全 文 ：书西北植物学报!
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文章编号$
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收稿日期$
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&修改稿收到日期$
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基金项目$贵州省工程技术研究中心专项黔科合农
2
字"
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(
作者简介$陈
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红"
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#!男!博士!副教授!主要从事生物技术与果树遗传育种研究工作)
3+45/6
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78918(*
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56/
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;1,7<4
贵州桃种质资源遗传多样性的
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分析
陈
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红#!!杨
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鑫#!!安华明#!
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#
贵州省果树工程技术研究中心!贵阳
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!
贵州大学 农学院!贵阳
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#
摘
!
要$应用
=>分子标记技术对
-#
份贵州桃种质进行遗传多样性分析!以期从分子水平上揭示其遗传多样性
及资源间的遗传关系!为科学保存与利用贵州桃种质资源提供依据)结果表明$"
#
#
#*
条引物共检测出
#(!
个位
点!其中多态性位点数
#*
个!多态性比例为
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!平均每条引物扩增位点为
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个&供试材料
A9/
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0
遗传多样
性指数"
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#为
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信息指数"#为
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!遗传相似系数变幅为
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CD2EF
聚类分析显示!在相似系数
",*
处可将
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份桃资源分成
*
类!其中
!
份白花桃资源+
!
份血
桃资源+
!
份青桃资源分别为同名异物)研究认为贵州桃种质具有较丰富的遗传多样性!采用该分子标记技术区分
了同名异物的桃资源)
关键词$桃&遗传多样性&亲缘关系&目标起始密码子多态性"
=>#
中图分类号$
G%$*
H
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G-&(
文献标志码$
F
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:
51TO965N/<108/
U
51T
U
O09OR5N/<151T;N/6/M5N/<1U
9578577900/<10/12;/M8<;
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J
919N/7T/R9O0/N
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V
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9
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J
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:
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919N/70/4/65O/N
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J
N89577900/<10W9O9V9NW991
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9578577900/<10/1
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J
O<;
U
9T/1N<0/Z
J
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U
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4
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U
97N/R96
:
,?890;V0N51N/56
J
919N+
/7T/R9O0/N
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W50/T91N/P/9T54<1
J
N89
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9578577900/<10/12;/M8<;
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51TN89
U
9578577900/<10:
4
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919N/7T/R9O0/N
:
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J
919N/7O965N/<108/
U
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9N9T
U
<6
:
4U
8/04
#
!!
贵州位于中国西南地区云贵高原!立体气候复
杂!孕育了许多重要的桃资源!这些桃资源在育种上
很有利用价值#+%(!但部分桃资源名称混乱+亲缘关
系不清!给资源保存和利用带来诸多困难)目前对
于贵州桃资源的研究较少!杨鑫等$(从形态学水平
对贵州野生毛桃资源果核特征进行了遗传多样性分
析!但所利用的资源材料少!取材范围有限!而且利
用分子标记在分子水平上对贵州桃种质的遗传多样
性及亲缘关系研究尚未见报道)
由
><65OT
和
E57X/6
开发的目标起始密码子
多态性"
0N5ON7J
9N9T
U
<6
:
4U
8/04
!
=>#
分子标记是一种目的基因分子标记方法+*(!它结合
了
S==]
标记和
]FD^
标记的优点!具有操作简单+
重复性好+引物通用性强+成本低+多态性高等特点!
已成功应用于龙眼-(+枇杷&(+柑橘((+葡萄#"(+芒
果##+#!(+菠萝#%(+柿#$(+番木瓜#(以及草莓#*(等果
树作物的鉴定分析)为此!本研究应用
=>分子
标记技术!以
-#
份贵州桃资源为试材!从
A^F
水
平检测不同桃资源的遗传多样性及资源间的遗传关
系!为贵州桃种质资源的科学保存与利用提供依据)
#
!
材料和方法
>,>
!
材
!
料
试验材料为
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"
!"#%
年采自贵州不同地区
的
-#
份桃资源"表
#
#!取幼嫩叶片带回实验室!经
液氮处理后置于超低温冰箱保存备用)
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条
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!
试验材料及来源
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3Z
U
9O/491N5645N9O/5651T0<;O79
编号
A<,
名称
A549
采集地点
YO/
J
/1
编号
A<,
名称
A549
采集地点
YO/
J
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#
安龙
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J
A<,#
黔西南州安龙县
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J
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G/51Z/151 %-
荔波
+-_/V黔南州荔波县
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G/51151
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安龙
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J
A<,!
黔西南州安龙县
F16<1
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荔波
+&_/V黔南州荔波县
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G/51151
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安龙
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J
A<,%
黔西南州安龙县
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J
!
G/51Z/151 %(
青桃
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J
N5黔南州荔波县
_/V<
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G/51151
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毕节
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毕节市七星关区
G/Z/1
JJ
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龙里
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6/A<,#
黔南州龙里县
_<1
J
6/
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G/51151

毕节
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毕节市七星关区
G/Z/1
JJ
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盘县
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六盘水市盘县
D51Z/51
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毕节
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毕节市七星关区
G/Z/1
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盘县
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六盘水市盘县
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毕节
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毕节市七星关区
G/Z/1
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盘县
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六盘水市盘县
D51Z/51
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_/;
U
5108;/
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毕节
+\/
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毕节市七星关区
G/Z/1
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盘县
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六盘水市盘县
D51Z/51
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黔西南州册亨县
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J
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G/51Z/151 $
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黔西南州普安县
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J
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黔西南州册亨县
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黔西南州普安县
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*
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岑巩
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J
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普安
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黔西南州普安县
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J
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普安
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铜仁市德江县
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普安
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D;
*
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J
A<,#
安顺市关岭县
2;516/1
J
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普安
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*
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黔西南州普安县
D;
*
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G/51Z/151
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J
A<,!
安顺市关岭县
2;516/1
J
!
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普安
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*
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黔西南州普安县
D;
*
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G/51Z/151
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2;516/1
J
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F108;1 !
普安
+&D;
*
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黔西南州普安县
D;
*
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G/51Z/151
#-
关岭
+$2;516/1
J
A<,$
安顺市关岭县
2;516/1
J
!
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黄蜡桃
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J
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黔西南州普安县
D;
*
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G/51Z/151
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关岭
+2;516/1
J
A<,
安顺市关岭县
2;516/1
J
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晴隆
+#G/1
J
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J
A<,#
黔西南州晴隆县
G/1
J
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J
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白花桃
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2;516/1
J
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水城
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六盘水市水城县
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青桃
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N5贵阳市
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天柱
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黔东南州天柱县
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J
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贵阳
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贵阳市
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J
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赫章
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毕节市赫章县
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威宁
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毕节市威宁县
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毕节市赫章县
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贵阳市乌当区
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赫章
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毕节市赫章县
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J
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息烽
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A<,#
贵阳市息烽县
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J
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赫章
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J
A<,$
毕节市赫章县
I9M851
J
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息烽
+!L/P91
J
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贵阳市息烽县
L/P91
J
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花溪
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贵阳市花溪区
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息烽
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贵阳市息烽县
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花溪
+!I;5Z/A<,!
贵阳市花溪区
I;5Z/
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J
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黔西南州兴仁县
L/1
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黔东南州雷山县
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J
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K/1
.
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J
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雷山
+!_9/0851A<,!
黔东南州雷山县
_9/0851
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J
151 *
玉屏
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J
A<,#
铜仁市玉屏县
K;
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雷山
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+#L;9N5黔南州荔波县
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G/51151 *-
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血桃
+!L;9N5黔南州荔波县
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G/51151 *(
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J
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F108;1
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荔波
+$_/V黔南州荔波县
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G/51151 -"
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+a8911/1
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a8911/1
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!
F108;1
%
荔波
+_/V黔南州荔波县
_/V<
!
G/51151 -#
镇远
+#a891
:
;51A<,#
黔东南州镇远县
a891
:
;51
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G/51T<1
J
151
%*
荔波
+*_/V黔南州荔波县
_/V<
!
G/51151
"*#
西
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北
!
植
!
物
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学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
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卷
引物序列参照
><65OT
等(!由上海捷瑞生物工程
有限公司合成)
_^!"""
和
!b#$
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D>] E50N9O+
E/Z
含
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,
#
_
)#
#$
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<6
:
49O509
!
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#
4<6
,
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)#
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,
_
)#
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,
_
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c>6
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E
J
>6
!
!以
及其他稳定剂和增强剂(均购自天根生化科技"北
京#有限公司)
>,?
!
方
!
法
>@?@>
!
,A5
提取与检测
!
采用王富荣
>?F改良
法#-(!提取桃嫩叶的基因组
A^F
!利用
#@
琼脂糖
凝胶电泳和
c""
型超微量分光光度计分析仪进
行
A^F
样品质量和浓度的检测)模板
A^F
工作
浓度稀释至
"1
J
%
#
_
!置于
)!"d
保存备用)
>@?@?
!
$%"&B2%C
扩增
!
D>]
扩增反应在
F
UU
6/9T
\/<0
:
0N940e9O/N/
?E
?89O456>
:
769OD>]
扩增仪上
进行)
!"
#
_
反应体系包括模板
A^F!
"
$"1
J
!
引物浓度
",*"
#
4<6
%
_
!
E50N9OE/Z(,"
#
_
)反应
程序为
($d
预变性
$4/1
&
($d
变性
#4/1
!
#d
退火
#4/1
!
-!d
延伸
!4/1
!循环
%*
次&最后
-!d
延伸
#"4/1
!扩增产物于
$d
下保存)用浓度为
!@
的琼脂糖凝胶对
D>]
产物电泳检测!并在紫外
凝胶成像系统上拍照保存)
>,D
!
数据统计与分析
=>产物按条带的有无分别赋值!在相同迁
移位置有带的记为-
#
.!无带的记为-
"
.!建立
=>标记的
"
+
#
矩阵)利用
A?=K=
U
7!,#"9
软件计算
遗传相似性系数!按
CD2EF
方法进行聚类分析!
构建树状图!分析样品间亲缘关系)利用程序包
DIK_SD
进行
\<U
分析"
#"""
次重复!每次
替换
%@
的分子标记数据#)应用
DYD23A3%!
软
件进行遗传多样性参数分析!计算多态性引物的有
效等位基因数"
&9
#+
A9/
*
0
基因多样性指数"
!
#和
=8511<1
*
0
信息指数"#)
!
!
结果与分析
?@>
!
$%"&
扩增片段多态性分析
从
%*
条引物中!筛选出多态性高+重复性好且
条带清晰的
#*
条
=>引物!共扩增出
#(!
条带!
其中多态性条带
#*
条!多态性比例为
&#,!@
!说
明供试材料遗传多样性比较丰富!其中代表性扩增
图谱见图
#
)每条引物可扩增出
(
"
#
条带!平均
每条引物扩增出
#!
条带!平均多态性条带为
(,-
条!扩增出的
A^F
带的大小在
#""
"
!$""V
U
之间
"表
!
#)
图
#
!
引物
=#"
对
-#
份桃种质的
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扩增
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材料编号同表
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6/P/75N/<1U
9578577900/<10V
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#
"
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期
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陈
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红!等$贵州桃种质资源遗传多样性的
=>分析
表
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!
$%"&
扩增结果统计
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?890N5N/0N/7U
6/P/75N/<1O90;6N
引物
DO/49O
引物序列"
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"
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DO/49O09
g
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扩增条带数
A<,U
6/P/9T
V51T0
多态性带数
D<6
:
4U
8/7
V51T0
多态性比例
D<6
:
4U
8/04
U
9O791N5
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平均
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!
遗传多样性分析
利用
DYD23A3%!
软件对
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份桃材料扩增的
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条
A^F
条带进行分析!供试样品的等位基因数
"
&
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#为
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9
#为
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遗传多样性指数"
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#为
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*
0
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)表明
-#
份桃资源间的遗传差
异较大!存在较为广泛的遗传多样性)
?,D
!
聚类分析
根据遗传相似系数!采用
CD2EF
法进行聚类
分析!构建
-#
个桃资源遗传关系聚类图"图
!
#)以
遗传相似系数
",*
为阈值时可将供试材料分为六
类!第
$
类包含
#
份资源!为毕节市的
-
号&第
%
类
包含
#
份资源!为毕节市的
&
号&第
&
类包含
#
份资
源!为黔南州的
$"
号&第

类包含
$
份资源!它们分
别是毕节市的

号!黔南州的
%-
号+
%&
号!铜仁市
的
#%
号&第
(
类包含
#
份资源!为黔南州的
%%
号&
第
)
类包含其余的
*%
份资源)
以上结果表明!大部分资源聚在了第
)
类!包含
了
&
个地区的桃资源!其中不同果肉颜色的
%
号和
*-
号桃资源聚在了一类!表明单从果肉颜色无法区
分亲缘关系的远近)黔南州
#"
份资源+毕节
##
份
资源分别聚在不同的四类!而铜仁
$
份资源分属于
不同的二类!安顺
##
份资源+黔西南州
#*
份资源+
贵阳
&
份资源+黔东南州
*
份资源+六盘水

份资源
分别聚在相同的一类!表明黔南州和毕节等地区的
桃资源遗传多样性较高)
?,E
!
资源相似性分析
供试材料的遗传相似系数在
",$"""
"
",&!
之间)其中毕节市威宁县的
-
号与黔西南州的
%
号+毕节市的
&
号+黔南州的
%-
号的相似系数分别
为
",$!!
+
",$"""
+
",$"-$
!表明
-
号与
%
号+
&
号+
%-
号的亲缘关系较远)安顺市关岭县的
#*
号
与
#(
号+黔南州荔波县的
%*
号与毕节市赫章县的
!%
号之间的相似系数分别为
",&!
+
",&%(-
!说
明
#*
号与
#(
号+
%*
号与
!%
号之间的亲缘关系较
近)黔南州荔波县的
%#
号与
%!
号之间的相似系数
为
",-(%
!说明这
!
个样品为同名异物)黔南州荔
波县的
%(
号与贵阳市乌当区的
!"
号等样品的相似
系数为
",*(%
!表明这两对样品也为同名异物)
%
!
讨
!
论
贵州桃资源由于长期受到立体气候差异+实生
繁殖和人工选择的影响!所取样品表观性状差异较
大!呈现出丰富的多样性)
-#
份桃种质材料中!部
分为优良地方品种!部分为野生毛桃资源!其中包括
!*#
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
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卷
图
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份桃资源
=>标记聚类树状图
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:
R56;95V#
白肉桃+黄肉桃+红肉桃等多个类别!
=>分子标
记分析也表明贵州桃种质材料遗传多样性较为丰
富)本研究发现具有不同性状的材料聚在亲缘关系
很近的亚组中!如不同果形特征+果肉颜色的资源聚
在了一起!说明仅从部分表观性状无法区分其亲缘
关系的远近#&(&来自不同地区的样品互相交叉!这
可能是贵州桃种质在相互引种过程中!发生了基因
渗透#((!这与贵州李资源研究结果类似!"()同一类
中同一地区的资源聚在一起!例如来自安顺地区关
岭县的
*
份资源聚为一类!但来自毕节七星关区的

份资源聚为不同的
%
类!表明并不是来自同一地
区的资源都聚为一类!说明桃资源亲缘关系的远近
由基因型决定)
聚类结果表明大部分样品聚在亲缘关系相对较
近的一类中!但也有个别资源材料聚为亲缘关系较
远的其它类中!体现其独特性!如毕节市七星关区的
&
号!该资源为冬桃!反映其具有特异的遗传组成)
此外!毕节市威宁县
-
号也单独聚为一类!这可能
与毕节市威宁县高海拔地区的独特气候条件有关!
在贵州李资源研究中也发现威宁县的资源特异性丰
%*#
&
期
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陈
!
红!等$贵州桃种质资源遗传多样性的
=>分析
富!"(!因此!需重视该地区特异资源的保存和利用)
尽管来自同一县份的血桃"
%#
号和
%!
号#和白
花桃"
#*
号和
#(
号#聚在亲缘关系很近的亚组中!
但它们也不完全是同一样品!这可能是繁殖过程中!
部分单株发生了遗传变异!如
%!
号单果重明显大于
%#
号!因此!可加强这些资源优良单株的筛选)来
自贵阳和黔南州荔波县的两份青桃资源"
!"
号和
%(
号#亲缘关系较远!说明它们为同名异物)其它特异
资源
**
号为油桃!
%%
号果实成熟期较晚!
%
号为黄
肉桃!对这些特异资源应进一步加强管理利用!以达
到利用其遗传差异优势创造优良品种的目的)
参考文献!

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"李秀兰#!
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