圆袁 郧怎葬灶早凿燥灶早 孕则燥增蚤灶糟藻袁
悦澡蚤灶葬曰 猿援 月蚤泽澡葬灶 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 栽藻糟澡灶燥造燥早赠 孕则燥皂燥贼蚤燥灶 悦藻灶贼藻则袁 月蚤泽澡葬灶 源园圆苑远园袁 悦澡燥灶早择蚤灶早袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 陨灶 燥则凿藻则 贼燥 蚤皂责则燥增藻 贼澡藻 蚤泽燥造葬贼蚤燥灶 则葬贼藻 燥枣 贼澡藻 造蚤贼糟澡蚤 凿燥憎灶赠 遭造蚤早澡贼 责葬贼澡燥早藻灶 孕藻则燥灶燥责澡赠贼澡燥则葬 造蚤贼糟澡蚤蚤
悦澡藻灶 藻曾 运燥 藻贼 葬造援 葬灶凿 凿藻增藻造燥责 葬 泽藻造藻糟贼蚤增藻 皂藻凿蚤怎皂袁 贼澡则藻藻 枣怎灶早蚤糟蚤凿藻泽 葬灶凿 藻蚤早澡贼 葬灶贼蚤遭蚤燥贼蚤糟泽 憎藻则藻 贼藻泽贼藻凿 贼燥
凿藻贼藻则皂蚤灶藻 贼澡藻蚤则 藻枣枣藻糟贼泽 燥灶 皂赠糟藻造蚤葬造 早则燥憎贼澡 燥枣 孕援 造蚤贼糟澡蚤蚤 葬灶凿 燥贼澡藻则 灶蚤灶藻 糟燥灶贼葬皂蚤灶葬贼蚤灶早 枣怎灶早蚤援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽
泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 泽藻造藻糟贼蚤增藻 皂藻凿蚤怎皂袁 憎澡蚤糟澡 糟燥灶泽蚤泽贼泽 燥枣 员园 滋早 葬援 蚤援 辕 皂蕴 糟葬则遭藻灶凿葬扎蚤皂袁 圆 滋早 葬援 蚤援 辕 皂蕴
责则燥糟澡造燥则葬扎袁 圆园园 滋早 葬援 蚤援 辕 皂蕴 蚤责则燥凿蚤燥灶藻袁 员园 滋早 葬援 蚤援 辕 皂蕴 则蚤枣葬皂责蚤糟蚤灶袁 葬灶凿 缘园 滋早 葬援 蚤援 辕 皂蕴 灶赠泽贼葬贼蚤灶 蚤灶 责燥贼葬贼燥
泽怎糟则燥泽藻 葬早葬则 渊 孕杂粤冤 皂藻凿蚤怎皂袁 憎葬泽 葬遭造藻 贼燥 葬造造燥憎 孕援 造蚤贼糟澡蚤蚤 贼燥 早则燥憎 憎藻造造 葬灶凿 贼燥 泽怎责责则藻泽泽 皂燥泽贼 燥枣 贼澡藻
糟燥灶贼葬皂蚤灶葬贼蚤灶早 枣怎灶早蚤袁 蚤灶糟造怎凿蚤灶早 悦燥造造藻贼燥贼则蚤糟澡怎皂 泽责援 袁 孕澡燥皂燥责泽蚤泽 泽责援 袁 粤造贼藻则灶葬则蚤葬 泽责援 袁 云怎泽葬则蚤怎皂 泽责援 袁
孕藻泽贼葬造燥贼蚤燥责泽蚤泽 泽责援 袁 酝怎糟燥则 泽责援 袁 郧藻燥贼则蚤糟澡怎皂 泽责援 袁 杂葬糟糟澡葬则燥皂赠糟藻泽 泽责援 葬灶凿 杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造怎皂 泽责援 栽澡藻 蚤泽燥造葬贼蚤燥灶
则藻增藻葬造藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 责怎则藻 糟燥造燥灶赠 燥枣 孕援 造蚤贼糟澡蚤蚤 糟燥怎造凿 遭藻 泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠 燥遭贼葬蚤灶藻凿袁 憎澡藻贼澡藻则 贼澡藻 凿蚤泽藻葬泽藻凿 贼蚤泽泽怎藻泽
憎藻则藻 泽怎则枣葬糟藻鄄泽贼藻则蚤造蚤扎藻凿 燥则 灶燥贼 遭赠 怎泽蚤灶早 贼澡蚤泽 泽藻造藻糟贼蚤增藻 皂藻凿蚤怎皂援 栽澡藻则藻枣燥则藻袁 贼澡藻 蚤泽燥造葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 燥枣
孕援 造蚤贼糟澡蚤蚤 澡葬泽 遭藻藻灶 早则藻葬贼造赠 蚤皂责则燥增藻凿援
运藻赠 憎燥则凿泽院 造蚤贼糟澡蚤 凿燥憎灶赠 遭造蚤早澡贼曰 孕藻则燥灶燥责澡赠贼澡燥则葬 造蚤贼糟澡蚤蚤曰 贼蚤泽泽怎藻 蚤泽燥造葬贼蚤燥灶曰 泽藻造藻糟贼蚤增藻 皂藻凿蚤怎皂
摇 摇 由荔枝霜疫霉 孕藻则燥灶燥责澡赠贼澡燥则葬 造蚤贼糟澡蚤蚤 悦澡藻灶 藻曾 运燥
藻贼 葬造援引起的荔枝霜疫霉病是荔枝生产中的重要病
害咱员暂 袁在开花尧挂果期如遇阴雨天气极易发生和流
行袁造成大量落花尧落果及果实的腐烂袁严重时甚至
失收遥 该病在受害部位形成褐色病斑袁湿度大时可
见霜状霉层袁受害后天气转晴或湿度降低袁则霜状霉
层极少或不产生曰而田间也常发生炭疽病袁若没有病
征出现袁其病状与霜疫霉病难以区分遥 另外袁为害荔
枝果实的还有酸腐病尧镰刀菌果腐病等咱员暂 袁这些病
害的病状也易与霜疫霉病混淆遥 荔枝霜疫霉病是一
种卵菌病害袁其防治措施与无性型真菌引起的病害
差异很大袁故准确诊断尤为重要遥 尽管荔枝霜疫霉
易在多种培养基上生长咱圆 原 猿暂 袁但分离出纯菌株比较
困难遥 笔者执行国家产业技术体系建设项目的 缘 年
来袁不仅多次分别到广东尧广西尧海南尧福建尧云南和
四川荔枝主产区进行霜疫霉菌株的收集工作袁也多
次接到荔枝主产区快递的病害样品袁发现在分离荔
枝霜疫霉过程中除分离到已报道的炭疽菌 悦燥造造藻贼燥鄄
贼则蚤糟澡怎皂 泽责援 尧镰刀菌 云怎泽葬则蚤怎皂 泽责援 和地霉 郧藻燥贼则蚤糟澡怎皂
泽责援外咱源暂 袁还可分离到拟茎点霉 孕澡燥皂燥责泽蚤泽 泽责援 尧链格
孢菌 粤造贼藻则灶葬则蚤葬 泽责援 尧拟盘多毛孢 孕藻泽贼葬造燥贼蚤燥责泽蚤泽 泽责援 尧毛
霉 酝怎糟燥则 泽责援 尧裂褶菌 杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造怎皂 泽责援 和酵母菌
杂葬糟糟澡葬则燥皂赠糟藻泽 泽责援等真菌袁特别是毛霉和裂褶菌的生
长速率明显快于目标菌且气生菌丝生长旺盛袁常将
荔枝霜疫霉覆盖或抑制袁极大地影响了荔枝霜疫霉
的分离成功率遥 若是所分离的病害样本不新鲜袁或
是多种病原菌复合侵染袁则更难检出和分离到荔枝
霜疫霉遥
鉴于病原菌分离对病害准确诊断的重要性袁以
及进行该病病原菌的形态学尧生物学特性尧侵染特
性尧致病机理尧抗药性监测及其形成机理尧防治药剂
的筛选等方面的研究都离不开菌株的分离获得袁因
此急需筛选一种对荔枝霜疫霉具有高度选择性的培
养基遥 关于荔枝霜疫霉的分离技术袁已有学者研发
出用于分离荔枝霜疫霉的选择性培养基咱源 原 缘暂 袁但上
述研究未将常为害荔枝果实的地霉纳入选择性培养
基的抑制对象袁或未提及分离过程中的常见污染真
菌种类及对污染真菌的抑菌效果曰岑贞陆和黄思
良咱远暂对常规组织分离方法作了一些改进袁但未涉及
选择性培养基遥 因此袁在前人工作的基础上袁本研究
开展了一系列的培养基改良试验袁以期筛选出一种
更易于分离出荔枝霜疫霉纯菌落的选择性培养基遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试菌株院荔枝霜疫霉 孕援 造蚤贼糟澡蚤蚤和炭疽菌 悦燥造造藻鄄
贼燥贼则蚤糟澡怎皂 泽责援分离自增城市荔枝病果袁拟茎点霉 孕澡燥鄄
皂燥责泽蚤泽 泽责援 尧链格孢菌 粤造贼藻则灶葬则蚤葬 泽责援 尧镰刀菌 云怎泽葬则蚤怎皂
泽责援和拟盘多毛孢 孕藻泽贼葬造燥贼蚤燥责泽蚤泽 泽责援 分离自从化市荔
枝病花穗袁地霉 郧藻燥贼则蚤糟澡怎皂 泽责援分离自廉江市荔枝病
果袁毛霉 酝怎糟燥则 泽责援 和裂褶菌 杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造怎皂 泽责援 分离
自钦州市荔枝病果袁酵母菌 杂葬糟糟澡葬则燥皂赠糟藻泽 泽责援 分离
自玉林市荔枝病果曰除荔枝霜疫霉外袁其它 怨 种真菌
均为自病果或病花穗分离该菌时常被分离到的非目
标菌遥 应用于分离实践的荔枝病样为采自从化市的
荔枝病花穗和东莞市的荔枝病果曰为提高分离成功
率袁病样采回后立即进行分离遥
供试药剂院根据供试菌株的种类及不同杀菌剂
的抑菌谱袁选取了 猿 种杀菌剂和 愿 种抗生素用于选
择性培养基配方的筛选院圆缘豫咪鲜胺渊责则燥糟澡造燥则葬扎冤乳
油袁德国拜耳作物科学公司曰缘园豫多菌灵渊糟葬则遭藻灶凿葬鄄
扎蚤皂冤可湿性粉剂袁江苏蓝丰生物化工股份有限公司曰
圆缘豫异菌脲渊 蚤责则燥凿蚤燥灶藻冤悬浮剂袁珠海真绿色技术有
限公司曰愿园 万单位注射用青霉素钠渊责藻灶蚤糟蚤造造蚤灶 泽燥凿蚤鄄
怎皂冤尧员园园 万单位注射用硫酸链霉素 渊 泽贼则藻责贼燥皂赠糟蚤灶
泽怎造枣葬贼藻冤袁华北制药股份有限公司曰注射用头孢拉定
渊糟藻枣则葬凿蚤灶藻冤袁广州白云山天心制药股份有限公司曰圆缘
万单位四环素渊 贼藻贼则葬糟赠糟造蚤灶藻冤片袁广州白云山光华制
药股份有限公司曰员圆郾 缘 皂早 辕 缘 皂蕴 氯霉素 渊 糟澡造燥则葬皂鄄
责澡藻灶蚤糟燥造冤滴眼液袁武汉天天明药业有限责任公司曰圆缘
万单位红霉素渊藻则赠贼澡则燥皂赠糟蚤灶冤肠溶胶囊袁浙江丽水众
益药业有限公司曰园郾 员缘 早利福平渊则蚤枣葬皂责蚤糟蚤灶冤胶囊袁广
东华南药业集团有限公司曰缘园 万单位制霉菌素渊灶赠泽鄄
贼葬贼蚤灶冤片袁上海信谊药厂有限公司遥
培养基院马铃薯蔗糖琼脂渊责燥贼葬贼燥 泽怎糟则燥泽藻 葬早葬则袁
孕杂粤冤培养基院马铃薯 圆园园 早尧蔗糖 员园 早尧琼脂条 员愿 早尧
水 员 园园园 皂蕴曰选择性培养基渊泽藻造藻糟贼蚤增藻 皂藻凿蚤怎皂袁 杂酝冤院
以 孕杂粤为基础培养基袁在其中添加多菌灵尧咪鲜胺尧
异菌脲尧利福平和制霉菌素使其浓度分别至 员园尧圆尧
圆园园尧员园 和 缘园 滋早 辕 皂蕴遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 供试药剂对荔枝霜疫霉菌丝生长的影响
选取供试的 猿 种杀菌剂和 愿 种抗生素袁以 孕杂粤
为基础培养基袁分别设置 猿 耀 源 个不同浓度渊表 员冤袁
远员远 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
并以 孕杂粤作为空白对照袁每处理 源 次重复袁于平板
渊培养皿直径 怨 糟皂冤中央接入 圆 皂皂 伊圆 皂皂的荔枝霜
疫霉新鲜菌块袁在 圆远 益培养 远 凿后袁用十字交叉法测
量菌落直径袁取其平均值袁计算菌丝生长抑制率遥 平
均抑菌率 越 渊对照平均菌落直径 原处理平均菌落直
径冤 辕对照平均菌落直径 伊 员园园豫 遥
员援 圆援 圆 供试药剂对非目标真菌菌丝生长的影响
抗细菌类抗生素主要是用于排除在分离荔枝霜
疫霉过程中的细菌污染袁因此不再进行该类抗生素
对 怨 种非目标真菌的毒力检测袁仅进行多菌灵尧咪鲜
胺尧异菌脲和制霉菌素对各真菌菌丝生长抑制效果
的检测袁方法同 员援 圆援 员袁供试菌株为 怨 种非目标真
菌袁荔枝霜疫霉为阳性对照袁培养时间为 猿 凿遥
员援 圆援 猿 供试菌株在选择性培养基上的生长情况
综合 员援 圆援 员 和 员援 圆援 圆 的试验结果袁确定选择性
培养基的组成配方曰然后以 员援 圆援 员 相同方法袁检测其
对各供试菌株的抑制效果遥
员援 圆援 源 选择性培养基用于分离荔枝霜疫霉的实践
病组织消毒分离方法咱苑暂 院取病组织袁用 苑园豫酒
精和 圆豫次氯酸钠溶液进行表面消毒袁再用灭菌水
漂洗 猿 次袁用灭菌滤纸吸干残余水分后将其接入选
择性培养基平板袁并以 孕杂粤 作为空白对照袁于 圆远 益
培养 猿 凿后观察荔枝霜疫霉的分离成功率和其它真
菌的生长情况袁并用显微镜镜检菌落中有无荔枝霜
疫霉的生长遥
病组织直接分离方法院取病组织不经表面消毒
直接置于选择性培养基平板袁并以 孕杂粤 作为空白对
照袁培养条件同病组织消毒分离方法遥
员援 猿 数据分析
采用 耘曾糟藻造 圆园园猿 软件对数据进行统计袁计算各
处理平均菌落直径尧标准差和平均抑菌率曰采用 阅孕杂
苑援 园缘 软件咱愿暂进行方差分析袁用 阅怎灶糟葬灶 氏新复极差
法进行差异显著性检验遥
圆 结果与分析
圆援 员 不同药剂对荔枝霜疫霉菌丝生长的影响
杀菌剂多菌灵 员 耀 缘园 滋早 辕 皂蕴尧咪鲜胺 圆 耀 员园 滋早 辕
皂蕴和异菌脲 缘园 耀 圆园园 滋早 辕 皂蕴 对荔枝霜疫霉菌丝生
长的影响较小袁平均抑菌率在 猿援 员苑豫 耀 圆怨援 缘员豫之
间袁且菌落性状与在 孕杂粤 上无明显差异渊表 员冤袁表
明该 猿 种杀菌剂及其供试浓度范围可作为选择性培
养基的备选成分和备选浓度遥
在供试的 愿 种抗生素中袁青霉素钠尧头孢拉定尧
利福平和制霉菌素 员园 耀 缘园 滋早 辕 皂蕴尧氯霉素 员园 滋早 辕 皂蕴
对荔枝霜疫霉的菌丝生长影响较小袁平均抑菌率在
缘援 员缘豫 耀猿员援 圆圆豫之间袁且菌落性状与在 孕杂粤 上无
明显差异袁表明上述 缘 种抗生素的浓度范围可用于
配制选择性培养基袁用于抑制细菌或部分真菌遥
硫酸链霉素尧四环素和红霉素 员园 耀 缘园 滋早 辕 皂蕴尧
氯霉素 猿园 耀 缘园 滋早 辕 皂蕴尧制霉菌素 员园园 滋早 辕 皂蕴 对荔枝
霜疫霉菌丝生长具有较强的抑制作用袁平均抑菌率
在 源缘援 圆员豫 耀 员园园豫之间袁且菌落性状常发生变异袁
表明该 缘 种抗生素的浓度范围不宜用于配制选择性
培养基遥
表 员 三种杀菌剂和 愿 种抗生素对荔枝霜疫霉菌丝生长的抑制作用
栽葬遭造藻 员 栽澡藻 蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则赠 藻枣枣藻糟贼泽 燥枣 贼澡则藻藻 枣怎灶早蚤糟蚤凿藻泽 葬灶凿 藻蚤早澡贼 葬灶贼蚤遭蚤燥贼蚤糟泽 葬早葬蚤灶泽贼 皂赠糟藻造蚤葬造 早则燥憎贼澡 燥枣 孕藻则燥灶燥责澡赠贼澡燥则葬 造蚤贼糟澡蚤蚤
杀菌剂或抗生素
云怎灶早蚤糟蚤凿藻 燥则 葬灶贼蚤遭蚤燥贼蚤糟
浓度 渊滋早 辕 皂蕴冤
悦燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
平均菌落直径 渊糟皂冤
粤增藻则葬早藻 糟燥造燥灶赠 凿蚤葬皂藻贼藻则
平均抑菌率 渊豫 冤
粤增藻则葬早藻 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 则葬贼藻
多菌灵 悦葬则遭藻灶凿葬扎蚤皂 员 苑援 员园 依 园援 园怨 粤月 猿援 员苑
员园 远援 远苑 依 园援 圆远 阅耘云 怨援 园员
缘园 缘援 猿猿 依 园援 圆园 允运 圆苑援 圆远
咪鲜胺 孕则燥糟澡造燥则葬扎 圆 远援 圆苑 依 园援 园源 郧匀 员源援 缘园
缘 缘援 远源 依 园援 员园 陨 圆猿援 园远
员园 缘援 员苑 依 园援 园远 运蕴 圆怨援 缘员
异菌脲 陨责则燥凿蚤燥灶藻 缘园 远援 怨远 依 园援 员苑 月悦 缘援 园缘
员园园 远援 愿缘 依 园援 员园 月悦阅 远援 缘缘
圆园园 远援 缘远 依 园援 员猿 耘云 员园援 源源
青霉素钠 孕藻灶蚤糟蚤造造蚤灶 泽燥凿蚤怎皂 员园 远援 怨缘 依 园援 园猿 月悦 缘援 员缘
猿园 远援 苑苑 依 园援 员园 悦阅耘 苑援 远愿
缘园 缘援 圆愿 依 园援 园缘 允运蕴 圆苑援 怨员
头孢拉定 悦藻枣则葬凿蚤灶藻 员园 远援 怨缘 依 园援 员圆 月悦 缘援 圆圆
猿园 远援 远怨 依 园援 员园 阅耘 愿援 苑苑
缘园 缘援 园源 依 园援 园缘 蕴 猿员援 圆圆
苑员远缘 期 凌金锋等院 一种适于分离荔枝霜疫霉的选择性培养基
续表 员
杀菌剂或抗生素
云怎灶早蚤糟蚤凿藻 燥则 葬灶贼蚤遭蚤燥贼蚤糟
浓度 渊滋早 辕 皂蕴冤
悦燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
平均菌落直径 渊糟皂冤
粤增藻则葬早藻 糟燥造燥灶赠 凿蚤葬皂藻贼藻则
平均抑菌率 渊豫 冤
粤增藻则葬早藻 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 则葬贼藻
硫酸链霉素 杂贼则藻责贼燥皂赠糟蚤灶 泽怎造枣葬贼藻 员园 员援 源苑 依 园援 员园 韵 苑怨援 怨园
猿园 园援 苑园 依 园援 园员 孕 怨园援 源缘
缘园 园援 猿圆 依 园援 员愿 砸 怨缘援 远猿
四环素 栽藻贼则葬糟赠糟造蚤灶藻 员园 园援 猿苑 依 园援 员怨 匝砸 怨源援 怨缘
猿园 园援 园园 依 园援 园园 杂 员园园援 园园
缘园 园援 园园 依 园援 园园 杂 员园园援 园园
氯霉素 悦澡造燥则葬皂责澡藻灶蚤糟燥造 员园 远援 源圆 依 园援 员怨 云郧 员圆援 源圆
猿园 员援 源员 依 园援 员猿 韵 愿园援 愿猿
缘园 园援 源圆 依 园援 圆园 匝砸 怨源援 圆猿
红霉素 耘则赠贼澡则燥皂赠糟蚤灶 员园 源援 园圆 依 园援 圆员 酝 源缘援 圆员
猿园 园援 远园 依 园援 员源 孕匝 怨员援 愿员
缘园 园援 园苑 依 园援 园怨 杂 怨怨援 园愿
利福平 砸蚤枣葬皂责蚤糟蚤灶 员园 远援 员苑 依 园援 员猿 匀 员缘援 愿猿
猿园 缘援 缘愿 依 园援 员园 陨 圆猿援 愿缘
缘园 缘援 园缘 依 园援 园怨 蕴 猿员援 员圆
制霉菌素 晕赠泽贼葬贼蚤灶 员园 远援 苑远 依 园援 园怨 悦阅耘 苑援 苑愿
猿园 远援 远圆 依 园援 员员 阅耘云 怨援 远怨
缘园 缘援 源怨 依 园援 园怨 陨允 圆缘援 员缘
员园园 圆援 愿缘 依 园援 员远 晕 远员援 员苑
空白对照 渊悦运冤 园 苑援 猿猿 依 园援 园远 粤 园援 园园
摇 摇 表中数据为平均数 依标准差遥 数据后不同大写字母表示经 阅怎灶糟葬灶氏新复极差法检验在 孕 约 园援 园员水平差异显著遥 阅葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 贼葬遭造藻
葬则藻 皂藻葬灶 依 杂阅援 阅葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 贼葬遭造藻 枣燥造造燥憎藻凿 遭赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 怎责责藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约 园援 园员 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎 皂怎造贼蚤鄄
责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼援
圆援 圆 不同药剂对非目标真菌菌丝生长的影响
根据 圆援 员 的试验结果及各杀菌剂和抗生素的抗
菌谱袁选取多菌灵尧咪鲜胺尧异菌脲和制霉菌素进
一步检测该 源 种药剂对 怨 种非目标真菌菌丝生长的
影响袁结果表明渊表 圆冤袁多菌灵 员园 滋早 辕 皂蕴尧咪鲜胺
圆 滋早 辕 皂蕴对炭疽菌尧拟茎点霉尧镰刀菌和拟盘多毛孢
具有明显的抑制作用袁抑菌率可达 愿苑援 园圆豫 耀 员园园豫曰
异菌脲 圆园园 滋早 辕 皂蕴对链格孢菌尧拟盘多毛孢尧毛霉和
酵母菌的抑菌效果显著袁平均抑菌率在 怨苑援 缘缘豫 耀
员园园豫之间曰制霉菌素 缘园 滋早 辕 皂蕴 对炭疽菌尧拟茎点
霉尧链格孢菌尧拟盘多毛孢尧地霉尧酵母菌和裂褶菌均
有较好的抑菌效果袁平均抑菌率在 愿园援 愿源豫 耀 员园园豫
之间遥 针对供试的 怨 种非目标真菌袁均可从上述 源
种药剂浓度处理中找出一种用于抑制该真菌的生
长袁且在该药剂浓度下不影响荔枝霜疫霉菌丝生长
或影响较小遥
圆援 猿 不同菌株在选择性培养基上的菌落生长情况
根据药剂筛选结果袁拟定选择性培养基配方为院
孕杂粤为基础培养基袁在其中添加多菌灵尧咪鲜胺尧异
菌脲尧利福平和制霉菌素使其浓度分别至 员园尧圆尧
圆园园尧员园 和 缘园 滋早 辕 皂蕴遥
供试 员园 个菌株在拟定的选择性培养基上袁
圆远 益培养 猿 凿 的结果表明渊表 猿冤袁除地霉稍有生长
外袁其它 愿 种非目标真菌的生长被完全抑制曰荔枝霜
疫霉的菌落生长速率虽然也受到一定的影响袁但足
以满足分离纯化的需要袁其菌落性状也与在 孕杂粤 上
无明显区别袁表明该拟定的选择性培养基是合适的遥
圆援 源 选择性培养基应用于分离荔枝霜疫霉的实践
病组织经表面消毒分离培养 猿 凿 后袁无论是荔
枝病花穗还是病果袁新鲜发病组织还是后期病组织袁
在 孕杂粤上虽然绝大多数组织块都可以检测到荔枝
霜疫霉袁但常和其它非目标真菌或细菌混合生长袁甚
至被覆盖曰而在选择性培养基上袁其它非目标真菌或
细菌被抑制袁仅获得纯的荔枝霜疫霉菌落渊图 员冤袁这
一效果在分离后期病组织时尤为突出遥
病组织直接分离结果与病组织经表面消毒分离
结果相似袁但在 孕杂粤 上其它杂菌污染更明显袁几乎
观察不到荔枝霜疫霉菌落曰而在选择性培养基上袁虽
然个别荔枝霜疫霉菌落混杂有一些非目标菌的生
长袁但荔枝霜疫霉菌落仍明显可见袁可直接进行纯化
和保存袁极大地提高了分离的成功率和效率遥
愿员远 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
怨员远缘 期 凌金锋等院 一种适于分离荔枝霜疫霉的选择性培养基

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表 猿 荔枝霜疫霉和 怨 种非目标真菌在选择性培养基上的菌落生长情况
栽葬遭造藻 猿 酝赠糟藻造蚤葬造 早则燥憎贼澡 燥枣 孕藻则燥灶燥责澡赠贼澡燥则葬 造蚤贼糟澡蚤蚤 葬灶凿 燥贼澡藻则 灶蚤灶藻 糟燥灶贼葬皂蚤灶葬贼蚤灶早 枣怎灶早蚤 燥灶 泽藻造藻糟贼蚤增藻 皂藻凿蚤怎皂 糟皂
供试菌株 陨泽燥造葬贼藻 不同培养基上的平均菌落直径 粤增藻则葬早藻 糟燥造燥灶赠 凿蚤葬皂藻贼藻则 燥灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 皂藻凿蚤葬孕杂粤 杂酝
荔枝霜疫霉 孕援 造蚤贼糟澡蚤蚤 猿援 员圆 依 园援 园苑 阅 员援 猿远 依 园援 猿员 粤
炭疽菌 悦燥造造藻贼燥贼则蚤糟澡怎皂 泽责援 猿援 园圆 依 园援 员员 阅 园援 园园 依 园援 园园 月
拟茎点霉 孕澡燥皂燥责泽蚤泽 泽责援 源援 园猿 依 园援 园缘 月 园援 园园 依 园援 园园 月
链格孢菌 粤造贼藻则灶葬则蚤葬 泽责援 圆援 缘远 依 园援 园缘 云 园援 园园 依 园援 园园 月
镰刀菌 云怎泽葬则蚤怎皂 泽责援 猿援 员缘 依 园援 园怨 阅 园援 园园 依 园援 园园 月
拟盘多毛孢 孕藻泽贼葬造燥贼蚤燥责泽蚤泽 泽责援 猿援 园员 依 园援 园远 阅 园援 园园 依 园援 园园 月
毛霉 酝怎糟燥则 泽责援 愿援 园愿 依 园援 员圆 粤 园援 园园 依 园援 园园 月
地霉 郧藻燥贼则蚤糟澡怎皂 泽责援 圆援 愿园 依 园援 园缘 耘 园援 圆圆 依 园援 园远 月
酵母菌 杂葬糟糟澡葬则燥皂赠糟藻泽 泽责援 园援 缘员 依 园援 园圆 郧 园援 园园 依 园援 园园 月
裂褶菌 杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造怎皂 泽责援 猿援 远源 依 园援 园远 悦 园援 园园 依 园援 园园 月
摇 摇 孕杂粤院 基础培养基曰 杂酝院 选择性培养基遥 表中数据为平均数 依标准差遥 同列数据后不同大写字母表示经 阅怎灶糟葬灶氏新复极差法检
验在 孕 约园援 园员水平差异显著遥 孕杂粤院 栽澡藻 遭葬泽葬造 皂藻凿蚤怎皂曰 杂酝院 泽藻造藻糟贼蚤增藻 皂藻凿蚤怎皂援 阅葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 贼葬遭造藻 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂阅援 阅葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 贼葬遭造藻 枣燥造造燥憎藻凿
遭赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 怎责责藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约 园援 园员 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎 皂怎造贼蚤责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼援
图 员 孕杂粤培养基及选择性培养基自病果分离荔枝霜疫霉的效果比较
云蚤早援 员 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 泽藻造藻糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 蚤泽燥造葬贼蚤灶早 孕藻则燥灶燥责澡赠贼澡燥则葬 造蚤贼糟澡蚤蚤 燥灶 孕杂粤 葬灶凿 泽藻造藻糟贼蚤增藻 皂藻凿蚤怎皂 枣则燥皂 凿蚤泽藻葬泽藻凿 枣则怎蚤贼泽
摇 摇 孕杂粤院 基础培养基曰 杂酝院 选择性培养基遥 孕杂粤院 栽澡藻 遭葬泽葬造 皂藻凿蚤怎皂曰 杂酝院 泽藻造藻糟贼蚤增藻 皂藻凿蚤怎皂援
猿 讨论
对有些植物病害的诊断及其病原菌的研究袁组织
分离是其中不可或缺的一步袁必须通过分离获得该病
病原菌的纯培养遥 在分离荔枝霜疫霉过程中袁由于常
受到其它杂菌的干扰袁特别是对于非新鲜样品袁其干
扰菌更为复杂袁要分离出纯的荔枝霜疫霉菌株较为困
难遥 有关荔枝霜疫霉的选择性培养基袁仅见杨宏仁
等咱源暂报道的 孕陨运粤 培养基和一发明专利要白云豆选
择性培养基咱缘暂 遥 前者在 员园豫 灾鄄愿 躁怎蚤糟藻 葬早葬则 培养基中
加入 圆缘豫 咪鲜胺渊 责则燥糟澡造燥则葬扎冤乳油尧圆猿援 苑豫 异菌脲
渊蚤责则燥凿蚤燥灶藻冤烟片及 源猿豫春雷霉素窑多菌灵渊噪葬泽怎早葬鄄
皂赠糟蚤灶 驭 糟葬则遭藻灶凿葬扎蚤皂冤可湿性粉剂 猿 种杀菌剂有效成
分各 员园 滋早 辕 皂蕴 及氨苄青霉素渊 葬皂责蚤糟蚤造蚤灶冤圆园园 滋早 辕 皂蕴
后能够有效抑制或延缓炭疽病菌尧镰刀菌尧根霉菌及
细菌等的污染咱源暂 曰根据 孕陨运粤培养基中咪鲜胺和多菌
灵所用浓度判断袁该培养基同样可有效抑制本研究中
提到的另 猿 种真菌要拟茎点霉尧链格孢菌和拟盘多毛
孢袁但不包括地霉尧裂褶菌和酵母菌遥 本研究发现袁当
有地霉污染时袁荔枝霜疫霉很难被纯化出来袁经药剂
筛选袁发现制霉菌素对该菌有良好的抑制作用袁并将
其作为选择性培养基的主要成分之一袁有效解决了地
霉的污染问题遥 本研究未发现根霉菌的污染袁但发现
另一同属接合菌亚门的真菌要毛霉的污染袁该菌生长
速率同样极快袁严重影响荔枝霜疫霉的分离成功率遥
本研究结果表明当异菌脲的有效浓度为 圆园园 滋早 辕 皂蕴
时袁远高于 孕陨运粤 培养基中的 员园 滋早 辕 皂蕴咱源暂 袁可有效抑
制毛霉的生长遥 此外袁裂褶菌在 孕杂粤 培养基上较荔
枝霜疫霉生长快且气生菌丝发达袁酵母菌的生长也易
将分离的病组织块包裹袁均不利于荔枝霜疫霉的成功
分离袁而本研究将异菌脲和制霉菌素混合使用袁可有
效抑制裂褶菌和酵母菌的生长袁增强了该选择性培养
园圆远 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
基排除其它污染真菌的能力袁进一步扩大了其抑菌
谱遥 然而袁后者虽然也是通过添加苯醚甲环唑尧多菌
灵或咪鲜胺等杀菌剂来抑制其它非目标真菌的生长袁
但并未说明其它非目标真菌的种类以及所用杀菌剂
浓度是否可对其进行有效抑制遥 岑贞陆和黄思良咱远暂
也曾报道过一种分离荔枝霜疫霉的方法袁但该方法需
时较长袁而本研究仅采用选择性培养基通过常规组织
分离的操作袁甚至可省略表面消毒这一步袁成功分离
获得荔枝霜疫霉纯菌落袁且 猿 凿 后即可观察结果袁操
作更为简便尧省时遥 虽然也有个别荔枝霜疫霉菌落受
到一些杂菌污染袁但由于杂菌的生长受抑制较荔枝霜
疫霉慢袁不影响目标菌的直接纯化和保存遥
对于分离荔枝霜疫霉所用的基础培养基袁本研究
选用较为常用的 孕杂粤 培养基袁更易制备和获得遥 为
排除细菌污染袁在培养基中加入适当的抗生素可有效
抑制细菌生长袁但本研究结果表明袁并非所有抗生素
都适合用于荔枝霜疫霉的分离袁如硫酸链霉素和四环
素对荔枝霜疫霉菌丝生长有很强的抑制作用袁与刘爱
媛咱怨暂 尧刘西莉等咱缘暂报道结果相一致袁而氯霉素在本研
究中同样对荔枝霜疫霉有较强的抑制作用袁与刘西莉
等咱缘暂报道不同袁这可能与试验所用荔枝霜疫霉菌株
对该抗生素的敏感性差异有关遥 此外袁荔枝霜疫霉可
通过孢子囊和游动孢子进行传播袁并以卵孢子在病组
织或土壤中越冬袁因此本研究所选的选择性培养基是
否也适合该菌孢子囊尧游动孢子及卵孢子的生长袁对
于可否扩大它的应用及检出范围具有决定性作用遥
本研究进一步的试验结果表明袁荔枝霜疫霉的孢子囊
及游动孢子在该选择性培养基上也能萌发尧生长形成
菌落袁而对卵孢子的测试则仍在进行中遥
参 考 文 献 渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
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圆园园园院 猿愿 原 源猿
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物学报袁 圆园园怨袁 猿园渊怨冤院 员圆圆远 原 员圆猿员
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培养基援 中国袁 圆园员圆员园员苑苑愿源缘援 怨援 圆园员圆 原 员员 原 园苑
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掘渊第 圆版冤援 北京院 科学出版社袁 圆园员园院 愿圆 原 愿源
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