全 文 ：植 物 研 究
B U L LT EI NF OBr OAI NC AL RE SA EH C R
绍 7卷 , 策 3 期
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3
一 7 年 7 月
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五 个三年桐品种过氧化物
酶同功酶的酶谱分析
黄健屏 朱桃英 陈 怡
T HE P E ROX ! D ASE ISO E N Z Y M E S P EC T RUM AN A
-
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H u a n g J i a n
一
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〔提要〕 五个三年桐品种的过氧化物酶同功酶经聚丙烯酞胺凝胶电泳后 , 分
离出了清晰的酶带 , 根据酶带的强弱 、 位置 , 它可划为三个区 段 , 品 种 间
的强带 R f 值极为接近 , 表明它们之间的紧密亲缘关系 , 无疑可归于同 一 个
种 , 但它们各区段中的弱带数及其 R f 值又各不相同 , 表明了它们在性 状 上
的差异 , 可划分成不同的品种。 千年桐较之五个三年桐品种 , 不仅酶带少 , 无
明显的强带 , 而且不呈现类似三年桐酶带的区段 , 无可非议的可成为另一个种。
众所周知 , 生物体的遗传性状都是由基因控制的 , 等位基因不同 , 一方
面使它们所控制的同功酶显示差异 , 另一方面使它们所表现的相对遗传性
状也不相同 , 从而使生物出现种与种或变种与变种之间的差别 ,这样 ,可以
利用同功酶酶谱之间的差异 , 从质的方面来鉴别生物中的种或变种 , 这种
方法 , 应用在树木分类方面 , 可以克服传统的只根据枝 、 叶 、 花和果等外
部形态特征来划分种 , 特别是变种的难处 。
油桐是我国南方重要的经济树种之一 , 属大戟科 ( E uP 乙。幼 fac ae 。 ) 抽
桐属 ( A l o u : f t e s ) 。 该属六个种 , 三年桐 ( A l e u r i t e s f o ld i矛 H e m s l ) 在 我
国分布最广 , 千年桐 ( A 。 橄 on t an a W i ls )的数量也不少〔`〕。 由于长期栽培
在不同的环境中 , 三年桐形成了许多品种 , 又由于划分品种的标推不一 ,
本文作者工作单位 : 湖南 , 株洲 , 中南林学院 ( C e n t r a l一 s o u r h F e r e s t r了 C o l le g e , Z卜u 艺卜。 。 ,
月 . n . n ) -
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品种命名很紊乱 , 为了使三年桐品种划分工作趋于完善 , 笔者 鉴 于 国外
利用同功酶鉴别火炬松 、 花旗松和 日本柳杉等主要树种的品种〔2〕, 以及国
内利用同功酶鉴别苹果〔3〕和油茶品种闭的先例 , 采用文献阁比〕的方法 ,从
三年桐的许多品种中选择了遗传性状比较稳定的五个品种 , 与千年桐作了
过氧化物酶同功酶的酶谱分析比较研究 。
材 料 和 方 法
一 、 电泳仪
D Y Y一班型园盘式电泳仪 。 电泳仪玻管内径 4 。 4 m m , 管长 90 m m 。
二 、 供试样品 *
三年桐品种 : 葡萄桐 、 福建球桐 、 四川小米桐 、 浙江五爪 桐 和 石 汀
,’ l 91 。” 。 树龄 4 年 , 初果期 , 叶龄为 1 个月 。
千年桐 , 树龄 6 年 , 初果期 , 叶龄为 1 个月 。
三 、 试荆叹制
配制的试剂包括凝胶单体母液 、 缓冲液和酶染色液等 , 采用文献 s( 〕〔睁
的方法配制 。
四 、 醉液提取
取植株上中下部的叶 , 用无离子水洗干净 , 滤纸吸去叶上的水 , 各剪
取 O。 lg 于研钵中 , 加少量细度为80 0目的石英砂和 0 。 4 M 硼砂缓冲液 10 m l ,
磨成匀浆 , 先 3 , o o o r p m 离心 1 0分钟 , 上清液再 4 , o o o r p m 离心 1 5分钟 , 上
清液即为电泳酶液 。
五 、 报胶制备
凝胶采用文献〔的的方法制备 , 其浓度为 7 . 5% , 交联度为 2写 。
六 、 滴 . 电泳
在胶面上加人 5 0川 的酶液和等量的浓度为 25 %的蔗糖液 , 再加人 1 ,J、
滴浓度为 0 . 0 4写的澳酚兰指示剂 , 然后沿管壁轻轻地加 满 。 . 4 M 硼 砂 缓
冲液 , 最后再将该缓冲液倒人上下电泳槽中 , 直至淹没凝胶管 口 。 开始以
l m A /管 电泳 10 一巧分钟 ,待样品全部进人凝胶后 , 调至 Zm A /管 , 当有一
凝胶管中的澳酚兰指示剂接近底部时 , 停止 电泳 , 时约 2 小时 。
七 、 取胶染色
电泳完后 , 按文献〔7〕的方法取出凝胶柱 , 放人染色 液 中浸 10 一 15 分
钟 , 倾去染色液 , 用无离子水漂洗几次后 , 用 5 纬的冰醋酸固定 , 酶带呈
现褐色 , 装在玻璃管中 , 再加 5 %的冰醋酸封蜡 , 放在 4℃的冰箱中保存`
一 1 3 2 一
J 、 、 计茸 R f 值
精确量出凝胶柱中各酶带和澳酚兰的迁移距离 , 按下列公式计算各酶
带的 R f 值 。 然后根据各酶带的数 目 、 强弱 、 R f 值及酶带分布特征 , 比较
各油桐品种的酶谱异同 。
酶 带 R f 值 - 酶带的迁移距离澳酚兰的迁移距离 . X 1 0 0
结 果
三年桐各品种和千年桐的过氧化物酶同功酶经聚丙烯酞胺凝胶电泳后 ,
均能分离出较清晰的酶带 (见图 ) , 经计算 , 得到各酶带的 R f 值 (见图表 ) 。
不 同油桐品种过长化物醉同功醉 电珠图斑
( l )一千年拥 : ( 2 )一粉萄桐 : ( s )一福建球桐 : (峨 )一石 门 “ 1 0 1 0 .
( 5 )一浙江五爪拥 : ( e) 一沪澳小 米拥。
从图表可知 , 酶带数最多的为福建球桐 , 共 13 条 , 葡萄桐和浙江五爪桐
各为 12 条 , 石门 “ 19 1 0” 为 1 条 , 沪溪小米桐为 10 条 , 都比对照种千年桐 8条多 ,
说明三年桐各品种的过氧化物酶同功酶中所含不同大小级别的蛋白质分子
忱千年桐都多 。 按照从负极到正极酶带分布的情况和强弱带的位置 , 各品
种的衷 潜图潜可 呈现 A 、 B 、 C 、 三个区段 , 虽然各品种各相应区段中的酶带
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县教及其 Rf值各不相同 , 但强带的位置 ( R f 值都为 41 . 4士 0 . 8) 、 着色程度
和宽度都非常接近 , 这表明各品种之间存在属性大同小异的基因 , 所以 ,
它们归在同一个种内是无可非议的 。 午年桐较之三年桐各品种 , 无明显的
强带存在 , 也难以分出三个区段 , 而且酶带数及其 R f 值都与三年桐 差 别
, 极大 , 这表明两个种之间的过氧化物酶同功酶 , 即基因属性方面存在较大
`的差别 , 它们确属两个不同的种 。
讨 论
聚丙烯酞胺凝胶电泳所得的结果 , 重复性强 , 辨晰度高 , 操作简便 ,
并有较好的工作效率 , 多次电泳所得各酶带的 R f 值总是相同 。 某些微 生
物品种的酶谱图型早在二十多年前就已正式作为品种的一个重要的鉴别 指
·标 〔“ 〕 , 而且得到了公认 , 树木品种的划分不仅可以 , 而且也应该将其酶谱
分图型作为一个重要的鉴定指标 。
试验结果表明 : 凝胶浓度为 7 . 5写的聚丙烯酸胺对 油桐过氧化物 酶 同
一功酶的电泳效果比其他浓度 (1 。% 、 6% 、 5 %和 4% ) 的电泳效果要好 , 半月
以内的幼嫩叶和形成离层快要落的叶难形成酶带图谱 , 生长健状的叶 , 不
管在植株的哪一部分 , 其酶带图谱没有什么差别 。
A B 5 T R A C T
F i v e s t r a i n s o f A l e u r i t e s f o : d f i H e m s l
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