全 文 ：植物保护学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ２０１５， ４２（３）： ４１０ － ４１７ ＤＯＩ： １０􀆰 １３８０２ ／ ｊ． ｃｎｋｉ． ｚｗｂｈｘｂ． ２０１５􀆰 ０３􀆰 ０１９
基金项目： 黑龙江省自然科学基金（Ｃ２０１３０７）
∗通讯作者（Ａｕｔｈｏｒｓ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ）， Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｓｄｆ６６１６＠ １６３． ｃｏｍ， ｚｈａｎｇｚｈｅｎｇｋｕｎ１９８０＠ １２６． ｃｏｍ
收稿日期： ２０１４ － １２ － １１
苏云金芽胞杆菌一新菌株的鉴定及其杀虫活性
孟鑫睿１ 　 路　 杨２ 　 刘艳微１ 　 徐文静２ 　 冯树丹１∗　 张正坤２∗
（１．哈尔滨师范大学生命科学与技术学院， 哈尔滨 １５００２５； ２．吉林省农业科学院植物保护研究所， 公主岭 １３６１００）
摘要： 为分离并鉴定对亚洲玉米螟具有高毒力的苏云金芽胞杆菌菌种，通过棋盘式采集法从吉林
省农业科学院试验田土壤中分离获得野生菌株，进行了形态、生化特性、伴孢晶体观察及基因型鉴
定，并测定了其对 ３ 种鳞翅目害虫的室内生物活性。 结果显示：该菌株在 ＬＢ 培养基上为圆形、暗
白色菌落，边缘不整齐，革兰氏染色阳性，产生的伴孢晶体形状多为不规则形。 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列与苏
云金芽胞杆菌属的 ＮＢＲＣ １３８６５ 同源性达 ９９％ ；该菌株为 ｃｒｙ２ ＋ ｃｒｙ９ 复合基因型，编码氨基酸序列
与 Ｃｒｙ２Ａｂ和 Ｃｒｙ９Ｅａ蛋白同源性分别为 ９４％和 ９９％ ，鉴定为苏云金芽胞杆菌，命名为 ＪＮ００１。 该菌
株对亚洲玉米螟具有较高毒性，以 １􀆰 ０ × １０９ 个 ／ ｍＬ菌体浓度接种 ３ 龄幼虫 ７２ ｈ 后，其校正死亡率
为 ９５􀆰 ０６％ ，致死中浓度（ＬＣ５０）为 ４􀆰 １２ × １０３ 个 ／ ｍＬ菌体，而对斜纹夜蛾和粘虫毒性较弱，接种 ７２ ｈ
后校正死亡率分别为 １２􀆰 ８８％和 ７􀆰 ３４％ 。 表明该菌株是 １ 株对亚洲玉米螟具有较强毒力的苏云金
芽胞杆菌新菌株，具有较好的开发利用潜力。
关键词： 菌株鉴定； 微生物杀虫剂； 亚洲玉米螟
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｅｗ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｔｒａｉｎ
Ｍｅｎｇ Ｘｉｎｒｕｉ１ 　 Ｌｕ Ｙａｎｇ２ 　 Ｌｉｕ Ｙａｎｗｅｉ１ 　 Ｘｕ Ｗｅｎｊｉｎｇ２ 　 Ｆｅｎｇ Ｓｈｕｄａｎ１∗ 　 Ｚｈａｎｇ Ｚｈｅｎｇｋｕｎ２∗
（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｈａｒｂｉｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈａｒｂｉｎ １５００２５， Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ；
２． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， Ｊｉｌｉｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｇｏｎｇｚｈｕｌｉｎｇ １３６１００， Ｊｉｌｉｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｎｅｗ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｍａｃａｌｉｓ， ａ ｎｅｗ
ｗｉｌｄ ｓｔｒａｉｎ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｆｉｅｌｄ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ
ｃｈｅｓｓｂｏａｒｄ ｓａｍｐｌｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ａｇａｉｎｓｔ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｉｎｓｅｃｔｓ， Ｏ． ｆｕｍａｃａｌｉｓ，
Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ ａｎｄ Ｍｙｔｈｉｍｎａ ｓｅｐａｒａｔｅ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｔｅｓｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ
ｓｔｒａｉｎ ｃｏｌｏｎｙ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｏｎ ｌｕｒｉａ⁃ｂｅｒｔａｎｉ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ｃｉｒｃｕｌａｒ ａｎｄ ｄａｒｋ ｗｈｉｔｅ ｗｉｔｈ ｉｒｒｅｇｕｌａｒ ｅｄｇｅ．
Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ， ｉｔ ｗａｓ ａ ｇｒａｍ⁃ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｔｒａｉｎ ａｎｄ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｒｒｅｇｕｌａｒ ｐａｒａｓｐｏｒａｌ ｃｒｙｓｔａｌｓ． Ｉｔ ｗａｓ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ
ｔｏ Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｔｒａｉｎ ＮＢＲＣ １３８６５ ｗｉｔｈ ９９％ ｉｄｅｎｔｉｔｙ． Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ， ｃｒｙ２ ａｎｄ ｃｒｙ９ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ， ｗｈｉｃｈ ｅｎｃｏｄｅｄ ｔｗｏ Ｃｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｓｈａｒｉｎｇ ９４％ ａｎｄ ９９％ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｗｉｔｈ Ｃｒｙ２Ａｂ
ａｎｄ Ｃｒｙ９Ｅａ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ａｌｌ ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ｗａｓ ａ ｎｅｗ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ Ｂ．
ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ， ａｎｄ ｉｔ ｗａｓ ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ ａｓ Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ＪＮ００１． Ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ＪＮ００１ ｈａｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｔｏｘｉｃｉｔｙ
ａｇａｉｎｓｔ Ｏ． ｆｕｍａｃａｌｉｓ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｐｅｓｔｓ． Ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ａｎｄ ＬＣ５０ ａｇａｉｎｓｔ Ｏ． ｆｕｍａｃａｌｉｓ ｗｅｒｅ
９５􀆰 ０６％ ａｎｄ ４􀆰 １２ × １０３ ／ ｍＬ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ⁃ｉｎｓｔａｒ ｌａｒｖａｅ ｆｅｄ ｗｉｔｈ ｍｅｄｉａ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １􀆰 ０ × １０９ ／ ｍＬ ｏｆ
ＪＮ００１ ｆｏｒ ７２ ｈｏｕｒｓ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｈｏｗｅｖｅｒ， ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＪＮ００１ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｔｗｏ
ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｐｅｓｔｓ ｗａｓ ｖｅｒｙ ｌｏｗ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ＪＮ００１ ｗａｓ ａ ｎｅｗ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｂ．
ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｏ． ｆｕｍａｃａｌｉｓ ａｎｄ ｗａｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｓｔｒａｉｎ ｆｏｒ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅ
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｓｔｒａｉｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ； ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ； Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ Ｇｕｅｎéｅ
　 　 亚洲玉米螟 Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ Ｇｕｅｎéｅ是我国尤
其是东北玉米主产区的重要害虫，导致玉米严重减
产及品质下降，造成巨大的经济损失并危害食品安
全。 ２００４ 年以来，吉林等省开展了利用微生物制剂
球孢白僵菌 Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ防治亚洲玉米螟的工
作，取得了良好的防治效果（田志来等，２０１０；徐文
静等，２０１１），但也暴露出制剂单一、作用周期长、环
境要求高、菌株易退化等问题（林海萍等，２００６）。
因此，为适应我国未来农业土地规模化经营方式、农
作物病虫害专业化防治的转变和提高生物防治的持
续效果，寻找更多的玉米螟生物防治资源，实现生物
制剂多元化十分必要。
苏云金芽胞杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ，Ｂｔ）是一
种革兰氏阳性杆状细菌，形成芽孢的同时会产生具
有杀虫活性的伴孢晶体，对鳞翅目、鞘翅目等多种害
虫具有特异杀虫活性（李海涛等，２００５）。 该菌具有
高效、对人畜和环境安全且对标靶寄主特异性强的
特点，是化学杀虫剂的重要替代品之一 （ Ｂｒａｖｏ ｅｔ
ａｌ． ，２０１３；Ｐａｒｄｏ⁃Ｌóｐｅｚ ｅｔ ａｌ． ，２０１３），已成为目前世
界上开发时间最长、产量最大、应用最广的生物杀虫
剂，占生物杀虫剂总量的 ９０％以上，已有 ６０ 多个国
家登记 １２０ 个品种，取得了巨大的经济、生态和社会
效益（Ｂｒａｖｏ ｅｔ ａｌ． ，２０１１）。
近年来各国对 Ｂｔ 菌株的分离和应用加大了力
度，并已广泛应用于各种鳞翅目、鞘翅目害虫如甜菜
夜蛾 Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ （Ｈüｂｎｅｒ）、斜纹夜蛾 Ｓ． ｌｉｔｕｒａ
（ Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ ）、 马 尾 松 毛 虫 Ｄｅｎｄｒｏｌｉｍｕｓ ｐｕｎｃｔａｔｕｓ
（Ｗａｌｋｅｒ）、茶尺蠖 Ｅｃｔｒｏｐｉｓ ｏｂｌｉｑｕａ （Ｐｒｏｕｔ）、水稻二化
螟 Ｃｈｉｌｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓａｌｉｓ （Ｗａｌｋｅｒ）（李青等，２００９；）、白纹
伊蚊 Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ（张灵玲等，２００８）、蛴螬（束长
龙等，２００７；胡晓婷等，２００８）等的防治。 但应用于
玉米螟防治的 Ｂｔ 菌株的分离、筛选及应用研究较
少。 因此，为丰富玉米螟生物防治资源，本研究对从
吉林省农业科学院试验田采集土样中分离到的 １ 株
菌株进行了鉴定，并测定其对亚洲玉米螟等鳞翅目
害虫的生物活性，旨在为玉米螟等害虫的生物防治
提供具有潜在应用价值的生防新菌株。
１ 材料与方法
１􀆰 １ 材料
供试土壤样品及昆虫：采自吉林省农业科学院
试验田（４３°３０′４７􀆰 １″Ｎ，１２４°４８′０２􀆰 ７″Ｅ）。 采用棋盘
式采集法取土壤表层 ５ ｃｍ深处土壤 ５ 个点，每个点
为 ５０ ｇ土样，装于自封袋内保存。 ３ 龄亚洲玉米螟
Ｏ． ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ、粘虫 Ｍｙｔｈｉｍｎａ ｓｅｐａｒａｔａ 和斜纹夜蛾幼
虫 Ｓ． ｌｉｔｕｒａ均由吉林省农业科学院植物保护研究所
微生物农药研究室提供。
培养基：ＬＢ（ ｌｕｒｉａ⁃ｂｅｒｔａｎｉ）液体培养基：蛋白胨
１􀆰 ０％ 、酵母粉 ０􀆰 ５％ 、ＮａＣｌ １􀆰 ０％ 、ｐＨ ７􀆰 ０；ＬＢ 固体
培养基：上述 ＬＢ 液体培养基中添加 １􀆰 ５％琼脂；双
倍酵母蛋白胨（２ × ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ｔｒｙｐｔｏｎｅ，２ × ＹＴ）培
养基：酵母粉 １％ 、蛋白胨 １􀆰 ６％ 、ＮａＣｌ １􀆰 ６％ 。
试剂：ｐＭＤ１８⁃Ｔ载体购自宝生物工程（大连）有
限公司；Ｔｒａｎｓ⁃Ｔ１ 感受态细胞购自北京全式金生物
技术有限公司；蛋白胨、酵母粉购自美国 ＯＸＯＩＤ 公
司；琼脂、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ⁃１０ 及 Ｅｚｕｐ 柱式细菌基因组 ＤＮＡ
提取试剂盒购自生工生物工程（上海）股份有限公
司；其它药品均为国产分析纯。
仪器：ＴＣ⁃５０００ 型 ＰＣＲ 仪，英国 ＴＥＣＨＮＥ 公司；
ＨＺＰ⁃２５０ 型全温振荡培养箱、ＳＨＰ⁃２５０ 型生化培养
箱，上海精宏实验设备有限公司；Ｂ１ 光学显微镜，德
国 Ｍｏｔｉｃ 公司； ＶＨＸ⁃１０００ 超景深三维显微镜，日本
ＫＥＹＥＮＣＥ公司。
１􀆰 ２ 方法
１􀆰 ２􀆰 １ 菌株的取样与分离
将土样从自封袋取出，置于室温通风处 ２ ｄ 以
上，待水分自然蒸发。 取 ０􀆰 ５ ｇ土样放入装有 １０ ｍＬ
灭菌水和玻璃珠的试管中，旋涡振荡器振荡 ３ ｍｉｎ，
将土粒打碎后置于 ２００ ｒ ／ ｍｉｎ摇床上振荡 ２０ ｍｉｎ，７５
℃水浴 ２０ ｍｉｎ，杀死样品中的非芽孢菌。 待稍静置
后，选取 １０ － ２、１０ － ３、１０ － ４稀释浓度，分别吸取 １００
μＬ菌悬液于 ２ × ＹＴ 平板上，涂布均匀，于 ３０ ℃培
养 ３ ｄ。 沾取菌液于 ＬＢ 平板上划线培养，４ ℃保存
（苏旭东等，２００７）。
１􀆰 ２􀆰 ２ 菌体形态鉴定及伴孢晶体的制备
挑取单菌落接种于 ｐＨ ７􀆰 ０ 的 ＬＢ 液体培养基
中，于 ３０ ℃、２００ ｒ ／ ｍｉｎ 摇床中震荡培养 ４８ ｈ 后观
察菌体形态。 革兰氏染色，在光学显微镜下观察菌
体形态、颜色及大小。
用无菌水将 Ｂｔ 固体培养物从培养皿上冲洗下
来，用磁力搅拌器搅拌，除去泡沫，多次重复操作以
尽量除去孢子。 对所得溶液进行超声波处理，将处
１１４３ 期 孟鑫睿等： 苏云金芽胞杆菌一新菌株的鉴定及其杀虫活性
理过的发酵液在 ４ ℃冰箱中放置 ２４ ｈ。 将裂解得到
的溶液于 ４ ℃、８ ０００ ｒ ／ ｍｉｎ下冷冻离心 １５ ｍｉｎ后除
去上清液，用无菌水洗涤沉淀，离心后用 ０􀆰 ５ ｍｏｌ ／ Ｌ
ＮａＣｌ洗涤沉淀，得到的悬液继续离心沉淀 １０ ｍｉｎ，
去除上清液，向沉淀中加入 １ ｍｏｌ ／ Ｌ ＮａＣｌ ＋ ０􀆰 ０１％
Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ⁃１００ 制成孢晶悬液，在 ０ ～ ４ ℃静置 ２４ ｈ。
将静置后的悬浮液离心，然后溶于 ０􀆰 ００１ ｍｏｌ ／ Ｌ
ＮａＨ２ＰＯ４ ＋ ０􀆰 ４ ｍｏｌ ／ Ｌ ＮａＣｌ ＋ ０􀆰 ０１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ⁃１００ ＋
２％甘油中，静置 １０ ｍｉｎ，离心，沉淀制成水悬液。 水
悬液在冰箱中冷冻过夜，然后放入冷冻干燥机中冷
冻干燥即得伴孢晶体粉末（王子佳等，２００９），并通
过超景深三维分析系统进行形态观察拍照。
１􀆰 ２􀆰 ３ 菌株 １６Ｓ ｒＤＮＡ分析
经 ３０ ℃培养 ３ ｄ 的菌液采用细菌基因组提取
试剂盒提取基因组 ＤＮＡ。 用细菌 １６Ｓ ｒＤＮＡ通用引
物 ２７Ｆ：５′⁃ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ⁃３′和 １４９２Ｒ：５′⁃
ＧＧＴＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ⁃３′（Ｌａｎｅ，１９９１）。 以提取的
基因组 ＤＮＡ 为模板进行 ＰＣＲ 扩增。 扩增条件：９４
℃预变性 ４ ｍｉｎ；９４ ℃变性 ３０ ｓ，５４ ℃退火 ３０ ｓ，７２
℃延伸 １􀆰 ５ ｍｉｎ，３５ 个循环；７２ ℃延伸 １０ ｍｉｎ；４ ℃
保存。 扩增产物于 １％琼脂糖凝胶电泳检测并回收
纯化，克隆到 ｐＭＤ１８⁃Ｔ载体，送交生工生物工程（上
海）股份有限公司进行测序。 将测定的序列提交到
ＢＬＡＳＴ数据库中与 ＧｅｎＢａｎｋ中已知的 １６Ｓ ｒＤＮＡ 序
列进行同源性比较，选取同源性较高的序列采用
Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ软件进行多重比对。 应用 ＭＥＧＡ ５􀆰 １ 以邻
接法构建系统发育树。
１􀆰 ２􀆰 ４ 菌株 ｃｒｙ基因型的鉴定
以提取的基因组 ＤＮＡ 为模板，参照宋福平等
（１９９８）方法进行该菌株 ｃｒｙ 基因型鉴定，进行 ＰＣＲ
扩增，有扩增产物的引物编号和序列分别为 ｃｒｙ２（正
向引物 Ｓ５ｕｎ２： ５′⁃ＧＧＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＡＴＴＴＧＴＧＡＴＧＣ⁃
３′；反向引物 Ｓ３ｕｎ２：５′⁃ＡＡＴＡＧＴＴＴＧＡＡＴＴＡＣＣＧＣＧＡ⁃
ＧＣ⁃３′）和 ｃｒｙ９（正向引物 Ｓ５ｕｎ９：５′⁃ＡＧＧＡＣＣＡＧＧＡＴＴ⁃
ＴＡＣＡＧＧＡＧＧ⁃３′； 反 向 引 物 Ｓ３ｕｎ９： ５′⁃ＣＣＣＡＡＴ⁃
ＧＣＧＡＡＡＧＡＡＣＴＡＡＧ⁃３′）。 ＰＣＲ反应条件：９４ ℃预变
性 ５ ｍｉｎ；９４ ℃变性 ３０ ｓ，５２ ℃退火 １􀆰 ５ ｍｉｎ，７２ ℃
延伸 ２ ｍｉｎ，３０ 个循环；７２ ℃最后延伸 １０ ｍｉｎ；４ ℃
冰箱中保存。 扩增产物电泳检测并纯化后克隆到
ｐＭＤ⁃１８Ｔ载体，送生工生物工程（上海）股份有限公
司测序。 测序结果经 ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ在线分析并预测
其所编码氨基酸序列。
１􀆰 ２􀆰 ５ 菌株的室内生物活性测定
挑取单菌落接种于 ＬＢ 液体培养基中，于 ３０
℃、２００ ｒ ／ ｍｉｎ摇床中震荡培养 ４８ ｈ，分别以 １０ 倍比
例稀释成菌体浓度为 １􀆰 ０ × １０９、１􀆰 ０ × １０８、１􀆰 ０ ×
１０７、１􀆰 ０ × １０６、１􀆰 ０ × １０５个 ／ ｍＬ 培养基，各取 ２０ ｍＬ
不同浓度菌液拌入 ２０ ｇ 饲料中饲喂 ３ 龄亚洲玉米
螟幼虫，待其取食完毕及时添加无菌新饲料，每个浓
度设置 ３ 次重复，每重复为 ３０ 头幼虫，以无菌培养
基为对照，２６ ℃、相对湿度 ６０％ ～７０％条件下饲养，
分别于 ２４、４８、７２ ｈ后调查幼虫死亡情况，并计算其
死亡率和校正死亡率。 死亡率 ＝死虫数 ／试虫数 ×
１００％ ，校正死亡率 ＝ （处理组死虫头数 －对照组死
虫头数） ／ （３０ －对照组死虫头数） × １００％ 。 另外采
用上述相同的处理方法，饲料拌入 １􀆰 ０ × １０９ 个 ／ ｍＬ
浓度的菌液 ２０ ｍＬ，室内测定其对 ３ 龄粘虫幼虫、３
龄斜纹夜蛾幼虫的活性，比较分析该菌株对 ３ 种鳞
翅目幼虫的致死作用。
１􀆰 ３ 数据分析
利用 ＤＰＳ １２􀆰 ５０ 统计软件计算 ＬＴ５０并分析该菌
株对供试幼虫的致死作用，应用 Ｄｕｎｃａｎ氏新复极差
法进行不同处理下校正死亡率之间的差异显著性
检验。
２ 结果与分析
２􀆰 １ 菌体形态特点
革兰氏染色结果显示该菌体呈紫色，革兰氏阳
性，菌体杆状。 在 ＬＢ 平板上划线 ３０ ℃培养 ２４ ｈ，
形成的单菌落为暗白色，表层菌落较大，呈圆盘状，
表面干枯，不隆起，边缘不整齐，呈粗布状向外展开，
略带放射状皱纹；深层菌落呈毡块状，有丝状放射
线。 将纯化得到的伴孢晶体在超景深三维分析系统
下放大 １ ０００ 倍可以看出该菌伴孢晶体形状多为不
规则形（图 １）。
图 １ 菌株 ＪＮ００１ 的伴孢晶体形态（ × １ ０００）
Ｆｉｇ． １ Ｐａｒａｓｐｏｒａｌ ｃｒｙｓｔａｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ
ｓｔｒａｉｎ ＪＮ００１ （ × １ ０００） 　
２１４ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷
２􀆰 ２ 菌株 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列的同源性分析
１６Ｓ ｒＤＮＡ ＰＣＲ扩增片段大小为 １ ５００ ｂｐ左右，
经测序其大小为 １ ４６５ ｂｐ。 将 １６Ｓ ｒＤＮＡ 序列与
ＧｅｎＢａｎｋ中已发表的 １６Ｓ ｒＤＮＡ 序列进行同源性比
对发现，该菌株与苏云金芽胞杆菌 ＮＢＲＣ １３８６５ 菌
株非常相近，同源性达 ９９％ （图 ２），可初步认为该
菌株在分类学上属于苏云金芽胞杆菌 Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎ⁃
ｓｉｓ，命名为 Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ＪＮ００１。
图 ２ 苏云金芽胞杆菌 ＪＮ００１ 菌株的 １６Ｓ ｒＤＮＡ同源性分析
Ｆｉｇ． ２ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ １６Ｓ ｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｔｒａｉｎｓ
　
２􀆰 ３ 菌株 ｃｒｙ基因型分析
蛋白质同源性分析表明，以 Ｓ５ｕｎ２ ／ Ｓ３ｕｎ２ 引物
从 ＪＮ００１ 菌株总 ＤＮＡ 中扩增片段编码的氨基酸序
列与 Ｃｒｙ２Ａｂ（ＧｅｎＢａｎｋ 登录号：ＡＣＧ７６１２０）的同源
性为 ９４％ （图 ３），而以 Ｓ５ｕｎ９ ／ Ｓ３ｕｎ９ 引物扩增片段
编码的氨基酸序列与 Ｃｒｙ９Ｅａ （ ＧｅｎＢａｎｋ 登录号：
ＡＢＭ２１７６５）的同源性为 ９９％ （图 ４），其差异集中在
２ 个蛋白质的羧基端，分别命名为 ＪＮ００１＿Ｃｒｙ２（Ｇｅｎ⁃
Ｂａｎｋ登录号：ＫＰ１７４７１２）和 ＪＮ００１ ＿Ｃｒｙ９ （ＧｅｎＢａｎｋ
登录号：ＫＰ１７４７１３）。 结合在线 ＯＲＦ Ｆｉｎｄｅｒ 及序列
同源性多重序列比对分析等结果，可认为该菌株为
ｃｒｙ２Ａｂ ＋ ｃｒｙ９Ｅａ复合基因型。
２􀆰 ４ 菌株室内生物活性测定
该菌株对亚洲玉米螟 ３ 龄幼虫表现出较高毒
性，不同浓度下饲喂含该菌液的饲料 ７２ ｈ 后达到死
亡高峰，其校正死亡率随浓度的升高而增加，１􀆰 ０ ×
１０９ 个 ／ ｍＬ浓度时达到 ９５􀆰 ０６％ ；不同浓度菌液对亚
洲玉米螟幼虫的致死时间不同，致死中时间（ＬＴ５０）
随浓度的升高而缩短，１􀆰 ０ × １０９ 个 ／ ｍＬ 浓度时为
４３􀆰 ５７ ｈ（表 １）。 而 １􀆰 ０ × １０９ 个 ／ ｍＬ 浓度的菌液处
理斜纹夜蛾及粘虫幼虫 ２４、４８ ｈ 后，其校正死亡率
均低于 １０％ ，７２ ｈ 时也仅分别为 １２􀆰 ８８％和 ７􀆰 ３４％
（图 ５）。 表明该菌株对亚洲玉米螟的致死作用远高
于后二者。
表 １ 菌株 ＪＮ００１ 对亚洲玉米螟 ３ 龄幼虫的致死作用
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ＪＮ００１ ｓｔｒａｉｎ ａｇａｉｎｓｔ Ａｓｉａｎ ｃｏｒｎ ｂｏｒｅｒ ｌａｒｖａｅ
浓度（个 ／ ｍＬ）
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
校正死亡率 Ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ （％ ）
２４ ｈ ４８ ｈ ７２ ｈ
ＬＴ５０（ｈ）
１􀆰 ０ × １０５ ３􀆰 ４５ ± ３􀆰 ４５ ｂ ３１􀆰 ０３ ± ３􀆰 ４５ ｃ ６５􀆰 ４３ ± ７􀆰 ４１ ｃ ５９􀆰 ０７
１􀆰 ０ × １０６ ６􀆰 ９０ ± ３􀆰 ４５ ａｂ ３１􀆰 ０３ ± ６􀆰 ９０ ｃ ７２􀆰 ８４ ± ３􀆰 ７０ ｃ ５６􀆰 ０５
１􀆰 ０ × １０７ １０􀆰 ３４ ± ３􀆰 ４５ ａｂ ４１􀆰 ３８ ± ６􀆰 ９０ ｂ ８３􀆰 ９５ ± ３􀆰 ７ ｂ ４９􀆰 ６０
１􀆰 ０ × １０８ １０􀆰 ３４ ± ６􀆰 ９０ ａｂ ４８􀆰 ２８ ± ３􀆰 ４５ ａｂ ８３􀆰 ９５ ± ７􀆰 ４１ ｂ ４８􀆰 ００
１􀆰 ０ × １０９ １３􀆰 ７９ ± ３􀆰 ４５ ａ ５１􀆰 ７２ ± ３􀆰 ４５ ａ ９５􀆰 ０６ ± ０􀆰 ００ ａ ４３􀆰 ５７
ＬＣ５０ — ３􀆰 ７３ × １０８ ４􀆰 １２ × １０３
　 　 —： 死亡率过低，无法计算 ＬＣ５０。 表中数据为平均数 ±标准差。 同列数据后不同字母表示经 Ｄｕｎｃａｎ 氏新复极差法检验在 Ｐ ＜
０􀆰 ０５ 水平差异显著。 —： Ｔｈｅ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｉｓ ｔｏｏ ｌｏｗ ｔｏ ｃｏｕｎｔ ＬＣ５０ ． Ｄａｔａ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ． Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ Ｄｕｎｃａｎ’ｓ ｎｅｗ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒａｎｇｅ ｔｅｓｔ．
３１４３ 期 孟鑫睿等： 苏云金芽胞杆菌一新菌株的鉴定及其杀虫活性
图 ３ 菌株 ＪＮ００１ 基于 Ｃｒｙ２ 同源性近似基因菌株的蛋白序列比对分析结果
Ｆｉｇ． ３ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ＪＮ００１ ｓｔｒａｉｎ ｗｉｔｈ ｆｏｕｒ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ Ｃｒｙ２ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ＡＣＧ７６１２０： Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｙｗｃ５⁃４ 菌株的 Ｃｒｙ２Ａｂ（９９％相似度）； ＡＢＪ９０４６４： Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ＬＬＢ６ 菌株的 Ｃｒｙ２Ａｄ（９０％相
似度）； ＡＣＶ９７１５８： Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ Ｔ２０ 菌株的 Ｃｒｙ２Ａ（８５％相似度）； ＡＨＭ９２５８１： Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ＨＤ３９５ 菌株的 Ｃｒｙ２Ａｂａ２
（７０％相似度）。 灰色阴影： 相同的氨基酸残基； 黑色阴影： 保守的氨基酸残基。 － ： 代表序列缺失； 星号： 表示该位置完全
相同； 冒号： 相似度≥６０％ ； 圆点： 相似度 ＜ ６０％ 。 ＡＣＧ７６１２０： Ｃｒｙ２Ａｂ ｆｒｏｍ Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｙｗｃ５⁃４ （ ９９％ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）；
ＡＢＪ９０４６４： Ｃｒｙ２Ａｄ ｆｒｏｍ Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ＬＬＢ６ （９０％ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）； ＡＣＶ９７１５８： Ｃｒｙ２Ａ ｆｒｏｍ Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ Ｔ２０ （８５％ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）；
ＡＨＭ９２５８１： Ｃｒｙ２Ａｂａ２ ｆｒｏｍ Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ＨＤ３９５ （７０％ ｉｄｅｎｔｉｔｙ） ． Ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｃａｌ ａｎｄ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ａｒｅ ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｅｄ ｉｎ ｗｈｉｔｅ ｏｎ
ｂｌａｃｋ ａｎｄ ｇｒａｙ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄｓ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． － ： ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｇａｐ； ∗ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｉｄｅｎｔｉｃａｌ ｒｅｓｉｄｕｅｓ； “：” ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ａ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｏｆ ｇｒｅａｔｅｒ
ｔｈａｎ ｏｒ ｅｑｕａｌ ｔｏ ６０％ ， ａｎｄ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ６０％ ｉｓ ｍａｒｋｅｄ ａｓ “． ” ．
　
３ 讨论
不同 Ｂｔ基因编码的蛋白对不同的靶标害虫具
有杀虫活性，菌株的杀虫活性高低与其所含杀虫基
因密切相关（宋福平等，１９９８）。 本研究利用了 ２６
对通用引物进行新菌株基因型鉴定，通过同源序列
比对分析该菌株为 ｃｒｙ２Ａｂ和 ｃｒｙ９Ｅａ的复合基因型。
以 ｃｒｙ基因第一等级为大类划分，一般来说对鳞翅
目害虫具有特异杀虫活性的是 ｃｒｙ１、ｃｒｙ２、ｃｒｙ９ 类基
因所编码的蛋白（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ． ，２００３）。 Ｃｒｙ２Ａ 类蛋
白对鳞翅目害虫舞毒蛾 Ｌｙｍａｎｔｒｉａ ｄｉｓｐａｒ（Ｏｈｓａｗａ ｅｔ
ａｌ． ，２０１２）、小菜蛾 Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ、棉铃虫 Ｈｅｌｉｃｏｖ⁃
ｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ（董明等，２０１０ａ）、玉米螟（Ｌｉｒａ ｅｔ ａｌ． ，
２０１３）、小地老虎 Ａｇｒｏｔｉｓ ｙｐｓｉｌｏｎ（陆琼等，２００９）等鳞
翅目害虫具有活性；Ｃｒｙ９Ｅ 类蛋白也对鳞翅目害虫
小菜蛾（Ｗａｓａｎｏ ｅｔ ａｌ． ，２００５）、家蚕等（ｖａｎ Ｆｒａｎｋｅｎ⁃
ｈｕｙｚｅｎ，２００９）具有活性。 综上所述，初步解释了本
试验中所分离的菌株 ＪＮ００１ 对鳞翅目害虫亚洲玉米
螟具有较高毒性的分子机理。 由于我国的 Ｂｔ 资源
具有基因多样性的特点，近几年调查发现了一批 ｃｒｙ
４１４ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷
图 ４ 菌株 ＪＮ００１ 基于 Ｃｒｙ９ 同源近似基因菌株的蛋白序列比对分析结果
Ｆｉｇ． ４ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ＪＮ００１ ｓｔｒａｉｎ ｗｉｔｈ ｆｏｕｒ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ Ｃｒｙ９ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ＡＢＭ２１７６５： Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｌｙＡ菌株的 Ｃｒｙ９Ｅａ３（９９％相似度）； ＡＣＮ５４５３１： Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ Ｂｔ４ 菌株的 Ｃｒｙ９Ｅａ（９９％相
似度）； Ｑ４５７３３： Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｅｒｏｖａｒ ｔｏｌｗｏｒｔｈｉ 菌株的 Ｃｒｙ９Ｃａ（８４％相似度）； ＡＤＦ８７９４７： Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ Ｂ⁃ＳＣ５ 菌株的
Ｃｒｙ９Ｂａ２（８３％相似度）。 灰色阴影： 相同的氨基酸残基； 黑色阴影： 保守的氨基酸残基。 － ： 代表序列缺失； 星号： 表示该
位置完全相同； 冒号： 相似度≥６０％ ； 圆点： 相似度 ＜ ６０％ 。 ＡＢＭ２１７６５： Ｃｒｙ９Ｅａ３ ｆｒｏｍ Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｌｙＡ （９９％ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）；
ＡＣＮ５４５３１： Ｃｒｙ９Ｅａ ｆｒｏｍ Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ Ｂｔ４ （９９％ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）； Ｑ４５７３３： Ｃｒｙ９Ｃａ ｆｒｏｍ Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｅｒｏｖａｒ ｔｏｌｗｏｒｔｈｉ （８４％
ｉｄｅｎｔｉｔｙ）； ＡＤＦ８７９４７： Ｃｒｙ９Ｂａ２ ｆｒｏｍ Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ Ｂ⁃ＳＣ５ （８３％ ｉｄｅｎｔｉｔｙ） ． Ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｃａｌ ａｎｄ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ａｒｅ ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｅｄ
ｉｎ ｗｈｉｔｅ ｏｎ ｂｌａｃｋ ａｎｄ ｇｒａｙ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄｓ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． － ： ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｇａｐ； ∗ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｉｄｅｎｔｉｃａｌ ｒｅｓｉｄｕｅｓ； “：” ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ａ ｓｉｍｉ⁃
ｌａｒｉｔｙ ｏｆ ｇｒｅａｔｅｒ ｔｈａｎ ｏｒ ｅｑｕａｌ ｔｏ ６０％ ， ａｎｄ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ６０％ ｉｓ ｍａｒｋｅｄ ａｓ “． ” ．
　
基因组合，尤其是针对不同害虫的 Ｂｔ菌株及基因的
分离和鉴定，如对防治松毛虫具有高效性的菌株
ＫＮ⁃３５，基因型组合为 ｃｒｙ１Ａｃ ＋ ｃｒｙ１Ｈ ＋ ｃｒｙ２Ａｂ；对斜
纹夜蛾有高毒力的菌株 ＫＮ⁃１１，其基因型组合为
ｃｒｙ１Ａａ ＋ ｃｒｙ１Ａｂ ＋ ｃｒｙ１Ｃ ＋ ｃｒｙ２Ａａ（李青等，２００９）。 与
菌株 ＫＮ⁃１１ 基因型组合的不同，也验证了本研究供
试菌株 ＪＮ００１ 对斜纹夜蛾毒力不明显的结果。
高效特异性杀虫微生物的筛选，特别是针对高
效或专化性强的 Ｂｔ菌株的筛选和产业化开发，是微
生物杀虫剂研发的热点（谭芙蓉等，２００６）。 近几年
５１４３ 期 孟鑫睿等： 苏云金芽胞杆菌一新菌株的鉴定及其杀虫活性
图 ５ 接种 １􀆰 ０ ×１０９ 个 ／ ｍＬ浓度菌株 ＪＮ００１
对不同供试昆虫的室内校正死亡率
Ｆｉｇ． ５ Ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｏｆ Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ，
Ｍｙｔｈｉｍｎａ ｓｅｐａｒａｔｅ ａｎｄ Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ｗｉｔｈ ＪＮ００１ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ １􀆰 ０ × １０９ ／ ｍＬ ｉｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
图中数据为平均数 ± 标准差。 不同字母表示经
Ｄｕｎｃａｎ氏新复极差法检验在 Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ 水平差异显著。
Ｄａｔａ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ． Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｏｎ ｔｈｅ ｂａｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ Ｄｕｎｃａｎ’ ｓ ｎｅｗ
ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒａｎｇｅ ｔｅｓｔ．
　
来，国内很多学者分离到多种对不同害虫具有高毒
力的 Ｂｔ菌株，如菌株 ＫＮ⁃２６ 对甜菜夜蛾防治的效果
突出（李青等，２００９）、菌株 ＨＹＷ⁃８ 对美国白蛾具有
很高的杀虫毒力（董明等，２０１０ｂ），还有针对小地老
虎（束长龙等，２００７）、蛴螬（胡晓婷等，２００８）、白纹
伊蚊 Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ（张灵玲等，２００８）等防治的 Ｂｔ
菌株。 当前对玉米螟具有高效特异性的 Ｂｔ 菌株的
分离及鉴定研究较少（束长龙等，２００７）。 本研究从
玉米田中筛选到 １ 株 Ｂｔ菌株，对其进行了生物学特
性研究及分子鉴定，发现其对 ３ 种不同供试鳞翅目
害虫幼虫的毒力差异显著，仅对亚洲玉米螟幼虫具
有高毒力，对粘虫和斜纹夜蛾幼虫毒力不明显，表明
菌株 ＪＮ００１ 具有成为玉米螟专化型 Ｂｔ菌株的潜力，
可作为玉米螟防治中新的生防菌株。 在今后的工作
中，还需深入研究其杀虫分子机理，同时扩大其杀虫
谱测定，尤其是对不同鳞翅目害虫的毒性筛选，并进
行田间防治剂型及应用方式的研究，将其应用到亚
洲玉米螟防治实践中。
参 考 文 献 （Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）
Ｂｒａｖｏ Ａ， Ｇóｍｅｚ Ｉ， Ｐｏｒｔａ Ｈ， Ｇａｒｃíａ⁃Ｇóｍｅｚ ＢＩ， Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ⁃Ａｌｍａｚａｎ
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报， ２６（３）： ２４２ － ２４４］
Ｄｏｎｇ Ｍ， Ｄｕ ＬＸ， Ｗａｎｇ ＲＹ， Ｗａｎｇ ＪＹ， Ｃａｏ ＷＰ， Ｓｏｎｇ Ｊ， Ｆｅｎｇ ＳＬ．
２０１０ａ． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｔｒａｉｎ ｈｉｇｈｌｙ
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Ｈｕ ＸＴ， Ｓｏｎｇ Ｊ， Ｗａｎｇ ＲＹ， Ｄｕ ＬＸ， Ｃａｏ ＷＰ， Ｗａｎｇ ＪＹ， Ｆｅｎｇ ＳＬ．
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ｔｕｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １３（６）： ７８７ － ７９１ （ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［李海
涛， 姚江， 郭巍， 宋福平， 高继国， 黄大昉， 张杰． ２００５． 苏
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技术学报， １３（６）： ７８７ － ７９１］
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Ｌｉｒａ Ｊ， Ｂｅｒｉｎｇｅｒ Ｊ， Ｂｕｒｔｏｎ Ｓ， Ｇｒｉｆｆｉｎ Ｓ， Ｓｈｅｅｔｓ Ｊ， Ｔａｎ ＳＹ， Ｗｏｏｓｌｅｙ
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６１４ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷
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Ｌｕ Ｑ， Ｚｈａｎｇ ＹＪ， Ｙｕ ＨＣ， Ｃａｏ ＧＣ， Ｌｕ ＹＨ， Ｇｕｏ ＹＹ． ２００９． Ｉｎｓｅｃ⁃
ｔｉｃｉｄａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｃｒｙ２Ａｂ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｔｏ Ａｇｒｏｔｉｓ ｙｐｓｉｌｏｎ （Ｒｏｔｔｅｍ⁃
ｂｅｒｇ） ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌａｒｖａｅ．
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ３６（１）： １６ － ２０ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［陆
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Ｏｈｓａｗａ Ｍ， Ｔａｎａｋａ Ｍ， Ｍｏｒｉｙａｍａ Ｋ， Ｓｈｉｍａｚｕ Ｍ， Ａｓａｎｏ Ｓ， Ｍｉｙ⁃
ａｍｏｔｏ Ｋ， Ｈａｇｉｎｏｙａ Ｋ， Ｍｉｔｓｕｉ Ｔ， Ｋｏｕｙａ Ｔ， Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ Ｍ， ｅｔ
ａｌ． ２０１２． Ａ ５０⁃ｋｉｌｏｄａｌｔｏｎ Ｃｒｙ２Ａ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｓ ｌｅｔｈａｌ ｔｏ Ｂｏｍｂｙｘ
ｍｏｒｉ ａｎｄ Ｌｙｍａｎｔｒｉａ ｄｉｓｐａｒ． Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏ⁃
ｂｉｏｌｏｇｙ， ７８（１３）： ４７５５ － ４７５７
Ｐａｒｄｏ⁃Ｌóｐｅｚ Ｌ， Ｓｏｂｅｒóｎ Ｍ， Ｂｒａｖｏ Ａ． ２０１３． Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ
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（责任编辑：李美娟）
７１４３ 期 孟鑫睿等： 苏云金芽胞杆菌一新菌株的鉴定及其杀虫活性