全 文 ：转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁玉米对亚洲玉米螟的抗性评价
常摇 雪摇 王摇 伟摇 沈志成摇 叶恭银鄢
渊浙江大学昆虫科学研究所袁 农业部农业昆虫学重点实验室袁 杭州 猿员园园缘愿冤
摘要院 为探讨转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁玉米对亚洲玉米螟 韵泽贼则蚤灶蚤葬 枣怎则灶葬糟葬造蚤泽渊郧怎藻灶伢藻冤的抗性袁采用室内生测
和田间人工接虫鉴定方法评价了 远 个转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁玉米品系对亚洲玉米螟的杀虫效果袁并利用
酶联免疫吸附法渊耘蕴陨杂粤冤测定了 悦则赠员粤遭蛋白在各品系主要组织的表达水平遥 结果显示袁亚洲玉米
螟幼虫取食转基因玉米各品系雄穗尧苞叶尧花丝和雌穗 源愿 澡后死亡率在 怨园豫左右袁取食心叶的死亡
率在 苑园豫左右袁怨远 澡后大部分幼虫死亡袁而取食非转基因玉米的死亡率为 猿援 猿豫 耀 愿援 苑豫 曰春播和夏
播田转基因玉米叶片尧茎秆尧雌穗基本没有被害袁而对照玉米叶片尧茎秆尧雌穗被害严重袁春播和夏播
玉米平均每株分别有 圆援 怨尧圆援 猿 头幼虫和蛹袁圆援 愿尧猿援 源 个蛀孔袁隧道长度为 苑援 缘尧员源援 圆 糟皂袁雌穗被害级
别为 缘援 猿 和 缘援 员曰远 个转基因玉米品系中 悦则赠员粤遭蛋白在心叶尧雄穗尧花丝尧苞叶和雌穗中稳定表达遥
综合评价认为袁转基因玉米各品系在整个生育期内对亚洲玉米螟有很好的抗性袁其中 晕缘园 品系抗
虫效果最佳袁可以作为抗虫转多基因玉米育种的备选材料遥
关键词院 转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁玉米曰 亚洲玉米螟曰 抗虫性
耘增葬造怎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁 皂葬蚤扎藻 枣燥则
蚤贼泽 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 韵泽贼则蚤灶蚤葬 枣怎则灶葬糟葬造蚤泽
悦澡葬灶早 载怎藻摇 宰葬灶早 宰藻蚤摇 杂澡藻灶 在澡蚤糟澡藻灶早摇 再藻 郧燥灶早赠蚤灶鄢
渊运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 耘灶贼燥皂燥造燥早赠 燥枣 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻袁 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 陨灶泽藻糟贼 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁
在澡藻躁蚤葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 匀葬灶早扎澡燥怎 猿员园园缘愿袁 在澡藻躁蚤葬灶早 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 陨灶 燥则凿藻则 贼燥 葬泽泽藻泽泽 贼澡藻 糟燥灶贼则燥造 藻枣枣蚤糟葬糟赠 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁 皂葬蚤扎藻 贼燥 韵泽贼则蚤灶蚤葬 枣怎则灶葬糟葬造蚤泽
渊郧怎藻灶伢藻冤袁 泽蚤曾 藻增藻灶贼泽 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁 皂葬蚤扎藻 憎藻则藻 藻增葬造怎葬贼藻凿 贼澡则燥怎早澡 造葬遭燥则葬贼燥则赠 遭蚤燥葬泽泽葬赠 葬灶凿
葬则贼蚤枣蚤糟蚤葬造 蚤灶枣藻泽贼葬贼蚤燥灶 蚤灶 枣蚤藻造凿 贼藻泽贼袁 葬灶凿 贼澡藻 造藻增藻造泽 燥枣 悦则赠员粤遭 责则燥贼藻蚤灶 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 皂葬蚤灶 贼蚤泽泽怎藻泽 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟
皂葬蚤扎藻 憎藻则藻 皂藻葬泽怎则藻凿 怎泽蚤灶早 藻灶扎赠皂藻鄄造蚤灶噪藻凿 蚤皂皂怎灶燥泽燥则遭藻灶贼 葬泽泽葬赠泽援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 皂燥则贼葬造蚤贼蚤藻泽
燥枣 韵援 枣怎则灶葬糟葬造蚤泽 灶藻燥灶葬贼藻 造葬则增葬藻 憎藻则藻 葬则燥怎灶凿 怨园援 园豫 憎澡藻灶 枣藻凿 燥灶 贼葬泽泽藻造泽袁 澡怎泽噪泽袁 泽蚤造噪泽袁 噪藻则灶藻造泽 燥枣 贼则葬灶泽鄄
早藻灶蚤糟 皂葬蚤扎藻 藻增藻灶贼泽袁 葬则燥怎灶凿 苑园援 园豫 憎澡藻灶 枣藻凿 燥灶 憎澡燥则造 造藻葬增藻泽 源愿 澡 葬枣贼藻则 蚤灶枣藻泽贼葬贼蚤燥灶袁 葬灶凿 皂燥泽贼 造葬则增葬藻 糟燥怎造凿
泽怎则增蚤增藻 灶燥 造燥灶早藻则 贼澡葬灶 怨远 澡援 栽澡藻 皂燥则贼葬造蚤贼蚤藻泽 燥枣 灶藻燥灶葬贼藻 造葬则增葬藻 枣藻凿 燥灶 灶燥灶鄄贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥灶贼则燥造 憎藻则藻 猿援 猿豫 原
愿援 苑豫 援 栽澡藻则藻 憎藻则藻 灶燥 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿葬皂葬早藻泽 燥枣 造藻葬增藻泽袁 泽贼葬造噪泽 葬灶凿 噪藻则灶藻造泽 蚤灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 皂葬蚤扎藻 责造葬灶贼泽 蚤灶
泽责则蚤灶早 葬灶凿 泽怎皂皂藻则 糟则燥责 泽藻葬泽燥灶泽袁 糟燥皂责葬则藻凿 憎蚤贼澡 泽藻增藻则藻 凿葬皂葬早藻泽 燥枣 造藻葬增藻泽袁 泽贼葬造噪泽 葬灶凿 噪藻则灶藻造泽 蚤灶 灶燥灶鄄
贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥灶贼则燥造 责造葬灶贼泽 憎蚤贼澡 葬灶 葬增藻则葬早藻 灶怎皂遭藻则 燥枣 圆援 怨 葬灶凿 圆援 猿 造葬则增葬藻 渊燥则 责怎责葬藻冤 责藻则 责造葬灶贼袁 圆援 愿 葬灶凿
猿援 源 贼怎灶灶藻造泽 责藻则 泽贼葬造噪袁 葬灶 葬增藻则葬早藻 造藻灶早贼澡 燥枣 苑援 缘 葬灶凿 员源援 圆 糟皂 燥枣 凿葬皂葬早藻凿 贼怎灶灶藻造袁 葬泽 憎藻造造 葬泽 缘援 猿 葬灶凿 缘援 员
藻葬则 凿葬皂葬早藻 则葬贼蚤灶早泽援 粤凿凿蚤贼蚤燥灶葬造造赠袁 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 造藻增藻造泽 燥枣 悦则赠员粤遭 责则燥贼藻蚤灶 蚤灶 憎澡燥则造 造藻葬增藻泽袁 贼葬泽泽藻造泽袁 泽蚤造噪泽袁
澡怎泽噪泽 葬灶凿 噪藻则灶藻造泽 燥枣 贼澡藻泽藻 泽蚤曾 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 皂葬蚤扎藻 藻增藻灶贼泽 憎藻则藻 泽贼葬遭造藻援 陨灶 糟燥灶糟造怎泽蚤燥灶袁 贼澡藻泽藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟
基金项目院 国家自然科学基金创新研究群体科学基金渊猿员园圆员园园猿冤
作者简介院 常雪袁女袁员怨愿员年生袁博士研究生袁研究方向为转基因作物环境安全性评价袁 耘鄄皂葬蚤造院 糟曾怎藻泽灶燥憎岳 员远猿援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 糟澡怎岳 扎躁怎援 藻凿怎援 糟灶
收稿日期院 圆园员猿 原 园源 原 园愿
第 源园 卷摇 第 源 期
圆园员猿 年摇 愿 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源园摇 晕燥援 源
粤怎早援 摇 圆园员猿
摇 摇 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁 皂葬蚤扎藻 藻增藻灶贼泽 糟燥怎造凿 责则燥增蚤凿藻 责则燥贼藻糟贼蚤燥灶 葬早葬蚤灶泽贼 韵援 枣怎则灶葬糟葬造蚤泽 枣燥则 贼澡藻 憎澡燥造藻 泽藻葬泽燥灶袁 葬灶凿 贼澡藻
藻增藻灶贼 晕缘园 燥枣枣藻则藻凿 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼 蚤灶泽藻糟贼 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 葬灶凿 糟燥怎造凿 泽藻则增藻 葬泽 遭则藻藻凿蚤灶早 泽燥怎则糟藻 枣燥则 贼澡藻 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣
蚤灶泽藻糟贼鄄则藻泽蚤泽贼葬灶贼 责赠则葬皂蚤凿藻凿 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 皂葬蚤扎藻援
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摇 摇 亚洲玉米螟 韵泽贼则蚤灶蚤葬 枣怎则灶葬糟葬造蚤泽渊郧怎藻灶伢藻冤是我国
玉米的重要害虫袁其幼虫具有钻蛀特性袁初孵幼虫为
害未展开的玉米叶片袁大龄幼虫蛀食茎秆袁造成折
茎尧折穗而减产袁此外袁虫伤还诱发玉米病害袁如玉米
茎腐病和穗腐病袁降低籽粒品质咱员 原 圆暂 遥 虽然传统的
生物和化学方法可以有效控制玉米螟的危害袁但因
为成本高尧操作困难等因素在生产中的应用面积有
限咱猿暂 遥 已有研究证实袁抗虫转 月贼 基因玉米渊月贼 玉
米冤对玉米螟有非常显著的防治效果咱源 原 缘暂 遥 圆园员圆
年袁国际上商业化种植 月贼玉米的国家达 员苑 个袁种植
面积持续增加袁其中转 糟则赠员粤遭 玉米 酝韵晕愿员园 和 月贼员员
分别获得 圆圆 和 圆园 个国家的批准袁是目前应用最广
的抗虫转 月贼基因玉米咱远暂 遥
持续大面积种植转单抗虫基因作物会诱导靶标
害虫产生抗性和降低转基因作物抗虫效果袁在田间
至少已有 猿 种鳞翅目和 员 种鞘翅目害虫对转单抗虫
基因作物产生抗性咱苑暂 遥 目前尚未见亚洲玉米螟在
田间对 月贼 玉米产生抗性的报道袁但菲律宾自 圆园园缘
年商业化种植 酝韵晕愿员园 以来袁不同地理种群的亚洲
玉米螟对 悦则赠员粤遭的敏感基线都有所提高袁中国农业
科学院植物保护研究所玉米害虫组室内筛选的抗
悦则赠员粤遭亚洲玉米螟可以在 酝韵晕愿员园 花丝上存活并
化蛹袁说明在持续的选择压下袁亚洲玉米螟极有可能
在田间对转单基因玉米产生抗性咱愿 原 怨暂 遥 因此袁亟需
开发新型抗虫玉米袁以避免因推广单一抗虫基因玉
米导致的亚洲玉米螟抗性风险遥
将杀虫机制不同的 月贼 基因转入同一植株是抗
虫转基因作物研发的趋势咱员园暂 遥 玉米是转多基因作
物的先锋袁美国孟山都渊酝燥灶泽葬灶贼燥冤和杜邦渊阅怎责燥灶贼冤
等公司已成功开发出多种转多基因抗虫玉米袁如
孕燥憎藻则悦燥则藻襆渊糟则赠员粤援 员园缘 垣 糟则赠圆粤遭圆 垣 糟则赠员云冤尧郧藻灶怎蚤贼赠襆
灾栽 阅燥怎遭造藻 孕则燥栽酝渊糟则赠员粤援 员园缘 垣 糟则赠圆粤遭圆冤尧郧藻灶怎蚤贼赠襆 灾栽
栽则蚤责造藻 孕则燥栽酝渊 糟则赠员粤援 员园缘 垣 糟则赠圆粤遭圆 垣 糟则赠猿月遭员冤和 郧藻鄄
灶怎蚤贼赠襆 杂皂葬则贼杂贼葬曾栽酝渊糟则赠员云葬圆 垣 糟则赠员粤援 员园缘 垣 糟则赠圆粤遭圆 垣
糟则赠猿月遭员 垣 糟则赠猿源粤遭员 垣 糟则赠猿缘粤遭员冤袁其中 郧藻灶怎蚤贼赠襆 灾栽
栽则蚤责造藻 孕则燥栽酝和 郧藻灶怎蚤贼赠襆 杂皂葬则贼杂贼葬曾栽酝已于 圆园员园 年在
美国商业化种植袁而且种植面积逐年增加咱员员暂 遥 我国
尚未见自主研发的抗虫性较高的转多基因玉米的报
道袁为此袁本试验对转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁玉米 远 个转化品
系的室内杀虫和田间抗虫效果及蛋白表达量进行了
评价袁以期为我国开发新型抗虫转基因玉米提供种
质资源袁并为亚洲玉米螟的有效防治提供技术储备遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试玉米院供试转基因玉米转化品系 晕员园尧
晕圆园尧晕源园尧晕缘园尧晕远园尧晕苑园袁由浙江大学昆虫科学研究
所沈志成教授团队研发袁非转基因亲本对照为 匀蚤灶凿
域遥 月贼 基因 糟则赠员粤遭 和 糟则赠圆粤躁 串联后置于 哉遭蚤择怎蚤贼蚤灶
启动子控制下表达融合杀虫蛋白 悦则赠员粤遭 辕 悦则赠圆粤躁袁
同时串联的还有 缘 原烯醇式丙酮酸莽草酸 原 猿 原磷
酸合成酶 渊 缘鄄藻灶燥造责赠则怎增赠造泽澡蚤噪皂葬贼藻鄄猿鄄责澡燥泽责澡葬贼藻 泽赠灶鄄
贼澡葬泽藻袁耘孕杂孕杂冤基因袁使植株具有抗草甘膦特性遥 各
品系的转基因玉米和亲本于 圆园员员 年 源 月和 苑 月种
植于隔离条件严格的浙江大学试验农场内袁缘 耀 远 叶
期喷洒 源员豫草甘膦异丙胺盐水剂 猿园园 倍稀释液以
去除非转基因个体遥 所有植株按照常规方式管理袁
整个生育期未使用杀虫剂遥
供试昆虫院亚洲玉米螟由中国农业科学院植物
保护研究所玉米害虫组提供遥 卵块置于 圆愿 依 圆 益尧
相对湿度渊苑园 依 缘冤豫 尧光周期 员远 颐 愿 澡渊光 颐 暗冤条件
下袁孵化 圆源 澡之内的幼虫供试遥
供试农药院源员豫草甘膦异丙胺盐渊早造赠责澡燥泽葬贼藻 蚤泽燥鄄
责则燥责赠造葬皂蚤灶藻 泽葬造贼冤水剂袁浙江金帆达生化股份有限
公司遥
试剂盒和仪器院月贼鄄悦则赠员粤遭 辕 悦则赠员粤糟 耘蕴陨杂粤 试剂
盒袁美国 耘灶增蚤则燥造燥早蚤曾栽酝公司生产曰悦则赠员粤遭 标准蛋白袁
美国凯斯西储大学渊悦葬泽藻 宰藻泽贼藻则灶 砸藻泽藻则增藻 哉灶蚤增藻则泽蚤鄄
贼赠冤生产遥 栽蚤泽泽怎藻蕴赠泽藻则 域组织研磨仪袁 德国 匝陨粤鄄
郧耘晕襆公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 室内抗虫性鉴定
分别对玉米心叶尧雄穗尧苞叶尧花丝和雌穗的抗
虫性进行鉴定遥玉米心叶中期即愿 耀 员园叶期从田
间采回上部第 员 片展开叶袁剪成 源 糟皂 小片放入 远援 缘
糟皂 伊 圆援 园 糟皂 指形管中袁叶片底部和两端放有含 员园园
滋早 辕 皂蕴苯并咪唑的滤纸片保湿咱员圆暂 袁每管放 圆缘 头初
孵幼虫袁圆 耀 猿 凿更换 员 次叶片袁每个处理重复 员园 次遥
园源猿 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
幼嫩雄穗的 源 耀 缘 个小花尧雌穗切成 员糟皂猿 小块袁分别
放入 圆源 孔细胞培养板中袁每孔接 员 头初孵幼虫袁雄
穗重复 苑 次袁雌穗重复 缘 次遥 苞叶从田间取回后剪
成小块袁放入 远 孔细胞培养板中袁每孔接 缘 头初孵幼
虫袁共测试 猿园 头幼虫袁每处理重复 缘 次遥 取新鲜未
授粉的花丝袁剪成 缘 糟皂 长袁放入直径 远 糟皂 的塑料培
养皿中袁皿底部放有滤纸保湿袁每皿接 圆缘 头初孵幼
虫袁重复 员圆 次遥
接虫 源愿尧怨远尧员远愿 澡 后分别调查幼虫存活数并称
重袁员远愿 澡后仍处于 员 龄或重量臆园援 员 皂早 的幼虫均算
作死亡遥 参照 悦澡藻灶等咱员猿暂方法测量幼虫在 源愿 澡 和 怨远
澡的累计取食叶面积渊皂皂圆 辕 圆缘头冤遥 试验条件同上遥
员援 圆援 圆 田间抗虫性鉴定
在玉米植株心叶中期和花丝期袁分别进行田间
人工接虫鉴定遥 将黑头的玉米螟卵块放进 员援 缘 皂蕴
离心管后倒插在玉米喇叭口中或花丝上袁第 圆 天检
查卵块孵化情况袁每个植株约接 愿园 头初孵幼虫袁每
个处理接 员园 株遥 心叶中期接虫 员源 凿 后根据何康来
等咱员暂怨 级分级标准调查食叶级别遥 员 级表示叶片仅
有少数针刺状虫孔袁怨 级表示大部分叶片有大于绿
豆大小的蛀孔或长条孔遥 待玉米雌穗成熟后进行田
间剖秆调查袁以每株存活的幼虫和蛹数尧蛀孔数和隧
道长度袁以及雌穗被害级别等咱员源暂作为抗性评价的
标准遥
员援 圆援 猿 悦则赠员粤遭蛋白表达量测定
采用酶联免疫吸附法渊耘蕴陨杂粤冤测定供试转基因
玉米中 悦则赠员粤遭 蛋白的含量遥 各品系心叶尧雄穗尧苞
叶尧花丝和雌穗冷冻干燥后称重袁组织研磨仪研磨
员 耀 圆 皂蚤灶后加入提取液渊样品渊皂早冤 颐磷酸盐鄄吐温缓
冲液渊皂蕴冤 越 圆园 颐 员冤袁充分振荡悬浮袁源 益下静止 猿园
皂蚤灶袁经离心和适当稀释后严格按照 悦则赠员粤遭 辕 悦则赠员粤糟
试剂盒说明书进行定量测定遥
员援 猿 数据统计分析
室内生测和田间抗性调查结果及 悦则赠员粤遭 蛋白
含量等数据用 阅孕杂 系统软件渊增藻则泽蚤燥灶 员猿援 缘冤进行单
因素方差分析 渊 韵灶藻鄄憎葬赠 粤晕韵灾粤冤 和多重比较
渊蕴杂阅冤袁其中幼虫死亡率先进行反正弦平方根转换
后再分析遥 并利用 栽燥责泽蚤泽方法对 远 个转基因玉米品
系的室内和田间抗虫性进行排序比较咱员猿暂 遥
圆 结果与分析
圆援 员 室内杀虫效果
亚洲玉米螟取食 远 个转基因玉米品系心叶 源愿 澡
后幼虫死亡率均在 远园豫以上袁而取食非转基因玉米
心叶的幼虫死亡率仅为 圆援 愿豫袁差异显著袁其中 晕缘园
心叶抗虫性最好袁死亡率达 苑远援 愿豫 渊云 越 猿愿援 缘圆圆袁凿枣 越
远袁远怨袁孕 约 园援 园园员冤遥 怨远 澡 后取食各品系心叶的幼虫
死亡率达到怨园豫以上袁显著高于取食对照的幼虫
死亡率远援 源豫 渊云 越 圆源猿援 员缘远袁凿枣 越 远袁远怨袁孕 约 园援 园园员冤
渊表 员冤遥
取食转基因玉米各品系雄穗尧苞叶尧花丝和雌
穗 源愿 澡后袁亚洲玉米螟幼虫死亡率分别为 怨园援 缘豫 耀
怨愿援 愿豫尧怨苑援 猿豫 耀员园园豫尧愿缘援 愿豫 耀怨怨援 远豫和 远苑援 缘豫 耀
怨愿 援 猿 豫 袁而取食非转基因玉米的死亡率仅为
圆援 园豫 耀源援 圆豫 袁差异显著渊云雄穗 越 远源援 圆源缘袁凿枣 越 远袁源愿袁
孕 约 园援 园园员曰云苞叶 越 员缘猿援 缘员员袁凿枣 越 远袁猿源袁孕 约 园援 园园员曰
云花丝 越 员员愿 援 缘愿源 袁凿枣 越 远 袁愿猿 袁孕 约 园 援 园 园员 曰云雌穗 越源远援 圆怨员袁凿枣 越 远袁猿源袁孕 约 园援 园园员冤遥 怨远 澡 后除取食 晕员园
的雄穗和花丝外袁取食 月贼 玉米各组织的幼虫死亡率
均达 员园园豫袁显著高于非转基因玉米渊云雄穗 越猿员源援 怨苑圆袁凿枣 越 远袁源愿袁孕 约 园援 园园员曰云苞叶 越 猿缘园援 远园源袁凿枣 越 远袁猿源袁孕 约园援 园园员曰云花丝 越 猿园源援 远园猿袁凿枣 越 远袁愿猿袁孕 约 园援 园园员曰云雌穗 越缘苑源援 苑员怨袁凿枣 越 远袁猿源袁孕 约园援 园园员冤渊表 员冤遥
源愿 澡后袁亚洲玉米螟取食转基因玉米各品系的叶
面积为 员援 猿 耀 员猿援 员 皂皂圆 辕 圆缘 头袁显著低于对照 员员怨援 缘
皂皂圆 辕 圆缘 头渊云 越 猿远援 怨圆员袁凿枣 越 苑袁苑怨袁孕 约 园援 园园员冤曰怨远 澡
后取食叶面积达到员 援 猿 耀 圆远 援 愿皂皂圆 辕 圆缘头袁亦显著
低于对照圆远猿援 园 皂皂圆 辕 圆缘头渊云 越 猿愿援 圆怨怨袁凿枣 越 苑袁苑怨袁
孕 约园援 园园员冤遥
圆援 圆 田间抗虫性
春播玉米田间抗虫性调查结果表明袁月贼 玉米各
品系叶片基本没有虫孔袁食叶级别为 员援 园 耀 员援 圆袁而
对照非转基因玉米部分植株叶片有绿豆大小虫孔袁
平均食叶级别为 猿援 怨袁差异显著渊云 越 愿苑援 源圆源袁凿枣 越 远袁
远怨袁孕 约 园援 园园员冤遥 此外袁剖秆调查发现转基因玉米各
品系植株上没有虫孔或存活的幼虫和蛹袁雌穗没有
被害袁而对照玉米平均每株有 圆援 怨 头幼虫或蛹尧圆援 愿
个孔洞袁隧道长度为 苑援 缘 糟皂袁雌穗籽粒被害严重袁被
害级别达 缘援 猿遥
夏播玉米田间调查结果与春播玉米基本一致袁
转基因玉米各品系仅有个别叶片有针孔状虫孔袁食
叶级别为 员援 园 耀 员援 缘袁对照植株食叶级别为 缘袁差异显
著渊云 越 缘园援 愿远源袁凿枣 越 远袁远怨袁孕 约 园援 园园员冤遥 转基因玉米
植株上没有存活幼虫尧蛹和蛀孔袁雌穗未被害袁而对
照玉米被害严重袁平均每株有 圆援 猿头幼虫或蛹尧猿援 源 个
蛀孔袁隧道长度为 员源援 圆 糟皂袁雌穗被害级别为 缘援 员遥
员源猿源 期 常摇 雪等院转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁玉米对亚洲玉米螟的抗性评价
表 员 亚洲玉米螟初孵幼虫取食转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁玉米不同组织 源愿 澡和 怨远 澡后的死亡率
栽葬遭造藻 员 栽澡藻 皂燥则贼葬造蚤贼赠 燥枣 韵泽贼则蚤灶蚤葬 枣怎则灶葬糟葬造蚤泽 灶藻燥灶葬贼藻 造葬则增葬藻 枣藻凿 燥灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤泽泽怎藻泽 燥枣
贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁 皂葬蚤扎藻 藻增藻灶贼泽 枣燥则 源愿 澡 葬灶凿 怨远 澡 豫
玉米组织
酝葬蚤扎藻
贼蚤泽泽怎藻
转化品系
耘增藻灶贼 灶
取食时间渊澡冤
云藻藻凿蚤灶早 贼蚤皂藻
源愿 怨远
玉米组织
酝葬蚤扎藻
贼蚤泽泽怎藻
转化品系
耘增藻灶贼 灶
取食时间渊澡冤
云藻藻凿蚤灶早 贼蚤皂藻
源愿 怨远
心叶 晕员园 员园 远缘援 圆 依 远援 园葬遭 怨猿援 圆 依 猿援 远遭
宰澡燥则造 晕圆园 员园 远远援 愿 依 缘援 缘葬遭 怨怨援 远 依 园援 源葬
造藻葬枣 晕源园 员园 远园援 园 依 猿援 苑遭 怨怨援 圆 依 园援 缘葬
晕缘园 员园 苑远援 愿 依 缘援 圆葬 员园园援 园 依 园援 园葬
晕远园 员园 苑员援 远 依 缘援 园葬遭 怨怨援 远 依 园援 源葬
晕苑园 员园 苑源援 愿 依 猿援 猿葬 员园园援 园 依 园援 园葬
对照 匀蚤灶凿域 员园 圆援 愿 依 员援 园糟 远援 源 依 园援 怨糟
雄穗 晕员园 苑 怨园援 缘 依 猿援 源遭 怨苑援 远 依 圆援 源葬
栽葬泽泽藻造 晕圆园 苑 怨苑援 园 依 员援 愿葬遭 员园园援 园 依 园援 园葬
晕源园 苑 怨源援 远 依 圆援 源葬遭 员园园援 园 依 园援 园葬
晕缘园 苑 怨愿援 愿 依 园援 愿葬 员园园援 园 依 园援 园葬
晕远园 苑 怨苑援 远 依 圆援 源葬 员园园援 园 依 园援 园葬
晕苑园 苑 怨苑援 园 依 圆援 园葬遭 员园园援 园 依 园援 园葬
对照 匀蚤灶凿域 苑 源援 圆 依 员援 远糟 远援 远 依 员援 缘遭
苞叶 晕员园 缘 怨愿援 苑 依 员援 猿葬 员园园援 园 依 园援 园葬
匀怎泽噪 晕圆园 缘 怨苑援 猿 依 员援 圆葬 员园园援 园 依 园援 园葬
晕源园 缘 员园园援 园 依 园援 园葬 员园园援 园 依 园援 园葬
晕缘园 缘 怨愿援 苑 依 员援 猿葬 员园园援 园 依 园援 园葬
苞叶 晕远园 缘 员园园援 园 依 园援 园葬 员园园援 园 依 园援 园葬
匀怎泽噪 晕苑园 缘 怨愿援 苑 依 园援 愿葬 员园园援 园 依 园援 园葬
对照 匀蚤灶凿域 缘 圆援 园 依 员援 猿遭 愿援 苑 依 圆援 缘遭
花丝 晕员园 员圆 愿缘援 愿 依 苑援 园遭 怨猿援 怨 依 猿援 猿遭
杂蚤造噪 晕圆园 员圆 怨怨援 圆 依 园援 远葬 员园园援 园 依 园援 园葬
晕源园 员圆 怨愿援 愿 依 园援 怨葬 员园园援 园 依 园援 园葬
晕缘园 员圆 怨怨援 远 依 园援 源葬 员园园援 园 依 园援 园葬
晕远园 员圆 怨苑援 怨 依 员援 园葬 员园园援 园 依 园援 园葬
晕苑园 员圆 怨愿援 猿 依 园援 苑葬 员园园援 园 依 园援 园葬
对照 匀蚤灶凿域 员圆 圆援 缘 依 员援 圆糟 猿援 愿 依 员援 缘糟
雌穗 晕员园 缘 愿远援 苑 依 源援 猿遭 员园园援 园 依 园援 园葬
运藻则灶藻造 晕圆园 缘 怨园援 园 依 猿援 怨葬遭 员园园援 园 依 园援 园葬
晕源园 缘 怨园援 园 依 猿援 怨葬遭 员园园援 园 依 园援 园葬
晕缘园 缘 怨愿援 猿 依 员援 园葬 员园园援 园 依 园援 园葬
晕远园 缘 怨猿援 猿 依 猿援 源葬遭 员园园援 园 依 园援 园葬
晕苑园 缘 远苑援 缘 依 圆援 愿糟 员园园援 园 依 园援 园葬
对照 匀蚤灶凿域 缘 圆援 缘 依 员援 苑凿 猿援 猿 依 员援 远遭
摇 摇 表中数据为平均数 依标准误遥 相同组织的同列数据后不同字母表示经 蕴杂阅方法检验在 孕 约 园援 园缘 水平差异显著遥 栽澡藻 凿葬贼葬 蚤灶 贼澡藻
贼葬遭造藻 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂耘援 云燥则 贼澡藻 泽葬皂藻 贼蚤泽泽怎藻袁 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 则藻责则藻泽藻灶贼 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 渊孕 约园援 园缘冤 遭赠 蕴杂阅 贼藻泽贼援
圆援 猿 不同转基因玉米品系抗虫性的综合比较
根据室内和田间的抗虫性结果袁利用栽燥责泽蚤泽
法对远个转化品系的抗虫性进行排序袁其结果为
晕缘园 跃 晕圆园 跃 晕源园 跃 晕苑园 跃 晕远园 跃 晕员园渊表 圆冤遥
表 圆 不同转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁玉米品系对亚洲玉米螟的抗虫性排序
栽葬遭造藻 圆 砸藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 则葬灶噪泽 燥枣 泽蚤曾 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁 皂葬蚤扎藻 藻增藻灶贼泽 葬早葬蚤灶泽贼 韵泽贼则蚤灶蚤葬 枣怎则灶葬糟葬造蚤泽
品系
耘增藻灶贼 阅蚤 垣 阅蚤 原 悦蚤
排序
砸葬灶噪
品系
耘增藻灶贼 阅蚤 垣 阅蚤 原 悦蚤
排序
砸葬灶噪
晕员园 园援 员远愿苑 园援 员园缘猿 园援 猿愿源猿 远 晕缘园 园援 园源圆猿 园援 圆圆愿缘 园援 愿源猿苑 员
晕圆园 园援 园苑员远 园援 圆员圆员 园援 苑源苑远 圆 晕远园 园援 员缘愿怨 园援 员远缘愿 园援 缘员园远 缘
晕源园 园援 员员缘缘 园援 员苑愿园 园援 远园远缘 猿 晕苑园 园援 员源猿远 园援 员怨怨猿 园援 缘愿员圆 源
摇 摇 阅蚤 垣 院第 蚤个评价对象与最优方案的距离曰阅蚤 原 院第 蚤 个评价对象与最劣方案的距离曰悦蚤 院第 蚤 个评价对象与最优方案的接近程度遥
阅蚤 垣 院 阅蚤泽贼葬灶糟藻 枣则燥皂 贼澡藻 蚤凿藻葬造 泽燥造怎贼蚤燥灶 枣燥则 贼澡藻 蚤贼澡 糟葬灶凿蚤凿葬贼藻 造蚤灶藻曰 阅蚤 原 院 凿蚤泽贼葬灶糟藻 枣则燥皂 贼澡藻 灶藻早葬贼蚤增藻 泽燥造怎贼蚤燥灶 枣燥则 贼澡藻 蚤贼澡 糟葬灶凿蚤凿葬贼藻 造蚤灶藻曰 悦蚤 院 贼澡藻 则藻造葬鄄
贼蚤增藻 糟造燥泽藻灶藻泽泽 燥枣 贼澡藻 蚤贼澡 糟葬灶凿蚤凿葬贼藻 造蚤灶藻 贼燥 贼澡藻 蚤凿藻葬造 泽燥造怎贼蚤燥灶泽援
圆援 源 悦则赠员粤遭蛋白表达含量测定
根据 耘蕴陨杂粤检测结果袁转基因玉米各品系心叶
中 悦则赠员粤遭的表达范围为 员源援 猿员 耀 圆圆援 远苑 灶早 辕 皂早 阅宰袁
其中 晕员园 耀 晕缘园 中 悦则赠员粤遭 含量显著高于 晕远园 和
晕苑园渊云 越 员员援 员圆源袁凿枣 越 缘袁缘怨袁孕 约 园援 园园员冤遥 雄穗中各
转化品系 悦则赠员粤遭含量无显著差异渊云 越 园援 缘缘苑袁凿枣 越
缘袁源苑袁孕 越园援 苑猿员怨冤遥 晕缘园苞叶中 悦则赠员粤遭 表达量显著
低于 晕员园和 晕远园袁其它品系间无显著差异渊云 越 员援 缘圆袁
凿枣 越 缘袁猿缘袁孕 越园援 圆员猿源冤遥 各品系花丝中 悦则赠员粤遭含量
差异较大袁晕苑园 的表达量最高袁为 源怨援 猿猿 灶早 辕 皂早 阅宰袁
晕源园表达量最低袁为圆园 援 怨猿 灶早 辕 皂早阅宰渊 云 越 缘 援 远远 袁
凿枣 越 缘袁缘怨袁孕 约 园援 园园员冤遥 雌穗中 悦则赠员粤遭 的表达量较
高袁除 晕苑园 外袁其它品系表达量均大于 缘园 灶早 辕 皂早 阅宰
渊云 越猿援 圆怨猿袁凿枣 越 缘袁猿缘袁孕 越园援 园员苑猿渊图 员冤遥
圆源猿 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
图 员 转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁玉米不同组织中的 悦则赠员粤遭蛋白含量
云蚤早援 员 悦燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 悦则赠员粤遭 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤泽泽怎藻泽 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁 皂葬蚤扎藻
摇 摇 图中数据为平均数 依标准误渊心叶 灶 越 员园袁雄穗 灶 越 愿袁苞叶 灶 越 远袁花丝 灶 越 员园袁雌穗 灶 越 远冤袁同一组织中不同字母表示经 蕴杂阅测验差
异显著渊孕 约 园援 园缘冤遥 栽澡藻 凿葬贼葬 蚤灶 葬造造 泽葬皂责造藻泽 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂耘 渊灶 越 员园 枣燥则 憎澡燥则造 造藻葬枣袁 愿 枣燥则 贼葬泽泽藻造袁 远 枣燥则 澡怎泽噪袁 员园 枣燥则 泽蚤造噪袁 葬灶凿 远 枣燥则 噪藻则灶藻造冤援 云燥则
贼澡藻 泽葬皂藻 贼蚤泽泽怎藻泽袁 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 则藻责则藻泽藻灶贼 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 渊孕 约园援 园缘冤 遭赠 蕴杂阅 贼藻泽贼援
猿 讨论
亚洲玉米螟一般在玉米的心叶期和穗期为害袁
心叶期为害的玉米螟初孵幼虫先在心叶内取食袁而
后为害雄穗曰穗期玉米螟主要为害花丝和雌穗咱员暂 遥
本试验评估了转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁 玉米 远 个品系心叶尧
雄穗尧花丝尧苞叶尧雌穗的抗虫性袁大部分幼虫在取食
这些组织 怨远 澡后死亡袁造成的叶面积损失远远低于
非转基因对照玉米遥 田间抗虫性鉴定结果也表明袁
转基因玉米叶片和雌穗基本没有被害袁茎秆中没有
发现蛀孔和存活的幼虫袁其抗虫效果与 酝韵晕愿员园 和
月贼员员 一致袁说明转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁 玉米能够有效控制
心叶期和穗期亚洲玉米螟的危害咱猿袁 缘暂 遥
抗虫转基因作物中杀虫蛋白的表达量对抗虫效
果至关重要袁转基因玉米 月贼员苑远 中 悦则赠员粤遭蛋白的表
达量随着生育期的延长而降低袁因此对第 圆 代欧洲
玉米螟 韵泽贼则蚤灶蚤葬 灶怎遭蚤造葬造蚤泽 渊匀俟遭灶藻则冤的防治效果差咱员缘暂 遥
酝韵晕愿员园叶片中 悦则赠员粤遭 蛋白的含量为 苑援 怨猿 耀 员园援 猿源
滋早 辕 早 云宰袁而雌穗中仅为 园援 员怨 耀 园援 猿怨 滋早 辕 早 云宰袁下降
猿园 倍以上咱员远暂 遥 本试验 远 个转基因玉米品系中
悦则赠员粤遭蛋白在心叶尧雄穗尧花丝尧苞叶和雌穗中稳定
表达袁表达量均远高于中国不同地理种群亚洲玉米
螟对 悦则赠员粤遭蛋白的敏感基线渊园援 员园 耀 园援 愿员 灶早 辕 皂早冤袁
而且花丝和雌穗中 悦则赠员粤遭的表达量均高于叶片袁分
别为 圆园援 怨猿 耀 源怨援 猿猿 灶早 辕 皂早 阅宰和 源员援 愿猿 耀 苑缘援 园园 灶早 辕
皂早 阅宰袁说明转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁 玉米可以控制穗期玉
米螟的危害咱员苑暂 遥
悦则赠圆粤是以鳞翅目害虫为靶标的杀虫蛋白袁其
在昆虫中肠上皮细胞刷状缘膜囊泡渊 遭则怎泽澡 遭燥则凿藻则
皂藻皂遭则葬灶藻 增藻泽蚤糟造藻泽袁月月酝灾泽冤上的结合位点与 悦则赠员粤
不同袁是目前研发抗虫转多基因作物常用的基
因咱员愿 原 圆园暂 遥 据报道袁转 糟则赠圆粤遭和 糟则赠员粤糟棉尧转 糟则赠圆粤遭圆
和 糟则赠员粤援 员园缘 玉米都有很好的害虫防治和抗性治理
效果咱圆员 原 圆圆暂 遥 如转 糟则赠圆粤遭 和 糟则赠员粤遭 棉 月燥造造早葬则凿域与
转 糟则赠员粤遭棉 月燥造造早葬则凿相比袁不但扩大了杀虫范围袁而
且能控制在 月燥造造早葬则凿 上正常生长的棉红铃虫 孕藻糟贼蚤鄄
灶燥责澡燥则葬 早燥泽泽赠责蚤藻造造葬渊杂葬怎灶凿藻则泽冤的危害咱圆猿 原 圆源暂 遥 欧洲玉
米螟对 悦则赠圆粤很敏感袁由于亚洲玉米螟和欧洲玉米
螟对 月贼蛋白的敏感度相似袁悦则赠圆粤 对亚洲玉米螟亦
有较高杀虫活性袁推测转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁 玉米在亚洲
玉米螟防治和 悦则赠员粤遭 抗性治理中有很大的应用潜
力咱员员袁 圆缘暂 遥 综合评价转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁 玉米各品系室
内和田间的抗虫效果袁晕缘园 的抗虫性最佳袁可以作为
转多基因玉米育种的备选材料遥
参 考 文 献渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 何康来袁 王振营袁 周大荣袁等援 玉米抗螟性鉴定方法与评价
标准援 沈阳农业大学学报袁 圆园园园袁 猿员渊缘冤院 源猿怨 原 源源猿
咱圆暂 宋立秋袁 魏利民袁 王振营袁 等援 亚洲玉米螟与串珠镰孢菌复
合侵染对玉米产量损失的影响援 植物保护学报袁 圆园园怨袁 猿远
渊远冤院 源愿苑 原 源怨园
咱猿暂 何康来袁 王振营袁 文丽萍袁 等援 转 月贼 基因玉米对亚洲玉米
螟的抗性评价援 中国农学通报袁 圆园园源袁 圆园渊远冤院 圆源园 原 圆源圆
咱源暂 匀藻 运 蕴袁 宰葬灶早 在 再袁 在澡燥怎 阅 砸袁 藻贼 葬造援 耘增葬造怎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟
月贼 糟燥则灶 枣燥则 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 贼澡藻 粤泽蚤葬灶 糟燥则灶 遭燥则藻则 渊 蕴藻责蚤凿燥责贼藻则葬院
孕赠则葬造蚤凿葬藻冤援 允燥怎则灶葬造 燥枣 耘糟燥灶燥皂蚤糟 耘灶贼燥皂燥造燥早赠袁 圆园园猿袁 怨远渊猿冤院
怨猿缘 原 怨源园
咱缘暂 王培袁 何康来袁 王振营袁 等援 转 糟则赠员粤糟玉米对亚洲玉米螟的
抗性评价援 植物保护学报袁 圆园员圆袁 猿怨渊缘冤院 猿怨缘 原 源园园
猿源猿源 期 常摇 雪等院转 糟则赠员粤遭 辕 糟则赠圆粤躁玉米对亚洲玉米螟的抗性评价
咱远暂 允葬皂藻泽 悦援 郧造燥遭葬造 泽贼葬贼怎泽 燥枣 糟燥皂皂藻则糟蚤葬造蚤扎藻凿 遭蚤燥贼藻糟澡 辕 郧酝 糟则燥责泽院
圆园员圆援 陨杂粤粤粤 遭则蚤藻枣 源源袁 陨杂粤粤粤院 陨贼澡葬糟葬袁 晕再
咱苑暂 宰葬灶早蚤造葬 阅 杂袁 蕴藻燥灶葬则凿 月 砸袁 月葬蚤 再 再袁 藻贼 葬造援 蕴葬则增葬造 泽怎则增蚤增葬造
葬灶凿 责造葬灶贼 蚤灶躁怎则赠 燥枣 悦则赠员粤遭鄄泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻袁 鄄则藻泽蚤泽贼葬灶贼袁 葬灶凿 鄄澡藻贼藻则燥鄄
扎赠早燥怎泽 早藻灶燥贼赠责藻泽 燥枣 贼澡藻 泽怎早葬则糟葬灶藻 遭燥则藻则 燥灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥则灶 糟燥灶鄄
贼葬蚤灶蚤灶早 泽蚤灶早造藻 燥则 责赠则葬皂蚤凿藻凿 月贼 早藻灶藻泽援 悦则燥责 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 圆园员圆袁
源圆院 员园愿 原 员员缘
咱愿 暂 载怎 蕴 晕袁 宰葬灶早 在 再袁 在澡葬灶早 允袁 藻贼 葬造援 悦则燥泽泽鄄则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 燥枣
悦则赠员粤遭鄄泽藻造藻糟贼藻凿 粤泽蚤葬灶 糟燥则灶 遭燥则藻则 贼燥 燥贼澡藻则 悦则赠 贼燥曾蚤灶泽援 允燥怎则灶葬造
燥枣 粤责责造蚤藻凿 耘灶贼燥皂燥造燥早赠袁 圆园员园袁 员猿源渊缘冤院 源圆怨 原 源猿愿
咱怨暂 粤造糟葬灶贼葬则葬 耘袁 耘泽贼则葬凿葬 粤袁 粤造责怎藻则贼燥 灾袁 藻贼 葬造援 酝燥灶蚤贼燥则蚤灶早 悦则赠员粤遭
泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠 蚤灶 粤泽蚤葬灶 糟燥则灶 遭燥则藻则 渊蕴藻责蚤凿燥责贼藻则葬院 悦则葬皂遭蚤凿葬藻冤
燥灶 月贼 糟燥则灶 蚤灶 贼澡藻 孕澡蚤造蚤责责蚤灶藻泽援 悦则燥责 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 圆园员员袁 猿园渊缘冤院
缘缘源 原 缘缘怨
咱员园暂 酝葬灶赠葬灶早葬则蚤则憎葬 宰袁 栽怎则灶遭怎造造 酝袁 酝糟悦怎贼糟澡藻燥灶 郧袁 藻贼 葬造援 郧藻灶藻
责赠则葬皂蚤凿蚤灶早 葬泽 葬 月贼 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 皂葬灶葬早藻皂藻灶贼 泽贼则葬贼藻早赠院 澡燥憎 泽怎泽鄄
贼葬蚤灶葬遭造藻 蚤泽 贼澡蚤泽 泽贼则葬贼藻早赠钥 粤枣则蚤糟葬灶 允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁
圆园园远袁 缘渊员园冤院 苑愿员 原 苑愿缘
咱员员暂 杂贼燥则藻则 晕 孕袁 栽澡燥皂责泽燥灶 郧 阅袁 匀藻葬凿 郧 孕援 粤责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 责赠则葬皂蚤鄄
凿藻凿 贼则葬蚤贼泽 葬早葬蚤灶泽贼 蕴藻责蚤凿燥责贼藻则葬 蚤灶 蚤灶泽藻糟贼 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 皂葬灶葬早藻皂藻灶贼
枣燥则 月贼 糟则燥责泽援 郧酝 悦则燥责泽 葬灶凿 云燥燥凿院 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠 蚤灶 粤早则蚤糟怎造鄄
贼怎则藻 葬灶凿 贼澡藻 云燥燥凿 悦澡葬蚤灶袁 圆园员圆袁 猿渊猿冤院 员缘源 原 员远圆
咱员圆暂 再藻 郧 再袁 杂澡怎 匝 再袁 悦怎蚤 匀 砸袁 藻贼 葬造援 粤 造藻葬枣鄄泽藻糟贼蚤燥灶 遭蚤燥葬泽泽葬赠 枣燥则
藻增葬造怎葬贼蚤灶早 则蚤糟藻 泽贼藻皂 遭燥则藻则 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 蚤灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 则蚤糟藻 糟燥灶贼葬蚤鄄
灶蚤灶早 葬 泽赠灶贼澡藻贼蚤糟 糟则赠员粤遭 早藻灶藻 枣则燥皂 月葬糟蚤造造怎泽 贼澡怎则蚤灶早蚤藻灶泽蚤泽 月藻则鄄
造蚤灶藻则援 月怎造造藻贼蚤灶 燥枣 耘灶贼燥皂燥造燥早蚤糟葬造 砸藻泽藻葬则糟澡袁 圆园园园袁 怨园 渊圆冤院
员苑怨 原 员愿圆
咱员猿暂 悦澡藻灶 再袁 栽蚤葬灶 允 悦袁 杂澡藻灶 在 悦袁 藻贼 葬造援 栽则葬灶泽早藻灶蚤糟 则蚤糟藻 责造葬灶贼泽 藻曾鄄
责则藻泽泽蚤灶早 葬 枣怎泽藻凿 责则燥贼藻蚤灶 燥枣 悦则赠员粤遭 辕 灾蚤责猿匀 澡葬泽 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥
则蚤糟藻 泽贼藻皂 遭燥则藻则泽 怎灶凿藻则 造葬遭燥则葬贼燥则赠 葬灶凿 枣蚤藻造凿 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽援 允燥怎则灶葬造
燥枣 耘糟燥灶燥皂蚤糟 耘灶贼燥皂燥造燥早赠袁 圆园员园袁 员园猿渊源冤院 员源源源 原 员源缘猿
咱员源暂 宰蚤凿泽贼则燥皂 晕 宰援 粤灶 藻增葬造怎葬贼蚤燥灶 燥枣 皂藻贼澡燥凿泽 枣燥则 皂藻葬泽怎则蚤灶早 糟燥则灶
藻葬则憎燥则皂 蚤灶躁怎则赠援 允燥怎则灶葬造 燥枣 耘糟燥灶燥皂蚤糟 耘灶贼燥皂燥造燥早赠袁 员怨远苑袁 远园
渊猿冤院 苑怨员 原 苑怨源
咱员缘暂 粤则糟澡藻则 栽 蕴袁 杂糟澡怎泽贼藻则 郧袁 孕葬贼则蚤糟噪 悦袁 藻贼 葬造援 宰澡燥则造 葬灶凿 泽贼葬造噪
凿葬皂葬早藻 遭赠 耘怎则燥责藻葬灶 葬灶凿 泽燥怎贼澡憎藻泽贼藻则灶 糟燥则灶 遭燥则藻则泽 贼燥 枣燥怎则
藻增藻灶贼泽 燥枣 月葬糟蚤造造怎泽 贼澡怎则蚤灶早蚤藻灶泽蚤泽 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 皂葬蚤扎藻援 悦则燥责 孕则燥贼藻糟鄄
贼蚤燥灶袁 圆园园园袁 员怨渊猿冤院 员愿员 原 员怨园
咱员远暂 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 葬灶凿 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠 杂贼则葬贼藻早蚤藻泽 陨灶糟燥则责燥则葬贼藻凿援 圆园园员援
悦则燥责 凿葬贼葬遭葬泽藻袁 酝韵晕愿员园援 耘泽泽藻灶贼蚤葬造 月蚤燥泽葬枣藻贼赠援 澡贼贼责院 辕辕 糟藻则葬鄄
早皂糟援 燥则早 辕 蚤灶凿藻曾援 责澡责钥 葬糟贼蚤燥灶 越 早皂 赃 糟则燥责 赃 凿葬贼葬遭葬泽藻驭皂燥凿藻 越
杂澡燥憎孕则燥凿驭凿葬贼葬 越 酝韵晕愿员园
咱员苑暂 匀藻 运 蕴袁 宰葬灶早 在 再袁 宰藻灶 蕴 孕袁 藻贼 葬造援 阅藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 遭葬泽藻鄄
造蚤灶藻 泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠 贼燥 悦则赠员粤遭 责则燥贼藻蚤灶 枣燥则 粤泽蚤葬灶 糟燥则灶 遭燥则藻则
渊蕴藻责援 院 悦则葬皂遭蚤凿葬藻冤援 允燥怎则灶葬造 燥枣 粤责责造蚤藻凿 耘灶贼燥皂燥造燥早赠袁 圆园园缘袁
员圆怨渊愿冤院 源园苑 原 源员圆
咱员愿暂 运燥贼葬 酝袁 阅葬灶蚤藻造造 匀袁 灾葬则皂葬 杂袁 藻贼 葬造援 韵增藻则藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 贼澡藻
月葬糟蚤造造怎泽 贼澡怎则蚤灶早蚤藻灶泽蚤泽 渊 月贼冤 悦则赠圆粤葬圆 责则燥贼藻蚤灶 蚤灶 糟澡造燥则燥责造葬泽贼泽
糟燥灶枣藻则泽 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 责造葬灶贼泽 葬早葬蚤灶泽贼 泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 葬灶凿 月贼鄄则藻泽蚤泽贼葬灶贼
蚤灶泽藻糟贼泽援 孕则燥糟藻藻凿蚤灶早泽 燥枣 贼澡藻 晕葬贼蚤燥灶葬造 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁
哉杂粤袁 员怨怨怨袁 怨远渊缘冤院 员愿源园 原 员愿源缘
咱员怨暂 月则葬增燥 粤袁 杂燥遭藻则佼灶 酝援 匀燥憎 贼燥 糟燥责藻 憎蚤贼澡 蚤灶泽藻糟贼 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 月贼
贼燥曾蚤灶泽钥 栽则藻灶凿泽 蚤灶 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 圆园园愿袁 圆远渊员园冤院 缘苑猿 原 缘苑怨
咱圆园暂 郧燥怎枣枣燥灶 悦袁 增葬灶 灾造蚤藻贼 粤袁 增葬灶 砸蚤藻 允袁 藻贼 葬造援 月蚤灶凿蚤灶早 泽蚤贼藻泽 枣燥则
月葬糟蚤造造怎泽 贼澡怎则蚤灶早蚤藻灶泽蚤泽 悦则赠圆粤藻 贼燥曾蚤灶 燥灶 澡藻造蚤燥贼澡蚤灶藻 遭则怎泽澡 遭燥则凿藻则
皂藻皂遭则葬灶藻 增藻泽蚤糟造藻泽 葬则藻 灶燥贼 泽澡葬则藻凿 憎蚤贼澡 悦则赠员粤袁 悦则赠员云袁 燥则
灾蚤责猿粤 贼燥曾蚤灶援 粤责责造蚤藻凿 葬灶凿 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁 圆园员员袁
苑苑渊员园冤院 猿员愿圆 原 猿员愿愿
咱圆员暂 郧澡蚤皂蚤则藻 酝 晕袁 匀怎葬灶早 云袁 蕴藻燥灶葬则凿 砸袁 藻贼 葬造援 杂怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠 燥枣
悦则赠员粤遭鄄泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 葬灶凿 鄄则藻泽蚤泽贼葬灶贼 泽怎早葬则糟葬灶藻 遭燥则藻则 贼燥 贼则葬灶泽早藻灶鄄
蚤糟 糟燥则灶 责造葬灶贼泽 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 泽蚤灶早造藻 燥则 责赠则葬皂蚤凿藻凿 月葬糟蚤造造怎泽 贼澡怎则蚤灶早鄄
蚤藻灶泽蚤泽 早藻灶藻泽援 悦则燥责 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 圆园员员袁 猿园渊员冤院 苑源 原 愿员
咱圆圆暂 粤凿葬皂糟扎赠噪 允 允 允则袁 粤凿葬皂泽 蕴 悦袁 匀葬则凿藻藻 阅 阅援 云蚤藻造凿 藻枣枣蚤糟葬糟赠 葬灶凿
泽藻葬泽燥灶葬造 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责则燥枣蚤造藻泽 枣燥则 贼藻则皂蚤灶葬造 造藻葬增藻泽 燥枣 泽蚤灶早造藻 葬灶凿
凿燥怎遭造藻 月葬糟蚤造造怎泽 贼澡怎则蚤灶早蚤藻灶泽蚤泽 贼燥曾蚤灶 糟燥贼贼燥灶 早藻灶燥贼赠责藻泽援 允燥怎则灶葬造 燥枣
耘糟燥灶燥皂蚤糟 耘灶贼燥皂燥造燥早赠袁 圆园园员袁 怨源渊远冤院 员缘愿怨 原 员缘怨猿
咱圆猿暂 悦澡蚤贼噪燥憎泽噪蚤 砸 蕴袁 栽怎则灶蚤责泽藻藻凿 杂 郧袁 杂怎造造蚤增葬灶 酝 允袁 藻贼 葬造援 云蚤藻造凿
葬灶凿 造葬遭燥则葬贼燥则赠 藻增葬造怎葬贼蚤燥灶泽 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥贼贼燥灶泽 藻曾责则藻泽泽蚤灶早 燥灶藻
燥则 贼憎燥 月葬糟蚤造造怎泽 贼澡怎则蚤灶早蚤藻灶泽蚤泽 增葬则援 噪怎则泽贼葬噪蚤 月藻则造蚤灶藻则 责则燥贼藻蚤灶泽 枣燥则
皂葬灶葬早藻皂藻灶贼 燥枣 灶燥糟贼怎蚤凿 渊蕴藻责蚤凿燥责贼藻则葬冤 责藻泽贼泽援 允燥怎则灶葬造 燥枣 耘糟燥鄄
灶燥皂蚤糟 耘灶贼燥皂燥造燥早赠袁 圆园园猿袁 怨远渊猿冤院 苑缘缘 原 苑远圆
咱圆源暂 栽葬遭葬泽澡灶蚤噪 月 耘袁 阅藻灶灶藻澡赠 栽 允袁 杂蚤皂泽 酝 粤袁 藻贼 葬造援 悦燥灶贼则燥造 燥枣 则藻鄄
泽蚤泽贼葬灶贼 责蚤灶噪 遭燥造造憎燥则皂 渊孕藻糟贼蚤灶燥责澡燥则葬 早燥泽泽赠责蚤藻造造葬冤 遭赠 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟
糟燥贼贼燥灶 贼澡葬贼 责则燥凿怎糟藻泽 月葬糟蚤造造怎泽 贼澡怎则蚤灶早蚤藻灶泽蚤泽 贼燥曾蚤灶 悦则赠圆粤遭援
粤责责造蚤藻凿 葬灶凿 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁 圆园园圆袁 远愿 渊愿 冤院
猿苑怨园 原 猿苑怨源
咱圆缘暂 栽葬灶 杂 再袁 悦葬赠葬遭赠葬遭 月 云袁 粤造糟葬灶贼葬则葬 耘 孕袁 藻贼 葬造援 悦燥皂责葬则葬贼蚤增藻
泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠 燥枣 韵泽贼则蚤灶蚤葬 枣怎则灶葬糟葬造蚤泽袁 韵泽贼则蚤灶蚤葬 灶怎遭蚤造葬造蚤泽 葬灶凿 阅蚤鄄
葬贼则葬藻葬 泽葬糟糟澡葬则葬造蚤泽 渊 蕴藻责蚤凿燥责贼藻则葬院 悦则葬皂遭蚤凿葬藻 冤 贼燥 月葬糟蚤造造怎泽
贼澡怎则蚤灶早蚤藻灶泽蚤泽 悦则赠员 贼燥曾蚤灶泽援 悦则燥责 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 圆园员员袁 猿园 渊 怨 冤院
员员愿源 原 员员愿怨
渊责任编辑院谢小帆冤
源源猿 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷