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Antibacterial Activity and Mechanism of Paenibacillus polymyxa CP7 Against Peronophythora litchi

多粘类芽孢杆菌CP7对荔枝霜疫霉菌的抗菌活性及其作用机制



全 文 :园 艺 学 报 2010,37(7):1047–1056
Acta Horticulturae Sinica
多粘类芽孢杆菌 CP7 对荔枝霜疫霉菌的抗菌活
性及其作用机制
陈海英 1,2,林健荣 1,*,廖富蘋 1,林碧敏 3
(1华南农业大学动物科学学院,广州 510642;2温州市农业科学研究院,浙江温州 325006;3华南农业大学公共基
础教育中心,广州 510642)
摘 要:多粘类芽孢杆菌 Paenibacillus polymyxa CP7菌株分泌的抗菌物质对荔枝霜疫霉菌等真菌具
有很强的抑杀作用。用光学显微镜、扫描电镜和透射电镜观察发现,荔枝霜疫霉菌菌丝体经 CP7 菌株的
抗菌物质处理后, 菌丝发生不规则扭曲、萎蔫、干瘪,菌丝端部膨大等形态变化;经处理的菌体细胞组织
结构受损,细胞膜结构模糊不清,看不到完整的外膜结构,细胞器消溶。处理后的荔枝霜疫霉菌孢子囊
出现凹陷、干瘪、畸形;孢子囊外壁严重受损,原来厚实的外壁只剩一薄层,孢子囊内原有的微细结构
消失,结构模糊不清,细胞器溶解,孢囊内物质大量外泄。抗菌物质还引起菌体细胞内磷的外泄,并对
细胞呼吸速率和 NADH氧化酶活力有抑制作用。
关键词:荔枝;多粘类芽孢杆菌;荔枝霜疫霉菌;抗菌活性
中图分类号:S 667.1 文献标识码:A 文章编号:0513-353X(2010)07-1047-10

Antibacterial Activity and Mechanism of Paenibacillus polymyxa CP7
Against Peronophythora litchi
CHEN Hai-ying 1,2,LIN Jian-rong 1,*,LIAO Fu-ping 1,and LIN Bi-min 3
(1College of Animal Science,South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China;2 Wenzhou Research
Institute of Agriculture Science,Wenzhou, Zhejiang 325006,China;3 Public Elementary Education Center,South China
Agricultural University,Guangzhou 510642,China)
Abstract: Paenibacillus polymyxa CP7 antibacterial substance has a significant inhibitory action on
fungus, such as Peronophythora litchi. The morphology of mycelium and sporangium of Peronophythora
litchi were observed under the optic microscope, the scanning electronic microscope and transmission
electronic microscope. The mycelium of Peronophythora litchi treated by CP7 antibacterial substance
show morphological aberrance such as irregular distorted, wizened and swelled of mycelium. It also show
the expanded end of the mycelium. The cell tissue structure of mycelium is damaged that showing the
incompleted cell wall and the cell membrane, the blurred cell membrane structure, incompleted external
membrane structure, and the dissolved partial cell organs. The sporangium of Peronophythora litchi treated
by CP7 antibacterial substance become hollow, withered and abnormal. The wall of sporangium is injuried

收稿日期:2010–02–09;修回日期:2010–06–30
基金项目:国家自然科学基金项目(30570036)
﹡ 通信作者 Author for correspondence(E-mail:jrlin@scau.edu.cn)
致谢:感谢华南农业大学园艺学院苏美霞教授为本试验提供荔枝霜疫霉菌菌种及给予的指导。
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seriously that original massiness external cell wall only remain a thin layer, original fine structure of the
sporangium is disappeared. It causes the blurred cell structure, dissolved cell organs and leakage of
substances of the sporangium. In addition, the antibacterial substance also causes bacterial cells releasing
of phosphorus, and inhibit cell respiration rate and NADH oxidase activity.
Key words:litchi;Paenibacillus polymyxa;Peronophythora litchi;antifungal activity

荔枝霜疫霉病(Peronophythora litchi Chen ex KO et al.)是荔枝的主要病害,在荔枝花期发生会
造成大量的枯花;在结果期发生常引起大量落果和烂果(Liu et al.,2005;蔡学清 等,2008)。研
究开发新型的生物制剂来防治荔枝霜疫霉病已受到高度重视(Wisniewski & Wilson,1992;Jiang et
al.,2001;鞠荣 等,2003)。已有报道,某些植物源的抑菌物质可以用于防治荔枝霜疫霉病等植物
病害(Jaysainghe et al.,2004;Karina et al.,2005;吴光旭 等,2006;江茂生和许文耀,2007;曾
勇 等,2007)。而利用微生物的代谢产物来防治植物病害的研究更为活跃,如枯草芽孢杆菌 B2 可
以产生一种脂肽类抗菌物质,该物质可以强烈地抑制小麦赤霉菌孢子的萌发(高学文 等,2003)。
CP7 菌株是作者所在课题组分离的一株属多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)的新菌株
(陈海英 等,2007),其发酵液有强烈的抑菌作用,经研究已明确抗菌活性物质主要为抗革兰氏阳
性菌的具有 23 个基本氨基酸的碱性多肽 Cpacin(廖富蘋 等,2007)、抗革兰氏阴性菌的多粘菌素
polymyxin(陈海英 等,2009)和抗真菌活性物质 β–1,3–1,4–葡聚糖酶(文凤云,2008),且
三者之间没有交叉拮抗作用。陈迎等(2009)分析了 CP7抗菌物质粗提液对革兰氏阳性菌的杀菌机
制。从将来生产开发和实际利用的角度考虑,本研究中选择 CP7菌抗菌物质粗提液而不是单一的抗
菌蛋白组分,探讨其对荔枝霜疫霉菌等真菌的抑杀效果及其作用机制,以期为今后的利用提供理论
依据。
1 材料与方法
1.1 材料
发酵用菌株 Paenibacillus polymyxa CP7菌株为作者所在课题组分离并保存。培养 CP7菌株采用
YEPD培养基(Yeast extract 1%,Tryptone 2%,葡萄糖 2%)和发酵培养基(豆麸 5%,可溶性淀粉
2.7%,MgSO4 ·7H2O 0.1%,K2HPO4·3H2O 0.15%);培养真菌采用 PDA培养基(马铃薯汁 20%,葡
萄糖 1.5%)。如制备固体培养基则加入 1.5%的琼脂粉。抗真菌谱检测用菌株见表 1(部分菌株为华
南农业大学资环学院姜子德教授、方羽生教授和园艺学院的苏美霞教授提供,其余均为本实验室保
存)。
1.2 CP7菌株抗菌物质粗提液的制备
将 CP7菌株接种于 5 mL YEPD液体培养基中,30 ℃,180 r · min-1培养过夜,然后以 1%接种
于发酵培养基中,30 ℃,180 r · min-1培养 48 h,发酵液在沸水浴中加热 20 min,离心(10 000 r · min-1,
30 min)后收集上清液即为抗菌物质粗提液,于 4 ℃保存备用。
1.3 抗菌物质粗提液对真菌菌丝生长的影响
参照彭蓉和洪华珠(2002)的方法,用打孔器(直径 0.5 mm)分别打取 16种真菌菌落边缘菌
块,分别接种于含 10% CP7菌株抗菌物质粗提液和不含抗菌物质粗提液的 PDA培养基平板上,按
各被检测真菌菌种的适宜生长温度培养 6 d后观察抑菌效果。抑菌率(%)= (对照菌落平均直径–
7期 陈海英等:多粘类芽孢杆菌 CP7对荔枝霜疫霉菌的抗菌活性及其作用机制 1049
处理菌落平均直径) / 对照菌落平均直径 × 100。
取在 PDA培养基上新鲜生长的荔枝霜疫霉菌(Peronophythora litchi Chen ex KO et al.)菌丝,
将其直接浸泡在 100%抗菌物质粗提液中,对照是将菌丝浸泡在灭菌发酵培养基中,25 ℃处理 15 h
后,取出菌丝用于制备电镜观察样品。扫描电镜和透射电镜样品的制备按宫霞等(2004)的方法进行。
1.4 抗菌物质粗提液对荔枝霜疫霉菌孢子囊萌发的影响
将荔枝霜疫霉菌接种于 PDA培养基平板上于 25 ℃培养至长出孢子囊,每皿用 10 mL灭菌水洗
下孢子囊,经 4层灭菌纱布过滤制成孢子囊悬液,并用血球计数板计数,调整孢子囊浓度到 105 · mL-1。
在 96孔板中分别加入 50 µL孢子囊悬液、140 µL PDA液体培养基和 10 µL的抗菌物质粗提液,
得到含 5%粗提液的孢子囊处理液,同样方法制得 10%、15%、20%、25%、30%的孢子囊处理液。
混匀后于 25 ℃培养,每隔 12 h在倒置显微镜下观察孢子囊萌发情况,以灭菌水代替粗提液作为对
照。每个试验 3次重复。
取 2 mL制备好的孢子囊悬液于 5 mL离心管中,加入 2 mL抗菌物质粗提液(终浓度为 50%),
对照加入 2 mL灭菌发酵培养基,混匀后于 25 ℃静置处理 20 h。2 000 r · min-1离心 10 min,收集处
理后的孢子囊,用 0.1 mol · L-1的磷酸缓冲液洗涤 2次,弃缓冲液,加入 4%戊二醛固定液,混匀后
在 4 ℃冰箱中固定过夜。之后制备成扫描电镜和透射电镜观察的样品进行对孢子囊的观察。
1.5 抗菌物质粗提液对荔枝霜疫霉菌菌丝理化特性的影响
1.5.1 磷泄漏
参照 Newton(1984)的方法将荔枝霜疫霉菌在 PDA培养基平板上培养 6 d,自菌落边缘用打孔
器打取直径约为 3 mm的菌丝片转入 50 mL的 PDA液体培养基中,在 25 ℃下摇瓶培养 60 h,选取
大小一致的菌丝球,每个菌丝球用 1%的 NaCl溶液冲洗 3次以除去杂质。将每个菌丝球分别悬浮在
5 mmol · L-1 pH 7.0 的 HEPES-Na缓冲液中,加入抗菌物质粗提液进行处理,使最终浓度为 50%(体
积比),以灭菌发酵培养基作为对照。混匀后在 25 ℃下静置培养,分别于 1、3、6、12、24 h取样,
2 000 r · min-1离心 10 min,收集上清液。总磷含量测定采用钼锑抗比色法(黄惠华,2005)。
1.5.2 呼吸速率
荔枝霜疫霉菌丝球制备同 1.5.1。抗菌物质粗提液处理荔枝霜疫霉菌丝体后呼吸耗氧量的测定采
用氧电极法(Yasusuke et al.,1996)。依次向氧电极反应槽中加入 250 µL PDA液体培养基、一个制
备好的新鲜的成熟菌丝球(脱水干质量 0.034 g)、250 µL不同浓度的粗提液,使粗提液最终浓度分
别为 0、10%、20%、30%和 50%。每 2 min测定一次耗氧量,将某一时刻测得的反应体系(处理)
溶解氧气的量除以反应开始时刻的溶解氧气的量,即为该时刻反应体系中溶解氧的百分率。菌体的
耗氧百分率 = 1–溶解氧的百分率。在呼吸作用的动力学曲线上,以切线的斜率来确定呼吸速率。
每处理 3次重复。
1.5.3 NADH氧化酶活性
在已知抗菌物质粗提液会影响荔枝霜疫霉菌丝体呼吸的基础上,选择在生物呼吸链中有着关键
作用的 NADH氧化酶为对象,探讨抗菌物质影响菌体呼吸的内在原因。将 1.5.1中制得的菌丝球分
别悬浮在 5 mmol · L-1 pH 7.0 的 HEPES-Na缓冲液中,加入抗菌物质粗提液,使终浓度分别为 0、
10%、30%和 50%,混匀后置于 25 ℃下静止孵育 2 h。将处理的菌丝球迅速置于冰浴中,4 ℃,2 000
r · min-1离心 10 min,收集沉淀,用 0.2 mol · L-1 pH 7.2磷酸缓冲液悬浮,于冰浴中用 160 W的超声
破碎仪进行超声处理 10 min,12 000 r · min-1、4 ℃离心 30 min,取上清用于 NADH氧化酶活性的测
定。用磷酸缓冲液调零,取 2 mL上清液与 1 mL浓度为 5 × 10-4 g · mL-1的 NADH混合孵育,每个

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反应体系中最终含有 0.22 mmol · L-1的 NADH、50 mmol · L-1的 pH 7.2磷酸缓冲液和一定量的酶液
(Kunio et al.,1986)。以 OD340 nm值的减小表示酶活性大小。酶活性单位定义为:在上述反应条
件下,每个菌丝球(0.034 g)每分钟使 1 nmol的 NADH发生氧化的酶量为 1个酶活力单位(U)。
每处理 3次重复。
2 结果与分析
2.1 抗菌物质粗提液对真菌菌丝的抑菌活性
从表 1的结果可以看出,抗菌物质粗提液对 14种供试菌有抑菌作用,其中对荔枝霜疫霉菌等 7
种真菌有很强的抑菌活性,抑菌率>50%,占供试菌的 43.75%。
表 1 CP7菌粗提液的抗菌活性
Table 1 The antagonist activity of crude extracts from CP7
菌株名称
Strain names
抑菌率/%
The inhibition rate
菌株名称
Strain names
抑菌率/%
The inhibition rate
座壳孢菌 Aschersonia sp. 62.34 水稻纹枯病菌 Rhizoctonia solani 57.67
莱氏野村菌 Nomuraea rileyi 41.56 褐色菌核病菌 Sclerotium orgzae-satvae 55.12
粉质拟青霉菌 Paecilomyces farinosus 18.41 玉米大斑病菌 Exserohilum turcicum 58.14
白僵菌 Beauveria bassiana 12.74 灰葡萄孢菌 Botrytis cinerea 56.51
黄曲霉菌 Aspergillus flavus 8.69 瓜类炭疽病菌 Colletotrichum lagenarium 19.74
青霉菌 Penicillium citrinum 31.25 发酵毕赤酵母 Pichia fermentans 0
荔枝霜疫霉病菌 Peronophythora litchi 87.80 卡尔斯伯酵母 Saccharomyces calsbergensis 0
荔枝炭疽病菌 Colletotrichum gloeosporioiees 62.81 白色念珠菌标准株 Candida albicans 16.38
2.2 抗菌物质粗提液对荔枝霜疫霉菌的抑制效果
2.2.1 对荔枝霜疫霉菌菌丝生长的抑制作用
荔枝霜疫霉菌的菌丝经抗菌物质粗提液处理后,其生长受到明显抑制(表 2)。
从表 2可知,荔枝霜疫霉菌在培养生长 12 d后,对照组菌丝生长旺盛,菌盘直径达 8.2 cm。处
理培养基含粗提液终浓度为 2%时,已明显产生抑制生长的作用,菌丝生长抑制率达 24.39%。随着
处理浓度的提高,其抑制率也明显增大,当粗提液浓度为 15%时,菌丝完全不能生长,达到了 100%
的抑制率。
表 2 抗菌物质粗提液对荔枝霜疫霉菌菌丝生长的抑制作用
Table 2 Inhibitory effects of crude extracts on mycelia growth
粗提液终浓度/%
Concentration of crude extracts
菌落直径/cm
Colony diameter
菌丝生长抑制率/%
The percentage of mycelia growth inhibition
对照 Control 8.2 ± 0.03 a 0
2 6.2 ± 0.04 b 24.39
5 3.3 ± 0.09 c 59.76
10 1.0 ± 0.03 d 87.80
15 0.5 ± 0.05 e 100
20 0.5 ± 0.05 e 100
25 0.5 ± 0.05 e 100
注:培养 12 d后的菌落直径;a ~ e为差异显著性分析结果,α = 0.05。
Note:The colony diameter after culture of day 12;a–e:The results of the significant difference analysis, α = 0.05.
7期 陈海英等:多粘类芽孢杆菌 CP7对荔枝霜疫霉菌的抗菌活性及其作用机制 1051
图 3 抗菌物质粗提液对荔枝霜疫霉菌孢子囊萌发的影响
Fig. 3 Effects of crude extracts on the sporangium germination
利用扫描电镜和透射电镜观察,对照菌丝光滑、圆润,新生菌丝饱满(图 1,A);经粗提液原
液处理 15 h后的菌丝表面凹陷、干瘪、皱缩、变形,菌丝体严重畸形,一些新生菌丝体发生强烈变
形、菌丝体表面布满瘤状物(图 1,B)。

图 1 正常对照(A)和抗菌物质粗提液处理(B)的荔枝霜疫霉菌菌丝的扫描电镜观察
Fig. 1 The control(A)and the effects of crude extracts on mycelia growth(B)observed under scan electron microscope

经透射电镜观察发现,正常对照的荔枝霜疫霉菌菌丝体的切面结构清晰,细胞内的细胞器在胞
浆中有序分布,细胞壁和细胞膜完整,且有一层厚厚的外壁(图 2,A)。而用抗菌物质粗提液原液
处理的菌丝细胞出现质壁分离(图 2,B中箭头所示),结构模糊不清,界限不明显,细胞内物质出
现固缩现象;有的细胞的细胞器解体,并形成大量空白区(图 2,C中箭头所示);有的细胞内有固
缩成团块状,细胞壁溶解、溃破(图 2,D中箭头所示)。
图 2 正常对照(A)和抗菌物质粗提液处理(B ~ D)的荔枝霜疫霉菌菌丝的透射电镜观察
Fig. 2 The control (A) and the effects of crude extracts on mycelia growth(B–D)observed under transmission electron microscope

2.2.2 对荔枝霜疫霉菌孢子囊萌发的抑制作用
用 5% ~ 15%的抗菌物质粗提液培养荔枝
霜疫霉菌孢子囊24 h后,部分孢子囊能够萌发,
当用 20%粗提液处理后完全见不到萌发的孢子
囊,抑制孢子囊萌发的效果达到 100%(图 3)。
用显微镜观察,部分孢子囊内容物外泄,
有的形成空泡(图 4,B箭头)。对照孢子囊培
养 24 h后全部萌发,菌丝生长旺盛(图 4,A)。
进一步用扫描电镜和透射电镜观察抗菌物
质粗提液对荔枝霜疫霉菌孢子囊萌发的抑制作
用,50%抗菌物质粗提液处理荔枝霜疫霉菌孢子囊 20 h后,对照中的孢子囊外观整齐、完整,整个
孢子囊很饱满,呈椭圆状,不变形(图 5,A)。处理中的孢子囊外壁局部破裂,孢子囊外表变形,
凹陷、干瘪,畸形,从孢子囊外表上可看到附着在其上面有许多小球状颗粒,推测是其囊壁破裂而

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外泄的孢内物质(图 5,B ~ D中箭头所示)。
图 4 正常对照(A)和抗菌物质粗提液处理(B)荔枝霜疫霉菌孢子囊萌发的显微镜观察
Fig. 4 The control (A) and the effects of crude extracts on the sporangium germination(B) observed under optic microscope
图 5 正常对照(A)和抗菌物质粗提液处理(B ~ D)的荔枝霜疫霉菌孢子囊的扫描电镜观察
Fig. 5 The control(A)and the effects of crude extracts on the sporangium germination(B–D)observed under scan electron microscope

为进一步从孢子囊内部的组织结构上了解抗菌物质粗提液对荔枝霜疫霉菌孢子囊的抑杀作用
机制,用 50%粗提液处理荔枝霜疫霉菌孢子囊 20 h后进行透射电镜观察。对照中的孢子囊外壁厚实
清楚,孢子囊内结构清晰可见,细胞质分布均匀(图 6,A);处理中的厚实外壁已不存在,只剩很
薄的一层,而且孢子囊内结构模糊不清,细胞器解体,原来有序的超微结构紊乱甚至消失(图 6,B
中箭头所示)。
图 6 正常对照(A)和抗菌物质粗提液处理(B)的荔枝霜疫霉菌孢子囊透射电镜观察
Fig. 6 The control (A) and the effects of crude extracts on the sporangium germination(B)
observed under transmission electron microscope
7期 陈海英等:多粘类芽孢杆菌 CP7对荔枝霜疫霉菌的抗菌活性及其作用机制 1053
2.3 抗菌物质粗提液对荔枝霜疫霉菌菌丝生理生化特性的影响
2.3.1 对磷泄漏的影响
用 50%粗提液处理荔枝霜疫霉菌菌丝体后,检测上清液中磷含量的变化见图 7。随着处理时间
的延长,处理液中磷的含量不断升高,处理 1 h的为 26.7 µmol · L-1,处理 6 h的为 125.9 µmol · L-1,
此后磷的含量虽然继续增多,但比较缓慢,经过 12 h后磷的含量达到 142 µmol · L-1。而对照组对应
时间磷的含量分别为 4.8、12.6和 19.5 µmol · L-1,且其整个作用过程变化很小。由此可以看出,抗
菌物质粗提液作用于荔枝霜疫霉菌后,会引起菌丝体磷的泄漏,作用非常明显,其泄出在 3 h以前
最多。
2.3.2 对呼吸速率的影响
抗菌物质粗提液处理荔枝霜疫霉菌丝体后,检测其对菌体呼吸速率的变化,结果见图 8。不同
浓度的抗菌物质粗提液,影响作用有明显的差异,表现出明显的浓度梯度效应。对照菌体的呼吸作
用从起始至 12 min时,耗氧百分率为 90%;30%粗提液处理的荔枝霜疫霉菌丝体,经过 8 min后呼
吸基本停止,耗氧百分率低于 26%,;50%粗提液处理的荔枝霜疫霉菌丝体,只经过 4 min就停止呼
吸,耗氧百分率低于 12%。随着处理浓度的提高,荔枝霜疫霉菌丝体耗氧百分率增加的速率变缓;
氧呼吸终止处的最终耗氧量减小;氧呼吸作用从起始到结束所持续的时间也变短。

图 7 抗菌物质粗提液处理荔枝霜疫霉菌丝体后磷的泄漏 图 8 抗菌物质粗提液对荔枝霜疫霉菌丝体呼吸的抑制作用
Fig. 7 Time course of the amount of phosphorus efflux from Fig. 8 Inhibition effect on the respiration of the mycelia
mycelia treated with crude extracts treated with 10%–50% crude extracts

2.3.3 对 NADH氧化酶活性的影响
荔枝霜疫霉菌丝体经粗提液处理后,提取 NADH氧化酶,测定其活性。随着粗提液浓度的增加,
酶比活力明显减小,3个处理浓度的酶比活力依次较对照降低了 29%、53%和 79%(表 3)。

表 3 粗提液处理后荔枝霜疫霉菌丝体的 NADH氧化酶比活力的变化
Table 3 Specific activities of NADH oxidase in the mycelia treated with crude extracts
粗提液浓度/%
Concentration of crude extracts
酶比活力/(U · mg-1Pr)
Specific activity
对照 Control 326 ± 0.1 a
10 231 ± 0.1 b
30 152 ± 0.1 c
50 67 ± 0.1 d
α = 0.05.

1054 园 艺 学 报 37卷
3 讨论
很多微生物可以产生多种代谢产物能抑制其他微生物的生长,如枯草芽孢杆菌 BS-2、解淀粉
链芽孢杆菌 TB2 菌株和枯草芽孢杆菌 TL2 菌株均对荔枝霜疫霉菌丝生长和孢子囊萌发有抑制作用
(蔡学清 等,2008)。陈敏等(2009)从链霉菌 4301 的代谢产物中分离到 5 个化合物,3 个属于
酚酸类,2个为黄酮类化合物,其中槲皮素对荔枝炭疽病菌、荔枝霜疫霉菌等有抑菌作用。Kristan 等
(2005)研究证明 5,7,4–三羟基黄酮为 17–羟甾脱氢酶的抗氧化剂和抑制剂。徐良雄等(2008)
从绿僵菌 SC0924 的发酵物中分离得到 8 个酚酸类化合物,试验证明该类化合物具有抗荔枝霜疫霉
的作用。马丽丽等(2008)研究了发光杆菌 NJ菌株的抑菌活性,发现该菌株对 16种植物病原真菌
具有较强的抑制作用,分离得到的抑菌物质主要有蒽醌类、羟化二苯乙烯类、细菌素和几丁质酶类。
孙东磊等(2009)将发光杆菌 1029发酵液和乙膦铝混配,研究了该混合物对荔枝霜疫霉病菌的抑制
作用。
这些研究都表明微生物代谢产物对某些植物病原真菌有抑制作用,而同时对革兰氏阴性菌和革
兰氏阳性菌有抑制作用的报道很少。本课题组分离的多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CP7
菌株产生的抗菌物质有 3个组分,分别拮抗革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和植物病原真菌,这与前
人的报道有所不同。初步的研究表明三者之间没有交叉拮抗作用,从本研究观察其对荔枝霜疫霉菌
的抑杀作用看,是对菌体细胞壁、细胞膜和细胞浆直接起破坏作用,这样的作用,与其他抗菌肽作
用于细菌一样,不易引起耐药性(陈欣欣 等,2009)。在生理代谢方面,荔枝霜疫霉菌菌体经抗菌
物质作用后,会降低 NADH氧化酶在呼吸代谢中的活力,并引起菌体内磷物质的泄漏等,菌体磷的
泄漏,可以认为是抗菌物质引起菌体细胞壁和细胞膜破损或离子通道改变,导致细胞内容物泄漏的
证据(高向阳,2005)。为此,初步推定 CP7 菌抗菌物质是通过破坏菌体、孢子的细胞壁、细胞质
等组织结构,引起细胞器溶解,胞内物质外泄而起到抑杀菌体的作用。同时还可以通过抑制某些氧
化酶的活性而影响呼吸代谢,协同地起到抑菌杀菌的作用。当然,菌体细胞膜的破裂必然使得胞内
物质向外泄漏,但与此同时抗菌物质能否也扩散进入胞内而起到杀菌作用? 以及为什么低浓度时并
没有引起细胞膜的崩溃而杀死菌体?这些都是值得深入探讨与进一步研究的问题。
当今,对害虫、病菌的防治,由于化学农药的过多与过量的使用,已在很大程度上产生了对生
物体的危害和对环境的污染,因此,寻求无污染的生物农药和生物防治技术正在深入的研究和开发
中。而 CP7菌的抗菌物质粗提液因对许多真菌具有很强的抑菌杀菌活性,尤其是对荔枝霜疫霉菌具
有很强的抑杀效果,为此,从生物防治和水果的环保防腐方面,CP7菌的抗菌物质具有很好的开发
利用前景。

References
Cai Xue-qing,Lin Na,Chen Wei,Hu Fang-ping. 2008.Selection of the biological agents and fungicides against Peronophthora fitchii. Journal of
Fujian Agriculture and Forestry University:Natural Science Edition,37(5):463–468.(in Chinese)
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