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LIUAiling,LIUYali,LOUQian,ZHANGHaiqin
(StateKeyLaboratoryofCropStressBiologyinAridAreas,MinistryofAgricultureKeyLaboratoryofHorticulturalPlantBiol
ogyandGermplasmInnovationinNorthwestChina,Colegeofforestry,Yangling,Shaanxi712100,China)
犃犫狊狋狉犪犮狋:Toobtainbluish犔犻犾犻狌犿spp.indirectbreeding,wescreenedthesuitablevarietyOTlilyRobina
forgenetictransformation.Here,bothembryoniccalusinducedfromfilamentandregeneratedbulbscales
ofOTlilyRobinawereusedasthetransformationmaterial.犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿mediatedtransformationof
犘犺犪犾犪犲狀狅狆狊犻狊犉3′5′犎 wasstudied.Theresultsshowed:withthepreculture3d,OD600=0.8,infection
time10min,coculturedfor3d,100μmol/Lacetosyringoneconditions,thestabletransformationrateof
regeneratedbulbscalescouldreachtothehighest12.78%;however,embryogeniccaluspreculture2d,
OD600=0.8,infectiontime10min,cocultured3d,with100μmol/Lacetosyringoneconditions,which
thestabletransformationratewasthehighest12.22%.Inaltheconditions,thebesthygromycinresist
antscreeningconcentrationsalwayswas20mg/L.PCRandreversetranscriptionPCRassayshowed9pu
tativetransgenicplantswereobtained.Southernhybridizationanalysisfurtherproved6plantsthatthe
transgenicliliumflowerscarrybluegene犉3′5′犎.Theresultsprovidedtechnicalsupportandmaterialbasis
forthecontinuingdevelopmentofnovelbluish犔犻犾犻狌犿flowers.
犓犲狔狑狅狉犱狊:犉3′5′犎;lilyRobina;embryoniccalus;bulbscales;genetictransformation
OTÌBrs Robina(犔犻犾犻狌犿狋犲狀狌犻犳狅犾犻狌犿o
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phosphotransferasegene
Fig.1 TDNAschematicdiagramofplasmidp1300pPZPF3′5′HDFR
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1.5mg·L-1NAA+30g·L-1+3g·L-1#
$+200mg·L-1carb+(0、5、10、15、20、25)
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Table1 Primersequencesusedinthisresearch
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Primername
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犇犉犚R TCTAGACTAGCGCGAAGCAATGTGAACC
犎犘犜ⅡF TACACAGCCATCGGTCCAGA
犎犘犜ⅡR CGCAAGGAATCGGTCAATACAC
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Fig.2 Stabletransformationrateoflilyembryonic
calusandbulbscaleindifferentpreculturetime
±3 ¥¡¢K´rs§l
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Fig.3 Stabletransformationrateoflilyembryonic
calusandbulbscaleindifferentcoculturetime
±4 AS±²´rs§l
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Fig.4 Stabletransformationrateoflily
embryoniccalusandbulbscaleindifferent
acetosyringoneconcentration
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´PCR»¼noEøÇE15rs*·
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Table2 Thesensitivitiesofregeneratedbulbletsandembryoniccalusfromlilytohygromycin
¬®±²
Concentrationof
hygromycin/(mg·L-1)
8Regeneratedbulblets Embryoniccalus
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No.ofexplants
]ld?¨
Frequencyof
adventitiousbuds/%
{#z,
No.ofexplants
]ld?¨
Frequencyof
adventitiousbuds/%
0 60 88.89±2.48a 50 91.33±2.33a
5 60 73.89±1.91b 50 75.33±5.14b
10 60 43.89±3.52c 50 44.67±3.09c
15 60 5.56±2.49d 50 8.00±1.98d
20 60 1.67±1.74de 50 0.67±1.12de
25 60 0±0.00e 50 0±0.00e
Ê:,2º3ÅZ+]E“³±¯”;¼&,2ȯ]¼Iä2犘=0.05ñ¢[。
Note:Datainthetableare“average±standarderror”ofthererepeattests.Datainthesamecolumnwithdifferentlowercaselettershave
significantdifferencesat犘=0.05level.
A.犉3′5′犎;B.犇犉犚;C.犎犘犜Ⅱ;M.Marker;
P.d¾´(;WT.F#;1~9.,v#
±5 rs¬®µ#E犉3′5′犎、犇犉犚犎犘犜Ⅱ
,vEPCR»¼
A.犉3’5’犎;B.犇犉犚;C.犎犘犜Ⅱ;M.Marker;P.Positive
control;WT.Nontransformed;19.Transformedplantlets
Fig.5 PCRdetectionoftransformedplantletsforpresence
of犉3′5′犎gene,DFRgeneand犎犘犜Ⅱgene
2.5 89rs>犛狅狌狋犺犲狉狀xyHz
jk·ÃÄ»¼E,vÍÇrs,
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M.Marker;P.d¾´(;WT.F#;1~15.,v#
±6 rs¬®µ#E犉3′5′犎 ,vERTPCR»¼
M.Marker;P.Positivecontrol;WT.Nontransformed;
115.Transformedplantlets
Fig.6 RTPCRdetectionoftransformedplantlets
forpresenceof犉3′5′犎gene
N.F#(´ ();1~9.RTPCR¾¬®µ#
±7 ¬®µ#ESouthernblotÀÁ?Â
N.Nontransformedplants(comparison);1-9.RTPCR
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,v犚狅狊犲犪1;20140®¯[20]dH°±r
sm£k犔犳犕犃犇犛1,v;20140²
[21]
d³´rsm£k犌狊犣犉犘1,v。
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犎 E,vrs,jÈÉnopqErs|/·k
TO¸¹$d,Ë
。
!J
:
[1] QIYY,DULJ,QUANYH,犲狋犪犾.犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿mediated
transformationofembryogeniccelsuspensionculturesandplant
regenerationin犔犻犾犻狌犿狋犲狀狌犻犳狅犾犻狌犿 oriental×trumpet‘Robina’
[J].犃犮狋犪犘犺狔狊犻狅犾.犘犾犪狀狋.2014,36(8):20472057.
[2] ¤¥¦.rszÌÍE~O«¾¿¡¢E67[D].g!h
º
:
!"S>+TU%
,2013.
[3] »¼,꽩,¾¿¯,.ÀÙrsEµ?8{Á¯ÂS
[J].S%F&,2005,21(3):240242.
ZHANGSJ,ZHOU HG,犲狋犪犾.Preliminarystudiesonthe
physiologyofheattolerancein犔犻犾犻狌犿犾狅狀犵犻犳犾狅狉狌犿 [J].犆犺犻
狀犲狊犲犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲犅狌犾犾犲狋犻狀,2005,21(3):240242.
[4] Ã Ø.pq|lmqr,vE?N«{-?Â[D]."
Ä
:
"Ä>_U%
,2006.
[5] FILIPPABRUGLIERA,TAOGQ,URSULATEMS,犲狋犪犾.
Violet/bluechrysanthemumsmetabolicengineeringofthean
thocyaninbiosyntheticpathwayresultsinnovelpetalcolors
[J].犘犾犪狀狋犆犲犾犾犘犺狔狊犻狅犾.2013,54(10):16961710.
[6] TANAK Y,BRUGLIERA F.Flowercolour[C].//Ain
sworth,Blackwel,Floweringanditsmanipulation.Oxford.
2006:201239.
[7] ÅÆ`.xB@$#$pq|»q,vE£!]Ç[D].g
!hi
:
!"S>+TU%
,2013.
[8] È,.JK,ÅÆ`,.yqqz?°®«÷p
q,vErsáB
[J].S%F&,2010,26(20):5256.
ZHANGP,LIUYL,QIYY,犲狋犪犾.TheSelectionoflilycul
tivarssuitableforbeingtransformedbluegenesbyusingthe
greycorrelationanalysis[J].犆犺犻狀犲狊犲犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲
犅狌犾犾犲狋犻狀,2010,26(20):5256.
[9] É Ê。SVir,v~Ov@67·Ë[J].8$Z
þÌÌ
,2011,31(7):126132.
ZOUZ.Advancesonfactorsinfluencinginductionof犃犵狉狅犫犪犮
狋犲狉犻狌犿狋狌犿犲犳犪犮犻犲狀狊virulencegenes[J].犆犺犻狀犪犅犻狅狋犲犮犺狀狅犾狅犵狔,
2011,31(7):126132.
[10] LEOS.MELCHERS,DAVEV.THOMPSON,KENB.
IDER,犲狋犪犾.Molecularcharacterizationofthevirulencegene
virAofthe犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿tumefaciensoctopineTiplasmid
[J].犘犾犪狀狋犕狅犾犲犮狌犾犪狉犅犻狅犾狅犵狔,1988,11(2):227237.
[11] LIUXH,GUJH,JWANGJM,犲狋犪犾.Lilybreedingbyu
singmoleculartoolsandtransformationsystems[J].犕狅犾犲犮
狌犾犪狉犅犻狅犾狅犵狔犚犲狆狅狉狋狊,2014,41(10):68996908.
[12] COHEN A,CAROLE A,MEREDITH P.犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿
mediatedtransformationof犔犻犾犻狌犿 [J].犃犮狋犪犎狅狉狋犻犮狌犾狋狌狉犪犲,
1992,325(86):611618.
[13] ,® Í,ÎèÏ.LA¿&rs|¡¡ TO
67
[J].!"#$%&,2014,34(9):18941899.
ZHANGJ,LIY,SUN H M.Floralorganstissueculture
propagationtechnologyof犔犻犾犻狌犿犾狅狀犵犻犳犾狅狉狌犿×犔.犪狊犻犪狋犻犮
Hybrid‘Eyeliner’[J].犃犮狋犪犅狅狋.犅狅狉犲犪犾.犗犮犮犻犱犲狀狋.犛犻狀.,
2014,34(9):18941899.
[14] ÐØÑ,Ò<Ó,h®Ø,.rsQRz¿67·Ë[J].
ßÔS_+%
,2008,36(1):127133.
WANGLN,LIAOHR,YANGSL,犲狋犪犾.Researchpro
gressongenetictransformationsysteminlily[J].犌狌犻狕犺狅狌
犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊,2008,36(1):127133.
[15] MERCURIA,DE BENEDETTIL,BRUNA S,犲狋犪犾.
犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿MediatedtransformationwithRolgenesof
犔犻犾犻狌犿犾狅狀犵犻犳犾狅狉狌犿 Thunb[C]//XXIInternationaleucarpia
symposiumonclassicalversusmolecularbreedingoforna
mentalsPartI.[S.1]:[s.n.].2003:129136.
[16] PSCHOUREY,DBZURAWSKI.Calusformationfrompro
toplastsofamaizecelculture[J].犜犺犲狅狉.犃狆狆犾.犌犲狀犲狋,
1981,59(2):341344.
[17] ATRIBULATO,PCREMOTTI,LOFFLERHJM.Oc
currenceofembryolikestructuresandplantregeneration
fromacelsuspensionof犔犾犻犾犻狌犿犾狅狀犵犻犳犾狅狉狌犿 [J].犃犮狋犪
犎狅狉狋犻犮.,1997,447(1):205206.
[18] ÕÖ×,Øv,ÙÚÛ,.s
¡¢QRE67
·Ë
[J].!"#$%&,2006,26(4):858863.
DICX,ZHANGMX,XIEZK,犲狋犪犾.Researchadvances
inlilytissuecultureandgenetictransformation[J].犃犮狋犪
犅狅狋.犅狅狉犲犪犾.犗犮犮犻犱犲狀狋.犛犻狀,2006,26(4):858863.
[19] © ª,Ü Ý,Þß×.|b®smó,v犚狅狊犲犪1Î
Crs«¬E67
[J].àÎS_+%,2012,10(3):1022.
YUANL,WEIC,JIA GX.Studyontransformotionof
犔犻犾犻狌犿狅狉犲狀狋犻犪犾Sorbonnewithananthocyaninregulatory
gene犚狅狊犲犪1[J].犌狌犪狀犵犱狅狀犵犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 ,2012,
10(3):1022.
[20] ®¯,. b,.b>.犔犳犕犃犇犛1,v´H°±rs‘Raizen
No.1’EQR[J].8$TOF&,2014,26(3):8693.
LIYH,LIUQ,LIUQL.Studyongenetictransformation
of犔犳犕犃犇犛1geneinto犔犻犾犻狌犿 ×犳狅狉犿狅狊犪狀狌犿 ‘RaizenNo.
1’[J].犅犻狅狋犲犮犺狀狅犾狅犵狔犅狌犾犾犲狋犻狀,2014,26(3):8693.
[21] ²,á x,.SO³´rsz¿E°â«
犌狊犣犉犘1,v67[J].8$TOF&,2014,26(2):9196.
ZHANGH,ZHENGJ,犲狋犪犾.Stablishmentof犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻
狌犿mediatedAsiaticLily‘Cedeazzle’transformationsystem
andtransferof犌狊犣犉犘1genes[J].犅犻狅狋犲犮犺狀狅犾狅犵狔犅狌犾犾犲狋犻狀,
2014,26(2):9196.
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犘犾犪狋犲Ⅰ Productionoflilyembryoniccalusandbulbscalesandthetransformationintoseedling
a.Preculturedexplantsbrowning;b.Filamentsproduceembryogeniccalus;c.Embryogeniccalus;d.Suspensionculturesystemof
Lily;e.Cocultureofembryogeniccalus;f.Filamentsinducedbud;g.Lilybud;h.Growinglilyseedlings;i.Cocultureofsmalbulbs;j.
Resistantbudsproducedfromembryogeniccalus;k.Resistantbudproducedbybulbscale;l.Resistantplants
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