全 文 ：书西北植物学报!
"#$
!
%$
"
&
#$
#%#&#%!$
!"#$%&#%&()$*+,""-.)/#0-/
!!
文章编号$
#"""()"!$
"
!"#$
#
"&(#%#&("*
!!!!!!!!!!!!!!!
!"#
$
#"+&,",
%
-
+.//0+#"""()"!$+!"#$+"&+#%#&
收稿日期$
!"#$("%(#%
&修改稿收到日期$
!"#$("$(#1
基金项目$国家
*)1
项目
!"##(2
"
!1
#(&国家科技支撑项目"
!"#%345!"5"$
#&江苏省三新工程项目"
6728
"
!"#)
#
"")
#&江苏省科技厅项
目"
639!"#)"%"1##
#
作者简介$余晓娟"
#*1*
#!女!在读硕士研究生!从事葡萄育种及分子生物学研究)
9(:;.<
$
1)&&*&!1)
!==
+>?:
"
通信作者$陶建敏!博士!教授!博士生导师!主要从事葡萄栽培育种及生物技术研究)
9(:;.<
$
@
-
:!,,
!
/.0;+>?:
葡萄半不育花粉粒形态和细胞学观察
及相关基因表达分析
余晓娟!袁
!
月!王继源!陶建敏"
"南京农业大学 园艺学院!南京
!#""*$
#
摘
!
要$以葡萄品种*魏可+"可育#及其自交后代单株*魏可实生
(%
+和*魏可实生
(#!
+以及品种*钟山红+"雄性不育#
为材料!对花器官特征,花粉萌发率,花粉粒形态以及小孢子发育过程的细胞学特征进行观察!并对绒毡层发育相
关基因"
!"##
,
#!$#
和
%"&)
#的表达进行分析!以初步鉴定葡萄半不育单株的不育特征!揭示花粉败育与基因
调控的关系)结果显示$"
#
#*魏可实生
(%
+和*魏可实生
(#!
+的花粉萌发率均在
#"A
左右!属于半不育花粉&其雄
蕊主要特征为花丝卷曲!花丝短于花柱!花药内花粉量少!花药中既有正常长球形花粉粒也有异常近球形花粉粒)
"
!
#*魏可实生
(%
+,*魏可实生
(#!
+没有明显的药室壁结构!小孢子母细胞稀少,疏松&*魏可实生
(%
+双核期绒毡层未
完全降解!绒毡层细胞中的营养物质滞留没有及时供应小孢子的发育!致后期部分小孢子败育&*魏可实生
(#!
+绒毡
层细胞在单核早期就大部分降解而导致营养供应异常!使部分小孢子败育)"
%
#在减数分裂期!*魏可+的绒毡层发
育相关基因
!"##
和
#!$#
的表达均最高!
%"&)
最低!*钟山红+的
%
个基因的表达与*魏可+相反!*魏可实生
(%
+
和*魏可实生
(#!
+的表达水平均在*魏可+与*钟山红+之间&单核早期以后!
%
个基因在*魏可+的表达一直均较低!钟
山红+的
!"##
基因表达一直最高!其余
!
个基因均在最低水平!而*魏可实生
(%
+的
#!$#
,
%"&)
基因在单核早期
表达量最高!*魏可实生
(#!
+的
#!$#
在双核期表达量最高)研究表明!*魏可实生
(%
+的花粉败育发生在单核晚期
至双核期!*魏可实生
(#!
+的花粉败育发生在单核早期&部分药室绒毡层的异常降解!小孢子发育营养供应不均衡可
能是导致其花粉半不育发生的原因&*魏可实生
(%
+的绒毡层延迟降解与减数分裂期
!"##
基因的表达量不足,单
核期
#!$#
基因的过量表达以及
%"&)
基因在单核期的异常表达有关!而*魏可实生
(#!
+的绒毡层提前降解与减
数分裂期
!"##
基因的表达量不足而
%"&)
基因过量表达!以及双核期
#!$#
基因过量表达有关)
关键词$葡萄&细胞学&绒毡层&半不育&基因表达
中图分类号$
B%)%+%)
&
B&1*
文献标志码$
4
$"%
&
"("
)
#*+(
!
,
-
."("
)
#*+(/012%3+.#"4"56"(247%+#41
+4!89
&
%211#"4"5:2(+.2!72421#4;2<#=1.2%#(27%+
&
21
CD7.;?
-
E;0
!
CD4FCEG
!
H4F2I.
J
E;0
!
K4LI.;0:.0
"
"
8?M
G?NO?P@.>E<@EPG
!
F;0
-
.0
M
4
M
P.>E<@EP;J
!
F;0
-
.0
M
!#""*$
!
8R.0;
#
>01.%+*.
$*
H.0S
+"
NGP@.#!*
TR?0
M
/R;0R?0
M
+"
:;#!*
H.0S/GGU<.0
M
(%
+!*
H.0S/GGU<.0
M
(#!
+
VGPG
GW;:.0GU+KRGNR;P;>@GP./@.>/
!
X
?J
!
X
?X
G;0U@RG>
J
@?M
.>;P?(
/
X
?PG/VGPG?Y/GPQGU
!
!"##
!
#!$#;0U%"&)
M
G0G/@R;@V;/PG<;@GU@?@RG@;
X
G@E:UGQGX
:G0@VGPG
;0;<
J
ZGU+KRG/G:.(/@GP.R;P;>@GP./@.>/?N@RG
*
H.0S/GGU<.0
M
(%
+
;0U
*
H.0S/GGU<.0
M
(#!
+
VGPG.UG0@.N.GU
XPG<.:.0;P.<
J
!
;0U@RG
X
;@@GP0?N@RG
M
G0GPG
M
E<;@.?0?N
X
?;@GU
@R;@
$"
#
#
@RG:;.0NG;@EPG/?N@V?
*
H.0S/GGU<.0
M
+
M
P;
X
G/
$
N.<;:G0@/>EP<;0U/R?P@GP@R;0@RG/@
J
!
NGV
X
?!
@RG
X
?J
V;/?0<
J
;Y?E@#"A+KRGPGVGPG@V?S.0U/?N
X
?M
P;.0/.0;0(
@RGP/
$
0?P:;<
X
P?<;@G/
X
RGP?.U;<
X
?M
P;.0/;0U;
XX
P?W.:;@G<
J
/
X
RGP?.U;<
X
?M
P;.0/+
"
!
#
KRG;0@RGP
V;@EPGV;/0?@?YQ.?E/
!
;0U@RG:.>P?/
X
?PG:?@RGP>G*
H.0S/GGU<.0
M
+
M
P;
X
G/+KRG@;
X
G@E:?N
*
H.0S/GGU<.0
M
(%
+
U.U0?@UG
M
P;UG>?:
X
J
.0@RGY.0E>M
G
!
@RG0E@P.G0@/
?N@;
X
G@E:>?EXX
<
J
N?P@RGUGQGX
:G0@?N/
X
?PG/@.:G<
J
!
VR.>R>;E/GU@RG;Y?P@.?0?N:.>P?/
X
?PG/
.0@RG<;@GUGQGX
:G0@;M
G+KRG@;
X
G@E:?N
*
H.0S/GGU<.0
M
(#!
+
:?/@<
J
U./.0@G
M
P;@GU;@@RGG;P<
J
:?0?(
0E>P?/
X
?PG
!
VR.>R>;E/GU@RG;Y0?P:;XX
<
J
?N0E@P.G0@;0U@RG;Y?P@.?0?N:.>P?/
X
?PG/+
"
%
#
[0
@RG:G.?/.//@;
M
G
!
!"##;0U#!$#GW
X
PG//.?0.0
*
H.0S
+
VGPG@RGR.
M
RG/@
!
%"&)V;/@RG&
KRG/G
@RPGG
M
G0GGW
X
PG//.?0.0
*
TR?0
M
/R;0R?0
M
+
VGPG>?0@P;P
J
@?
*
H.0S
+!
;0U@RG*
H.0S/GGU<.0
M
+
M
P;
X
G/<;.UYG@VGG0
*
H.0S
+
;0U
*
TR?0
M
/R;0R?0
M
+
+4N@GP@RG:?0?0E>P?/
X
?PG/@;
M
G
!
@RPGG
M
G0GGW(
X
PG//.?0.0
*
H.0S
+
VGPG;J
/!
!"##GW
X
PG//.?0M
RG/@
!
#!$#;0U%"&)VGPG@RG
&
#!$#;0U%"&)GW
X
PG//.?0*
H.0S/GGU<.0
M
(%
+
VGPGR.
M
RG/@.0@RG:?0?0E>P?(
/
X
?PG/@;
M
G
!
;0U#!$#GW
X
PG//.?0.0
*
H.0S/GGU<.0
M
(#!
+
V;/R.
M
RG/@.0@RGY.0E>M
G+KRG/@EU
J
/R?VGU@R;@
*
H.0S/GGU<.0
M
(%
+
;Y0?P:;<@;
X
G@E:UG
M
P;U;@.?0V;/
X
P?Y;Y<
J
PG<;@GU@?@RG!"##.0/ENN.(
>.G0@GW
X
PG//.?0.0@RG:G.?/.//@;
M
G
!
@RG#!$#?QGPGW
X
PG//.?0.0@RG:?0?0E>P?/
X
?PG/@;
M
G
!
;0U
%"&)E0E/E;X
PG//.?0.0@RG:?0?0E>P?/
X
?PG/@;
M
G+
*
H.0S/GGU<.0
M
(#!
+
;Y0?P:;<@;
X
G@E:UG
M
(
P;U;@.?0V;/
X
P?Y;Y<
J
PG<;@GU@?@RG!"##.0/ENN.>.G0@GW
X
PG//.?0;0U%"&)?QGPGW
X
PG//.?0.0@RG:G.?/./
/@;
M
G
!
;0U@RG#!$#?QGPGW
X
PG//.?0.0@RGY.0E>M
G+
?2
-
@"%!1
$
M
P;
X
G
&
>
J
@?M
.>;J
&
@;
X
G@E:
&
/G:.(/@GP.&
M
G0GGW
X
PG//.?0
!!
植物雄性不育是一种植物在有性繁殖过程中雄
性器官发育由于受到某些内,外因素的影响不能产
生正常的花药,花粉或雄配子体的遗传现象)雄性
不育在植物界中很常见!迄今为止已在
)%
科!
#,!
属的
%!"
种植物中发现
,#&
例天然的或种属间杂交
来源的雄性不育#()过去关于植物雄性不育的研究
主要集中在水稻,高粱,小麦等农作物以及一些草本
植物方面!对于多年生木本植物雄性不育的研究相
对较少!主要有杉木!(%(,桃)(&(,枣1(,芒果*(,板
栗#"(#!(,梨#%(#$(等!关于葡萄雄性不育的研究主要
有雄性不育种质特性研究#,(,不育种质生理生化分
析#&(#1(以及雄性不育基因的定位#*(,克隆!"()
半不育现象在
#*!#
年就有发现!
KGP;?

!#
(在水
稻品种-
6GS.
J
;:;
.中发现了
#
株半不育突变株!
#**$
年在 -
F;S;@G(/R.0/G0Y?0
.品 种 和 -
F.
XX
?0
Y;PG
.品种中也发现了半不育突变体!突变率分别为
#+,1\#"
)
,
1+$!\#"
$

!!
(
)但是关于其半不育特
性及其发生原因的研究较少!
TR?E
等!%(观察了
-
F.
XX
?0Y;PG
.水稻的后代半不育突变体
V!"&(!
的
花粉形态及其不育特性!并从中克隆了
())*+
,*-./,0*1.).0
2
#
基因)目前!在果树上半不育的相
关研究还尚未见报道)
绒毡层位于小孢子母细胞和花药壁体细胞之
间!广泛存在于陆生植物中并为孢子体母细胞,小孢
子,花粉粒提供必需的营养!因此有着相当大的生理
意义!)()绒毡层的发育是一个复杂而精密的细胞
行为!而且是在极短时间内接连完成!其中涉及到了
大量基因的特异性表达!目前大多数的花粉败育都
与绒毡层的异常活动有关系)
TRE
等!$(对拟南芥
绒毡层形成,发育和功能必不可少的
1
个调控基因
进行分析!假设了一个绒毡层发育的调控网络!在这
个绒毡层发育转录调控网中!
!"##
处于
,3
%
455
和
6%,#
%
67,
的下游!在绒毡层细胞命运决
定后调控绒毡层的发育!这也符合该基因在绒毡层
分化与发育过程中的先后表达顺序!
#!$#
位于
!"##
的下游!对绒毡层向分泌型态的转化起到重
要作用)
80%"&#"%
%
%,#11
处于
#!$#
下游!调
控绒毡层后期的发育与花粉壁形成)
本试验的研究对象是从*魏可+"可育#葡萄自交
后代中选育出来的单株!*魏可+实生种子于
!""1
年
播种!
"##
,
!"#!
年开花,结果过程中发现部分单株
表现出类似于雄性不育的异常表现)对花器官外部
形态观察,活力测定及花粉粒形状进行观察以及细
胞层次分析!并对绒毡层发育的关键相关基因进行
1#%#
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
了表达分析!为进一步探讨其半不育产生的原因及
分子机理提供基本依据)
#
!
材料和方法
A+A
!
试验材料
葡萄品种*魏可+"可育#"
9:;.+.
<
*1=]+>Q+
H.0S
#,*钟山红+"雄性不育#以及
!
个*魏可+自交
后代单株*魏可实生
(%
+,*魏可实生
(#!
+)
A+B
!
方
!
法
A+B+A
!
花粉外部形态观察
!
于盛花期采集上述材
料的花蕾!将采集的新鲜花蕾于体 式 显 微 镜
"
?^@.>_()""]
#下拍照!观察花器官外观形态)
A+B+B
!
花粉生活力测定
!
花前
#
周将花序套袋!初
花期采集花蕾!取下花药于培养皿中!
$`
培养
!)
R
!收集花粉放入指形管中!干燥后置于
)`
冰箱储
存备用)取低温条件下保存的花粉采用离体萌发
法!,(测定其花粉生活力!滴
#
滴萌发培养 基
"
+"#A
的硼酸,
#"A
的蔗糖和
#A
的琼脂#于载玻
片上!待其冷却后!将花粉均匀散播于培养基表面!
!$
"
%"`
培养
!)R
萌发)在光学显微镜"
L<
J
:
X
E/
37($%!"1%
#下观测萌发情况!统计
$
个视野下总共
%""
粒花粉的萌发率!花粉管长度大于花粉粒直径
的视为萌发)
A+B+C
!
花粉粒形态的观察
!
取初花期的花粉粘于
双面胶上!经过处理后喷金镀膜"日立
9(#"#"
离子
溅射仪#!在扫描电子显微镜"日立
6(%"""F
型#下
观察拍照)参照牛立新等!&(应用标准差法统计花
粉粒的大小及形态)
A+B+D
!
花药及小孢子细胞学观察
!
从幼蕾期到初
花期!分别采集上述材料的花蕾!每
)U
采样
#
次!
用于小孢子细胞学观察)不同品种不同发育时期的
花粉用
a44
分别固定!
)`
保存)采用石蜡切片技
术!厚度
,
"
1
#
:
!铁矾
(
苏木精染色!固绿复染!中
性树胶封固!1(!*(!光学显微镜观察并拍照)
表
A
!
荧光定量
6,:
引物序列
K;Y!
KRG
X
P.:GP/N?P
=
bK(c8b
基因
2G0G
引物名称
cP.:GP0;:G
引物序列
cP.:GP/G
=
EG0>G
"
$d
#
%d
#
8>0.+
8>0.+(a
8>0.+(b
K4844KK884K84K2442K2K24K2
KK42442848KK88K2K244844K2
!"##
!"##(a
!"##(b
2KK2442K248K44K4K424K22
22422K42K44842422K4
#!$#
#!$#(a
#!$#(b
42442442488KK4KK2KK4
28KK42K4KK8842K42KK
%"&)
%"&)(a
%"&)(b
224K24444K22224424248K22
K8KK2888K8K28K2KK2K4K442
A+B+E
!
基因表达分析
!
采用改良
8K43
法%"(提取
葡萄各个发育时期的花蕾的
bF4
!第一链
>5F4
的合成参照
cP.:G6>P.
X
@
$
#/@6@P;0U>5F46
J
0(
@RG/./_.@
"
K;_;b;
#操作说明书)
>5F4
稀释
#"
倍后!取
#
#
]
用于表达分析)荧光定量
bK(c8b
分析以
8>0.+
为内参基因!在
F83[
上根据拟南芥
!"##
,
#!$#
,
%"&#"%
基因!查找葡萄中相似性最
高的序列!表达分析所用引物见表
#
!反应体系为稀
释
#"的
>5F4#
#
]
!上下游引物分别为
"+!
#
]
!
6C3bcPG:.W9W#=
?
"
K;_;b;
#
"
#
]
!
UUO
!
L1+,
#
]
)反应程序为
*$`
预变性
):.0
&
*$`
变性
!"
/
!
,"`
退火
!"/
!
&!`
延伸
)"/
!
)"
个循环)数据
分析采用
&%""/
J
/@G:
软件和
!

$$
@@的方法)
!
!
结果与分析
B+A
!
花粉外部及花药形态观察
与*魏可+相比!*魏可实生
(%
+,*魏可实生
(#!
+
开花后雄蕊花丝表现出不同程度的卷曲)*钟山红+
是雌能花品种!其花丝短,花药翻卷%#()*魏可实
生
(%
+和*魏可实生
(#!
+花丝卷曲但并未翻卷!花丝
短于花柱)*魏可+的花药中含有较多的花粉!*魏可
实生
(%
+和*魏可实生
(#!
+的花粉含量较少"图
#
!
4
"
O
#)
B+B
!
花粉生活力鉴定
*魏可+花粉的萌发率约为
&"A
!*魏可实生
(
%
+,*魏可实生
(#!
+的花粉萌发率都为
#"A
左右!萌
发率明显低于*魏可+!只具有一定的萌发能力!*钟
山红+的花粉无萌发力"图
!
!
4
"
5
#)
B+C
!
花粉粒形态观察
*魏可+花粉粒为长球形!外壁为孔穴状纹饰!中
间分布稀少!两端较为密集"图
!
!
9
#&*钟山红+花粉
粒为近球形!花粉外壁为网状及其他不规则状纹饰
"图
!
!
,
#!*魏可+实生单株包含有长球形花粉粒,近球
形花粉粒以及极度变形的花粉粒!长球形花粉粒与
*魏可+外形极为相似"图
!
!
2
,
O
所示正常的花粉
粒#&*魏可实生
(%
+和*魏可实生
(#!
+部分变形花粉粒
与*钟山红+相似"图
!
!
2
,
O
所示异常的花粉粒#)
B+D
!
花药和小孢子主要发育时期的细胞学观察
葡萄含有
)
"
$
枚雄蕊!每个花药由
)
个花粉囊
和药隔构成!从*魏可+花药的横切面上可看到正常
花药由花粉囊壁和小孢子母细胞组成!花粉囊壁由
表皮层,药室内壁,中层和绒毡层组成!围绕着中央
的花粉母细胞"图版
%
!
#
#&小孢子母细胞经过减数
分裂后!包围四分体的胼胝质降解!单核小孢子游离
*#%#
&
期
!!!!!!!!!!
余晓娟!等$葡萄半不育花粉粒形态和细胞学观察及相关基因表达分析
出来!刚游离出来的小孢子排列稀松且不规则!小孢
子细胞质较浓!细胞核位于中央!绒毡层开始降解!
细胞变薄变扁平!药室内壁增厚"图版
%
!#&小孢子
逐渐发育!体积变大!大部分细胞核从中央移至细胞
一侧!称为单核早期或单核靠边期!此时!表皮细胞
逐渐变得扁平!药室内壁细胞切向伸长!呈纤维状排
图
#
!
葡萄花器官外部形态及花药观察
4
"
5
分别为魏可,魏可实生
(%
,魏可实生
(#!
和钟山红花器官&
9
"
O
分别为魏可,魏可实生
(%
,魏可实生
(#!
和钟山红花药
a.
M
+#
!
KRG;
XX
G;P;0>G?NN45PG
X
PG/G0@H.0S
!
H.0S/GGU<.0
M
(%
!
H.0S/GGU<.0
M
(#!;0UTR?0
M
/R;0R?0
M
N!
PG/
X
G>@.QG<
J
&
9OPG
X
PG/G0@H.0S
!
H.0S/GGU<.0
M
(%
!
H.0S/GGU<.0
M
(#!;0UTR?0
M
/R;0R?0
M
;0@RGP
!
PG/
X
G>@.QG<
J
图
!
!
花粉萌发及花粉粒扫描电镜和透射电镜分析
4
"
5
分别为魏可,魏可实生
(%
,魏可实生
(#!
和钟山红花粉萌发状况&
9
"
O
分别为魏可,
钟山红,魏可实生
(%
和魏可实生
(#!
成熟花粉的扫描电镜图&红色箭头为正常花粉&白色箭头为异常花粉
a.
M
+!
!
KRG;
XX
G;P;0>G?N
M
GP:.0;@.?0?N
X
?;00.0
M
G@P?0
:.>P?/>?
X
G
"
69^
#
.:;
M
G/?N@RG:;@EPG
X
?M
P;
X
G
45PG
X
PG/G0@H.0S
!
H.0S/GGU<.0
M
(%
!
H.0S/GGU<.0
M
(#!;0UTR?0
M
/R;0R?0
MM
GP:.0;@.?0?N
X
?!
PG/
X
G>@.QG<
J
&
9OPG
X
PG/G0@69^.:;
M
G?N@RG:;@EPG
X
?M
P;.0NP?:H.0S
!
TR?0
M
/R;0R?0
M
!
H.0S/GGU<.0(%;0UH.0S/GGU<.0(#!
!
PG/
X
G>@.QG<
J
&
bGU;PP?V//@;0UN?P0?P:;<
X
?&
HR.@G;PP?V//@;0UN?P;Y0?P:;<
X
?列!绒毡层细胞逐渐降解"图版
%
!
%
#&之后小孢子的
细胞核进行有丝分裂!生成
!
个核!呈心形凹陷!形
成
!
个细胞!即生殖细胞和营养细胞!此时期!双核
花粉粒积累营养物质!染色较深!绒毡层显著解体!
核消失!内含物消失"图版
%
!
)
#&花粉成熟时期!*魏
可+花粉粒形态均匀一致!染色深!之后两相邻的药
室相连!药室开裂!散出花粉"图版
%
!
$
#)
*魏可实生
(%
+花粉囊壁由表皮层,药室内壁,中
层和绒毡层组成!但结构层次不明显!围绕着中央的
小孢子细胞!小孢子母细胞稀少,疏松"图版
%
!
,
#&
小孢子母细胞经过减数分裂后形成四分体!但从四
分体游离出来的小孢子含量少!部分四分体的胼胝
质不降解!小孢子不能正常游离出来!中层细胞已变
成薄层!绒毡层细胞未降解!染色深"图版
%
!
&
#&单
核靠边期!表皮细胞变扁平!药室内壁细胞纤维状排
列!但绒毡层才开始降解"图版
%
!
1
#&双核期!绒毡
"!%#
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
层细胞未完全降解!花粉囊中出现空壳花粉"图版
%
!
*
#&花粉成熟时!花粉粒大小不一!染色不均匀!
绒毡层并没有降解完全!将花粉包围!花粉无法正常
散出"图版
%
!
#"
#)
*魏可实生
(#!
+花药同样具有表皮层,药室内
壁,中层和绒毡层结构!但结构不明显!花粉母细胞
位于中央"图版
%
!
##
#&小孢子母细胞形成四分体
后!能够正常释放小孢子!绒毡层细胞已大部分降
解!说明*魏可实生
(#!
+绒毡层细胞在小孢子释放前
已经开始降解"图版
%
!
#!
#&单核靠边期!表皮细胞,
药室内壁细胞正常发育!绒毡层细胞显著降解!还存
在空壳花粉粒"图版
%
!
#%
#&小孢子细胞有丝分裂进
入双核期!绒毡层几乎完全降解成薄层!花粉囊中含
图
%
!
绒毡层发育相关基因的表达分析
%
+
减数分裂期&
$
+
单核早期&
&
+
单核晚期&

+
双核期&
(
+
成熟花粉期
a.
M
+%
!
9W
X
PG//.?0;0;<
J
/./?N@RG@;
X
G@E:
UGQGX
:G0@PG<;@GU
M
G0G
%
+^ G.?/.//@;
M
G
&
$
+^ ?0?0E>P?/
X
?PG/@;
M
G
&
&
+];@G
:?0?0E>P?/
X
?PG/@;
M
G
&

+3.0E>M
G
&
(
+^;@EPG/@;
M
G
有空壳,染色较浅的花粉粒"图版
%
!
#)
#&花粉成熟
期!绒毡层消失!花粉囊中花粉粒大小不一!染色浅!
而且还存在空壳花粉粒"图版
%
!
#$
#)
在*魏可实生
(#!
+的部分花药中发现不分化的
细胞团!没有药室内壁,中层及绒毡层的分化!没有
小孢子母细胞的形成!也没有小孢子的发生和发育
"图版
%
!
#,
,
#&
#!试验中还发现没有花粉的空花粉
囊!不具有可育花药的药室结构"图版
%
!
#1
#)*魏
可实生
(%
+和*魏可实生
(#!
+并不是所有的小孢子都
发育异常!还有少部分小孢子能够正常发育!最终形
成正常的成熟花粉粒"图版
%
!
#*
,
!"
#)
B+E
!
绒毡层发育相关基因的表达分析
图
%
所示!在减数分裂期!*魏可+的绒毡层发育
相关基因
!"##
,
#!$#
表达量均最高!
%"&)
最
低!*钟山红+的
%
个基因的表达情况与*魏可+相反!
*魏可实生
(%
+*和*魏可实生
(#!
+的表达水平均在
*魏可+与*钟山红+之间&单核早期开始到花粉成熟!
%
个基因在*魏可+中的表达水平一直均较低!*钟山
红+的
!"##
基因表达量一直最高!
#!$#
,
%"&)
基因表达水平一直最低!*魏可实生
(%
+
#!$#
基因
在单核早期表达量最高!
%"&)
基因在单核晚期表
达量最高!*魏可实生
(#!
+的
#!$#
基因在双核期表
达量最高!
%"&)
基因表达水平一直最低)
%
!
讨
!
论
C+A
!
*魏可实生
(C
+和*魏可实生
(AB
+半不育特性的
分析
*魏可实生
(%
+和*魏可实生
(#!
+雄蕊花丝卷曲!
花药中花粉量少!花粉萌发率仅
#"A
左右!花粉存
在
!
种形态!一种为正常长球形!含有萌发沟!另一
种为异常近球形!不含萌发沟)正常花粉与*魏可+
"可育#形态相似!异常花粉与*钟山红+"雄性不
育#%#(相似!根据牛立新等!&(,贺普超%!(对葡萄雄
性不育的描述!属于葡萄雄性不育类型)按照贺和
初等%%("水稻#对花粉育性的划分!*魏可实生
(%
+和
*魏可实生
(#!
+花粉萌发率
#"A
左右!属半不育花
粉!按照
b;
-
等%)(的划分标准!属于部分不育花粉)
周时荣%$(研究发现
V!"&(!
半不育是由于
AB/
C.+*B.+(#
基因中一个单碱基的突变造成了其编码
的驱动蛋白中的一个与微管结合相关的关键氨基酸
的改变!进而导致其不能正常地参与减数分裂过程
中涉及染色体运动的联会,分离等过程!造成部分花
粉缺失
#
条或多条染色体!并在单核期逐渐开始退
化为没有任何内容物的空壳花粉!最终形成了花粉
#!%#
&
期
!!!!!!!!!!
余晓娟!等$葡萄半不育花粉粒形态和细胞学观察及相关基因表达分析
的半不育)*魏可实生
(%
+和*魏可实生
(#!
+是*魏
可+自交后代性状分离得到的单株!小孢子细胞切片
观察到*魏可实生
(%
+在花粉成熟期仍有绒毡层包
围!部分花粉粒异常!*魏可实生
(#!
+的绒毡层则在
单核早期就大部分降解!单核晚期观察不到明显的
绒毡层!最终药室内出现异常花粉!这可能是基因调
控导致绒毡层发育异常!最终不能为花粉发育提供
足够的营养!导致部分花粉不育)
C+B
!
*魏可实生
(C
+和*魏可实生
(AB
+小孢子败育的
时期和原因分析
不同种植物,同一种植物不同品种雄性不育的
败育机理都不尽相同!在花粉发育的所有阶段都可
能发生败育!单子叶植物多数在单核至双核期!双子
叶植物多发生在四分体至小孢子形成期%,()目前
大多数的研究发现!多数植物绒毡层发育不正常是
导致花粉败育的一个主要原因)绒毡层是药室壁的
最内层!包围着小孢子!在花粉形成和发育中起重要
的作用$产生和输送给小孢子正常发育所需的酶类,
激素类和营养物质&合成胼胝质酶!分解包围在四分
体周围的胼胝质壁&提供构成花粉外壁的孢粉素)
绒毡层发育和降解的异常!往往会影响小孢子的正
常发育!有研究%&(认为花粉败育是由于绒毡层细胞
在花粉形成和发育过程过度肥大液泡化,提前或延
后退化)
本研究中*魏可实生
(%
+,*魏可实生
(#!
+没有明
显的药室壁结构!小孢子母细胞稀少,疏松!这可能
与早期原生造孢细胞和平周细胞的分化异常有
关%1()*魏可实生
(%
+双核期绒毡层未完全降解!一
直到花粉成熟期还存在!包围着成熟的花粉粒!绒毡
层细胞中的营养滞留其中!没有及时供应小孢子的
发育!引起后期小孢子的败育!部分花粉粒异常)
*魏可实生
(#!
+绒毡层细胞在单核早期就大部分降
解!过早降解导致营养供应异常!部分小孢子败育!
这与刘倩等#,(在*钟山红+小孢子发育的单核早期
观察到的现象一致)
本研究中还发现没有花粉的空花粉囊"图版
%
!
#&
#!罗来水等,(对桃树
!%
个品种花粉发生发育和
花粉败育过程中细胞形态学上的变化特征研究!发
现了相似的现象!指出在花粉处于单核晚期
(
二核早
中期绒毡层细胞发生液化,增生现象和花粉母细胞
减数分裂不正常是导致大多数桃树品种产生空粒花
粉的主要原因)但本研究中*魏可实生
(#!
+小孢子
发育的单核晚期
(
二核早期中并未观察到绒毡层液
化,增生现象!空花粉囊可能是因为绒毡层提前解
体!无法正常分泌胼胝质酶!小孢子很难从四分体中
游离出来!而且绒毡层细胞中营养物质流失!无法为
小孢子正常发育提供营养)
C+C
!
*魏可实生
(C
+和*魏可实生
(AB
+绒毡层发育异
常的基因调控分析
!"##
"
!",$D4@#EA483#86#D%#
#编
码一个在花药发育早期表达的
Y;/.>RG<.W(X
(RG(
<.W
"
YO]O
#家族转录因子!控制着绒毡层特异基因
的表达!在花药发育前期的绒毡层中强烈表达!
!"##
突变体绒毡层细胞出现异常的空泡化和肥
大!无法转为分泌型细胞!导致小孢子提前降解!完
全雄性不育%*(&
#!$#
"
!6$6@#E96E4 #86/
#83!6963A%64#
#是一个在绒毡层,花粉母
细胞和小孢子中强烈表达的
%"&
家族的转录因
子!调控了绒毡层细胞的分裂以及正常的分泌功能!
是控制胼胝质解体的重要元件!
0F
<
#
突变体表型类
似于
F
2
0#
!绒毡层细胞无法进一步分化为分泌型的
细胞!不能正常分泌胼胝质酶!最后胼胝质无法降解
使小 孢 子 聚 集 在 花 粉 囊 中!完 全 败 育)"(&
80/
%"&#"%
在拟南芥绒毡层中特异性表达并对绒毡层
功能起重要作用!编码
%"&
家族转录因子!其突变
体
=0-
2
G#"%
花药发育过程中绒毡层提早降解和花
粉畸形)#(!葡萄中的
%"&)
基因是
80%"&#"%
的
同源基因!均属于
%"&
转录因子家族!具有相同的
结构功能域)
本研究中!从*钟山红+单核早期到花粉成熟!
!"##
基因的表达水平一直较高!它的过量表达抑制
了下游
#!$#
基因的表达!进而导致了下游
%"&)
基因减数分裂期超量表达!从而影响绒毡层发育!*钟
山红+绒毡层提前降解#,(&*魏可实生
(%
+
!"##
基因
在减数分裂期表达量远低于*魏可+!
#!$#
基因在单
核早期表达量最高!
"##
基因表达量不足抑制下游
#!$#
基因在减数分裂期的表达!而
#!$#
基因单核
早期的过量表达导致下游
%"&)
基因在单核早期表
达量异常增加!导致绒毡层延迟降解&*魏可实生
(#!
+
!"##
基因在减数分裂期表达量低于*魏可+!
!"##
基因减数分裂期的表达量不足导致了
#!$#
基因在
双核期,花粉成熟期过量表达!最终下游
%"&)
基因
过量表达!绒毡层提前降解)同时
#!$#
基因还是控
制胼胝质解体的重要元件!
#!$#
异常表达不仅会影
响绒毡层降解!而且还会影响绒毡层分泌胼胝质酶!
导致胼胝质壁无法正常解体!进而影响小孢子的释
放!*魏可实生
(#!
+观察到的空花粉囊可能与
#!$#
基因双核期过量表达有关)
!"##
,
#!$#
,
%"&)
基
!!%#
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
因编码蛋白调控绒毡层发育的具体作用机理还有待 于进一步研究探讨)
参考文献!

#
(
!
_4D] ]^+^ ;J
.0O.
M
RGPc<;0@/

^
(
+FGVC?PS
$
6
X
P.0
M
GP(eGP<;
M
!
#*11
$
%,+

!
(
!
][c
"李
!
平#!
CD7O
"余象煜#!
]fOa
"吕洪飞#
+8?:
X
;P;@.QG/@EU.G/?0UGQGX
:G0@;<;0;@?:
J
!
X
R
J
/.?MJ
;0UY.?>RG:./@P
J
?N:.(
>P?/@P?Y.X
<;0@/.0@H++.+
I
J=-.=)=+>*()=0=

I
(
:,>.*+0.=,.);=*,.+.>=*
"林业科学#!
#**!
!
BF
"
!
#$
##$
#!#
"
.08R.0G/G
#
+

%
(
!
]fOa
"吕洪飞#!
CD7C
"余象煜#!
][c
"李
!
平#!
*0=)+9@P?0:.>P?/>?
X
G?Y/GPQ;@.?0?0@RG:.>P?/
X
?P;0
M
.E:UGQGX
:G0@.0:;/@GP.X
<;0@;0U:;X
<;0@?N@H++.+
I
J=-.=)=+>*()=0=

I
(
:K(H1+=)(
<
LHJ=+&(0=+.>=)M*B*=1>J
"武汉植物学研究#!
#**&
!
AE
"
!
#$
*&#"!
"
.08R.0G/G
#
+

)
(
!
6O9FCC
"沈元月#!
H4F258O
"王东昌#
+8
J
@?:?P
X
R?MJ
?N:.>P?/
X
?P?
M
G0G/./.0:;*
8RE;0ZR?0
M
U;?
+
VR.@G
X
G;>R

I
(
+
@J.+:K(H1+=)(
<
8
NN
).*F6+;.1(+-*+0=)&.()(
I2
"应用与环境生物学报#!
""!
!
F
"
)
#$
)%$)%&
"
.08R.0G/G
#
+

$
(
!
]DL]6O
"罗来水#!
7[4L57
"肖德兴#!
ODL2O
"霍光华#
+4
X
P.:;P
J
/@EU
J
?0:;J
.0
X
G;>R
$
[
X
RG0?@
JX
G/;0U;Y?P@.QG
V;
J
/?N@RGN.P/@Y;@>R?N!%:;X
G;>R

I
(
+8>0=8
I
1.>H)0H1=*D+.;*1B.0=0.BK.=+
I
O.*+B.B
"江西农业大学学报#!
#***
!
BA
"
)
#$
),%),1
"
.08R.0G/G
#
+

,
(
!
]DL]6O
"罗来水#!
7[4L57
"肖德兴#!
ODL2O
"霍光华#!
*0=)+cRG0?@
JX
G/?N:;X
;@RV;
J
/;:?0
M
X
G;>RQ;P.G@.G/

I
(
+K(H1+=)(
<
$1H.0,>.*+>*
"果树科学#!
"""
!
AG
"
!
#$
1**,
"
.08R.0G/G
#
+

&
(
!
]DL]6O
"罗来水#!
ODL2O
"霍光华#!
][DC
"刘
!
勇#
+KRGPG<;@.?0YG@VGG0:;J
;0UNPGG;:.0?;>.U>?0@G0@?NNM
;0.0
X
G;>R

I
(
+K(H1+=)(
<
$1H.0,>.*+>*
"果树科学#!
"""
!
AG
"
)
#$
!$$!,"
"
.08R.0G/G
#
+

1
(
!
王玖瑞
+
枣树雄性不育和胚败育研究
5
(
+
河北保定$河北农业大学!
"")+

*
(
!
a4F^K
"范眸天#!
][6OC
"李树云#!
][C
"李
!
云#
+6@EU.G/?0@RG:;J
;0U
X
?X
P?E@.0
M
?N:;0
M
?

I
(
+K(H1+=)(
<
"H++=+
8
I
1.>H)0H1=)D+.;*1B.0
2
"云南农业大学学报#!
#**,
!
AA
"
#
#$
!$!&
"
.08R.0G/G
#
+

#"
(
!
][D23
"刘国彬#!
]4FCc
"兰彦平#
+4UQ;0>G/.0PG/G;P>R?0:;J
?N8R.0G/G>RG/@0E@
"
@=B0=+*=-()).BB-=3#
I
(
+@J./
+*B*8
I
1.>H)0H1=),>.*+>*&H))*0.+
"中国农学通报#!
"##
!
BG
"
#,
#$
&$&1
"
.08R.0G/G
#
+

##
(
!
][D]O
"刘丽华#!
][32
"李保国#!
2DCO
"顾玉红#!
*0=)+KRG:?P
X
R?M
.>;<>R;P;>@GP./@.>/;0U@RG>R;0
M
G/?NG0U?
M
G0?E/R?P:?0G
>?0@G0@/UEP.0
M
@RGUGQGX
:G0@?N:;G0>G.0@RG:;RG/@0E@

I
(
+@J.+*B*P(10.>H)0H1*8GB01=>0B
"中国园艺文摘#!
!""*
!
BE
"
)
#$
!#!1
"
.08R.0G/G
#
+

#!
(
!
][D]O
"刘丽华#!
][32
"李保国#!
B[2O
"齐国辉#!
*0=)+bG<;@.?0/R.
X
/YG@VGG0/?:G
X
P?@G>@.QGG0Z
J
:G/;>@.Q.@.G/
!
^54>?0@G0@;0U
:;G0>G?N:;RG/@0E@

I
(
+,>.*+0.=,.);=*,.+.>=*
"林业科学#!
""&
!
DC
"
)
#$
#!##!)+

#%
(
!
2DLC]
"郭艳玲#!
][DTO]
"刘招龙#!
TO4F26O]
"张绍铃#
+8
J
@?M
.>;J
?0@RG:.>P?/
X
?PG;Y?P@.?0.0
X
G;P>E<@.Q;PF.@;S;
;0U4@;
M
?

I
(
:K(H1+=)(
<
$1H.0,>.*+>*
"果树学报#!
""&
!
BD
"
)
#$
)%%)%&
"
.08R.0G/G
#
+

#)
(
!
O4F4O
"韩爱华#!
C[F_]
"尹克林#!
6LF2]B
"宋来庆#!
*0=)+8
J
@?M
.>;J
?N:;J
;0U
X
?X
G;P
"

2
1HB
/
XX
+
#
e;P.G@
J
*
7.0<.&"
+
I
(
+K(H1+=)(
<
,(H0JQ*B08
I
1.>H)0H1=)D+.;*1B.0
2
"西南农业大学学报#!
"")
!
BH
"
#
#$
,),&
"
.08R.0G/G
#
+

#$
(
!
ODII
"胡静静#!
TO4LI
"赵
!
静#!
6O9F7
"沈
!
向#
+8
J
@?M
.>;J
?0:;J
.0
2
1HB
N2
1.
<
().=F;S;

I
(
+@J.+*B*8
I
1./
>H)0H1=),>.*+>*&H))*0.+
"中国农学通报#!
"#"
!
BH
"
!
#$
#1$#11
"
.08R.0G/G
#
+

#,
(
!
][DB
"刘
!
倩#!
TOLD33
"周蓓蓓#!
TO4F2B]
"张其林#!
*0=)+8
J
@?M
.>;J
?N:;J
;0U
X
?JX
G/
?N
M
P;
X
G/

I
(
+K(H1+=)(
<
$1H.0,>.*+>*
"果树学报#!
"#"
!
BG
"
)
#$
#)$!"
"
.08R.0G/G
#
+

#&
(
!
TO9F2O
"郑
!
焕#!
b9FIc
"任俊鹏#!
I[4C
"贾
!
癑#!
*0=)+8R;0
M
G/?N
X
R
J
@?R?P:?0G>?0@G0@/UEP.0
M
;0@RGP;Y?P@.?0?N:;0GV
M
P;
X
GQ.0G/G@.?0
*
!"")(,(#!
+
I
(
+K(H1+=)(
<
$1H.0,>.*+>*
"果树学报#!
"#!
!
BI
"
%
#$
%$"%$)
"
.08R.0G/G
#
+

#1
(
!
][DB
"刘
!
倩#!
K4LI^
"陶建敏#!
TO4F2B]
"张其林#!
*0=)+3.?>RG:.>;<;0;<
J
/./?N:;J
(YPGU!"")(,(#!
"
H.0S
/GGU<.0
M
#
UEP.0
M
NX
:G0@

I
(
+8>0=8
I
1.>H)0H1=*D+.;*1B.0=0.BK.=+
I
O.*+B.B
"江西农业学报#!
!"#"
!
BB
"
#
#$
$)$,
"
.08R.(
0G/G
#
+

#*
(
!
I[8Oa
"季晨飞#!
TO4F2^C
"张明月#!
H4F2IC
"王继源#!
*0=)+2G0G@.>:;
XX
.0
M
?N@RG:;M
G0G.0
M
P;
X
G

I
(
+8>0=&(0:
&(1*=):/A>>.F*+0:,.+:
"西北植物学报#!
"#)
!
CD
"
##
#$
!#,$!#,*
"
.08R.0G/G
#
+

!"
(
!
TO9F2O
"郑
!
焕#!
TO4F2IC
"张计育#!
H4F27H
"王新卫#!
*0=)+8M
;0UGW
X
PG//.?0;0;<
J
/./?N;:;J
(PG<;@GU
M
G0G
9;%,!NP?:
M
P;
X
G/

I
(
+,>.*+0.=8
I
1.>H)0H1=,.+.>=
"中国农业科学#!
"#%
!
DH
"
#)
#$
!*$%!*,!
"
.08R.0G/G
#
+
%!%#
&
期
!!!!!!!!!!
余晓娟!等$葡萄半不育花粉粒形态和细胞学观察及相关基因表达分析
!#
(
!
K9b4bLO+^ E@;@.?0?N/G:.(/@GP.<.@
J
;0U.@/.0RGP.@;0>G.0P.>G

I
(
+K=
N
=+*B*K(H1+=)(
<
R*+*0.>B
!
#*!#
!
#
$
)$$)+

!!
(
!
[_9O46O[O
!
C4^42D8O[+6G:.(/@GP.PG;/G?NP.>G

I
(
+4(H
I2
(HA
2
(G.*+
I
*.
!
"""
!
&$
$
&""&")+

!%
(
!
TOLD6b
!
H4F2C
!
][H8
!
*0=)+c?J
#G0>?UG/;S.0G/.0(#(<.SG
X
P?@G.0.:
X
?P@;0@N?P:;!
;0@RGPUGR./(
>G0>G
!
;0UNGP@.<.@
J
.0P.>G

I
(
+#J*)=+0@*))
!
"##
!
BC
"
#
#$
####!*+

!)
(
!
9KKLb9c48[F[
!
2+2+ab4F8O[
!
[^8O49]O9669+KRG@;
X
G@E:
$
.@/N?P:
!
NE0>@.?0;0U
X
?//.YX
R
J
M
G0
J
.0G:YP
J
?
X
R
J
@;

I
(
+
)=+0,
2
B0*-=0.>=+F6;()H0.(+
!
#*1$
!
ADI
"
%
%
)
#$
#$$#1$+

!$
(
!
TODI
!
8O9FO
!
][O
!
*0=)+5GNG>@.QG.0@;
X
G@;X
:G0@;0UNE0>@.?0#./G//G0@.;X
:G0@;0U@;
X
G@;@.?0
N?P:.>P?/
X
?PG:;@EP;@.?0.081=G.F(
N
B.B

I
(
+)=+0K(H1+=)
!
""1
!
EE
"
!
#$
!,,!&&
!
$!+

!,
(
!
OD6OC
"胡适宜#
+9W
X
GP.:G0@;<:G@R?U/.0
X
<;0@G:YP
J
?MJ
"
[
#
UG@GP:.0;@.?0?N
X
?J

I
(
+@J.+*B*&H))*0.+(
<
&(0=+
2
"植
物学通报#!
#**%
!
AJ
"
!
#$
,",!
"
.08R.0G/G
#
+

!&
(
!
][D]7
"牛立新#!
TO4F2C]
"张延龙#
+KRG/@EU
J
?0
X
?X
R?MJ
?N@RGV.
I
(
+8>0=P(10.>H)0H1=*
,.+.>=
"园艺学报#!
"""
!
BG
"
$
#$
%,#%,%
"
.08R.0G/G
#
+

!1
(
!
郑国铝
+
生物显微技术
^
(
+
北京$人民教育出版社!
#*&1
$
##"%+

!*
(
!
李正理
+
植物组织制片学
^
(
+
北京$北京大学出版社!
#**,
$
#!*#%&+

%"
(
!
TO4F2IC
"张计育#!
BD6O8O
"渠慎春#!
5LF28O
"董
!
畅#!
*0=)+D@.<.@
J
;0U>?0/@PE>@.?0?NNE<(M
@R>5F4<.YP;P
J
?N%=)HB
JH
N
*J*+B.B
X
?/@(.0@P?UE>GUV.@R/;<.>
J
<.>;>.U

I
(
+8>0=&(0:&(1*=):/A>>.F*+0:,.+:
"西北植物学报#!
"#"
!
CJ
"
1
#$
#$!&#$%%
"
.08R.(
0G/G
#
+

%#
(
!
K4LI^
"陶建敏#!
TO4F2TO
"章
!
镇#!
24LTOO
"高志红#!
*0=)+40GVGW>GMM
P;
X
G>E<@.Q;P
*
TR?0
M
/R;0R?0
M
+

I
(
+8>0=P(10.>H)0H1=*,.+.>=
"园艺学报#!
"#!
!
CI
"
#"
#$
!"1!!"1)
"
.08R.0G/G
#
+

%!
(
!
贺普超!罗国光
+
葡萄学
^
(
+
北京$中国农业出版社!
#**)
$
)*$"+

%%
(
!
O9O8O
"贺和初#
+4
X
PG<.:.0;P
J
/@EU
J
?0@RGNGP@.<.@
J
.0RGP.@;0>G;0U:;R;0./:?NR
J
YP.UP.>G?N5.;0#@
JX
G;0U3K
@
JX
G

I
(
+K(H1+=)(
<
"H++=+8
I
1.>H)0H1=)D+.;*1B.0
2
"云南农业大学学报#!
#*11
!
C
"
#
#$
),1
"
.08R.0G/G
#
+

%)
(
!
b4I_8
!
e[b4F[66+2G0G@.>/?NNGP@.<.@
J
PG/@?P;@.?0?N
*
H4
+
@
JX
G>
J
@?
X
<;/::;J
.0P.>G

I
(
+@1(
N
,>.*+>*
!
#*11
!
BF
"
$
#$
&1!
&*!+

%$
(
!
周时荣
+
水稻花粉半不育基因
c66#
的图位克隆与功能研究
5
(
+
南京$南京农业大学!
""1+

%,
(
!
_[F[4e
!
699KO4b4^4
!
IL6O[66+^ G>R;0./:?N
X
?
J
@?
X
<;/::;
I
(
+@
2
0()(
I
.=
!
#**)
!
EI
"
#
#$
#!##!)+

%&
(
!
2DLI7
"郭晶心#!
6DFba
"孙日飞#!
6LF2I7
"宋家祥#!
*0=)+^.>P?/
X
?P?
M
G0G/./?N/GQGP;<:;=1=
N
=]+
//
X
+
N
*S.+*+B.B

I
(
+8>0=P(10.>H)0H1=*,.+.>=
"园艺学报#!
"#!
!
CJ
"
#
#$
)*$)
"
.08R.0G/G
#
+

%1
(
!
Db6D]46
!
6Db96O_D^4b3
!
*0=)+^ ?E<;P;0;<
J
/./?NFLTT]9
!
;
M
G0G.0Q?X
;@@GP0N?P:;@.?0;0UG;P<
J
/
X
?P?
M
G0G/./
UEP.0
M
/GW?P
M
;0UGQGX
:G0@.081=G.F(
N
B.B0J=).=+=

I
(
+1(>**F.+
I
B(
<
0J*4=0.(+=)8>=F*-
2
(
<
,>.*+>*B
!
#***
!
IH
"
!"
#$
##,,)
##,,*+

%*
(
!
TO4F2H
!
6DFC
!
K[^ La9I9e4]
!
*0=)+bG
M
E<;@.?0?N81=G.F(
N
B.B@;
X
G@E:UGQGX
:G0@;0UNE0>@.?0Y
J
5C6aDF8K[LF4]K4(
c9KD #^
"
5CK#
#
G0>?U.0
M
;
X
E@;@.QGYO]O@P;0/>P.
X
@.?0N;>@?P

I
(
+!*;*)(
N
-*+0
!
"",
!
ACC
"
#,
#$
%"1$%"*$+

)"
(
!
TODI
!
8O9FO
!
][O
!
*0=)+5GNG>@.QG.0@;
X
G@;X
:G0@;0UNE0>@.?0#./G//G0@.;X
:G0@;0U@;
X
G@;@.?0
N?P:.>P?/
X
?PG:;@EP;@.?0.081=G.F(
N
B.B

I
(
+)=+0K(H1+=)
!
""1
!
EE
"
!
#$
!,,!&&+

)#
(
!
O[22[F6LFK
!
][6a
!
c4b[6ObH+4@^ C3#"%PG
M
E<;@G/@;
X
G@E:;0U@P.>RP?:GUGQGX
:G0@.081=G.F(
N
B.B0J=).=+=

I
(
+)=+0K(H1/
+=)
!
""%
!
CE
"
!
#$
#&&#*!+
)!%#
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
!!
图版
%!
魏可实生
(%
和魏可实生
(#!
花药和小孢子发育观察
9+
表皮层&
90+
室内壁&
]^+
中层&
K+
绒毡层&
KU+
四分体&
c^ 8+
花粉母细胞"小孢子母细胞#&
c2+
花粉粒
#
"
#$+
花药和小孢子发育过程$
#
"
$+
魏可&
,
"
#"+
魏可实生
(%
&
##
"
#$+
魏可实生
(#!
&
#,
,
#&+
魏可实生
(#!
未发育的孢原细胞团&
#1+
魏可
实生
(#!
空花粉囊&
#*+
魏可实生
(%
成熟花粉粒"正常#&
!"+
魏可实生
(#!
成熟花粉粒"正常#)
6(+.2
%!
KRGPG/E<@/?N;0@RGP;0U:.>P?/
X
?PG/UGQGX
:G0@
9+9
X
.UGP:./
&
90+90U?@RG>.E:
&
]^+^.UUJ
GP
&
K+K;
X
G@E:
&
KU+KG@P;U
&
c^ 8+^.>P?/
X
?PG:?@RGP>G<
&
c2+c?M
P;.0
a.
M
+##$+KRGUGQGX
:G0@?N;0@RGP/;0U:.>P?/
X
?PG/
$
a.
M
+#$+H.0S
&
a.
M
+,#"+H.0S/GGU<.0
M
(%
&
a.
M
+###$+H.0S/GGU<.0
M
(#!
&
a.
M
+
#,
!
#&+H.0S/GGU<.0
M
(#!E0UGQGX
GU;P>RG/
X
?P.;<>G<
&
a.
M
+#1+H.0S/GGU<.0
M
(#!G:
X
@
J
;0@RGP
&
a.
M
+#*+H.0S/GGU<.0
M
(%:;@EPG
X
?M
P;.0/
"
0?P:;<
#&
a.
M
+!"+H.0S/GGU<.0
M
(#!:;@EPG
X
?M
P;.0/
"
0?P:;<
#
+
!编辑"宋亚珍#
!!
$!%#
&
期
!!!!!!!!!!
余晓娟!等$葡萄半不育花粉粒形态和细胞学观察及相关基因表达分析