全 文 ：竞争性特异等位基因 孕悦砸检测山东甜菜夜蛾
对高效氯氰菊酯的抗性
高摇 明摇 申瑞平摇 张摇 鹏摇 慕摇 卫鄢
渊山东农业大学植物保护学院袁 农药毒理及应用重点实验室袁 泰安 圆苑员园员愿冤
摘要院 为明确山东地区甜菜夜蛾对高效氯氰菊酯抗性水平袁采用竞争性特异等位基因 孕悦砸 方法袁
检测甜菜夜蛾钠离子通道基因片段上 蕴员园员源云 的突变频率遥 结果表明袁敏感种群个体中均未发现
突变个体曰田间章丘种群 怨圆豫个体具有 蕴员园员源云 突变袁其中 远源豫为 蕴员园员源云 突变纯合子袁圆愿豫为
蕴员园员源云突变杂合子遥 经高效氯氰菊酯汰选 缘 代后的抗性种群检测个体中均未发现敏感型纯合子遥
安丘种群的 蕴员园员源云突变等位基因频率最高袁为 愿缘豫 袁泰安尧滕州和滨州种群分别为 缘园豫 尧源猿援 猿猿豫
和 猿园豫 袁相关性分析表明甜菜夜蛾 蕴员园员源云 突变等位基因频率与对高效氯氰菊酯不敏感度呈线性
正相关渊再 越员援 员园远曾 垣园援 园苑怨袁砸圆 越 园援 怨猿冤遥
关键词院 甜菜夜蛾曰 钠离子通道曰 蕴员园员源云突变曰 高效氯氰菊酯曰 竞争性特异等位基因 孕悦砸
阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 遭藻贼葬鄄糟赠责藻则皂藻贼澡则蚤灶 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 蚤灶 杂澡葬灶凿燥灶早
责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽 燥枣 杂责燥凿燥责贼藻则葬 藻曾蚤早怎葬 遭赠 糟燥皂责藻贼蚤贼蚤增藻
孕悦砸 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 泽责藻糟蚤枣蚤糟 葬造造藻造藻
郧葬燥 酝蚤灶早摇 杂澡藻灶 砸怎蚤责蚤灶早摇 在澡葬灶早 孕藻灶早摇 酝怎 宰藻蚤鄢
渊运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 孕藻泽贼蚤糟蚤凿藻 栽燥曾蚤糟燥造燥早赠 葬灶凿 粤责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 栽藻糟澡灶蚤择怎藻袁 悦燥造造藻早藻 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁
杂澡葬灶凿燥灶早 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 栽葬蚤爷葬灶 圆苑员园员愿袁 杂澡葬灶凿燥灶早 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽燥 藻泽贼蚤皂葬贼藻 贼澡藻 遭藻贼葬鄄糟赠责藻则皂藻贼澡则蚤灶 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 造藻增藻造 燥枣 杂责燥凿燥责贼藻则葬 藻曾蚤早怎葬 蚤灶 杂澡葬灶凿燥灶早袁 贼澡藻 糟燥皂鄄
责藻贼蚤贼蚤增藻 孕悦砸 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 泽责藻糟蚤枣蚤糟 葬造造藻造藻 责则燥贼燥糟燥造 渊糟孕粤杂粤冤 憎葬泽 凿藻增藻造燥责藻凿 贼燥 凿藻贼藻糟贼 皂怎贼葬贼蚤燥灶 渊责澡藻灶赠造鄄
葬造葬灶蚤灶藻 贼燥 造藻怎糟蚤灶藻冤 葬贼 责燥泽蚤贼蚤燥灶 员园员源 燥枣 泽燥凿蚤怎皂 糟澡葬灶灶藻造 早藻灶藻援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼袁 灶燥灶藻 燥枣 贼澡藻 蚤灶凿蚤鄄
增蚤凿怎葬造泽 憎葬泽 枣燥怎灶凿 憎蚤贼澡 蕴员园员源云 皂怎贼葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 责燥责怎造葬贼蚤燥灶袁 葬灶凿 怨圆豫 蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽 枣则燥皂 贼澡藻
在澡葬灶早择蚤怎 责燥责怎造葬贼蚤燥灶 澡葬凿 蕴员园员源云 皂怎贼葬贼蚤燥灶 渊远源豫 澡燥皂燥扎赠早燥贼藻泽 葬灶凿 圆愿豫 澡藻贼藻则燥扎赠早燥贼藻泽冤 援 粤枣贼藻则 枣蚤增藻 早藻灶鄄
藻则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 泽藻造藻糟贼蚤燥灶 贼燥 遭藻贼葬鄄糟赠责藻则皂藻贼澡则蚤灶袁 圆缘 蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽 燥枣 贼澡藻 砸砸鄄糟赠责藻则皂藻贼澡则蚤灶 责燥责怎造葬贼蚤燥灶 澡葬凿 灶燥 憎蚤造凿鄄
贼赠责藻泽援 粤灶择蚤怎 责燥责怎造葬贼蚤燥灶 澡葬凿 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼 蕴员园员源云 葬造造藻造藻 枣则藻择怎藻灶糟赠 增葬造怎藻 燥枣 愿缘豫 袁 葬灶凿 贼澡藻 蕴员园员源云 葬造造藻造藻
枣则藻择怎藻灶糟赠 增葬造怎藻 燥枣 栽葬蚤爷 葬灶袁 栽藻灶早扎澡燥怎袁 葬灶凿 月蚤灶扎澡燥怎 责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽 憎藻则藻 缘园豫 袁 源猿援 猿猿豫 袁 葬灶凿 猿园豫 袁 则藻鄄
泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 燥遭贼葬蚤灶藻凿 遭赠 凿藻贼藻糟贼蚤灶早 蕴员园员源云 葬造造藻造藻 燥枣 枣蚤增藻 枣蚤藻造凿 责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻
蕴员园员源云 葬造造藻造藻 枣则藻择怎藻灶糟赠 憎葬泽 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 责燥泽蚤贼蚤增藻造赠 糟燥则则藻造葬贼藻凿 憎蚤贼澡 贼澡藻 蚤灶泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠 贼燥 遭藻贼葬鄄糟赠责藻则皂藻贼澡则蚤灶
渊再 越员援 员园远曾 垣园援 园苑怨袁 砸圆 越 园援 怨猿冤援
运藻赠 憎燥则凿泽院 杂责燥凿燥责贼藻则葬 藻曾蚤早怎葬曰 泽燥凿蚤怎皂 糟澡葬灶灶藻造曰 蕴员园员源云 皂怎贼葬贼蚤燥灶曰 遭藻贼葬鄄糟赠责藻则皂藻贼澡则蚤灶曰 糟燥皂责藻贼蚤增藻 孕悦砸
葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 泽责藻糟蚤枣蚤糟 葬造造藻造藻
基金项目院 公益性行业渊农业冤科研专项渊圆园园愿园猿园园苑冤
作者简介院 高明袁男袁员怨愿远年生袁硕士研究生袁研究方向为农药毒理与应用技术袁 耘鄄皂葬蚤造院 早皂蚤灶早圆园员园岳 员圆远援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 皂怎憎藻蚤岳 泽凿葬怎援 藻凿怎援 糟灶
收稿日期院 圆园员猿 原 园猿 原 员员
第 源园 卷摇 第 源 期
圆园员猿 年摇 愿 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源园摇 晕燥援 源
粤怎早援 摇 圆园员猿
摇 摇 甜菜夜蛾 杂责燥凿燥责贼藻则葬 藻曾蚤早怎葬 渊匀俟遭灶藻则冤 俗称白菜
褐夜蛾袁属鳞翅目夜蛾科袁是一种世界性农业害虫袁
其食性杂尧寄主范围广咱员暂 遥 目前袁田间防治主要依
赖化学药剂袁拟除虫菊酯类杀虫剂已广泛用于防治
鳞翅目害虫遥 但是袁由于频繁使用袁甜菜夜蛾对拟除
虫菊酯类药剂已表现出中尧高水平抗性咱圆暂 遥 昆虫对
拟除虫菊酯类杀虫剂产生抗性的主要机制是击倒抗
性渊噪灶燥糟噪凿燥憎灶 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻袁 运凿则冤袁即由作用靶标钠离
子通道的敏感性下降引起咱猿暂 遥 现已报道在家蝇
酝怎泽糟葬 凿燥皂藻泽贼蚤糟葬尧骚扰角蝇 匀藻皂葬贼燥遭蚤葬 蚤则则蚤贼葬灶泽尧小菜蛾
孕造怎贼藻造造葬 曾赠造燥泽贼藻造造葬尧 桃蚜 酝赠扎怎泽 责藻则泽蚤糟葬藻尧 冈比亚按蚊
粤灶燥责澡藻造藻泽 早葬皂遭蚤葬藻尧尖音库蚊 悦怎造藻曾 责蚤责蚤蚤藻灶泽尧马铃薯甲
虫 蕴藻责贼蚤灶燥贼葬则泽葬 凿藻糟藻皂造蚤灶藻葬贼葬和德国小蠊 月造葬贼贼藻造造葬 早藻则鄄
皂葬灶蚤糟葬等 愿 种昆虫上的击倒抗性产生与钠离子通
道 陨陨杂远 片段 员园员源 位点上的亮氨酸寅苯丙氨酸突变
渊蕴员园员源云冤有关咱源暂 遥
特异性等位基因 孕悦砸渊孕悦砸 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 泽责藻鄄
糟蚤枣蚤糟 葬造造藻造藻袁 孕粤杂粤冤是一种快速检测 阅晕粤 单个碱基
突变的方法袁又称为等位基因特异性扩增袁其原理是
利用 栽葬择酶缺乏 猿忆寅缘忆外切酶活性袁阻止了 孕悦砸 过
程不匹配的 阅晕粤模板与寡核苷酸引物 猿忆端的有效
延伸袁当目标等位基因迅速扩增时袁另一等位基因只
有少量扩增或几乎无扩增遥 这样就可以快速检测
阅晕粤单个碱基突变尧缺失或插入咱缘暂 遥 为提高扩增的
特异性和防止因 阅晕粤样本和 孕悦砸方面导致的假阴
性结果袁在澡怎 驭 悦造葬则噪咱远暂检测马铃薯甲虫乙酰胆碱酯
酶基因点突变时提出了改良的特异等位基因 孕悦砸
技术要要要竞争性特异等位基因 孕悦砸渊糟燥皂责藻贼蚤增藻 孕悦砸
葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 泽责藻糟蚤枣蚤糟 葬造造藻造藻袁糟孕粤杂粤冤袁在特异性等
位基因外部加入竞争性非特异等位基因引物袁该引
物与 阅晕粤模板完全配对袁比错配的等位基因特异性
引物更具竞争优势遥 与传统的生测方法相比袁特异
性等位基因可以鉴定出个体的基因型袁进行有效的
早期抗性监测袁且对试虫的虫龄尧虫态和虫量要求
较低遥
宫亚军等咱苑暂设计 孕粤杂粤方案检测了北京不同地
区桃蚜对高效氯氰菊酯的抗性水平遥 曹晓梅等咱愿暂
使用 糟孕粤杂粤方法检测了 愿 个家蝇野外种群的基因
型袁并发现 蕴员园员源云 等位基因频率与溴氰菊酯 蕴阅缘园
值有线性正相关关系遥 纠敏等咱怨暂发现 蕴员园员源云 突变
存在于田间甜菜夜蛾遥 虽然目前 糟孕粤杂粤 技术已应
用于多种农业尧卫生害虫的抗性研究袁但对甜菜夜蛾
的相关研究尚未见报道遥 本试验采用竞争性特异等
位基因 孕悦砸技术检测山东多地甜菜夜蛾 蕴员园员源云突
变频率袁以期明确甜菜夜蛾对高效氯氰菊酯的抗性
水平袁为甜菜夜蛾的抗性治理提供依据遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试昆虫院田间章丘种群于 圆园员员 年 员园 月采自
山东省济南章丘市大葱田袁浸叶法测定高效氯氰菊
酯对甜菜夜蛾的 蕴悦缘园为 怨园援 圆猿 皂早 辕 蕴袁在室内用高效
氯氰菊酯汰选 缘 代渊郧圆 耀 郧远 冤获得抗性种群渊砸砸鄄糟赠责藻则皂藻贼澡则蚤灶冤遥 滨州尧滕州尧安丘和泰安种群于 圆园员圆
年 怨尧员园 月分别采自山东省滨州尧滕州尧安丘和泰安
市遥 甜菜夜蛾敏感种群渊杂杂鄄宰匀冤引自武汉市蔬菜
科学研究所袁室内不接触药剂继代饲养多年遥 试虫
人工室内饲养参考慕卫等咱员园暂方法遥
供试植株院甘蓝袁品种夏光遥
杀虫剂院怨源豫高效氯氰菊酯渊遭藻贼葬鄄糟赠责藻则皂藻贼澡则蚤灶冤
原药袁江苏皇马农化有限公司曰二甲苯袁天津大茂化
学试剂厂曰农乳 缘园园裕尧农乳 远园园裕袁金陵石化公司化工
二厂遥
试剂院软体动物基因组 阅晕粤 提取试剂盒袁德国
月蚤燥皂藻贼则葬 公司曰耘杂 阅晕粤 聚合酶尧凿晕栽孕尧员园 伊 耘杂 栽葬择
遭怎枣枣藻则袁大连 栽葬运葬砸葬公司遥
仪器院台式离心机尧高速冷冻离心机袁上海安亭
科学仪器厂曰孕悦砸 仪袁德国 月蚤燥皂藻贼则葬 公司曰阅再再鄄圆悦
型电泳仪尧电泳凝胶成像系统袁北京六一仪器厂遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 生物测定
采用浸叶法测定高效氯氰菊酯对甜菜夜蛾幼虫
的毒力遥 取 源援 苑豫高效氯氰菊酯原药尧愿缘援 猿豫二甲
苯尧源豫农乳 缘园园裕尧远豫农乳 远园园裕配制成 源援 缘豫高效氯
氰菊酯乳油袁用清水稀释成系列浓度药液袁将新鲜尧
洁净的甘蓝叶片剪成直径 员援 缘 糟皂 圆叶盘于药液中
浸渍 员园 泽袁自然晾干后放入 圆源 孔板中袁接入 猿 龄甜
菜夜蛾幼虫袁以浸渍清水为对照遥 每处理重复 猿 次袁
每重复 圆源 头试虫遥 源愿 澡后检查死虫数袁每次的对照
死亡率在 员园豫以下袁为有效生测试验遥
抗性种群选育采用浸叶法袁从章丘种群第 圆 代
渊郧圆冤开始袁以高效氯氰菊酯杀死种群约 缘园豫 耀 苑园豫
的剂量处理甜菜夜蛾 猿 龄幼虫袁筛选处理的幼虫数
为 员缘园园 耀 圆园园园 头袁源愿 澡后将存活的幼虫作为下一代
的虫种继续用人工饲料饲养尧繁殖遥
源远猿 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
员援 圆援 圆 钠离子通道基因片段的克隆
引物设计院参照 阅晕粤 提取试剂盒的方法袁提取
甜菜夜蛾 猿 龄幼虫基因组 阅晕粤遥 根据甜菜夜蛾钠
离子通道 陨陨杂远 片段的 糟阅晕粤 序列咱怨暂 袁设计特异性上
游引物 孕员院缘忆鄄粤栽郧栽郧郧粤悦栽郧悦栽粤栽郧栽栽郧郧栽鄄忆猿 和下
游引物 孕圆院缘忆鄄悦栽郧栽栽郧粤粤郧郧悦悦栽悦栽郧悦栽粤栽鄄忆猿遥 反
应体系 圆缘 滋蕴袁含 阅晕粤 模板 园援 缘 滋蕴尧员园 滋皂燥造 辕 蕴 上下
游引物各 员 滋蕴尧缘园 哉 辕 滋蕴 耘杂 阅晕粤聚合酶 园援 圆 滋蕴尧圆援 缘
皂皂燥造 辕 蕴 凿晕栽孕 圆 滋蕴 尧员 园 伊 耘杂 栽葬择 遭怎枣枣藻则 渊 酝早悦造圆 冤圆援 缘 滋蕴尧凿凿 匀圆韵 员苑援 愿 滋蕴遥 扩增条件院怨缘 益预变性 缘皂蚤灶曰怨缘益变性 源缘 泽袁缘园益退火 源园 泽袁苑圆益延伸 源缘 泽袁猿园
个循环曰苑圆 益延伸 员园 皂蚤灶遥 孕悦砸 产物经基因纯化试
剂盒纯化后袁克隆于 责郧耘酝鄄栽 藻葬泽赠 增藻糟贼燥则袁送上海生
工生物工程技术服务有限公司测序遥
员援 圆援 猿 蕴员园员源云突变频率检测
根据测序结果袁设计 糟孕粤杂粤 方案遥 外引物 孕员尧
孕圆 同上遥 内引物 粤员院 缘忆鄄粤栽郧粤悦粤郧栽悦郧栽悦粤栽栽郧鄄
郧悦粤粤栽悦鄄忆猿 和 粤圆院缘忆鄄粤栽郧粤悦粤郧栽悦郧栽悦粤栽栽郧郧悦粤粤鄄
栽栽鄄忆猿遥 孕悦砸反应采用高保真 阅晕粤 聚合酶袁反应条
件如上遥 圆 个平行的 孕悦砸反应体系用于鉴定同一个
体基因型袁一个反应体系引物为 孕员尧孕圆尧粤员袁另一反
应体系引物为 孕员尧孕圆尧粤圆袁扩增的非特异性片段为
圆缘愿 遭责袁糟孕粤杂粤 检测的特异性片段约为 圆园园 遭责遥 监
测对象为单头甜菜夜蛾幼虫遥 只在 孕员尧孕圆尧粤员 引物
组合检测才出现特异性片段的为敏感纯合子曰只在
孕员尧孕圆尧粤圆 引物组合检测才出现特异性片段的为
蕴员园员源云突变纯合子曰在 孕员尧孕圆尧粤员 和 孕员尧孕圆尧粤圆 引
物组合均能检测到特异性片段的为 蕴员园员源云 突变杂
合子遥 孕悦砸产物在 圆豫琼脂糖凝胶中电泳袁耘月 染色
检测遥
员援 猿 数据分析
粤遭遭燥贼贼公式校正各处理死亡率袁用 杂孕杂杂数据处
理软件计算 蕴悦缘园值尧回归曲线斜率尧怨缘豫置信区间和
相关系数遥 校正死亡率渊豫 冤 越 渊处理组死亡率 原对
照组死亡率冤 辕 渊员 原对照组死亡率冤 伊 员园园曰敏感等位
基因频率渊豫 冤 越 渊敏感纯合子个体数 伊 圆 垣抗性杂
合子个体数冤 衣 圆 衣总个体数 伊 员园园曰蕴员园员源云 突变等
位基因频率渊豫 冤 越 渊抗性纯合子个体数 伊 圆 垣抗性
杂合子个体数冤 衣 圆 衣总个体数 伊员园园遥
圆 结果与分析
圆援 员 抗性汰选
与田间章丘种群渊在匝冤相比袁高效氯氰菊酯对敏
感种群 蕴悦缘园值为 园援 远缘 皂早 辕 蕴袁明显低于章丘种群袁表
明敏感种群对高效氯氰菊酯有较高的敏感性遥 章丘
种群经 缘 代筛选后袁抗性水平显著提高遥 抗性增长
呈现出先慢后快的趋势袁郧圆 耀 郧源 代抗性增长缓慢袁
仅增长了 源猿援 苑圆 倍袁郧缘尧郧远 代抗性增长较快袁郧远 代
抗性倍数为 猿圆愿援 愿远袁是初始田间种群 郧员 的 圆援 猿苑 倍渊表 员冤遥
表 员 甜菜夜蛾不同种群对高效氯氰菊酯的敏感性
栽葬遭造藻 员 杂藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠 贼藻泽贼 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽 燥枣 杂责燥凿燥责贼藻则葬 藻曾蚤早怎葬 葬早葬蚤灶泽贼 遭藻贼葬鄄糟赠责藻则皂藻贼澡则蚤灶
种群摇
孕燥责怎造葬贼蚤燥灶摇
蕴悦缘园渊皂早 辕 蕴冤
渊怨缘豫 悦蕴冤
斜率
杂造燥责藻
相关系数
砸
抗性倍数
砸藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 则葬贼蚤燥
敏感种群 杂杂鄄宰匀 园援 远缘渊园援 员怨 耀 圆援 圆园冤 园援 缘源 园援 怨苑远远 要
章丘种群 在匝 怨园援 圆猿渊苑缘援 源源 耀 怨缘援 愿苑冤 员援 苑愿 园援 怨远愿缘 员猿愿援 愿园
郧圆 员园猿援 缘园渊愿怨援 缘缘 耀 员员源援 怨圆冤 员援 苑缘 园援 怨苑苑圆 员缘怨援 圆猿郧猿 员员缘援 远源渊员园圆援 猿源 耀 员圆远援 源苑冤 员援 愿怨 园援 怨愿缘缘 员苑苑援 怨员郧源 员员愿援 远源渊员园苑援 员源 耀 员猿圆援 圆圆冤 圆援 员员 园援 怨远猿愿 员愿圆援 缘圆郧缘 员远员援 缘缘渊员猿远援 缘圆 耀 员愿园援 苑远冤 圆援 园远 园援 怨苑源远 圆源愿援 缘源
抗性种群渊郧远冤 圆员猿援 苑远渊员远愿援 远缘 耀 圆猿园援 缘缘冤 圆援 猿圆 园援 怨愿源缘 猿圆愿援 愿远
砸砸鄄糟赠责藻则皂藻贼澡则蚤灶
摇 摇 抗性倍数 越抗性种群的 蕴悦缘园 辕敏感种群的 蕴悦缘园遥 砸藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 则葬贼蚤燥 越 蕴悦缘园 燥枣 贼澡藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽 辕 蕴悦缘园 燥枣 贼澡藻 泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 责燥责怎造葬鄄
贼蚤燥灶泽援
圆援 圆 钠离子通道基因 陨陨杂远 序列
以敏感种群尧抗性种群为样本袁提取 猿 龄幼虫基
因组 阅晕粤袁经克隆测序分析获得大小为 圆缘愿 遭责 钠离
子通道 陨陨杂远 片段袁比对甜菜夜蛾钠离子通道 糟阅晕粤
序列袁推导编码氨基酸 远员 个袁含 员 个大小为 苑猿 遭责的
内含子遥 通过对敏感和抗性种群碱基序列比较分
析袁发现 员园员源 位点存在亮氨酸渊悦栽栽冤寅苯丙氨酸
渊栽栽栽冤的突变渊图 员冤遥
缘远猿源 期 高摇 明等院竞争性特异等位基因 孕悦砸检测山东甜菜夜蛾对高效氯氰菊酯的抗性
图 员 甜菜夜蛾敏感种群钠离子通道 陨陨杂远 片段碱基序列和氨基酸序列
云蚤早援 员 晕怎糟造藻燥贼蚤凿藻 葬灶凿 凿藻凿怎糟藻凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 贼澡藻 凿燥皂葬蚤灶 陨陨杂远 燥枣 贼澡藻 杂责燥凿燥责贼藻则葬 藻曾蚤早怎葬
泽燥凿蚤怎皂 糟澡葬灶灶藻造 枣则燥皂 杂杂鄄宰匀 责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽
摇 摇 方框内为 员园员源位点遥 栽澡藻 皂怎贼葬贼蚤燥灶 蚤泽 葬贼 责燥泽蚤贼蚤燥灶 员园员源 渊遭燥曾冤援
摇 摇 竞争性特异等位基因 孕悦砸 方法可较好地区分
甜菜夜蛾 猿 种基因型院蕴员园员源云 突变纯合子渊砸砸冤尧
蕴员园员源云突变杂合子渊砸杂冤和敏感纯合子渊杂杂冤袁扩增
的 圆缘愿 遭责 和 圆园园 遭责 条带清晰尧易辨别尧无杂带渊图
圆冤遥 检测结果表明院敏感种群仅存在敏感纯合子曰
章丘种群有 怨圆豫个体具有 蕴员园员源云 突变袁其中 远源豫
突变纯合子尧圆愿豫突变杂合子和 愿豫敏感纯合子曰抗
性种群有 愿源豫突变纯合子尧员远豫突变杂合子袁未检
出敏感纯合子遥 章丘种群经高效氯氰菊酯筛选 缘 代
后袁突变纯合子由 远源豫提高到 愿源豫 袁突变杂合子由
圆愿豫减少到 员远豫 袁敏感纯合子未减少遥 这表明甜菜
夜蛾钠离子通道 陨陨杂远 上 员园员源 位点亮氨酸寅苯并氨
酸的突变与高效氯氰菊酯抗性密切相关遥
图 圆 糟孕粤杂粤检测甜菜夜蛾的 猿 种不同 蕴员园员源云突变基因型
云蚤早援 圆 栽澡则藻藻 早藻灶燥贼赠责藻泽 燥枣 杂责燥凿燥责贼藻则葬 藻曾蚤早怎葬 葬糟则糟燥则凿蚤灶早 憎藻则藻 凿藻贼藻则皂蚤灶藻凿 贼燥 糟孕粤杂粤 凿蚤葬早灶燥泽贼蚤糟 贼藻泽贼 责则燥糟藻凿怎则藻 葬灶凿 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶
摇 摇 粤员院敏感等位基因特异性内引物曰粤圆院蕴员园员源云突变特异性内引物遥 圆缘愿 遭责为非特异性外引物扩增带袁圆园园 遭责为特异性内引物扩增
带遥 酝院阅晕粤 皂葬则噪藻则遥 粤员院 杂怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 葬造造藻造藻鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟 责则蚤皂藻则曰 粤圆院 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 葬造造藻造藻鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟 责则蚤皂藻则援 月葬灶凿 圆缘愿 遭责 憎葬泽 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 遭赠 灶燥灶鄄葬造造藻造藻鄄
泽责藻糟蚤枣蚤糟 责则蚤皂藻则曰 遭葬灶凿 圆园园 遭责 憎葬泽 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 遭赠 葬造造藻造藻鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟 责则蚤皂藻则援 酝院 阅晕粤 皂葬则噪藻则援
圆援 猿 蕴员园员源云突变频率及高效氯氰菊酯毒力
滨州种群的敏感性最高袁敏感等位基因频率为
苑园豫 袁蕴悦缘园为 源园援 源缘 皂早 辕 蕴遥 滕州和泰安种群敏感性
次之袁蕴员园员源云突变等位基因频率和敏感等位基因频
率接近缘园豫 遥章丘尧安丘种群的蕴员园员源云突变频率
较高袁蕴员园员源云突变等位基因频率分别为 苑愿援 猿猿豫 尧
愿缘豫 袁与敏感种群相比袁抗性倍数分别为 员猿愿援 愿圆 倍
和 员源远援 愿圆 倍渊表 圆袁猿冤遥 回归分析表明袁蕴员园员源云 突
变频率与高效氯氰菊酯的蕴悦缘园成线性关系再 越
员援 员园远曾 垣园援 园苑怨袁砸圆 越 园援 怨猿遥
远远猿 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
表 圆 不同地区田间甜菜夜蛾种群 蕴员园员源云突变频率
栽葬遭造藻 圆 蕴员园员源云鄄葬造造藻造藻 枣则藻择怎藻灶糟蚤藻泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 杂责燥凿燥责贼藻则葬 藻曾蚤早怎葬 责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽
田间种群摇
孕燥责怎造葬贼蚤燥灶摇
总虫数
栽燥贼葬造
敏感等位
基因频率渊豫 冤
杂怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 葬造造藻造藻
蕴员园员源云突变等位
基因频率渊豫 冤
砸藻泽蚤泽贼葬灶贼 葬造造藻造藻
蕴员园员源云
纯合子渊砸砸冤
匀燥皂燥扎赠早燥贼藻
蕴员园员源云
杂合子渊砸杂冤
匀藻贼藻则燥扎赠早燥贼藻
敏感
纯合子渊杂杂冤
宰蚤造凿 贼赠责藻
滨州种群 月在 猿园 苑园援 园园 猿园援 园园 源 员园 员远
滕州种群 栽在 猿园 缘远援 远苑 源猿援 猿猿 苑 员圆 员员
泰安种群 栽粤 猿园 缘园援 园园 缘园援 园园 员员 愿 员员
章丘种群 在匝 猿园 圆圆援 远苑 苑愿援 猿猿 圆园 苑 猿
安丘种群 粤匝 猿园 员缘援 园园 愿缘援 园园 圆圆 苑 员
表 猿 高效氯氰菊酯对不同地区甜菜夜蛾的毒力
栽葬遭造藻 猿 杂藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠 贼藻泽贼 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 杂责燥凿燥责贼藻则葬 藻曾蚤早怎葬 责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽 葬早葬蚤灶泽贼 遭藻贼葬鄄糟赠责藻则皂藻贼澡则蚤灶
田间种群摇
孕燥责怎造葬贼蚤燥灶摇
蕴悦缘园渊皂早 辕 蕴冤
渊怨缘豫 悦蕴冤
斜率
杂造燥责藻
相关系数
砸
抗性倍数
砸藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 则葬贼蚤燥
滨州种群 月在 源园援 源缘渊圆愿援 缘愿 耀 源远援 愿源冤 员援 怨缘 园援 怨远猿源 远圆援 圆猿
滕州种群 栽在 源苑援 愿远渊源员援 怨圆 耀 缘远援 愿怨冤 圆援 员员 园援 怨愿苑苑 苑猿援 远猿
泰安种群 栽粤 源猿援 苑圆渊猿远援 猿愿 耀 缘园援 圆圆冤 员援 苑愿 园援 怨远源源 远苑援 圆远
章丘种群 在匝 怨园援 圆猿渊苑缘援 源源 耀 怨缘援 愿苑冤 圆援 园猿 园援 怨远愿缘 员猿愿援 愿圆
安丘种群 粤匝 怨缘援 源猿渊愿苑援 远缘 耀 员员猿援 苑远冤 圆援 缘远 园援 怨源源缘 员源远援 愿圆
猿 讨论
钠离子通道氨基酸突变是拟除虫菊酯类杀虫剂
产生抗药性的主要机制遥 这些突变常发生在钠离子
通道同源结构域域和芋袁在结构域玉也有分布袁而在
结构域郁尚未发现遥 钠离子通道 陨陨杂远 上的 员园员源 位
点亮氨酸寅苯并氨酸突变渊蕴员园员源云冤是最常见的突
变袁同时该位点也存在其它氨基酸的突变咱源暂 遥 宰蚤造鄄
造蚤葬皂泽燥灶等咱员员暂和 砸葬灶泽燥灶等咱员圆暂发现尖音库蚊尧冈比亚
按蚊存在亮氨酸寅丝氨酸突变渊蕴员园员源杂冤遥 此外袁
孕葬则噪等咱员猿暂报道了在烟蚜夜蛾中存在亮氨酸寅组氨
酸突变渊蕴员园员源匀冤遥 这表明该位点的突变有一定的
多态性袁即由亮氨酸寅多种氨基酸的突变遥 本研究
发现袁甜菜夜蛾对高效氯氰菊酯抗性产生与 蕴员园员源云
突变有关遥 明确害虫对药剂的抗性靶标机制是制定
相应特异等位基因 孕悦砸 检测方案的前提遥 钠离子
通道突变产生的抗性分击倒抗性和超击倒抗性袁通
常击倒抗性与 蕴员园员源云 突变有关袁超击倒抗性与
蕴员园员源云突变和其它位点的突变有关咱猿暂 遥 宰蚤造造蚤葬皂泽燥灶
等咱员员暂报道了高水平抗性家蝇种群中存在 酝怨员愿栽 和
蕴员园员源云突变曰而 杂糟澡怎造藻则等咱员源暂发现小菜蛾的超击倒
抗性与 栽怨圆怨陨和 蕴员园员源云突变有关遥 目前袁甜菜夜蛾
钠离子通道全长尚不清楚袁且对拟除虫菊酯抗性靶
标机制研究较少袁还有待进一步研究遥
拟除虫菊酯类杀虫剂杀虫谱广尧高效尧低毒袁广
泛用于农业和卫生害虫防治袁但随着该类药剂的长
期使用袁抗药性不断增加遥 吴世昌等咱员缘暂监测上海地
区甜菜夜蛾的抗药性袁发现其对氯氰菊酯尧溴氰菊酯
和氰戊菊酯均产生高水平抗性遥 在澡燥怎 等咱员远暂报道了
山东多地甜菜夜蛾对高效氯氰菊酯产生了 怨缘援 猿员 耀
员园怨缘援 猿员 倍的抗性遥 本试验结果表明袁田间甜菜夜
蛾对高效氯氰菊酯的抗性较高尧敏感个体较少袁这不
利于敏感性恢复遥 与室内敏感种群相比袁田间种群
对高效氯氰菊酯敏感性明显下降袁其中 蕴员园员源云 突
变频率最低的滨州种群突变率也达到 猿园豫 袁抗性明
显的章丘尧安丘种群 远园 个个体中仅发现 源 个敏感纯
合子遥 因此应限制拟除虫菊酯类药剂在甜菜夜蛾上
使用袁并选用与该类药剂无交互抗性的杀虫剂遥
常规甜菜夜蛾抗性监测是以药剂对种群的毒力
测定结果为依据袁如浸叶法尧浸虫法尧点滴法尧夹毒叶
片法等遥 这些方法对试虫标准要求高尧工作量大袁易
受操作过程中诸多不确定因素的影响遥 特异性等位
基因 孕悦砸可通过快速检测点突变判断个体基因型袁
根据与抗性相关的突变频率反映抗性水平遥 特异性
等位基因 孕悦砸的使用需首先明确害虫的抗性靶标机
制袁这在一定程度上限制了该技术的使用袁但随着害
虫抗性机制研究的不断深入和检测技术的不断进步尧
完善袁该技术将更广泛地应用于昆虫的抗药性检测遥
苑远猿源 期 高摇 明等院竞争性特异等位基因 孕悦砸检测山东甜菜夜蛾对高效氯氰菊酯的抗性
参 考 文 献渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 王开运袁姜兴印袁仪美琴袁等援 甜菜夜蛾抗药性及其机理援 植
物保护学报袁圆园园圆袁圆怨渊猿冤院圆圆怨 原 圆猿源
咱圆暂 陈丙坤袁王开运袁姜兴印袁等援 甜菜夜蛾的抗药性调查与研
究援 植物保护学报袁圆园园圆袁圆怨渊源冤院猿远苑 原 猿苑圆
咱猿暂 王建军袁韩召军袁王荫长援 击倒抗性和钠离子通道援 昆虫学
报袁圆园园圆袁源缘渊猿冤院猿怨员 原 猿怨远
咱源暂 唐振华袁袁建忠袁庄佩君袁等援 昆虫钠通道的结构和与击倒抗
性有关的基因突变援 昆虫学报袁圆园园源袁源苑渊远冤院愿猿园 原 愿猿远
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咱苑暂 宫亚军袁王泽华袁石宝才袁等援 北京地区不同桃蚜种群的抗药
性研究援 中国农业科学袁 圆园员员袁源源 渊圆员冤院源猿愿缘 原 源猿怨源
咱愿暂 曹晓梅袁宋峰林袁赵彤言袁等援 运凿则等位基因频率与家蝇对溴
氰菊酯抗性的关系援 寄生虫与医学昆虫学报袁 圆园园源袁员员渊源冤院
圆圆猿 原 圆圆远
咱怨暂 纠敏袁安世恒袁张国彦袁 等援 甜菜夜蛾渊杂责燥凿燥责贼藻则葬 藻曾蚤早怎葬冤自
然种群与抗拟除虫菊酯有关的 蕴员园员源云突变的发现援 河南农
业大学学报袁圆园园圆袁猿远渊圆冤院员园苑 原 员员圆
咱员园暂 慕卫袁吴孔明袁张永军袁 等援 甜菜夜蛾的人工饲养技术援 棉
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咱员缘暂 吴世昌袁顾言真袁沈晋良袁等援 甜菜夜蛾的抗药性监测及防
治援 植物保护学报袁员怨怨缘袁圆圆渊员冤院怨缘 原 怨远
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渊责任编辑院吴竟一冤
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