全 文 ：第 源员 卷摇 第 远 期
圆园员源 年 员圆 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源员摇 晕燥援 远
阅藻糟援 摇 圆园员源
基金项目院 国家公益性行业渊农业冤科研专项渊圆园员猿猿园员怨冤袁西北农林科技大学 圆园员猿年校级大型仪器设备新功能开发项目
作者简介院 武丽娟袁女袁员怨愿源年生袁助理实验师袁研究方向为蛋白质电泳技术袁 耘鄄皂葬蚤造院 憎怎赃造蚤躁怎葬灶岳 灶憎泽怎葬枣援 藻凿怎援 糟灶
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则泽 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 贼曾造蚤怎岳 灶憎泽怎葬枣援 藻凿怎援 糟灶
收稿日期院 圆园员源 原 员园 原 员员
蚜虫蛋白质组双向电泳体系条件优化
武丽娟摇 樊永亮摇 宋摇 月摇 张战凤摇 刘小凤摇 刘同先鄢
渊西北农林科技大学袁 西北旱区作物逆境生物学国家重点实验室袁 农业部西北黄土高原作物
有害生物综合治理重点实验室袁 陕西 杨凌 苑员圆员园园冤
摘要院 为优化有效分离蚜虫全蛋白的双向电泳体系袁以豌豆蚜 粤糟赠则贼澡燥泽蚤责澡燥灶 责蚤泽怎皂 渊匀葬则则蚤泽冤为材料袁
比较了不同蛋白提取方法渊裂解液提取法尧三氯乙酸 辕丙酮沉淀法尧饱和酚抽提法冤尧蛋白上样量尧
陨孕郧胶条 责匀梯度等条件对蚜虫全蛋白双向电泳的影响遥 结果表明院不同的蛋白提取方法所获得的
豌豆蚜全蛋白提取率有显著差异袁其中以饱和酚抽提法的提取率最高袁为缘郾 猿源 依 园郾 圆远 皂早 辕 早袁且所提
取的蛋白种类丰富度也优于其它 圆 种方法曰当蛋白上样量为 员园园 滋早时所得蛋白点为 员 苑怨猿 依 猿远 个袁
高于其它上样量曰相同条件下选用 员员 糟皂 责匀 猿 耀 员园 非线性 陨孕郧胶条时所得蛋白点为 员 愿园猿 依 源圆 个袁
优于 责匀 源 耀 苑 的 陨孕郧胶条遥 表明采用饱和酚抽提法进行提取蛋白袁选用 员员 糟皂 责匀 猿 耀 员园 非线性
陨孕郧胶条袁以蛋白银染方法尧分离胶浓度为 员圆郾 缘豫进行双向电泳时最适蛋白上样量为 员园园 滋早袁所得
可识别蛋白质点最高袁且重复性试验匹配率高袁可用于豌豆蚜蛋白质组学研究遥
关键词院 蚜虫曰 蛋白质组曰 双向电泳曰 条件优化
韵责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼憎燥鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造 早藻造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 贼藻糟澡灶燥造燥早赠 泽赠泽贼藻皂
枣燥则 葬责澡蚤凿 责则燥贼藻燥皂藻
宰怎 蕴蚤躁怎葬灶摇 云葬灶 再燥灶早造蚤葬灶早摇 杂燥灶早 再怎藻摇 在澡葬灶早 在澡葬灶枣藻灶早摇 蕴蚤怎 载蚤葬燥枣藻灶早摇 蕴蚤怎 栽燥灶早曾蚤葬灶鄢
渊杂贼葬贼藻 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 悦则燥责 杂贼则藻泽泽 月蚤燥造燥早赠 枣燥则 粤则蚤凿 粤则藻葬泽袁 晕燥则贼澡憎藻泽贼 粤 驭 云 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠曰 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 晕燥则贼澡憎藻泽贼
蕴燥藻泽泽 孕造葬贼藻葬怎 悦则燥责 孕藻泽贼 酝葬灶葬早藻皂藻灶贼袁 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻袁 再葬灶早造蚤灶早 苑员圆员园园袁 杂澡葬葬灶曾蚤 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽澡蚤泽 泽贼怎凿赠 葬蚤皂泽 贼燥 燥责贼蚤皂蚤扎藻 葬 贼憎燥鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 渊圆鄄阅耘冤 泽赠泽贼藻皂 枣燥则 泽贼怎凿赠蚤灶早 贼燥贼葬造
责则燥贼藻蚤灶 燥枣 葬责澡蚤凿泽援 陨灶 贼澡藻 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼袁 贼澡藻 责藻葬 葬责澡蚤凿 粤糟赠则贼澡燥泽蚤责澡燥灶 责蚤泽怎皂 渊匀葬则则蚤泽冤 憎葬泽 怎泽藻凿援 栽澡则藻藻
凿蚤枣枣藻则藻灶贼 皂藻贼澡燥凿泽 燥枣 责则燥贼藻蚤灶 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶袁 灶葬皂藻造赠 造赠泽葬贼藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶袁 栽悦粤鄄葬糟藻贼燥灶藻 责则藻糟蚤责蚤贼葬贼蚤燥灶 葬灶凿 泽葬贼怎则葬贼藻凿
责澡藻灶燥造 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶袁 憎藻则藻 糟燥皂责葬则藻凿援 栽澡藻 枣葬糟贼燥则泽 蚤灶糟造怎凿蚤灶早 造燥葬凿蚤灶早 葬皂燥怎灶贼 燥枣 责则燥贼藻蚤灶 泽葬皂责造藻泽 葬灶凿 贼憎燥 噪蚤灶凿泽
燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 陨孕郧 泽贼则蚤责泽 渊责匀 猿 原 员园 灶燥灶造蚤灶藻葬则 葬灶凿 责匀 源 原 苑冤 憎藻则藻 贼藻泽贼藻凿援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻则藻
憎藻则藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽 葬皂燥灶早 贼澡藻 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿泽援 栽澡藻 泽葬贼怎则葬贼藻凿 责澡藻灶燥造 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶
赠蚤藻造凿藻凿 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼 葬皂燥怎灶贼 燥枣 缘郾 猿源 依 园郾 圆远 皂早 辕 早 责则燥贼藻蚤灶 葬泽 憎藻造造 葬泽 贼澡藻 遭藻泽贼 则蚤糟澡灶藻泽泽 燥枣 责则燥贼藻蚤灶泽援 云燥则
葬责澡蚤凿 圆鄄阅耘 责则燥贼藻燥皂藻 则藻泽藻葬则糟澡袁 贼澡藻 枣燥造造燥憎蚤灶早 责则燥贼燥糟燥造 泽澡燥怎造凿 遭藻 葬凿燥责贼藻凿院 责匀 猿 原员园 灶燥灶造蚤灶藻葬则 陨孕郧 泽贼则蚤责袁
员园园 滋早 责则燥贼藻蚤灶 造燥葬凿蚤灶早 葬皂燥怎灶贼袁 员圆郾 缘豫 早藻造 枣燥则 杂阅杂鄄孕粤郧耘袁 葬灶凿 泽蚤造增藻则 泽贼葬蚤灶蚤灶早援 栽澡蚤泽 皂藻贼澡燥凿 澡葬凿
凿藻贼藻糟贼藻凿 葬 贼燥贼葬造 燥枣 员 愿园猿 依 源圆 责则燥贼藻蚤灶 泽责燥贼泽 憎蚤贼澡 葬 澡蚤早澡造赠 则藻责则燥凿怎糟蚤遭造藻 则藻泽怎造贼 蚤灶 贼澡藻 责则燥贼藻燥皂蚤糟 泽贼怎凿赠 燥枣 贼澡藻
责藻葬 葬责澡蚤凿援
运藻赠 憎燥则凿泽院 葬责澡蚤凿曰 责则燥贼藻燥皂蚤糟泽曰 贼憎燥鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽曰 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶 燥责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶
摇 摇 蚜虫隶属于昆虫纲半翅目袁以吸食植物韧皮部
汁液为生袁现存的已知种类超过 缘 园园园 种袁大部分种
类具有复杂的生活史袁表现出孤雌世代和有性世代
交替尧卵生或胎生尧种内非遗传多样性等特征咱员暂 遥
蚜虫大部分种类是农林业害虫袁不仅对植物造成损
害袁有些还是植物病害的传播者遥 鉴于其生物学特
性及对农林业经济的重要性袁蚜虫已成为生态学尧进
化学以及遗传学研究的模式生物咱圆 原 猿暂 遥 随着国际蚜
虫基因组联盟对豌豆蚜 粤糟赠则贼澡燥泽蚤责澡燥灶 责蚤泽怎皂 渊匀葬则则蚤泽冤
全基因组序列测定的完成咱源暂 袁蚜虫的基因组尧功能
基因组以及蛋白质组学方面的研究与日俱增遥
蛋白质是生物体各种复杂生理功能的主要执行
者袁仅仅知道基因组仍无法了解生物体复杂的生命
活动过程咱缘暂 袁而对蛋白质结构和功能的研究有助于
阐明生物体复杂的生理机制遥 双向电泳 渊 贼憎燥鄄凿蚤鄄
皂藻灶泽蚤燥灶葬造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽袁圆鄄阅耘冤技术自 员怨苑缘 年由
韵忆云葬则则藻造造咱远暂建立后袁利用蛋白质的 圆 个重要物理特
性等电点 渊 藻造藻糟贼则蚤糟 责燥蚤灶贼泽袁 责陨冤和分子量 渊皂燥造藻糟怎造葬则
憎藻蚤早澡贼袁酝宰冤实现了在一块凝胶上同时分离和展示
上千种蛋白质点而成为蛋白质组学研究的关键技术
之一咱苑暂 遥 目前针对蚜虫唾液腺的蛋白质组学研究
取得了一定的成果袁晕蚤糟澡燥造泽燥灶 等咱愿暂运用双向电泳技
术研究 源 种不同俄罗斯小麦蚜虫 阅蚤怎则葬责澡蚤泽 灶燥曾蚤葬 的
唾液蛋白袁鉴定出了 猿源 个差异蛋白曰悦葬则燥造葬灶 等咱怨暂用
蛋白质学研究豌豆蚜唾液腺袁发现 猿园园 多个有分泌
信号肽的蛋白曰匀葬则皂藻造等咱员园暂利用双向电泳技术研究
桃蚜 酝赠扎怎泽 责藻则泽蚤糟葬藻 渊杂怎造扎藻则冤唾液袁发现其与植物互
作中起着重要作用的一些酶袁包括葡萄糖脱氢酶以
及 晕粤阅匀脱氢酶等遥 蛋白质组学还可用于蚜虫生
理以及行为等方面的研究袁如 云则葬灶糟蚤泽 等咱员员暂利用双
向电泳和电喷雾法袁结合质谱分析技术研究发现桃
蚜体内共有 员源 个差异蛋白随其取食的植物寄主种
类不同而发生差异表达袁其中 员园 个表达下调的差异
蛋白可能与糖酵解尧栽悦粤 循环尧蛋白质合成相关袁源
个过量表达的可能与细胞骨架相关曰孕葬责怎则葬 等咱员圆暂利
用双向电泳技术研究了麦长管蚜 杂蚤贼燥遭蚤燥灶 葬增藻灶葬藻
渊云葬遭则蚤糟蚤怎泽冤对大麦黄矮病病毒渊月葬则造藻赠 赠藻造造燥憎 凿憎葬则枣
增蚤则怎泽袁 月再阅灾冤孕粤灾的传播能力及品种差异间的表达
异同袁为进一步阐明二者之间的关系奠定了基础曰
郧葬怎责藻造泽等咱员猿暂运用双向电泳技术分析比较了经蚜虫
和未经蚜虫为害的植物韧皮部的蛋白差异曰阅怎糟藻责责藻
等咱员源暂运用蛋白质组学分析比较了正常番茄叶片与
经昆虫为害后的番茄叶片蛋白差异遥 但目前针对蚜
虫全蛋白的蛋白质组学报道甚少遥
双向电泳技术方法包括样品制备尧第一向等点
聚焦渊 蚤泽燥藻造藻糟贼则蚤糟 枣燥糟怎泽蚤灶早袁陨耘云冤尧第二向十二烷基硫
酸钠 原聚丙烯酰胺凝胶 渊 泽燥凿蚤怎皂 凿燥凿藻糟赠造 泽怎造枣葬贼藻 鄄
责燥造赠葬糟则赠造葬皂蚤凿藻早藻造藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽袁杂阅杂鄄孕粤郧耘冤 电泳分
离尧显色以及图像分析等基本步骤遥 由于不同研究
对象的蛋白质组成存在较大差异袁套用常规双向电
泳试验程序难以满足不同类型样品的蛋白质组学研
究袁因此袁针对不同样品需建立不同的双向电泳体
系遥 为此袁本试验探索了蛋白质提取方法尧上样量尧
固相 责匀 梯度渊 蚤皂皂燥遭蚤造蚤扎藻凿 责匀 早则葬凿蚤藻灶袁陨孕郧冤胶条等
因素对豌豆蚜全蛋白双向电泳图谱的影响袁以期建
立适合豌豆蚜全蛋白的双向电泳体系袁为蚜虫蛋白
质组学的后续研究奠定基础遥
员 材料与方法
员郾 员 材料
供试虫源院以蚕豆苗 灾蚤糟蚤葬 枣葬遭葬渊蕴援 冤为食源袁在
培养箱中饲养豌豆蚜作为试验材料袁温度 员愿 依 园郾 缘
益尧光周期 员源 蕴 颐 员园 阅尧相对湿度渊苑园 依 缘冤豫 遥 收集
无翅成蚜立即于液氮中速冷袁后转移至 原 愿园 益冰箱
保存待用遥
试剂院陨孕郧胶条和 月蚤燥鄄造赠贼藻 载体两性电解质尧碘
乙酰胺尧矿物油尧猿园豫丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺溶
液渊猿园豫 葬糟则赠造葬皂蚤凿藻冤购自美国 月蚤燥鄄砸葬凿公司曰二硫苏
糖醇渊阅蕴鄄凿蚤贼澡蚤燥贼澡则藻蚤贼燥造袁阅栽栽冤尧低熔点琼脂糖尧茁鄄巯基
乙醇尧十二烷基磺酸钠 渊 泽燥凿蚤怎皂 凿燥凿藻糟赠造 泽怎造枣葬贼藻袁
杂阅杂冤尧甘氨酸购自美国 粤皂则藻泽糟燥公司曰猿鄄咱渊猿鄄胆酰氨
基丙基冤二甲基氨基暂鄄员鄄丙磺酸渊猿鄄咱渊猿鄄糟澡燥造葬皂蚤凿燥鄄
责则燥责赠造冤凿蚤皂藻贼澡赠造葬皂皂燥灶蚤燥暂责则燥责葬灶藻泽怎造枣燥灶葬贼藻袁 悦匀粤孕杂冤尧
过硫酸铵渊葬皂皂燥灶蚤怎皂 责藻则泽怎造责澡葬贼藻袁粤孕冤尧四甲基乙二
胺渊 贼藻贼则葬皂藻贼澡赠造藻贼澡赠造藻灶藻凿蚤葬皂蚤灶藻袁 栽耘酝耘阅冤尧三羟甲基
氨基甲烷渊 贼则蚤泽渊 澡赠凿则燥曾赠皂藻贼澡赠造冤 皂藻贼澡赠造 葬皂蚤灶燥皂藻贼澡葬灶藻
栽匀粤酝袁栽则蚤泽鄄遭葬泽藻冤尧尿素尧硫脲尧蛋白标准品尧溴酚蓝
购自美国 杂蚤早皂葬 公司曰栽则蚤泽 饱和酚购自北京索莱宝
科技有限公司曰其余试剂均匀为国产分析纯遥
仪器院 孕砸韵栽耘粤晕 陨耘云 杂赠泽贼藻皂 水平电泳系统尧
孕砸韵栽耘粤晕 域 载蕴 悦藻造造垂直电泳系统和 郧杂鄄愿园园 光密
度扫描仪袁美国 月蚤燥鄄砸葬凿 公司曰杂耘圆远园 垂直电泳系
统袁郧耘 匀藻葬造贼澡糟葬则藻 公司曰灾悦载缘园园 超生波破碎仪袁美
国 杂燥灶蚤糟泽 公司曰 酝蚤造造蚤鄄匝 超纯水仪袁美国 酝蚤造造蚤责燥则藻
公司遥
员郾 圆 方法
员郾 圆郾 员 提取蚜虫全蛋白的方法比较
裂解液提取法院参照翁瑜等咱员缘暂方法并略作修
园缘远 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
改遥 取冻存的无翅成蚜材料 园郾 猿 早 加液氮迅速研磨
成粉末袁加 源 皂蕴 蛋白裂解液 渊 怨郾 缘 酝 尿素尧 源豫
悦匀粤孕杂尧员园园 皂酝 阅栽栽尧圆豫 月蚤燥鄄造赠贼藻冤曰收集样品加入
员郾 缘 皂蕴离心管中袁冰浴超声破碎渊员园园 宰袁员园 次袁每次
员园 泽袁间隔 员缘 泽冤曰源 益下 远 园园园 早离心 猿园 皂蚤灶袁取上清曰
用 园郾 圆圆 滋皂膜过滤上清袁真空冷冻干燥袁蛋白粉末于
原愿园 益冰箱保存备用遥
三氯乙酸 辕丙酮沉淀法院参考 阅葬皂藻则增葬造 等咱员远暂方
法并略作修改遥 取冻存的无翅成蚜材料 园郾 猿 早 加液
氮迅速研磨成粉末袁加入 员源 皂蕴预冷丙酮溶液渊含质
量分数 员园豫 栽悦粤和体积分数 园郾 园苑豫 茁鄄巯基乙醇冤袁
充分混匀后袁 原 圆园 益沉淀过夜曰源 益下 远 园园园 早 离心
猿园 皂蚤灶袁去除上清曰沉淀中加入 员源 皂蕴预冷丙酮袁震荡
混匀袁源 益下 远 园园园 早 离心 员园 皂蚤灶袁去除上清袁重复此
步骤至丙酮完全无色曰室温干燥沉淀袁加入 员 皂蕴 蛋
白裂解液袁冰浴超声破碎渊员园园宰袁员园 次袁每次 员园 泽袁间
隔 员缘 泽冤曰源益下 员圆 园园园 早离心 猿园皂蚤灶袁取上清曰用 园郾 圆圆
滋皂膜过滤上清袁真空冷冻干燥袁蛋白粉末于 原 愿园 益
冰箱保存备用遥
饱和酚抽提法院参照安少利等咱员苑暂方法并略作
修改遥 取冻存的无翅成蚜材料 园郾 猿 早 加液氮迅速
研磨成粉末袁加 原 圆园 益预冷 员园豫 栽悦粤 辕丙酮溶液
员源 皂蕴袁充分混匀后袁 原 圆园 益沉淀过夜曰离心 猿园 皂蚤灶袁
在沉淀中加入 原 圆园 益预冷甲醇 员源 皂蕴袁震荡混匀袁
离心 员园 皂蚤灶曰在沉淀中加入 原 圆园 益预冷 愿园豫丙酮
溶液袁震荡混匀袁离心 员园 皂蚤灶曰室温干燥沉淀 缘 皂蚤灶袁
加入 缘 皂蕴 栽则蚤泽饱和酚溶液和 缘 皂蕴 蔗糖 辕 杂阅杂 缓冲
液渊园郾 员 酝 责匀 愿郾 园 栽则蚤泽鄄匀悦造尧圆豫 杂阅杂尧圆豫 茁鄄巯基乙
醇尧猿园豫蔗糖冤袁混匀震荡曰离心 缘 皂蚤灶 取酚相曰加入
缘 倍体积的含 园郾 员 酝 乙酸铵的甲醇溶液袁 原 圆园益沉
淀过夜曰离心 猿园 皂蚤灶曰沉淀中加入 原 圆园 益预冷 愿园豫
丙酮溶液袁震荡混匀袁离心 员园 皂蚤灶袁去除上清袁重复
此步骤 员 次曰沉淀中加入 原 圆园 益预冷丙酮袁震荡混
匀袁离心 员园 皂蚤灶曰室温干燥沉淀袁于 原 愿园 益冰箱保
存备 用遥 上 述 离 心 操 作 均 在 源 益 尧 远 园园园 早
下进行遥 摇
员郾 圆郾 圆 蛋白样品的含量测定及 杂阅杂鄄孕粤郧耘分析
取上述各方法提取的尧于 原 愿园 益储存的蛋白
样品粉末袁加入 员 皂蕴 上样水化液渊愿 酝 尿素尧源豫
悦匀粤孕杂尧 远缘 皂酝 阅栽栽尧 园郾 圆豫 渊 憎 辕 增 冤 月蚤燥鄄蕴赠贼藻尧
园郾 园园员豫溴酚蓝冤袁恒温水浴摇床 猿园 益 尧猿园园 则 辕 皂蚤灶
孵育 圆 澡袁待蛋白粉末充分溶解后袁圆园 益下 员园 园园园
则 辕 皂蚤灶离心 员园 皂蚤灶袁取上清进行蛋白浓度测定遥 参
照 月则葬凿枣燥则凿咱员愿暂蛋白定量法袁以牛血清蛋白作为标
准蛋白袁测定 缘怨缘 灶皂 下的样品吸光值袁计算样品
蛋白浓度渊滋早 辕 滋蕴冤遥 采用垂直电泳系统对不同提
取方法所得样品蛋白各 员园 滋早 进行单向 杂阅杂鄄
孕粤郧耘 电泳袁分离胶浓度为 员圆郾 缘豫 袁浓缩胶浓度为
源豫 遥 采用质谱兼用敏感型银染法咱员怨暂 对 杂阅杂鄄
孕粤郧耘 凝胶进行染色袁用 郧杂鄄愿园园 光密度扫描仪对
凝胶进行图像采集袁设定 愿 位灰度和适当的分辨
率渊猿园园 凿责蚤冤袁图像保存为 贼蚤枣格式遥
员郾 圆郾 猿 不同上样量对双向电泳分离蛋白的影响
采用 员员 糟皂 责匀 猿 耀 员园 非线性 陨孕郧 胶条袁控制样
品蛋白上样量分别为 缘园尧员园园 和 圆园园 滋早袁用上样蛋白
缓冲液渊愿 酝 怎则藻葬尧源豫 悦匀粤孕杂尧远缘 皂酝 阅栽栽尧园郾 圆豫
渊憎 辕 增冤 月蚤燥鄄蕴赠贼藻尧园郾 园园员豫溴酚蓝冤稀释至 猿苑园 滋蕴遥 加
样时袁沿着聚焦盘槽的边缘从左往右线性加入蛋白
样品袁首先去除预制 陨孕郧胶条上的保护层袁使胶条胶
面朝下放入聚焦盘袁注意胶条正负极与聚焦盘正负
极保持一致袁然后沿着胶条缓慢加入适量矿物油覆
盖胶条袁防止水化液蒸发袁盖上胶条槽盖曰水平置于
电泳仪上进行等点聚焦遥
员郾 圆郾 源 陨孕郧胶条 责匀值对双向电泳分离蛋白的影响
为选择适合豌豆蚜全蛋白分离的 陨孕郧 胶条 责匀
梯度袁采用 员员 糟皂 陨孕郧 胶条袁蛋白上样量控制为 员园园
滋早袁对 责匀 猿 耀 员园 非线性和 责匀 源 耀 苑 的 陨孕郧胶条分别
进行等点聚焦遥 等电聚焦温度设置为 员苑 益袁每根胶
条的极限电流为 缘园 粤遥 聚焦程序参照叶月蚤燥鄄砸葬凿 蛋
白质组双向电泳实验操作手册曳设定并略作修改袁
设置参数如表 员 所示遥 等电聚焦结束后袁陨孕郧 胶条
依次在平衡液玉渊远 皂燥造 辕 蕴 尿素尧圆豫 杂阅杂尧远园 皂皂燥造 辕 蕴
栽则蚤泽鄄匀悦造 责匀 愿郾 愿尧圆园豫甘油尧圆豫 阅栽栽冤和平衡液域渊远
皂燥造 辕 蕴 尿素尧圆豫 杂阅杂尧远园 皂皂燥造 辕 蕴 栽则蚤泽鄄匀悦造 责匀 愿郾 愿尧
圆园豫甘油尧圆郾 缘豫碘乙酰胺冤中各平衡 员缘 皂蚤灶袁经超纯
水清洗 猿园 泽 后转移至胶浓度为 员圆郾 缘豫的二相 杂阅杂鄄
孕粤郧耘 凝胶上端袁并用低熔点琼脂糖封顶遥 以每块
胶恒定电流 缘 皂粤电泳 员郾 缘 澡袁待到溴酚蓝指示剂由
第一向胶条转移到第二向凝胶后加大电流至每块胶
员园 皂粤袁当溴酚蓝指示剂接近底部边缘时停止电泳袁
电泳全程由冷却循环系统控制温度为 圆园 益遥 采用
质谱兼用敏感型银染方法对凝胶进行染色袁用 郧杂鄄
愿园园 光密度扫描仪对凝胶进行图像采集袁设定 愿 位
灰度和适当的分辨率渊猿园园 凿责蚤冤袁图像保存为 贼蚤枣 格
式袁采用 孕阅匝怎藻泽贼 愿郾 园郾 员 软件对图像进行处理和
分析遥
员缘远远 期 武丽娟等院 蚜虫蛋白质组双向电泳体系条件优化
表 员 豌豆蚜全蛋白的双向等电聚焦电泳参数
栽葬遭造藻 员 陨泽燥藻造藻糟贼则蚤糟 枣燥糟怎泽蚤灶早 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 责葬则葬皂藻贼藻则 燥枣 粤糟赠则贼澡燥泽蚤责澡燥灶 责蚤泽怎皂 责则燥贼藻蚤灶
聚焦程序
云燥糟怎泽 责则燥早则葬皂
电压渊灾冤
灾燥造贼葬早藻
升压方式
宰葬赠泽 贼燥 遭燥燥泽贼 责则藻泽泽怎则藻
时间渊澡冤
栽蚤皂藻
作用
云怎灶糟贼蚤燥灶
杂员 缘园 快速 云葬泽贼 员圆 水化 匀赠凿则葬贼蚤燥灶
杂圆 员园园 快速 云葬泽贼 员 除盐 阅藻泽葬造蚤灶葬贼蚤燥灶
杂猿 圆缘园 线性 蕴蚤灶藻 员 除盐 阅藻泽葬造蚤灶葬贼蚤燥灶
杂源 缘园园 快速 云葬泽贼 员 除盐 阅藻泽葬造蚤灶葬贼蚤燥灶
杂缘 愿 园园园 线性 蕴蚤灶藻 源 升压 月燥燥泽贼
杂远 愿 园园园 快速 云葬泽贼 源园 园园园 灾澡 聚焦 云燥糟怎泽
杂苑 缘园园 快速 云葬泽贼 源 保持 运藻藻责
员郾 圆郾 缘 试验重复性验证
双向电泳分离技术良好的重复性和稳定性是得
到可靠的蛋白质组学研究结果的基础遥 采用上述各
预试验筛选所得最佳或最适的提取方法及条件袁即
采用饱和酚抽提法制备样品蛋白袁选择长度 员员 糟皂
责匀范围为 猿 耀 员园 的非线性 陨孕郧 胶条袁上样量为 员园园
滋早进行等电聚焦袁第二向分离胶浓度为 员圆郾 缘豫 袁用
质谱兼用敏感型银染方法袁分别进行 猿 次双向电泳遥
员郾 猿 数据分析
利用 杂孕杂杂 员猿郾 园 统计软件对 猿 种不同提取方法
的蛋白质提取率进行方差分析袁应用 阅怎灶糟葬灶氏新复
极差法进行差异显著性检验遥
圆 结果与分析
圆郾 员 蛋白质提取方法选择
圆郾 员郾 员 不同提取方法制备的样品蛋白提取率
饱和酚抽提法提取的 园郾 猿 早 样品质量浓度和蛋
白提取率均最高袁分别达到 圆郾 园园 依 园郾 员园 滋早 辕 滋蕴 和
缘郾 猿源 依 园郾 圆远 皂早 辕 早袁显著高于裂解液提取法和三氯乙
酸 栽悦粤 辕丙酮沉淀法渊表 员冤遥 表明在豌豆蚜蛋白质
提取率上采用饱和酚抽提法明显要优于其它 圆 种
方法遥
表 圆 不同提取方法制备的豌豆蚜样品蛋白质量浓度比较
栽葬遭造藻 圆 孕则燥贼藻蚤灶 糟燥灶贼藻灶贼 燥枣 粤糟赠则贼澡燥泽蚤责澡燥灶 责蚤泽怎皂 藻曾贼则葬糟贼藻凿 遭赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责则燥贼藻蚤灶 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿泽
蛋白提取方法
孕则燥贼藻蚤灶 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿
蛋白质量浓度渊滋早 辕 滋蕴冤
孕则燥贼藻蚤灶 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
蛋白提取率渊皂早 辕 早冤
孕则燥贼藻蚤灶 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 则葬贼藻
裂解液提取法 蕴赠泽葬贼藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 员郾 猿远 依 园郾 园愿 遭 源郾 缘圆 依 园郾 圆苑 遭
栽悦粤 辕丙酮沉淀法 栽悦粤 辕 葬糟藻贼燥灶藻 责则藻糟蚤责蚤贼葬贼蚤燥灶 员郾 猿圆 依 园郾 园远 遭 猿郾 缘圆 依 园郾 员远 糟
饱和酚抽提法 杂葬贼怎则葬贼藻凿 责澡藻灶燥造 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 圆郾 园园 依 园郾 员园 葬 缘郾 猿源 依 园郾 圆远 葬
摇 摇 表中数据为平均数 依标准差遥 同列不同小写字母表示经 阅怎灶糟葬灶 氏新复极差法检验在 孕 约 园郾 园缘 水平显著差异遥 阅葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 贼葬遭造藻
葬则藻 皂藻葬灶 依 杂阅援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约园郾 园缘 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎 皂怎造贼蚤责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼援
圆郾 员郾 圆 不同提取法制备样品蛋白 杂阅杂鄄孕粤郧耘电泳效果
对 猿 种方法提取的豌豆蚜全蛋白进行单向
杂阅杂鄄孕粤郧耘电泳袁结果表明 猿 种方法所提取的豌豆
蚜全蛋白的分子量主要集中在 员缘 耀 圆缘园 噪阅之间袁但
所得电泳条带有一定差异渊图 员冤遥 采用饱和酚抽提
法提取的样品蛋白条数较多袁且较清晰袁在 员缘 耀 圆缘尧
猿苑 耀 苑缘 和 员园园 耀 圆缘园 噪阅的电泳条带数要多于其它 圆
种方法遥
圆郾 员郾 猿 不同提取法制备的蛋白样品双向电泳图谱
在相同试验条件下袁采用裂解液法提取的豌
豆蚜全蛋白双向电泳图谱所得可识别蛋白质点为
员 源圆远 依 猿缘 个渊图 圆鄄粤冤袁采用 栽悦粤 辕丙酮沉淀法获
得 员 远圆远 依 猿园 个蛋白质点渊图 圆鄄月冤袁采用饱和酚提
取法可获得 员 愿园猿 依 源圆 个蛋白质点渊图 圆鄄悦冤遥 以
饱和酚提取法提取的豌豆蚜全蛋白的双向电泳图
谱最好袁获得的蛋白质点数最多且图像清晰遥 用
裂解液提取法获得的蛋白质点最少袁分子量在 圆园
耀 源猿 噪阅之间较多的低丰度蛋白质点未被有效检
测遥 栽悦粤 辕丙酮沉淀法相较裂解液提取法蛋白质点
明显增多袁但比饱和酚提取法少袁且等电点在 猿 耀 缘
的蛋白质点未有效分离遥 表明饱和酚抽提法在豌
豆蚜全蛋白提取率尧提取种类丰富度上均优于其
它 圆 种方法袁更适合豌豆蚜全蛋白双向电泳的样
品制备遥
圆郾 圆 不同上样量对双向电泳分离蛋白的影响
上样量为 缘园 滋早的双向电泳图谱所得蛋白点为
员 缘苑员 依 源圆 个袁等电点 缘 耀 员园 和分子量圆园 耀 源猿 噪阅 之
间的部分低丰度蛋白无法被染色和分析渊图 猿鄄粤冤曰
圆缘远 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
图 员 不同提取方法制备的样品蛋白 杂阅杂鄄孕粤郧耘电泳图谱
云蚤早援 员 杂阅杂鄄 孕粤郧耘 葬灶葬造赠泽蚤泽 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责则燥贼藻蚤灶
藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿泽
酝院 蛋白 酝葬则噪藻则曰 员院 裂解液提取法曰 圆院 饱和酚抽提
法曰 猿院 栽悦粤 辕丙酮沉淀法遥 酝院 酝葬则噪藻则曰 员院 造赠泽葬贼藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶
皂藻贼澡燥凿曰 圆院 泽葬贼怎则葬贼藻凿 责澡藻灶燥造 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿曰 猿院 栽悦粤 辕 葬糟藻鄄
贼燥灶藻 责则藻糟蚤责蚤贼葬贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿援
摇
上样量为 员园园 滋早所得蛋白质点数最多为 员 苑怨猿 依 猿远
个袁蛋白点重叠少且背景清晰渊图 猿鄄月冤曰上样量为
圆园园 滋早所得蛋白质点数为 员 源员远 依 源园 个袁在碱性端
责匀 缘 耀员园 和分子量在 圆园 耀 远远 噪阅之间的部分蛋白质
点出现重叠现象袁蛋白质点相互干扰袁有效分离的蛋
白质点数明显减少渊图 猿鄄悦冤遥 表明对于 员员 糟皂 的
陨孕郧胶条袁采用质谱兼用敏感型银染时袁选择上样量
为 员园园 滋早袁可有效分离豌豆蚜全蛋白遥
圆郾 猿 不同 责匀的 陨孕郧胶条对双向电泳蛋白分离的影响
图 圆 豌豆蚜蛋白样品不同蛋白提取方法的双向电泳图谱
云蚤早援 圆 圆鄄阅耘 责葬贼贼藻则灶泽 燥枣 粤糟赠则贼澡燥泽蚤责澡燥灶 责蚤泽怎皂 藻曾贼则葬糟贼泽 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿泽
粤院 裂解液提取法曰 月院 饱和酚抽提法曰 悦院 栽悦粤 辕丙酮沉淀法遥 粤院 蕴赠泽葬贼藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿曰 月院 泽葬贼怎则葬贼藻凿 责澡藻灶燥造 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶
皂藻贼澡燥凿曰 悦院 栽悦粤 辕 葬糟藻贼燥灶藻 责则藻糟蚤责蚤贼葬贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿援
采用 员员 糟皂 责匀 猿 耀员园 非线性的 陨孕郧胶条双向电
泳图谱检测到 员 愿园猿 依 源圆 个蛋白质点渊图 源鄄粤冤袁且蛋
白质点分布均匀袁在酸性端 责匀 猿 耀 缘 的区域蛋白质
点分离效果不明显袁出现蛋白质点重叠的现象袁部分
低丰度蛋白点被高丰度蛋白点所遮盖遥 而采用 员员
糟皂 责匀 源 耀 苑 的 陨孕郧 胶条双向电泳图谱检测到
员 苑园员 依 猿苑 个蛋白质点渊图 源鄄月冤袁原本聚集在 责匀 猿 耀
员园 非线性 陨孕郧胶条等电点 猿 耀 缘 之间的蛋白点获得
较好的分离袁且部分低丰度蛋白也得到分离和检测袁
但等电点 苑 耀 员园 之间的许多碱性蛋白质点丢失袁无
法检测遥 因此袁选择 员员 糟皂 责匀 猿 耀 员园 非线性的 陨孕郧
胶条可以满足豌豆蚜全蛋白的双向电泳分析遥
圆郾 源 豌豆蚜全蛋白电泳体系重复性验证
豌豆蚜全蛋白以相同的试验条件分别进行 猿
次双向电泳袁分别检测到 员 苑怨猿 依 猿远 渊图 缘鄄粤冤尧
员 苑苑员 依 源源渊图 缘鄄月冤和 员 苑猿圆 依 猿怨渊图 缘鄄悦冤个蛋白
质点袁重复性较好曰且 猿 张图谱的匹配率可达
苑远豫 袁表明本研究优化的豌豆蚜全蛋白双向电泳
分离体系具有较好的重复性袁可用于后续豌豆蚜
蛋白质学的分析研究遥
猿 讨论
蛋白样品制备的好坏直接影响双向电泳的成功
与否咱圆园暂 遥 裂解液提取法是利用高浓度的尿素溶液
对蛋白质进行直接溶解的提取方法袁操作简单袁溶解
过程中不会对蛋白进行修饰而被广泛用于动物细胞
及组织蛋白的提取咱圆员暂 袁但尿素对疏水性的蛋白溶解
性较差袁尤其是膜蛋白遥 蚜虫个体小袁蛋白含量低袁
猿缘远远 期 武丽娟等院 蚜虫蛋白质组双向电泳体系条件优化
图 猿 豌豆蚜蛋白样品不同上样量的双向电泳图谱
云蚤早援 猿 圆鄄阅耘 责葬贼贼藻则灶泽 燥枣 粤糟赠则贼澡燥泽蚤责澡燥灶 责蚤泽怎皂 藻曾贼则葬糟贼泽 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 造燥葬凿蚤灶早 泽葬皂责造藻 择怎葬灶贼蚤贼赠
摇 摇 粤 耀 悦院 上样量分别为 缘园尧员园园尧圆园园 滋早遥 粤鄄悦院 蕴燥葬凿蚤灶早 泽葬皂责造藻 择怎葬灶贼蚤贼赠 憎蚤贼澡 缘园袁 员园园袁 圆园园 滋早袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援
摇
图 源 豌豆蚜蛋白样品不同 责匀梯度范围 陨孕郧胶条双向电泳图谱
云蚤早援 源 圆鄄阅耘 责葬贼贼藻则灶泽 燥枣 粤糟赠则贼澡燥泽蚤责澡燥灶 责蚤泽怎皂 藻曾贼则葬糟贼泽 怎泽蚤灶早 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责匀 早则葬凿蚤藻灶贼 陨孕郧 泽贼则蚤责泽
粤院 责匀梯度范围 猿 耀 员园 非线性胶条曰 月院 责匀梯度范围 源 耀 苑 胶条遥 粤院 责匀 早则葬凿蚤藻灶贼 则葬灶早藻 猿 原 员园 灶燥灶造蚤灶藻葬则 陨孕郧 泽贼则蚤责曰 月院 责匀
早则葬凿蚤藻灶贼 则葬灶早藻 源 原 苑 陨孕郧 泽贼则蚤责援
摇
图 缘 豌豆蚜蛋白样品重复 猿 次双向电泳图谱
云蚤早援 缘 圆鄄阅耘 责葬贼贼藻则灶泽 燥枣 粤糟赠则贼澡燥泽蚤责澡燥灶 责蚤泽怎皂 藻曾贼则葬糟贼泽 憎蚤贼澡 猿 则藻责造蚤糟葬贼藻泽
摇
源缘远 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
全蛋白中含外骨骼蛋白尧肌动蛋白等难溶性蛋白且
脂类尧色素等干扰物多袁因此采用裂解液提取法很难
满足蚜虫全蛋白的提取遥 植物蛋白提取常使用
栽悦粤 辕丙酮沉淀法咱圆圆暂 袁栽悦粤 能有效抑制其它蛋白酶
对蛋白分离结果的影响袁降低蛋白样品的离子浓度袁
有效提高双向电泳的成功率袁但该方法会导致样品
部分蛋白丢失袁尤其是高碱性或低丰度蛋白的丢失袁
且对色素等干扰物的去除效果一般咱圆猿暂 袁蚜虫本身个
体较小袁色素等干扰物多袁该提取方法效果不甚理
想遥 饱和酚抽提法是利用物理和化学原理对蛋白质
进行提取袁使核酸尧素色以及多糖等可溶性物质进入
水相袁而蛋白质和脂类物质则进入酚相咱圆源暂 曰首先利
用 栽悦粤 辕丙酮溶液除去样品中的盐离子及脂类等物
质袁再利用饱和酚去除核酸尧色素及多糖等物质袁相
比较前 圆 种蛋白提取方法操作复杂袁但本研究中蚜
虫蛋白质提取率和提取效果明显优于其它 圆 种方
法袁更适合蚜虫全蛋白的提取遥
上样量会对双向电泳图谱上蛋白质点的分辨效
果产生直接影响咱圆缘暂 遥 上样量过低会使部分低丰度
蛋白无法成功从一向转移至二向袁导致双向电泳图
谱上的蛋白质点稀少袁部分低丰度蛋白无法染色和
分析袁蛋白质点丢失遥 上样量过高袁部分低丰度蛋白
得以较好地表现袁但随着上样量的增加样品中杂质
含量也相应增加袁导致第一向等电聚焦的负担加重袁
可能造成蛋白质点等电分离不完全的现象袁且高丰
度蛋白有可能互相重叠尧互相干扰袁导致检测分析结
果误差大遥 最适的上样量需要根据具体的蛋白样
品尧陨孕郧胶条的长度等因素综合考虑探索确定遥 本
试验中袁针对 员员 糟皂 责匀 猿 耀员园 非线性 陨孕郧胶条袁分别
选择了 缘园尧员园园 和 圆园园 滋早 上样量袁结果显示当上样
量为 员园园 滋早时袁双向电泳图谱可检测到的蛋白质点
重叠少且背景清晰袁可检测到的蛋白质点数最多袁可
有效分离和检测豌豆蚜全蛋白遥
陨孕郧胶条 责匀 范围的优化原则是先选用 责匀 范
围较宽的胶条来确定样品蛋白的大致分布规律袁然
后再选择符合目标蛋白等电点主要分布区域的窄
责匀范围的 陨孕郧胶条袁以提高低丰度蛋白点和重叠蛋
白质点的分辨率咱圆远暂 遥 本试验中袁采用 员员 糟皂 责匀 猿 耀
员园 非线性和 责匀 源 耀 苑 的 陨孕郧胶条进行了条件摸索袁
虽然等电点 猿 耀 缘 之间的蛋白点在 责匀 源 耀 苑 的 陨孕郧
胶条上获得了较好的分离袁且部分低丰度蛋白也得
到分离和检测袁但造成等电点在 苑 耀 员园 之间许多碱
性蛋白质点丢失袁无法检测遥 表明针对豌豆蚜全蛋
白样品的特性袁采用宽的 责匀 梯度 陨孕郧 胶条更有利
于豌豆蚜全蛋白的分离和检测遥
本研究结果表明袁采用饱和酚抽提法提取豌豆
蚜全蛋白袁选择长度 员员 糟皂 责匀范围为 猿 耀 员园 的非线
性 陨孕郧胶条袁上样量为 员园园 滋早 进行等电聚焦袁第二
向分离胶浓度为 员圆郾 缘豫 袁用质谱兼用敏感型银染方
法袁可获得分辨率高尧背景清晰且重复性好的双向电
泳图谱袁但对于分子量较大的蛋白渊愿园 耀 圆缘园 噪阅冤分
离效果较差袁还需进一步探索和优化出一套适合大
分子蛋白分离的双向电泳体系遥
参 考 文 献 渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 黄晓磊袁乔格侠援 蚜虫学研究现状与学科发展趋势援 昆虫学
报袁 圆园园远袁 源怨渊远冤院 员园员苑 原 员园圆远
咱圆暂 月则蚤泽泽燥灶 允 粤袁 杂贼藻则灶 阅 蕴援 栽澡藻 责藻葬 葬责澡蚤凿袁 粤糟赠则贼澡燥泽蚤责澡燥灶 责蚤泽怎皂院
葬灶 藻皂藻则早蚤灶早 早藻灶燥皂蚤糟 皂燥凿藻造 泽赠泽贼藻皂 枣燥则 藻糟燥造燥早蚤糟葬造袁 凿藻增藻造燥责皂藻灶鄄
贼葬造 葬灶凿 藻增燥造怎贼蚤燥灶葬则赠 泽贼怎凿蚤藻泽援 月蚤燥耘泽泽葬赠泽袁 圆园园远袁 圆愿 渊 苑 冤院
苑源苑 原 苑缘缘
咱猿暂 杂则蚤灶蚤增葬泽葬灶 阅 郧袁 月则蚤泽泽燥灶 允 粤援 粤责澡蚤凿泽院 葬 皂燥凿藻造 枣燥则 责燥造赠责澡藻灶蚤泽皂
葬灶凿 藻责蚤早藻灶藻贼蚤糟泽援 郧藻灶藻贼蚤糟泽 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造袁 圆园员圆袁 圆园员圆院
藻源猿员缘猿员
咱源暂 栽澡藻 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造 粤责澡蚤凿 郧藻灶燥皂蚤糟泽 悦燥灶泽燥则贼蚤怎皂援 郧藻灶燥皂藻 泽藻鄄
择怎藻灶糟藻 燥枣 贼澡藻 责藻葬 葬责澡蚤凿 粤糟赠则贼澡燥泽蚤责澡燥灶 责蚤泽怎皂援 孕蕴燥杂 月蚤燥造燥早赠袁
圆园员园袁 愿渊圆冤院 藻员园园园猿员
咱缘暂 匀怎灶贼藻则 栽 悦袁 粤灶凿燥灶 晕 蕴袁 运燥造造藻则 粤袁 藻贼 葬造援 栽澡藻 枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造 责则燥鄄
贼藻燥皂蚤糟泽 贼燥燥造遭燥曾院 皂藻贼澡燥凿泽 葬灶凿 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽援 允燥怎则灶葬造 燥枣 悦澡则燥皂葬鄄
贼燥早则葬责澡赠 月院 粤灶葬造赠贼蚤糟葬造 栽藻糟澡灶燥造燥早蚤藻泽 蚤灶 贼澡藻 月蚤燥皂藻凿蚤糟葬造 葬灶凿 蕴蚤枣藻
杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 圆园园圆袁 苑愿圆渊员 辕 圆冤院 员远缘 原 员愿员
咱远暂 韵忆云葬则则藻造造 孕 匀援 匀蚤早澡 则藻泽燥造怎贼蚤燥灶 贼憎燥鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽
燥枣 责则燥贼藻蚤灶泽援 栽澡藻 允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁 员怨苑缘袁 圆缘园
渊员园冤院 源园园苑 原 源园圆员
咱苑暂 郧觟则早 粤袁 宰藻蚤泽泽 宰袁 阅怎灶灶 酝 允援 悦怎则则藻灶贼 贼憎燥鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造 藻造藻糟贼则燥鄄
责澡燥则藻泽蚤泽 贼藻糟澡灶燥造燥早赠 枣燥则 责则燥贼藻燥皂蚤糟泽援 孕则燥贼藻燥皂蚤糟泽袁 圆园园源袁 源渊员圆冤院
猿远远缘 原 猿远愿缘
咱愿暂 晕蚤糟澡燥造泽燥灶 杂 允袁 匀葬则贼泽燥灶 杂 阅袁 孕怎贼藻则噪葬 郧 允援 孕则燥贼藻燥皂蚤糟 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣
泽藻糟则藻贼藻凿 泽葬造蚤增葬 枣则燥皂 砸怎泽泽蚤葬灶 憎澡藻葬贼 葬责澡蚤凿 渊 阅蚤怎则葬责澡蚤泽 灶燥曾蚤葬
运怎则凿援 冤 遭蚤燥贼赠责藻泽 贼澡葬贼 凿蚤枣枣藻则 蚤灶 增蚤则怎造藻灶糟藻 贼燥 憎澡藻葬贼援 允燥怎则灶葬造 燥枣
孕则燥贼藻燥皂蚤糟泽袁 圆园员圆袁 苑缘渊苑冤院 圆圆缘圆 原 圆圆远愿
咱怨暂 悦葬则燥造葬灶 允 悦袁 悦葬则葬早藻葬 阅袁 砸藻葬则凿燥灶 运 栽袁 藻贼 葬造援 孕则藻凿蚤糟贼藻凿 藻枣枣藻糟贼燥则
皂燥造藻糟怎造藻泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬造蚤增葬则赠 泽藻糟则藻贼燥皂藻 燥枣 贼澡藻 责藻葬 葬责澡蚤凿 渊粤糟赠则贼澡燥泽蚤鄄
责澡燥灶 责蚤泽怎皂冤院 葬 凿怎葬造 贼则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂蚤糟 辕 责则燥贼藻燥皂蚤糟 葬责责则燥葬糟澡援 允燥怎则鄄
灶葬造 燥枣 孕则燥贼藻燥皂藻 砸藻泽藻葬则糟澡袁 圆园员员袁 员园渊源冤院 员缘园缘 原 员缘员愿
咱员园暂 匀葬则皂藻造 晕袁 蕴佴贼燥糟葬则贼 耘袁 悦澡藻则择怎蚤 粤袁 藻贼 葬造援 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 葬鄄
责澡蚤凿 泽葬造蚤增葬则赠 责则燥贼藻蚤灶泽院 葬 责则燥贼藻燥皂蚤糟 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼蚤燥灶 燥枣 酝赠扎怎泽 责藻则泽蚤鄄
糟葬藻援 陨灶泽藻糟贼 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园愿袁 员苑渊圆冤院 员远缘 原 员苑源
咱员员暂 云则葬灶糟蚤泽 云袁 郧藻则噪藻灶泽 孕袁 匀葬则皂藻造 晕袁 藻贼 葬造援 孕则燥贼藻燥皂蚤糟泽 蚤灶 酝赠扎怎泽
责藻则泽蚤糟葬藻院 藻枣枣藻糟贼 燥枣 葬责澡蚤凿 澡燥泽贼 责造葬灶贼 泽憎蚤贼糟澡援 陨灶泽藻糟贼 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠
葬灶凿 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园远袁 猿远渊猿冤院 圆员怨 原 圆圆苑
咱员圆暂 孕葬责怎则葬 阅袁 允葬糟择怎燥贼 耘袁 阅藻凿则赠增藻则 悦 粤袁 藻贼 葬造援 栽憎燥鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造
藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 燥枣 责则燥贼藻蚤灶泽 凿蚤泽糟则蚤皂蚤灶葬贼藻泽 葬责澡蚤凿 糟造燥灶藻泽 燥枣 杂蚤贼燥鄄
缘缘远远 期 武丽娟等院 蚜虫蛋白质组双向电泳体系条件优化
遭蚤燥灶 葬增藻灶葬藻 凿蚤枣枣藻则蚤灶早 蚤灶 月再阅灾鄄孕粤灾 贼则葬灶泽皂蚤泽泽蚤燥灶援 粤则糟澡蚤增藻泽 燥枣
灾蚤则燥造燥早赠袁 圆园园圆袁 员源苑渊员园冤院 员愿愿员 原 员愿怨愿
咱员猿暂 郧葬怎责藻造泽 云袁 运灶葬怎藻则 栽袁 增葬灶 月藻造 粤 允援 粤 糟燥皂遭蚤灶葬贼燥则赠 葬责责则燥葬糟澡
枣燥则 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 责则燥贼藻蚤灶 泽藻贼泽 蚤灶 遭葬则造藻赠 泽蚤藻增藻鄄贼怎遭藻 泽葬皂责造藻泽 怎泽蚤灶早
耘阅栽粤鄄枣葬糟蚤造蚤贼葬贼藻凿 藻曾怎凿葬贼蚤燥灶 葬灶凿 葬责澡蚤凿 泽贼赠造藻糟贼燥皂赠援 允燥怎则灶葬造 燥枣
孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园愿袁 员远缘渊员冤院 怨缘 原 员园猿
咱员源暂 阅怎糟藻责责藻 酝 韵袁 悦造燥怎贼蚤藻则 悦袁 酝蚤糟澡葬怎凿 阅援 宰燥怎灶凿蚤灶早袁 蚤灶泽藻糟贼
糟澡藻憎蚤灶早 葬灶凿 责澡造燥藻皂 泽葬责 枣藻藻凿蚤灶早 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 葬造贼藻则 贼澡藻 造藻葬枣
责则燥贼藻燥皂藻 燥枣 责燥贼葬贼燥袁 杂燥造葬灶怎皂 贼怎遭藻则燥泽怎皂 蕴援 孕则燥贼藻燥皂藻 杂糟蚤藻灶糟藻袁
圆园员圆袁 员园院 苑猿
咱员缘暂 翁瑜袁 曾群力袁 姜槐袁 等援 双向凝胶电泳比较三种常用蛋
白质提取方法援 中国生物化学与分子生物学报袁 圆园园缘袁 圆员
渊缘冤院 远怨园 原 远怨源
咱员远暂 阅葬皂藻则增葬造 悦袁 凿藻 灾蚤藻灶灶藻 阅袁 在蚤增赠 酝袁 藻贼 葬造援 栽藻糟澡灶蚤糟葬造 蚤皂责则燥增藻鄄
皂藻灶贼泽 蚤灶 贼憎燥鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 蚤灶糟则藻葬泽藻 贼澡藻 造藻增藻造 燥枣
早藻灶藻贼蚤糟 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 凿藻贼藻糟贼藻凿 蚤灶 憎澡藻葬贼鄄泽藻藻凿造蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶泽援 耘造藻糟贼则燥鄄
责澡燥则藻泽蚤泽袁 员怨愿远袁 苑渊员冤院 缘圆 原 缘源
咱员苑暂 安少利袁 潘怡欧袁 许鹏袁 等援 蚜虫全蛋白提取方法的比较
研究援 环境昆虫学报袁 圆园员园袁 猿圆渊猿冤院 猿缘猿 原 猿缘远
咱员愿暂 月则葬凿枣燥则凿 酝 酝援 粤 则葬责蚤凿 葬灶凿 泽藻灶泽蚤贼蚤增藻 皂藻贼澡燥凿 枣燥则 贼澡藻 择怎葬灶贼蚤贼葬鄄
贼蚤燥灶 燥枣 皂蚤糟则燥早则葬皂 择怎葬灶贼蚤贼蚤藻泽 燥枣 责则燥贼藻蚤灶 怎贼蚤造蚤扎蚤灶早 贼澡藻 责则蚤灶糟蚤责造藻 燥枣
责则燥贼藻蚤灶鄄凿赠藻 遭蚤灶凿蚤灶早援 粤灶葬造赠贼蚤糟葬造 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁 员怨苑远袁 苑圆 渊员 辕
圆冤院 圆源愿 原 圆缘源
咱员怨暂 再葬灶 允 载袁 宰葬蚤贼 砸袁 月藻则噪藻造皂葬灶 栽袁 藻贼 葬造援 粤 皂燥凿蚤枣蚤藻凿 泽蚤造增藻则 泽贼葬蚤鄄
灶蚤灶早 责则燥贼燥糟燥造 枣燥则 增蚤泽怎葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 责则燥贼藻蚤灶泽 糟燥皂责葬贼蚤遭造藻 憎蚤贼澡 皂葬鄄
贼则蚤曾鄄葬泽泽蚤泽贼藻凿 造葬泽藻则 凿藻泽燥则责贼蚤燥灶 辕 蚤燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 葬灶凿 藻造藻糟贼则燥泽责则葬赠 蚤燥灶蚤扎葬鄄
贼蚤燥灶鄄皂葬泽泽 泽责藻糟贼则燥皂藻贼则赠援 耘造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽袁 圆园园园袁 圆员 渊 员苑 冤院
猿远远远 原 猿远苑圆
咱圆园暂 谈旭翡袁 陈智援 蛋白质组学研究中双向电泳的样品制备援
医学分子生物学杂志袁 圆园园愿袁 缘渊缘冤院 源远圆 原 源远缘
咱圆员暂 赵从建袁 贾宇峰袁 丁勤学袁 等援 中枢神经蛋白质组分析中
双向电泳技术的建立援 生物化学与生物物理进展袁 圆园园园袁
圆苑渊远冤院 远源缘 原 远缘园
咱圆圆暂 郧赠早蚤 杂 孕袁 悦燥则贼澡葬造泽 郧 蕴袁 在澡葬灶早 再 晕袁 藻贼 葬造援 耘增葬造怎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼憎燥鄄
凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造 早藻造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽鄄遭葬泽藻凿 责则燥贼藻燥皂藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 贼藻糟澡鄄
灶燥造燥早赠援 孕则燥糟藻藻凿蚤灶早泽 燥枣 贼澡藻 晕葬贼蚤燥灶葬造 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽 燥枣
贼澡藻 哉灶蚤贼藻凿 杂贼葬贼藻泽 燥枣 粤皂藻则蚤糟葬袁 圆园园园袁 怨苑渊员苑冤院 怨猿怨园 原 怨猿怨缘
咱圆猿暂 郧觟则早 粤袁 韵遭藻则皂葬蚤藻则 悦袁 月燥早怎贼澡 郧袁 藻贼 葬造援 栽澡藻 糟怎则则藻灶贼 泽贼葬贼藻 燥枣
贼憎燥鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 憎蚤贼澡 蚤皂皂燥遭蚤造蚤扎藻凿 责匀 早则葬凿蚤鄄
藻灶贼泽援 耘造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽袁 圆园园园袁 圆员渊远冤院 员园猿苑 原 员园缘猿
咱圆源暂 再葬燥 再袁 再葬灶早 再 宰袁 蕴蚤怎 允 再援 粤灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼 责则燥贼藻蚤灶 责则藻责葬则葬贼蚤燥灶
枣燥则 责则燥贼藻燥皂蚤糟 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 凿藻增藻造燥责蚤灶早 糟燥贼贼燥灶 枣蚤遭藻则泽 遭赠 圆鄄阅耘援
耘造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽袁 圆园园远袁 圆苑渊圆圆冤院 源缘缘怨 原 源缘远怨
咱圆缘暂 舒海燕袁 曹刚强袁 凌华袁 等援 双向电泳过程中的常见问题
及解决方法援 安徽农业科学袁 圆园园怨袁 猿苑渊猿冤院 员圆圆猿 原 员圆圆源
咱圆远暂 刘建军袁 房师松袁 李习艺袁 等援 蛋白质组研究技术平台的
建立要要要双向电泳条件的建立及优化援 卫生研究袁 圆园园源袁
猿猿渊猿冤院 猿圆苑 原 猿猿园
渊责任编辑院李美娟冤
远缘远 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷