全 文 ：书西北植物学报!
"#$! %$
"
&
#$##!(##%" !"#$%&#%&()$*+,""-.)/#0-/ !! 文章编号$
#""")$"! " !"#$
#
"&)##!)"&
!!!!!!!!!!!!!!!
!"#
$#"*+&"& % , *-../*#""")$"!*!"#$*"&*##! 收稿日期$
!"#$)"!)!& &修改稿收到日期$
!"#$)"$)!
作者简介$马晓菲" #011( #!女!在读硕士研究生!主要从事植物遗传与生物技术方面的研究 2)34-5$
6
7
,
-/
6
5-/
6
*11
!
#&%*893
"
通信作者$于元杰!硕士!教授!硕士生导师!主要从事植物生物技术及其在育种上的应用研究 2)34-5$
:
74/
,:!
.;47*<;7*8/
高皂苷轮叶党参
$%& 诱变突变体研究 马晓菲!唐玉倩!于元杰" "作物生物学国家重点实验室!山东农业大学 农学院!山东泰安 !+#"#1 # 摘 ! 要$以轮叶党参为材料!采用甲基磺酸乙酯"
2=>
#处理离体叶片和愈伤组织对轮叶党参进行诱变!选择最佳诱
变组合!并对诱变再生群体进行遗传分析结果表明$" # #轮叶党参叶片和愈伤组织经 2=> 处理的存活率和分化 率均低于对照!并且随 2=> 浓度的升高和处理时间的延长而下降" ! #叶片和愈伤组织的致死处理组合分别是 "*$?2=>
处理
$@ 和 "*%?2=> 处理$@
!半致死组合分别为
"*%?2=>
处理
!@
和
"*!?2=>
处理
!@
!愈伤
组织是
2=>
诱变轮叶党参的的最佳材料"
%
#筛选出的
&
号变异株皂苷含量为
*"
6
%
6
!较对照平均值提高了
*$1? "$
#对诱变再生苗进行遗传分析!
1
个特异引物对
#"
个供试材料共扩增出
0
条带!具有多态性的谱带数
为
$$
条!占
+$*&?
材料间的相似系数变化范围
"*$%
"
"*0#!
!其中
%
号(
+
号株与其他
1
株达到了品种间遗传差
异研究认为!
2=>
处理可应用于轮叶党参无性变异系的诱变!
%
号(
&
号(
+
号植株为诱变产生的具有较高皂苷含
量的初选植株
关键词$轮叶党参&甲基磺酸乙酯&突变体&皂苷
中图分类号$
A1#%*
&
A+10
文献标志码$
B
#
(
)&*
+
",#,-",./,.%0.*,.1"21&.&/&
2
3-3*$/")&*$#$3,!04/!5
6
$%&
=BC-49D<-
!
EBFGH7
I
-4/
!
HJH74/
,
-<
"
"
>K4K:
M4N9O4K9O
:
9DPO9
Q
R-959
6:
!
P95<
6
<9DB
6
O9/93
:
!
>@4/;9/
6
B
6
O-875K7O45J/-S:
!
E4-
)
4/
!
>@4/;9/
6
!+#"#1
!
P@-/4
#
751.8*4.
$
T9O;-.89S6
K@<9
Q
K-373.957K-9/
!
K@<5<4S<.4/;8457.9D!"#"$" % &&()$*+"(),)4O<7.<;K9
-/;78:
2K@
:
5=:
5>75D9/<
"
2=>
#
*E@Q
54/K.U:
V<;K9.8O<97KS4O-4/K
Q
54/K.*E@$"
#
#
R9K@K@<.7OS-S45O4K<4/;;-DD8457.<.-/;78<;N
:
2=>UQ
4O<;U-K@K@<89/KO95
!
4/;O<;78<;459/
6
U-K@K@KO4K-9/4/;K-3<*
"
!
#
E@"
*$?2=>W$@
#
4/;
"
*%?2=>W
$@
#!
4/;K@<.<3-5"
*%?2=>W!@
#
4/;
"
*!?2=>W!@
#
*P457.U4.K@K6
S4O-4K-9/9D!-()$*+"(),)*
"
%
#
E@Q
54/K9DF9*&89/K4-/<;*"
6
%
6
.4
Q
)
9/-/.U@-8@U4.*$1?@-
6
@"
$
#
G:
.-.9DO<
6
6
O97
Q
.@9U<;
K@4K
!
#"34KQ
5-D-8<;D9O0.KO-
Q
.N
:
1.
Q
<8-45
Q
O-3!
K@Q
95
:
39O
Q
@-8.KO-
Q
.U4.
$$
!
U@-8@48897/K<;D9O+$*&?*G:
896
"*$%
"
"*0#!*E@<
Q
54/K.9DF9*%
!
F9*&4/;F9*+U66
<.K<;K@4K2=>KO<4K)
3:
D9O37K4
6
6
4/K
Q
54/K.U@-8@@4S<39O<.4
Q
9/-/.*
9/
6
:"8!1
$!"#"$"
%
&&()$*+"(),) & 2=> & 37K4/K & .4 Q 9/-/ !! 轮叶党参* !"#"$"
%
&&()$*+"(),)
"
>-#
EO47S*
+又名山海螺(四叶参(山胡萝卜等!是桔梗科
多年生草本植物!珍贵的山野菜种中药材以根入
药!有清热解毒(补虚通乳(养阴润肺及祛痰之功
效*#+轮叶党参含黄酮类(生物碱(挥发油等多种药
用有效成分!研究表明!轮叶党参皂苷对二乙基亚硝
胺致小鼠肝细胞
YFB
损伤有一定的保护作用*!+!
对人肝癌
Z<
Q
G)!
细胞的生长具有抑制作用*%+此
外!轮叶党参还具有延缓衰老!降血脂!提高机体免
疫力等作用*$)&+!又因其富含维生素(氨基酸(微量元 素等营养成分!药食同源!可加工成果脯!低盐制品! 保健饮料等!风味鲜美独特!是中国出口韩国(日本( 美国的山菜之王 近年来!生态环境恶化导致野生党参产量和质量 下降明显!利用体细胞无性系变异与组织培养相结合 的方法来增加党参植物有效成分含量!提高党参品质 日益引起人们的重视甲基磺酸乙酯" 2=> #!是目前 运用范围最广也是最为有效的诱变剂!与其它诱变 剂相比! 2=> 诱变产生的突变频率高!且多为显性 突变体!易于筛选赵天祥等*++利用 2=> 诱变构 建出小麦 2=> 突变体库!变异类型丰富!特别是发 现了自然突变中少见的变异类型由继红等*1+用 2=> 处理紫花苜蓿愈伤组织!获得抗寒性突变体 张秀省等*0+报道利用 2=> 处理长春花愈伤组织发 现愈伤组织发生了变异!不仅生长快!且吲哚总碱含 量高本研究结合前人工作!在获得轮叶党参组织 培养体系的基础上!对其外植体和愈伤组织分别进 行 2=> 诱变!探索遗传改良的有效方法!以期获得 皂苷含量较高的优良变异植株!为党参植物的品种 改良及开发利用提供参考和技术支持 # ! 材料和方法 ;*; ! 试材及取样 试验用轮叶党参材料采自山东农业大学中药 园!取同一单株上的叶片!于$
"

月份采集材料
;*<
!
试验方法
;=<=;
!
$%& 处理离体叶片 ! 取 "*#395 % M ( Q Z +*" 的磷酸缓冲液!高压灭菌!与 2=> 原液配成的 不同浓度的 2=> 处理液 " "? ( "*#? ( "*!? ( "*%? ( "*$?
#叶片切成约
"*83
!
!消毒后置
2=>
处理液中分别浸泡
"*
(
#*"
(
!*"
和
$*"@ !无 菌水冲洗 % " 遍!接种于诱导培养基" =>W"* 3 6 % M! !$)YW"*3
6
%
M&)RBW#*"3
6
%
MLE
#
共
!"
个处理!每处理

瓶!每瓶
#"
个外植体暗培
养
#;
后移至光下培养每
%;
继代
#
次!培养基
"
=>W"*3
6
%
M&)RBW"*+3
6
%
MFBB
#
!;
后转至分化培养基"
#
%
!=>W"*3
6
%
M&)RBW"*!
3
6
%
MFBB
#
";
后统计存活率和分化率
存活率"
?
#
[
存活块数%接种总块数
\#""?
分化率"
?
#
[
分化出芽愈伤块数%接种愈伤总
块数
\#""?
;=<=<
!
$%& 处理愈伤组织 ! 用轮叶党参叶片诱导 愈伤组织!选取继代培养 # " !"; 的愈伤组织!于 不同浓度的 2=> 处理液 " "? ( "*#? ( "*!? ( "*%? ( "*$?
#中分别浸泡
"*
(
#*"
(
#*
和
!*"@
"期
间置于摇床上以
&"O
%
3-/
不停摇动#!无菌水冲洗!
接种于分化培养基"
#
%
!=>W"*3
6
%
M&)RBW"*!
3
6
%
MFBB
#每处理

瓶!每瓶
#"
块愈伤组织
接种
";
后统计愈伤组织的存活率和分化率
;*<*>
!
根的诱导
!
不定芽继代
%
次后进行生根诱
导!根诱导培养基
#
%
!=>W"*!3
6
%
M]BBW"*!
3
6
%
MFBB

%";
后统计生根率
生根率"
?
#
[
生根苗数%接种数
\#""?
;*<*?
!
炼苗移栽
!
试管苗根系长达
%
"
83
!并且
长出侧根!苗高达
$83 时!进行炼苗移栽移栽基 质为腐殖土 ^ 蛭石 ^ 河沙" #^ #^ # #取最佳诱变 条件下所得生长健壮的处理苗 !" 株与健康对照苗 !" 株炼苗移栽! %"; 后统计移栽成活率 ;*<*@ ! 皂苷含量的测定 ! ! # "轮叶党参皂苷的提取 ! 用筛选出的 2=> 适宜浓度和时间组合再分别对 各离体组织进行批量处理!将再生植株转入生根培 养基中扩繁 ! 代并培养 &"; !选取扩繁后长势良好( 生根粗壮的再生苗和对照的根各 个!测定根中皂 苷的含量 将鲜根洗净!烘干!用研钵磨碎成粉末取粉末 "过 % 号筛#约 ! 6 !精密称定!精密加入甲醇 #"" 3M !称重!放置过夜!加热回流 !@ !放冷!用甲醇补 失重!过滤!精密量取续滤液 "3M !蒸干!残渣加甲 醇溶解!转移至 3M 量瓶中!并稀释至刻度!摇匀! "*$
#
3
微孔滤膜滤过!取续滤液!即得到轮叶党参
供试品溶液
!"皂苷含量的测定
!$标准品溶液的配制 精密称取轮叶党参皂苷标准品适量!加甲醇溶解制 成每 #3M 含轮叶党参皂苷 "*10&3 6 的标准品溶 液 % 采用 _`)Z` MP 法色谱条件$色谱柱
Y-4)
39/.-5)P#
"
1!"33$*&33
!

#
3
#&流动相为乙
腈
)"*#?
甲酸"
%%^ &+
#&流速
#*"3M
,
3-/
(#
&检测
波长
!"+/3
&柱温
%"a
&进样量
#"
#
M

&
标准曲
线的绘制分别精密吸取标准品溶液
!*"
(
*"
(
#"*"
(
#*"
(
!"*"
#
M
!注入
Z` MP
仪中!按上述色谱
条件测定峰面积以峰面积积分值"
.
#为纵坐标!
进样量"
/
!
#
6
#为横坐标!制备标准曲线!得回归方
程为
.
[1-$\#" /(*01\#" % " 0["*0&++ #结 果表明!轮叶党参皂苷进样量在 #*+0! " #+*0! # 6 &!## 西 ! 北 ! 植 ! 物 ! 学 ! 报 !!!!!!!!!!!!!!!!!!! %$
卷
范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系
;=<=A
!
诱变再生群体的
B7CD
分析
!
采用
PEBR
法提取基因组
YFB
总反应液以
!
#
M
为基本单
位!模板
YFB
浓度稀释
#"
倍
反应体系为
#"\N7DD#
M
!
=
6
!W
"
!*
3395
%
M
#
*!
#
M
!
;FE`
"
!*3395
%
M
#
#
M
!
1)
2
酶
"*!
#
M
!
O`-3"
!"/
6
%
#
M
#
!
#
M
!
YFB
"
%"/
6
%
#
M
#
!
#
M
!
;;Z
!
b#&*#
#
M
反应程序为
0$a 预变性 3-/ ! 0$a
变性
#3-/
!
$"a 退火 #3-/ ! +!a 延伸 # 3-/ !$"
个循环后
+!a
延伸
#"3-/

试验采用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物制备
#?
琼脂凝胶!电泳缓冲液为
#\ER2
!电泳电压为
#""c
!电泳约
#3-/
采用
2R
染色!由凝胶成像
系统拍照保存
;*<*E
!
数据分析
!
采用
Y` >!"""
数据处理软件对
统计数据进行方差分析!比较差异显著性
根据电泳图谱!将观测到的每一条带视为一个
性状!把有带的量化为
#
!无带的量化为
"
!数据输入
计算机标准化处理利用
FE>H>` P!#)!
软件进行
数据的遗传分析!计算各株间的遗传相似系数"
3
>
#
和遗传距离指数"
4
#
!
!
结果与分析
<=;
!
$%& 处理对轮叶党参离体叶片和愈伤组织的 影响 经 2=> 处理过的叶片和愈伤较对照颜色变 褐(质地变软(失去光泽"图 # ! B ( R #!存活率和再生 率均低于对照"表 # # 在 "*#? 2=>W"*@ 处理的所有组合中!叶 片的存活率达到 #""? !但当处理组合达到 "*%? 2=>W!@ 时!叶片的存活率仅为$&*+?
因此!
"*$?2=>W$@
是离体叶片的致死处理组合!
"*%?2=>W!@
是离体叶片的半致死处理组合
同理!愈伤组织的致死剂量是
"*%?W$@ !半致死 处理组合为 "*!?W!@ 与叶片相比!愈伤组织对 2=> 处理更敏感 随着 2=> 浓度的增大! 2=> 对存活率的影响 较对分化率的影响大以叶片为例!在 2=> 浓度 从 "*#? 上升到 "*$?
的过程中!叶片的分化率降低
为
$"? 左右!而存活率降低了约 &"? 2=> 处理时间对存活率的影响也比对分化率 的影响大在 2=> 处理时间从 "*@ 增至$@
的
过程中!愈伤存活率从
+"*"?
减至
#+*?
!降低率
为
!*?
!而分化率降低约
%*0?
可见相对于分
化率!
2=>
抑制离体叶片和愈伤的存活作用更强
<*<
!
不同处理对再生苗生根的影响
再生苗接种到生根培养基
#;
后!芽基部开始
产生白色小突起!然后长成具有浓密根毛的白色根
"图
#
!
P
#!
$; 后生根趋于稳定 2=> 处理会显著降低丛生芽的生根率"表 ! #! 轮叶党参离体叶片和愈伤组织在半致死浓度下均成 功生根!说明本实验中 2=> 的半致死浓度可以作 为诱变浓度同时在 2=> 处理离体叶片和愈伤组 织的半致死组合下!愈伤组织的生根率为 #!*%? ! 高于叶片生根率" 0*1? #!因此!轮叶党参愈伤组织 更适宜用做 2=> 的诱变处理材料! "*!?2=> 处理 愈伤组织 !@ 是 2=> 诱导轮叶党参的上限处理 组合 <*> ! 炼苗移栽 2=> 处理获得的大部分处理苗较对照生长缓 慢但是部分处理苗表现出较好的形态特征!主要 表现在叶片颜色深!茎叶较为粗壮"图 # ! Y # 分别对 !" 株处理苗和对照苗统计移栽成活率 在适宜移栽条件下对照的移栽成活率可达到 1? ! 而经过 2=> 处理所得幼苗成活率只有$?
"表
%
#!
可见
2=>
处理降低了幼苗移栽成活率
<*?
!
变异体获得及皂苷含量的测定
2=>
处理获得的材料中存在长势较对照苗旺
图
#
!
轮叶党参离体叶片和愈伤组织的诱变与组织培养
B*
正常叶片愈伤组织&
R*2=>
处理后的叶片形成愈伤组织&
P*
再生苗生根&
Y*
诱变苗"左#与正常苗"右#
T-
6
*#
!
P457.-/;78K-9/DO935<4S<.4/;O<
6
B*F9O3458457.9D5<4S<.
&
R*P457.9D5<4S<.-/;78<;N
:
2=>
&
P*_99K<;
Q
54/K5&
Y*E@Q
54/K
"
5#
4/;K@Q
54/K
"
O-
6
@K
#
+!##
&
期
!!!!!!!!!!!!!!
马晓菲!等$高皂苷轮叶党参 2=> 诱变突变体研究 表 ; !$%&
对轮叶党参离体叶片和愈伤组织再生的影响
E4N5<#
!
2DD<8K.9D2=>9/O<
6
外植体
2d
Q
54/K
项目
]K<3
2=>
浓度
2=>89/8%
?
2=>
处理时间
EO<4K3%
@
"* #*" !*" $*"
平均
BS6
<
离体叶片
M<4D
存活率
>7OS-S45O4K<
%
?
"
"
PL
#
#""*" #""*" #""*" #""*" #""*"
"*# #""*" #""*" #""*" #""*" #""*"4
"*! #""*" #""*" 1%*% +"*" 11*%N
"*% #""*" +"*" $&*+ #"*" &*+8 "*$ #""*" &"*" #%*% "*" $%*%;
平均
BS6
< #""*"4 1!*N &"*18 $*";
分化率
Y-DD%
?
"
"
PL
#
1%*% 1"*" +&*+ &&*+ +&*+
"*# &"*" %*% "*" $"*" "*14 "*! %*%$&*+ %!*" #$*% %&*&N "*%$"*" !1*& #$*% "*" !"*+8 "*$ %+*% "*" "*" "*" 0*%;
平均
BS6
< $+*+4 %!*!N !"*#8 #%*&; 愈伤组织 P457. 存活率 >7OS-S45O4K< % ? " " PL # #""*" #""*" #""*" #""*" #""*" "*# 0"*" 1&*+ &+*+ "*" +%*&4 "*! 1&*+ +"*" "*" !"*" &*+N "*% &&*+$&*+ !&*+ "*" %*"8
"*$%&*+ #$*% #"*" "*" #*%;
平均
BS6
< +"*"4 $*$N %1*&8 #+*;
分化率
Y-DD%
?
"
"
PL
#
1&* 1%*% 1"*" +%*% 1"*1
"*# *+ $!*% !*" &*+ %!*$4
"*! $&*! !1*& #%*% "*" !!*"N "*% #*" &*+ "*" "*" *$8
"*$ %*% "*" "*" "*" "*1;
平均
BS6
< %+*&4 #0*$N 0*&8 #*+; !! 注$数值后的小写字母表示不同处理间
"*"
水平下差异显著&下同
F9K<
$
Y-DD6
/-D-84/K;-DD表
<
!
不同
$%& 浓度(不同时间处理的再生芽生根率 E4N5<br! _99K-/ 6 O4K<9DO< 6 <O4K<;.@99K.-/;-DD<O</K89/8</KO4K-9/.9D2=4/;KO<4K3处理时间 EO<4K3K-3< % @ 离体叶片再生芽生根率 _99K-/ 6 O4K<9D5<4S<. % ? PL "*# "*! "*% "*$
愈伤组织再生芽生根率
_99K-/
6
O4K<9D8457.
%
?
PL "*# "*! "*% "*$"* 11*" +!*! &*% !*" 0*# 11* &&*+$#*& #&*+ "*"
#*" 1%*% &!* %*+ #$*+ "*" 1$*" %&*$!*" 1*+ "*" !*" +1*%$&*+ !&*0 0*1 "*" +0*! !*" #!*% "*" "*"
$*" +"*" !*" #!*% "*" "*" &1*! "*" "*" "*" "*" 盛的再生植株!主要表现在生根多且主根粗壮&茎叶 长势旺盛!而且常伴随着茎叶肥厚(颜色偏重对其 中表现较为突出的 #" 株"包括离体叶片诱导形成的 株及愈伤组织诱导形成的 株#和 ! 组对照测定 根中皂苷的含量 组培过程对轮叶党参皂苷含量影响不明显!对 照组皂苷含量平均值为$*+013
6
%
6
"表
$#经 2=> 处理后获得的轮叶党参再生植株!皂苷含量变 化差异显著!变化幅度为 "*""# " "*%+!3 6 % 6 % 号! & 号! + 号的皂苷含量均高于对照平均值!其中 & 表 > !$%&
处理苗与对照苗移栽成活率的比较
E4N5<%
!
>7OS-S45O4K<89/KO4.KNQ
O98<..<;
.<<;5-/
6
.N
:
2=>4/;89/KO95
项目
]K<3
对照
P9/KO95
诱变处理
=7K4
6
移栽株数
F9*9D
Q
54/K5成活数
F9*9D.7OS-S<;
Q
54/K5成活率
_4K<9D.7OS-S<;
Q
54/K5号植株皂苷含量为
*"
6
%
6
!较对照平均值提高
了
*$1? !说明 2=> 处理离体叶片和愈伤组织是 诱导轮叶党参产生皂苷含量变异的有效途径 1!## 西 ! 北 ! 植 ! 物 ! 学 ! 报 !!!!!!!!!!!!!!!!!!! %$
卷
<=@
!
诱变再生苗
B7CD
分析
用
!""
个随机引物对上述
#"
株组培苗进行
P`_
扩增!筛选出
1
条带纹清晰(具有多态性的引
物"表

#
1
个特异引物对
#"
个供试材料扩增出
表
?
!
$%& 处理组的皂苷含量 E4N5<$
!
P9/KQ
9/-/9DKO<4K36
O97
Q
.
外植体
2d
Q
54/K
变异株号
F9*9DS4O-4/K
Q
54/K.
皂苷含量
P9/KQ
9/-/
%"
3
6
%
6
#
对照
P9/KO95 2=>
离体叶片
M<4D
# $*+0!$*1"";
! $*+0+$*+0!8;
% $*1"!$*0!&4
*1"" $*1"#;$*1"+ $*1"!8; 愈伤组织 P457. &$*1"! *"
+ $*+1+$*0!"N
1 $*1"#$*&10N8
0 $*+0%$*1"%8;
#" $*1"#$*1"!8;
变异系数
P9表
@
!
B7CD
分析所用的引物序列及扩增谱带
E4N5<
!
O`-3:
.-.4/;-K.
Q
4KK引物
O`-3序列
><
I
7每个引物扩增谱带数
R4/;.
Q
Q
O-3具多态性的谱带数
9`5
:
39O
Q
@-8N4/;.
>"#! BGGPBGPPEG + +
>"!% GEEPEPGGBP & %
>"10 GGGBBGBPGG +
>#!& GGBEPGEPGG 1 &
>#$+ GGGEPGGPEE % >#+ PPBPPBPGBP #" 1 >#+0 GGPGPGEEBG + & >#0& BPBPPEGPPB 0 & 总计 E9K45 0$$0 条带!平均每个引物可获得扩增带 +*$
条!最少
的可扩增

条带!最多的达
#"
条其中具有多态性
的谱带数为
$$
条!占
+$*&?
由引物
>"#!
的扩增
结果"图
!
#可见!除
1
号与
#"
号株谱带大致相近
外!其他所有植株的扩增结果都不相同!说明
2=>
处理获得了很高的突变率
<*A
!
遗传相似性分析
根据扩增多态性统计!分别计算出遗传相似系
数"
3
>
#和遗传距离指数"
4
#不同材料间的遗传相
似系数在
"*$%
"
"*0#!
之间"表
&
#其中
0
号株
与
#"
号株之间相似程度最高!
#
号与
&
号相似程度
最低皂苷含量较高的
%
号(
&
号和
+
号株均表现
出与其它植株间遗传距离较大的特征!说明较高皂
苷含量和较大遗传差异之间存在必然关系
&
号株与其它
+
组间的遗传距离为
"*$%$
!而
%
号(
+
号与其它所有植株间的遗传距离达到了
"*
!
相当于品种间的遗传差异皂苷含量提高的
%
组"
%
号(
&
号(
+
号#相互间的遗传差异也较大!说明
2=>
诱变不仅可以用于选育皂苷含量高的轮叶党参新品
图
!
!
引物
>"#!
的
_B` Y
扩增结果
=*YFB34Oe&
#
"
#"*2=>
诱导的变异株
YFB
T-
6
*!
!
E@<43
Q
5-D-<;O<.75K9D
Q
O-3"#!
=*YFB34Oe&
#
"
#"*E@Q
54/K.-/;78<;N
:
2=>
表
A
!
;F
株轮叶党参组培苗的遗传相似系数和遗传距离指数
E4N5<&
!
G:
4/;
6
6
.
# ! % $& + 1 0 #" # "*!0" "*$$"*!&0 "*%$" "*$+ "*$1& "*$!% "*!+& "*!!& ! "*+#" "*$%$"*!1$ "*!+& "*$0" "*$+% "*%1 "*%&% "*!0+
% "*$& "*&& "*%01 "*$%$"*!# "*%1 "*$#+ "*$1# "*$&+
$"*+%# "*+#& "*&"! "*%#% "*$%$"*$%0 "*!&$"*!0" "*%!% "*&&" "*+!$ "*&& "*&1+ "*$% "*$%+ "*!+ "*!1! "*%!+
& "*$% "*# "*$+0 "*&& "*$+ "* "*$+ "* "*$+ "*#$ "*!+ "*&# "*&# "*&% "* "*$1 "*$!& "*$" 1 "*++ "*&$! "*1% "*+%& "*+! "*! "*$! "*!## "*!&% 0 "*+!$ "*&%+ "*#0 "*+#" "*+#1 "* "*+$"*+10 "*"11 #" "*++$ "*+"% "*%% "*&&+ "*&+% "*$"*" "*+%+ "*0#! !! 注$左下方数据为遗传相似系数!右上方数据为遗传距离指数
F9K<
$
T-
6
7O<.4KK@<59U6
:
!
4/;K@<7
QQ
6
@K4O<
6
0!##
&
期
!!!!!!!!!!!!!!
马晓菲!等$高皂苷轮叶党参 2=> 诱变突变体研究 种!还能产生多样的变异类型!丰富育种基础材料 综上!判断 % 号( & 号和 + 号植株为有较高皂苷含量 的初选植株 % ! 讨 ! 论 本试验中!以轮叶党参的叶片(茎段诱导愈伤组 织时!出现了愈伤褐化现象!且在 2=> 处理组培材 料后!由于 2=> 的毒副作用延缓了组培进程更加 大了褐化率!愈伤死亡率明显增加!这使得降低褐化 率成为影响实验成功的重要环节研究发现!酚类 化合物的含量与褐变现象有直接关系*#"+!而植物在 生长旺盛季节大都含有较多的酚类化合物*##+另 外!采集后的外植体接种前无菌水浸泡 ! " %@ !接 种后 # " !; 转接到新鲜培养基也是控制褐变的有 效措施*#!+本试验采取春季$
"

月份采集的外植
体!消毒过程中在无菌水中切割材料!接种
%;
后将
材料转入新鲜培养基!缩短转瓶周期的措施!对培养
物的挽救作用十分明显!是防止轮叶党参愈伤褐变
的有效手段
诱变材料的选择在诱变育种过程中占有重要地
位!通常情况下!对诱变剂敏感的材料更适用于诱变
育种研究表明!植物生殖器官的敏感性要高于营
养器官!这可能与细胞的分化程度有关不同组织
之间!分生组织的敏感性要大于成熟组织梁国平
等*#%+对红掌的不定芽和愈伤组织进行辐射诱变时!
发现愈伤组织对射线更为敏感本试验分别对轮叶
党参叶片诱导的愈伤组织以及离体叶片进行
2=>
诱变处理!结果表明!愈伤组织对
2=>
诱变剂更为
敏感!与多数研究者所得结论一致
当前!采用物理和化学诱变方法来提高植物皂
苷含量已得到广泛应用!但皂苷含量的提高率受诱
变材料及诱变方式的影响较大李波*#$+用紫外诱 变法处理苜蓿种子!产生的愈伤组织的皂苷含量高 于未处理的种子 "*%? 崔永霞等*#+对辐射诱变的 盾叶薯蓣株系进行皂苷元含量分析!得到的诱变株 皂苷元含量平均比对照株系高出 !*"? 本试验 采用 2=> 化学诱变组培材料的方法!诱导获得的 轮叶党参再生植株皂苷含量较对照提高了 *$1?
!
诱变效果处于前两者之间虽然此方法能否应用于
大规模工厂化生产有待进一步研究!但为利用无性
系变异的方法增产轮叶党参药用成分提供了证据
参考文献!
*
#
+
!
中药志"第一册#*
=
+
*
北京$人民卫生出版社! #00%$
%+(%++*
*
!
+
!
XZ2FGPZf
"郑春姬#!
HJC
"俞
!
星#!
ZBFPZf
"韩春姬#
*`O9K<8K-S<%
&&()$*+"(),).4
Q
9/-/9/YFB;434
6
<-/5-S8<5.-/;78<;N
:
;-:
5/-KO9.43-/<
*
f
+
*6""#7*+$*+ "食品科学#! "#% ! >? " ## #$
!$(!+ " -/P@-/<.< # * * % + ! HJC "俞 ! 星#! M]M "李 ! 林#! ZBFPZf "韩春姬#! +,)(*!"##*2DD<8K.9D!"#"$"
%
&&()$*+"(),)K9K45.4/ Q 9/-/9/4 Q 9 Q K9.-.-/Z< Q G) !8<5. * f + *8"90$)("
:
8($;$5+0&,
.
"
=<;-8-/<2;-K-9/
#"吉林大学学报,医学版#!
"##
!
>E
"
&
#$#"0"(#"0% " -/P@-/<.< # * *$
+
!
F]2>M
"聂松柳#!
CJCC
"徐先祥#!
C]BMXZ
"夏伦祝#
*2DD<8K9DK9K45.4
Q
9/-/.9D89;9/9
Q
.-.9/N599;-
Q
-;4/;/-KO-89d-;<5Q
:Q
Q
<3-4O4K.
*
f
+
*8"90$)(" : <$=91!>!"((+
?
+
"安徽中医学院学报#!
""!
!
<;
"
$#$
"($!
"
-/P@-/<.<
#
*
*

+
!
CJA
"徐
!
勤#!
PZ2FCf
"陈晓军#!
+,)(*>K7;-<.9/-/S-
6
9O4K-/
6
6:
!
48K-S4K-/
6
N599;D59U
!
O<.95S-/
6
N599;.K4.-.4/;4/K-)4
6
-/
6
48)
K-9/.9D4589@95%
&&()$**"(),) * f + *39)$
?
/>+#*)(8"90$)( "广西医学#! ""1 ! >F " #! #$
#1%$(#1%+
"
-/P@-/<.<
#
*
*
&
+
!
gBFGYP
"王德才#!
A]JHH
"邱玉玉#!
XZBFGCXZ
"张显忠#!
+,)(*]337/9O<
6
754K-9/9D
Q
95
:
.488@4O-;<.DO93O4;-d89;9/9
Q
.-.
54/8<954K4,
7SQQ
O<..<;3-8<
*
f
+
*@&=A=+$>+#*$+)$#>),+0)B+&+)0*=
"时珍国医国药#!
!""0
!
"
##
#$
!11&(!111*
*
+
+
!
XZBbEC
"赵天祥#!
LbFGCH
"孔秀英#!
XZbJ_Z
"周荣华#!
+,)(*=9O
Q
@959
6
-845-;:
.-.9D2=>37K4/K.DO93
@Q
59-;U@<4K875K-S4OH4/V@4/$##" * f + *7*+$,)<
?
0*9(,90)7$*) "中国农业科学#! ""0 ! ?< " % #$
+(+&$* * 1 + ! HbJfZ "由继红#! HBFGgf "杨文杰#! M]>ZH "李淑云# *E@<.<5<8K-9/9D895;)O<.-.K4/K37K4/K.9DB5D45D4 * f + *8"90$)("
:
C"0,=+)&,
C"0D)(;$5+0&, . "东北师大学报#! #00& !$
1$(1+ " -/P@-/<.< # * * 0 + ! XZBFGC>Z "张秀省#! XZBFG_E "张荣涛#! PBbM "曹 ! 岚#! +,)(*=7K4K-9/-/!),=)0)$,=9&0"&+9&-/;78<;N
:
2=>
*
f
+
*!=$+&+ 10)#,"$)()$#E+0F)(409 ? & "中草药#! ""$
!
>@
"
##
#$#!0% " -/P@-/<.< # * * #" + ! GBbGC "高国训# *RO9U/-/ 6 -/ Q 54/KK-..7<875K7O< * f + *G()$,G=
.
&"("
?.
!"DD9$*),"$&
!
#000
!
>@
"
&
#$"#("& " -/P@-/<.< # * * ## + ! =B]2_c ! =2EXM]2_Y=*A74/K-K4K-S<8@4/ 6 <.-/;4K4 Q 95 :Q @95.4/;K@<-OO<54K-9/K9NO9U/-/<br6 * f + *6""#7*- ! #0& ! %"$
1"(1$* * #! + ! R]2Y2_=BFF2G*T48K9O.4DD<8K-/ 6 <.K4N5-.@3Q 3) ?$"()=
.
F0#&$5,0" * f + *<*,)E"0, ! #01+ ! #!$
&!(&!0*
*
#%
+
!
M]BFGG`
"梁国平#!
C]Bb>H
"肖三元#!
GJBFH
"管
!
艳#
*B
Q
O<5-3-/4O
:
O<
Q
9OK9/O4;-4K<;34K&"
P9D9O4/K@7O-73K-..7<
875K7O<
*
f
+
*10"
%
*)(<
?
0*9(,90)(7*+$*+H1+*=$"("
?.
"热带农业科技#!
""
!
"
%
#$!$(!&
"
-/P@-/<.<
#
*
*
#$
+
!
M]R
"李
!
波#
*]/D57:
9/.4
Q
9/-/.48873754K-9/9DB5D45D4.<<;.KO<4K<;N
:
75KO4S-95:
37K4K-9/
*
f
+
*7++#
"种子#!
""1
!
"
#
#$
%1(%0
"
-/P@-/<.<
#
*
*
#
+
!
PJ]HC
"崔永霞#!
gJ=C
"吴明侠#!
C]2PC
"谢彩侠#!
+,)(*B/45
:
.-.9D
Q
@
:
.-9)8@<3-845-/;6
K-9/5-/<.9D4"&*"0+)A$? F+0$&&
*
f
+
-!=$-E"&
%
-G=)0D-8-
"中国医院药学杂志#!
""0
!
"
!%
#$#0+#(#0+% " -/P@-/<.< # * "%## 西 ! 北 ! 植 ! 物 ! 学 ! 报 !!!!!!!!!!!!!!!!!!! %$
卷