全 文 ：犇犗犐：１０．１１６８６／犮狔狓犫２０１５３７４ 犺狋狋狆：／／犮狔狓犫．犾狕狌．犲犱狌．犮狀
李健，李岩，高兴祥，房锋，李美．马唐生防菌厚垣孢镰刀菌ＺＣ２０１３０１的生物学特性研究．草业学报，２０１６，２５（３）：２３４２３９．
ＬＩＪｉａｎ，ＬＩＹａｎ，ＧＡＯＸｉｎｇＸｉａｎｇ，ＦＡＮＧＦｅｎｇ，ＬＩＭｅｉ．Ｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆ犇犻犵犻狋犪狉犻犪狊犪狀犵狌犻狀犪犾犻狊ｐａｔｈｏｇｅｎ犉狌狊犪狉犻狌犿犮犺犾犪犿狔犱狅狊狆狅
狉狌犿ｓｔｒａｉｎＺＣ２０１３０１．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１６，２５（３）：２３４２３９．
马唐生防菌厚垣孢镰刀菌犣犆２０１３０１的生物学特性研究
李健１，李岩２，高兴祥１，房锋１，李美１
（１．山东省农业科学院植物保护研究所，山东 济南２５０１００；２．济宁市兖州区农业局，山东 济宁２７２１００）
摘要：厚垣孢镰刀菌ＺＣ２０１３０１对杂草马唐具有良好的生物防效，本研究通过单次单因子法对菌株ＺＣ２０１３０１的基
本生物学特性进行了进一步研究。结果表明，菌株ＺＣ２０１３０１最适生长培养基为ＰＤＡ和ＣＡＪ培养基，最适生长温
度为２５～３０℃，最适生长ｐＨ值为６～８；菌株ＺＣ２０１３０１在多种培养基上均能产孢，最适产孢培养基为马唐汁液培
养基，日光灯照射对菌丝生长影响不显著，但是对产孢有一定抑制作用；菌丝生长最佳碳源为葡萄糖，最佳氮源为
硝酸铵；菌落生长需要充足氧气，气／液小于１∶１时菌丝生长受到抑制。湿度是影响ＺＣ２０１３０１发挥生防效果的重
要因子，环境湿度小于６０％时生防效果下降显著。以上结果说明，该菌适宜培养，这对于其生防菌剂的制备及在田
间条件下存活有重要意义。
关键词：马唐；厚垣孢镰刀菌；生物除草剂；生物学特性　　
犜犺犲犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳犇犻犵犻狋犪狉犻犪狊犪狀犵狌犻狀犪犾犻狊狆犪狋犺狅犵犲狀犉狌狊犪狉犻狌犿犮犺犾犪犿狔犱狅狊狆狅狉狌犿
狊狋狉犪犻狀犣犆２０１３０１
ＬＩＪｉａｎ１，ＬＩＹａｎ２，ＧＡＯＸｉｎｇＸｉａｎｇ１，ＦＡＮＧＦｅｎｇ１，ＬＩＭｅｉ１
１．犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅犳犘犾犪狀狋犘狉狅狋犲犮狋犻狅狀，犛犺犪狀犱狅狀犵犃犮犪犱犲犿狔狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊，犑犻’狀犪狀２５０１００，犆犺犻狀犪；２．犜犺犲犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犲犅狌狉犲犪狌
狅犳犢犪狀狕犺狅狌，犑犻狀犻狀犵２７２１００，犆犺犻狀犪
犃犫狊狋狉犪犮狋：犉狌狊犪狉犻狌犿犮犺犾犪犿狔犱狅狊狆狅狉狌犿ｓｔｒａｉｎＺＣ２０１３０１ｓｈｏｗｅｄｈｉｇｈｈｅｒｂｉｃｉｄａｌａｃｔｉｖｉｔｙｔｏｗａｒｄｓ犇犻犵犻狋犪狉犻犪狊犪狀
犵狌犻狀犪犾犻狊．Ｉｎｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ‘ｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒａｔａｔｉｍｅ’ｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒ
ｉｓｔｉｃｓｏｆＺＣ２０１３０１．Ｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｍｙｃｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｍｅｄｉａｗｅｒｅｐｏｔａｔｏｄｅｘｔｒｏｓｅａｇａｒ（ＰＤＡ）ａｎｄ
ｃｒａｂｇｒａｓｓｌｅａｆｊｕｉｃｅ（ＣＡＪ），ａｎｄｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｆｏｒｍｙｃｅｌｉａｇｒｏｗｔｈｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ２５ｔｏ３０℃．Ｔｈｅｏｐｔｉ
ｍａｌｉｎｉｔｉａｌｐＨｆｏｒｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉａｗａｓ６－８．ＳｔｒａｉｎＺＣ２０１３０１ｃａｎｓｐｏｒｕｌａｔｅｉｎａｖａｒｉｅｔｙｏｆｍｅｄｉａ，ｂｕｔｔｈｅｏｐｔｉｍａｌ
ｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍｗａｓＣＡＪ．Ｍｙｃｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｄｉｄｎｏｔｄｉｆｆｅｒｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｌｉｇｈｔｆｒｏｍｔｈａｔｉｎｔｈｅ
ｄａｒｋ，ｂｕｔｄａｒｋｎｅｓｓｗａｓｂｅｎｅｆｉｃｉａｌｆｏｒｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅｓｆｏｒｍｙｃｅｌｉｕｍｇｒｏｗｔｈｗａｓｇｌｕ
ｃｏｓｅ，ａｎｄｔｈｅｂｅｓｔｎｉｔｒｏｇｅｎｓｏｕｒｃｅｗａｓＮＨ４ＮＯ３．Ｏｘｙｇｅｎｉｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｍｙｃｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈ，ａｎｄｍｙｃｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈ
ｗａｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄｗｈｅｎｔｈｅｌｉｑｕｉｄ／ｇａｓｒａｔｉｏｗａｓｌｅｓｓｔｈａｎ１∶１．ＴｈｅｈｅｒｂｉｃｉｄａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｓｔｒａｉｎＺＣ２０１３０１ｗａｓｓｅｎ
ｓｉｔｉｖｅｔｏｒｅｌａｔｉｖｅｈｕｍｉｄｉｔｙ，ａｎｄｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｗｈｅｎｈｕｍｉｄｉｔｙｗａｓｌｅｓｓｔｈａｎ６０％．Ｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎ
ｄｉｃａｔｅｔｈｅｓｔｒａｉｎＺＣ２０１３０１ｉｓａｍｅｎａｂｌｅｔｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈｉｓｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｏｒｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌａ
ｇｅｎｔｓａｎｄｆｏｒｔｈｅｉｒｓｕｒｖｉｖａｌｕｎｄｅｒｆｉｅｌｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犇犻犵犻狋犪狉犻犪狊犪狀犵狌犻狀犪犾犻狊；犉狌狊犪狉犻狌犿犮犺犾犪犿狔犱狅狊狆狅狉狌犿；ｂｉｏｈｅｒｂｉｃｉｄｅｓ；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
２３４－２３９
２０１６年３月
　　　草　业　学　报　　　
　　　ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ　　　
第２５卷　第３期
Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．３
收稿日期：２０１５０８２８；改回日期：２０１５１１０９
基金项目：山东省自然科学基金（ＺＲ２０１５ＣＱ０１４）和国家８６３计划（２０１１ＡＡ１０Ａ２０６）资助。
作者简介：李健（１９８６），男，山东临沂人，助理研究员，博士。Ｅｍａｉｌ：ｌｉｊｉａｎ９１０＠１６３．ｃｏｍ
通信作者Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅｍａｉｌ：ｌｉｍｅｉ９９０９＠１６３．ｃｏｍ
马唐（犇犻犵犻狋犪狉犻犪狊犪狀犵狌犻狀犪犾犻狊）是禾本科一年生恶性杂草，广泛分布于热带和温带地区［１］，危害小麦（犜狉犻狋犻犮狌犿
犪犲狊狋犻狏狌犿）、大麦（犎狅狉犱犲狌犿狏狌犾犵犪狉犲）、玉米（犣犲犪犿犪狔狊）、水稻（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪）、大豆（犌犾狔犮犻狀犲犿犪狓）等３０多种作
物，是世界上分布最为广泛的１８种恶性杂草之一［２］。马唐环境适应能力极强，生长期与作物较为一致，易同作物
竞争消耗地力［３４］。近年来，马唐的大量发生对我国黄淮海玉米产量造成了严重影响［５］。目前对于马唐的防治主
要是采取化学手段，但是化学药剂的大规模使用不仅对环境和食品安全造成了影响，同时也导致了抗性马唐的产
生［６］，这都为马唐的有效防控造成了困难。同时，由化学防控导致的环境污染日趋严重，生物防治及其他非化学
防控手段日益受到学者的重视［７］。
马唐的生物防治研究开展较早，国外有报道利用弯孢霉（犆狌狉狏狌犾犪狉犻犪犻狀狋犲狉犿犲犱犻犪）［８］及马唐黑粉菌（犝狊狋犻犾犪犵狅
狊狔狀狋犺犲狉狊犿犪犲）［３］作为马唐生防菌剂。海南大学利用新月弯孢霉（犆狌狉狏狌犾犪狉犻犪犾狌狀犪狋犪）菌株 ＭＴ０１１［９］，南京农业大
学利用画眉草弯孢霉（犆狌狉狏狌犾犪狉犻犪犲狉犪犵狉狅狊狋犻犱犻狊）［１０］，浙江师范大学利用弯孢型炭疽菌（犆狅犾犾犲狋狅狋狉犻犮犺狌犿犺犪狀犪狌犻）菌
株［１１］进行了马唐防治研究，均取得一定效果。本研究所用菌株为厚垣孢镰刀菌ＺＣ２０１３０１，为本科室前期筛选得
到的一株马唐生防菌，前期测定表明该菌种孢子悬浮液喷雾处理对苗期马唐具有非常好的防控效果，马唐感病后
很快干枯死亡，同时该菌也可使其他杂草感病，对反枝苋（犃犿犪狉犪狀狋犺狌狊狉犲狋狉狅犳犾犲狓狌狊）、狗尾草（犛犲狋犪狉犻犪狏犻狉犻犱犻狊）等
杂草表现出一定的防控效果［１２］。
优化培养条件以获得最佳生防因子是生防菌应用的前提［１３１４］。因此本研究以前期筛选得到的马唐生防菌
ＺＣ２０１３０１为材料，通过对其多个基本生物学特性进行研究，以明确其最佳培养和产孢条件，为其下一步应用提供
依据。
１　材料与方法
１．１　菌种与培养基
本研究所用菌株为厚垣孢镰刀菌ＺＣ２０１３０１（专利公开号：ＣＮ１０４２５０６２０Ａ），２０１４年由本实验室采集并保存。
本研究所用培养基基本配方如下，马铃薯葡萄糖培养基（ＰＤＡ）：马铃薯２００ｇ，葡萄糖２０ｇ，琼脂２０ｇ，水定
容至１０００ｍＬ；马铃薯蔗糖培养基（ＰＳＡ）：马铃薯２００ｇ，蔗糖２０ｇ，琼脂２０ｇ，水定容至１０００ｍＬ；胡萝卜培养基
（ＣＡ）：胡萝卜２００ｇ，琼脂２０ｇ，水定容至１０００ｍＬ；水琼脂培养基（ＷＡ）：琼脂２０ｇ，水定容至１０００ｍＬ；马唐汁
液培养基（ＣＡＪ）：马唐汁液２００ｇ，琼脂２０ｇ，水定容至１０００ｍＬ；１×，２×，４×，１０×，２０×ＣＡＪ培养基为原始
马唐汁液培养基稀释相应倍数。
碳源基础培养基：酵母浸膏１ｇ，ＫＨ２ＰＯ４０．５ｇ，ＭｇＳＯ４０．５ｇ，Ｋ２ＨＰＯ４１ｇ，琼脂２０ｇ，水定容至１０００ｍＬ；
氮源基础培养基：蔗糖２０ｇ，ＫＨ２ＰＯ４０．５ｇ，ＭｇＳＯ４０．５ｇ，Ｋ２ＨＰＯ４１ｇ，琼脂２０ｇ，水定容至１０００ｍＬ。
１．２　影响菌株ＺＣ２０１３０１菌丝生长及产孢等因子的测定
１．２．１　培养基　　ＰＤＡ培养基活化保存的菌株，５ｄ后，在菌落的边缘打取直径为５ｍｍ的菌饼，接种到各供试
培养基上，７ｄ后测量菌落直径；并收集菌丝，８０℃烘箱烘烤２ｈ后称量菌丝干重（下同）；３ｍＬ无菌水清洗菌落表
面孢子，收集后血球计数板计数，计算产孢量（下同）。
１．２．２　温度　　共设置 １５，２０，２５，２８，３０，３５℃ ６个处理，参照１．２．１的方法 ＰＤＡ 培养基上培养菌株
ＺＣ２０１３０１，放置于设置为不同温度的培养箱内，接菌后７ｄ，统计菌落直径和菌丝重量。
１．２．３　培养和光照时间　　以筛选出的ＰＤＡ和ＣＡＪ培养基为产孢培养基，进行不同培养时间对菌株产孢量影
响的测定，培养时间设置为接种后２，３，５，７，１４ｄ，收集孢子，分别计算产孢量。以筛选出的产孢量最大的ＣＡＪ培
养基为产孢培养基，测定光照条件对菌株产孢量的影响，光照条件设置为连续黑暗、连续光照、黑暗／光照交替
（８ｈ／１６ｈ、１２ｈ／１２ｈ、１６ｈ／８ｈ）５个处理，接菌后７ｄ，收集孢子，分别计算产孢量。
１．２．４　ｐＨ值　　将ＰＤＡ培养基灭菌后调制成不同ｐＨ 值，设置的ｐＨ 值为４，５，６，７，８，９这６个处理，参照
１．２．１的方法，２５℃，黑暗条件下培养７ｄ后，统计菌落直径和菌丝重量。
１．２．５　碳氮源　　在碳源基础培养基上分别添加相应量（２０ｇ／Ｌ）葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、可溶性淀粉、乳糖等５
５３２第２５卷第３期 草业学报２０１６年
种碳源，观察并统计菌落生长情况；在氮源基础培养基上分别添加相应量（１ｇ／Ｌ）硝酸钠、硝酸钾、硝酸钙、硝酸
铵、硫酸铵等５种氮源，２５℃，黑暗条件下培养７ｄ，观察并统计菌落生长情况。
１．２．６　气／液　　以１００ｍＬ液体马铃薯葡萄糖培养基为基础，通过采用不同容积的三角瓶达到气／液体积比为
１∶０．５、１∶１、１∶２、１∶４这４个处理。２５℃，１５０ｒ／ｍｉｎ，黑暗条件下摇菌培养７２ｈ，过滤收集所有菌丝，烘干后
称量菌丝重量。以上实验每个处理均设置３个重复。
１．３　环境湿度对菌株ＺＣ２０１３０１致病力的影响
２５℃，黑暗条件下，ＺＣ２０１３０１菌株在ＣＡＪ培养基上培养７ｄ后，收集孢子并配制成浓度为１×１０８ 个／ｍＬ的
孢子悬浮液（含０．１％吐温８０）。将孢子悬浮液用手持小喷壶喷施于２～３叶期的马唐植株上，黑暗条件下放于不
同湿度人工气候箱内；２５℃，黑暗培养４８ｈ后持续光照，１４ｄ后称量植株鲜重，计算鲜重抑制率。以喷施０．１％吐
温８０植株为对照，每处理重复３次。
１．４　数据分析
鲜重抑制率（ｆｒｅｓｈｗｅｉｇｈｔｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅ，ＦＷＩＲ）的计算公式：ＦＷＩＲ（％）＝［（对照平均鲜重－处理平均鲜
重）／对照平均鲜重］×１００。利用ＳＰＳＳ统计软件ＡＮＯＶＡ和ＧＬＭ分析不同处理间的差异显著性。
２　结果与分析
２．１　菌株ＺＣ２０１３０１在不同培养基内生长和产孢差异
结果（表１）表明，菌株ＺＣ２０１３０１在ＰＤＡ和ＣＡＪ培养基上生长速率最高，培养７ｄ后菌落直径分别达到７．９１
和７．５５ｃｍ，气生菌丝量ＰＤＡ培养基最多，约为ＣＡＪ培养基气生菌丝量的６倍；但最佳产孢培养基为ＣＡＪ培养
基，培养７ｄ后其产孢量约为ＰＤＡ培养基的１６７倍。
表１　菌株犣犆２０１３０１在不同培养基上的生长速率和产孢数量
犜犪犫犾犲１　犜犺犲犵狉狅狑狋犺狉犪狋犲犪狀犱狊狆狅狉犲狆狉狅犱狌犮狋犻狅狀狅犳狊狋狉犪犻狀犣犆２０１３０１狅狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮狌犾狋狌狉犲犿犲犱犻犪
项目Ｉｔｅｍ ＰＤＡ ＰＳＡ ＣＡＪ ＣＡ ＷＡ
菌落直径Ｃｏｌｏｎｙｄｉａｍｅｔｅｒ（ｃｍ） ７．９１±０．４ａ ６．７２±０．６ｂ ７．５５±０．５ａｂ ６．７３±０．５ｂ ４．４９±０．４ｃ
菌丝重量 Ｍｙｃｅｌｉｕｍｗｅｉｇｈｔ（ｍｇ） ３２．６０±９．３ａ １７．１０±５．３ｂ ５．７０±１．２ｃ ５．９０±３．１ｃ １．３０±０．２ｄ
产孢量Ｓｐｏｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｑｕａｎｔｉｔｙ（×１０７） ３．７０±０．２ｃ １．５０±０．６ｄ ６１７．７０±１８．３ａ ７２．３０±１３．８ｂ ０ｅ
　注：表中数值为平均值±标准误（狀＝３），同行数据后的不同字母表示在０．０５水平上差异显著，下同。
　Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅｖａｌｕｅｓｉｎｔｈｅｔａｂｌｅａｒｅｔｈｅａｖｅｒａｇｅｖａｌｕｅｏｆｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄｅｒｒｏｒ（狀＝３），ａｎｄｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓｗｉｔｈｉｎｔｈｅｓａｍｅｒｏｗｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔｔｈｅ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔａｔｔｈｅ０．０５ｌｅｖｅｌ．Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
由表１可以看出，菌株ＺＣ２０１３０１的最佳产孢培养基为ＣＡＪ培养基。为了利用尽量少的培养材料获得较高
的分生孢子产量，我们进一步降低ＣＡＪ培养基内的马唐数量研究其对产孢的影响，由表２可以看出，ＣＡＪ培养基
稀释两倍（２×）情况下其产孢量不受影响，而当稀释倍数继续加大，菌株ＺＣ２０１３０１的生长和产孢量受到显著影
响。
表２　不同马唐含量犆犃犑培养基上菌株犣犆２０１３０１的生长速率和产孢数量
犜犪犫犾犲２　犜犺犲犵狉狅狑狋犺狉犪狋犲犪狀犱狊狆狅狉犲狆狉狅犱狌犮狋犻狅狀狅犳狊狋狉犪犻狀犣犆２０１３０１狅狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮狉犪犫犵狉犪狊狊犮狅狀狋犲狀狋犮狌犾狋狌狉犲犿犲犱犻犪
项目Ｉｔｅｍ
ＣＡＪ培养基稀释倍数ＣＡＪｍｅｄｉｕｍｄｉｌｕｔｅｄｍｕｌｔｉｐｌｅｓ
１× ２× ４× １０× ２０×
菌落直径Ｃｏｌｏｎｙｄｉａｍｅｔｅｒ（ｃｍ） ７．８±０．５ａ ７．６±０．３ａ ６．５±０．５ｂ ５．８±０．３ｂ ５．７±０．５ｂ
菌丝重量 Ｍｙｃｅｌｉｕｍｗｅｉｇｈｔ（ｍｇ） ３１．３±８．０ａ ２７．７±４．２ｂ １３．７±３．１ｃ ８．０±２．６ｄ １．１±０．２ｄ
产孢量Ｓｐｏｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｑｕａｎｔｉｔｙ（×１０７） ６１．６±７５．７ａ ５９８．０±８８．１ａ １３．４±４．５ｂ ２．３±０．８ｃ ０ｄ
６３２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１６） Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．３
２．２　培养时间对菌株ＺＣ２０１３０１产孢的影响
以ＰＤＡ和ＣＡＪ培养基为产孢培养基，统计不同培养时间内菌株ＺＣ２０１３０１的产孢量。由表３可以看出，菌
株ＺＣ２０１３０１在ＰＤＡ培养基上产孢较慢，产孢量在培养７ｄ时基本达到最大量３．３×１０７ 个，而该菌株在ＣＡＪ培
养基上较短时间内就能够产生大量孢子，培养７ｄ后其产孢量已经达到５８３．９×１０７ 个。
２．３　光照时间对产孢量的影响
以ＣＡＪ培养基为产孢培养基，研究光照时间长短对菌株ＺＣ２０１３０１产孢量的影响。由表４可以看出，连续黑
暗条件下产孢量最高，光照对产孢量有一定抑制作用，且随着光照时间的增长抑制作用更为明显；另一方面光照
时间的变化对于菌株气生菌丝的生长没有影响。
２．４　培养温度对菌株ＺＣ２０１３０１生长的影响
由表５可以看出，菌株ＺＣ２０１３０１在ＰＤＡ培养基上的最适生长温度在２５～３０℃，当培养温度≤２０℃和＞
３０℃时生长速率和气生菌丝产生量均受到明显抑制。
２．５　ｐＨ值对菌株ＺＣ２０１３０１生长的影响
由表６可以看出，菌株ＺＣ２０１３０１在ＣＡＪ培养基上的最适生长ｐＨ值为６～８，当培养基ｐＨ值＜６和＞８时
生长速率和气生菌丝产生量均受到明显抑制。
表３　不同培养时间菌株犣犆２０１３０１产孢量
犜犪犫犾犲３　犜犺犲犪犿狅狌狀狋狅犳犣犆２０１３０１狆狉狅犱狌犮犲犱犪狋犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮狌犾狋狌狉犲狋犻犿犲 ×１０７
项目Ｉｔｅｍ ２ｄ ３ｄ ５ｄ ７ｄ １４ｄ
ＰＤＡ ０．０６±０．０２ｄ ０．１１±０．０５ｃ １．６０±０．２１ｂ ３．３０±０．４７ａ ３．９０±０．６６ａ
ＣＡＪ ２８．３０±３．８ｄ １８３．８０±２２．１ｃ ３９７．６０±６３．３ｂ ５８３．９０±５８．３ａ ６０９．６０±３３．２ａ
表４　光照时长对菌株犣犆２０１３０１生长和产孢量的影响
犜犪犫犾犲４　犈犳犳犲犮狋狊狅犳狋犺犲犾犲狀犵狋犺狅犳犾犻犵犺狋狅狀狋犺犲犵狉狅狑狋犺犪狀犱狔犻犲犾犱狅犳狋犺犲狊狋狉犪犻狀犣犆２０１３０１
项目
Ｉｔｅｍ
连续黑暗
Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ
ｄａｒｋｎｅｓｓ
连续光照
Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ
ｉｌｕｍｉｎａｔｉｏｎ
光／暗交替（８ｈ／１６ｈ）
Ｌｉｇｈｔ／ｄａｒｋ
ａｌｔｅｒｎａｔｉｏｎ
光／暗交替（１２ｈ／１２ｈ）
Ｌｉｇｈｔ／ｄａｒｋ
ａｌｔｅｒｎａｔｉｏｎ
光／暗交替（１６ｈ／８ｈ）
Ｌｉｇｈｔ／ｄａｒｋ
ａｌｔｅｒｎａｔｉｏｎ
菌落直径Ｃｏｌｏｎｙｄｉａｍｅｔｅｒ（ｃｍ） ７．９±０．７ａ ７．８±０．６ａ ７．６±０．５ａ ７．９±０．３ａ ７．５±０．８ａ
菌丝重量 Ｍｙｃｅｌｉｕｍｗｅｉｇｈｔ（ｍｇ） ５．２±１．１ａ ４．８±１．６ａ ５．３±０．７ａ ５．２±１．２ａ ５．７±１．３ａ
产孢量Ｓｐｏｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｑｕａｎｔｉｔｙ（×１０９） ８．１±０．５ａ １．６±０．３ｄ ３．７±０．７ｂ ２．７±０．３ｃ ２．５±０．５ｃ
表５　温度对菌株犣犆２０１３０１生长的影响
犜犪犫犾犲５　犈犳犳犲犮狋狅犳狋犲犿狆犲狉犪狋狌狉犲狅狀狋犺犲犵狉狅狑狋犺狅犳狊狋狉犪犻狀犣犆２０１３０１
项目Ｉｔｅｍ １５℃ ２０℃ ２５℃ ２８℃ ３０℃ ３５℃
菌落直径Ｃｏｌｏｎｙｄｉａｍｅｔｅｒ（ｃｍ） ３．５±０．３ｄ ６．１±０．５ｂ ８．１±０．６ａ ８．３±０．８ａ ８．１±０．６ａ ５．１±０．３ｃ
菌丝重量 Ｍｙｃｅｌｉｕｍｗｅｉｇｈｔ（ｍｇ） １３．２±５．９ｃ ２４．１±３．７ｂ ３５．３±５．１ａ ３５．６±３．３ａ ３１．２±４．３ａｂ １８．７±４．１ｃ
表６　狆犎值对菌株犣犆２０１３０１生长的影响
犜犪犫犾犲６　犈犳犳犲犮狋狅犳狆犎狏犪犾狌犲狅狀狋犺犲犵狉狅狑狋犺狅犳狊狋狉犪犻狀犣犆２０１３０１
项目Ｉｔｅｍ
ｐＨ
４ ５ ６ ７ ８ ９
菌落直径Ｃｏｌｏｎｙｄｉａｍｅｔｅｒ（ｃｍ） １．１±０．０３ｄ ２．３±０．０８ｃ ７．２±０．３３ａ ７．７±０．６９ａ ７．３±０．３９ａ ４．２±０．１７ｂ
菌丝重量 Ｍｙｃｅｌｉｕｍｗｅｉｇｈｔ（ｍｇ） ５．３±０．９ｅ ７．２±２．５ｄ ３５．１±８．３ａ ３５．９±２．９ａ ３１．３±４．２ａｂ １１．３±１．７ｃ
７３２第２５卷第３期 草业学报２０１６年
表７　不同气／液比值对菌株犣犆２０１３０１生长的影响
犜犪犫犾犲７　犈犳犳犲犮狋狊狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犵犪狊／犾犻狇狌犻犱狉犪狋犻狅狅狀狋犺犲犵狉狅狑狋犺狅犳狊狋狉犪犻狀犣犆２０１３０１ ｍｇ
项目Ｉｔｅｍ
气／液Ｇａｓ／ｌｉｑｕｉｄ
１∶０．５ １∶１ １∶２ １∶４
菌丝重量 Ｍｙｃｅｌｉｕｍｗｅｉｇｈｔ １５５．７±１１．２ａ １５２．７±１７．９ａ ９２．７±５．５ｂ ６６．３±９．５ｃ
２．６　气／液对菌株ＺＣ２０１３０１生长的影响
　　图１　菌株犣犆２０１３０１在含不同碳氮源培养基上的生长速率
犉犻犵．１　犌狉狅狑狋犺狉犪狋犲狅犳狊狋狉犪犻狀犣犆２０１３０１犻狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋
犮犪狉犫狅狀犪狀犱狀犻狋狉狅犵犲狀狊狅狌狉犮犲狊
　　　Ａ：葡萄糖 Ｇｌｕｃｏｓｅ；Ｂ：麦芽糖 Ｍａｌｔｏｓｅ；Ｃ：可溶性淀粉Ｓｏｌｕｂｌｅｓｔａｒｃｈ；
Ｄ：乳糖Ｌａｃｔｏｓｅ；Ｅ：蔗糖Ｓｕｃｒｏｓｅ；Ｆ：硝酸钠 ＮａＮＯ３；Ｇ：硝酸钾 ＫＮＯ３；
Ｈ：硝酸钙Ｃａ（ＮＯ３）２；Ｉ：硫酸铵 （ＮＨ４）２ＳＯ４；Ｊ：硝酸铵 ＮＨ４ＮＯ３．不
同字母表示在０．０５水平上差异显著（狀＝３）。Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓｉｎｄｉｃａｔｅ
ｔｈａｔｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔａｔｔｈｅ０．０５ｌｅｖｅｌ（狀＝３）．
由表 ７ 可以看出，菌株 ＺＣ２０１３０１ 在气／液为
１∶０．５和１∶１时菌丝重量大，而当气／液为１∶２和
１∶４时，菌株ＺＣ２０１３０１生长受限。
２．７　碳氮源对菌株ＺＣ２０１３０１生长的影响
由图１可以看出，菌株ＺＣ２０１３０１最佳碳源为葡
萄糖，但该菌株对碳源的要求不严格，在不同碳源培养
基上生长差异不显著；最佳氮源为硫酸铵，其对铵态氮
源的利用好于硝态氮源。
２．８　接种环境湿度对菌株ＺＣ２０１３０１致病力的影响
湿度是限制菌株ＺＣ２０１３０１发挥生防功能的重要
限制因子。由表８可以看出，菌株ＺＣ２０１３０１需要在
较高的湿度下才能够导致马唐发病死亡，而当接菌的
环境湿度为６０％时，其生防效果迅速下降。当湿度为
３０％时，其鲜重抑制率仅为１８．６％。
表８　不同湿度对菌株犣犆２０１３０１生长的影响
犜犪犫犾犲８　犈犳犳犲犮狋狊狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犺狌犿犻犱犻狋狔狅狀狋犺犲犵狉狅狑狋犺狅犳狊狋狉犪犻狀犣犆２０１３０１ ％
项目Ｉｔｅｍ
湿度 Ｈｕｍｉｄｉｔｙ（％）
３０ ４０ ５０ ６０ ７０ ８０ ９０
ＦＷＩＲ １８．６ｄ ２１．７ｄ ５１．１ｃ ７７．２ｂ ７８．８ｂ ８９．６ａ ９０．９ａ
３　讨论
生防效果好、作物安全性高和易于工业化生产是真菌除草剂是否能够开发应用的３个基本要素［１５］。我们通
过前期试验已经验证了菌株ＺＣ２０１３０１对马唐、反枝苋等杂草具有良好的生防效果，同时对小麦、玉米、大豆等作
物安全。
本研究发现，菌株ＺＣ２０１３０１能够在多种培养基上生长，其可利用培养基范围较广，对培养材料的要求较为
宽泛。菌株ＺＣ２０１３０１最佳产孢培养基为马唐汁液（ＣＡＪ）培养基，其在ＣＡＪ培养基上产孢量迅速，培养７ｄ后其
产孢量已经达到ＰＤＡ培养基的１６７倍。通过进一步的研究，我们发现将ＣＡＪ培养基内的马唐量减少一倍，对其
基本生长和产孢量没有显著影响。菌株ＺＣ２０１３０１在２５～３０℃和ｐＨ６～８条件下均能正常生长和产孢，其菌丝
生长和产孢所需温度、酸碱度等范围较广，在多种环境条件下均能生长；菌株ＺＣ２０１３０１对碳源利用差异较小，该
菌株较广的环境适应能力和较宽的生长条件不仅有助于其工业化生产，而且对于其后期施用后在田间条件下存
活和扩展有重要意义。进一步的筛选发现，接种前期的环境湿度是影响菌株ＺＣ２０１３０１发挥生防效果的重要影
响因子。当环境湿度小于６０％时，其生防效果显著下降，而当环境湿度小于３０％时，其致病力受影响较大。
ＣＡＪ培养基以杂草马唐为制作材料，杂草马唐获取方便，成本低廉，这些都是进一步工业化生产的有利条
８３２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１６） Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．３
件。同时，不同于先前发现的马唐灰梨孢类生防菌［１２］，菌株ＺＣ２０１３０１产孢不需要光照等因素的诱导，而且长时
间的光照会影响其孢子的产生，这也可以进一步简化后期发酵生产条件，节约成本。综合以上研究，菌株
ＺＣ２０１３０１符合杂草生防真菌要易于工业化生产的多个生物学条件，具有开发为微生物除草剂的潜力，但是使用
过程中要注意环境湿度。
犚犲犳犲狉犲狀犮犲狊：
［１］　ＷｅｂｓｔｅｒＴＨ，ＣｏｂｌｅＨＤ．ＣｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｗｅｅｄｓｐｅｃｉｅｓｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅＳｏｕｔｈｅｒｎＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓ：１９７４１９９５．ＷｅｅｄＴｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ，１９９７，１１：３０８３１７．
［２］　ＳｃｈｒｏｅｄｅｒＤ，ＭｕｅｌｅｒＳＨ，ＳｔｉｎｓｏｎＣＡＳ．Ｅｕｒｏｐｅａｎｗｅｅｄｓｕｒｖｅｙｉｎ１０ｍａｊｏｒｃｒｏｐｓｙｓｔｅｍｓｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔａｒｇｅｔｓｆｏｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｃｏｎｔｒｏｌ．ＷｅｅｄＲｅｓｅａｒｃｈ，１９９３，３３：４４９４５８．
［３］　ＪｏｈｎｓｏｎＤＡ，ＢａｕｄｏｉｎＡ Ｍ．Ｍｏｄｅｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄｆａｃｔｏｒｓａｆｆｅｃｔｉｎｇｄｉｓｅａｓｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅｏｆｌｏｏｓｅｓｍｕｔｏｆｃｒａｂｇｒａｓｓ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｏｎｔｒｏｌ，１９９７，１０：９２９７．
［４］　ＷｅｎＧＹ，ＱｉａｎＺＧ，ＬｉＴ，犲狋犪犾．Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｓｔｕｄｙｏｎｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆ犇犻犵犻狋犪狉犻犪狊犪狀犵狌犻狀犪犾犻狊（Ｌ．）Ｓｃｏｐ．Ｗｅｅｄ
Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１４，３２（２）：１４．
［５］　ＬｉＸＪ，ＷａｎｇＧＱ，ＤｕａｎＭＳ，犲狋犪犾．ＩｎｔｅｇｒａｔｅｄｍａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆＣｒａｂｇｒａｓｓ（犇犻犵犻狋犪狉犻犪犮犻犾犻犪狉犻狊）ｉｎｎｏｔｉｌＳｕｍｍｅｒＣｏｒｎ（犣犲犪
犿犪狔狊）．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｂｅｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２００３，７（１）：１６２１．
［６］　ＺｈａｎｇＨＪ，ＷａｎｇＧＱ，ＬｉｕＸ，犲狋犪犾．Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆ犇犻犵犻狋犪狉犻犪狊犪狀犵狌犻狀犪犾犻狊ｔｏｎｉｃｏｓｕｌｆｕｒｏｎ．ＷｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅ，２０１３，３１（１）：３４
３６．
［７］　ＱｉａｎｇＳ，ＣｈｅｎＳＧ．Ｃｕｒｒｅｎｔｓｔａｔｕｓｏｆｂｉｏｈｅｒｂｉｃｉｄｅｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｉｔｓｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓａｎｄｃｈａｌｅｎｇｅｓ．ＷｅｅｄＳｃｉ
ｅｎｃｅ，２０１１，２９（１）：１６．
［８］　ＴｉｌｅｙＡＭ，ＷａｌｋｅｒＨＬ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆ犆狌狉狏狌犾犪狉犻犪犻狀狋犲狉犿犲犱犻犪（犆狅犮犺犾犻狅犫狅犾狌狊犻狀狋犲狉犿犲犱犻狌狊）ａｓａｐｏｔｅｎｔｉａｌｍｉｃｒｏｂｉａｌｈｅｒｂｉｃｉｄｅ
ｆｏｒｌａｒｇｅｃｒａｂｇｒａｓｓ（犇犻犵犻狋犪狉犻犪狊犪狀犵狌犻狀犪犾犻狊）．ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｏｎｔｒｏｌ，２００２，２５：１２２１．
［９］　ＹａｎｇＹ，ＨｕＭＪ，ＷａｎｇＬＹ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｈｅｒｂｉｃｉｄａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙ犆狌狉狏狌犾犪狉犻犪犾狌狀犪狋犪ｆｒｏｍ犇犻犵犻
狋犪狉犻犪狊犪狀犵狌犻狀犪犾犻狊．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｏｎｔｒｏｌ，２００９，２５（２）：１５４１５９．
［１０］　ＺｈｕＹＺ，ＱｉａｎｇＳ．ＩｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｓｏｍｅｆａｃｔｏｒｓｏｎｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆｓｔｒａｉｎＱＺ２０００ｔｏ犇犻犵犻狋犪狉犻犪狊犪狀犵狌犻狀犪犾犻狊．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｎｊｉｎｇ
ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００４，２７（２）：４７５０．
［１１］　ＺｈａｏＭ Ｎ，ＱｉｕＨＰ，ＪｉａｎｇＨ，犲狋犪犾．ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌｓｔｒａｉｎＣｏｌ６８犆狅犾犾犲狋狅狋狉犻犮犺狌犿
犺犪狀犪狌犻ａｇａｉｎｓｔ犇犻犵犻狋犪狉犻犪狊犪狀犵狌犻狀犪犾犻狊．ＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅＺｈｅｊｉａｎｇｅｎｓｉｓ，２０１２，２４（３）：４５９４６３．
［１２］　ＬｉＪ，ＬｉＭ，ＧａｏＸＸ，犲狋犪犾．ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｔｒｏｌｆｕｎｇｉＺＣ２０１３０１ｔｏ犇犻犵犻狋犪狉犻犪狊犪狀犵狌犻狀犪
犾犻狊．ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０１５，４７（６）：９３９６．
［１３］　ＬｉａｎｇＸＪ，ＬｉｕＹＺ，ＺｈａｎｇＲＳ，犲狋犪犾．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍａｎｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆ犅犪犮犻犾犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊ＰＴＳ３９４．
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ），２０１３，３４（３）：７５８２．
［１４］　ＹａｎｇＣＤ，ＣｈａｎｇＴ，ＸｕｅＬ，犲狋犪犾．Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｅｃｒｅｔｉｏｎｂｙ
犘狅犾狔犵狅狀狌犿狏犻狏犻狆犪狉狌犿ｏｆｔｈｅｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ犅犪犮犻犾犾狌狊犿狅犼犪狏犲狀狊犻狊．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１５，２４（９）：１０４１１２．
［１５］　ＤｕＸＦ，ＳｕｎＳＹ，ＺｈｅｎｇＺ，犲狋犪犾．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｃｕｌｔｕｒｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｆｏｒｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎｏｆ犘狔狉犻犮狌犾犪狉犻犪．ＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｌ
ｔｕｒａｅＺｈｅｊｉａｎｇｅｎｓｉｓ，１９９５，７（６）：４６８４７２．
参考文献：
［４］　温广月，钱振官，李涛，等．马唐生物学特性初步研究．杂草科学，２０１４，３２（２）：１４．
［５］　李香菊，王贵启，段美生，等．免耕夏玉米田马唐的生物学特性与治理措施．河北农业科学，２００３，７（１）：１６２１．
［６］　张宏军，王贵启，刘学，等．马唐对烟嘧磺隆的抗药性研究．杂草科学，２０１３，３１（１）：３４３６．
［７］　强胜，陈世国．生物除草剂研发现状及其面临的机遇与挑战．杂草科学，２０１１，２９（１）：１６．
［９］　杨叶，胡美姣，王兰英．马唐草新月弯孢生物学特性及其代谢产物活性测定．中国生物防治，２００９，２５（２）：１５４１５９．
［１０］　朱云枝，强胜．真菌菌株ＱＺ２０００对马唐（犇犻犵犻狋犪狉犻犪狊犪狀犵狌犻狀犪犾犻狊）致病力的影响因子．南京农业大学学报，２００４，２７（２）：４７５０．
［１１］　赵美娜，邱海萍，姜华，等．马唐生防菌Ｃｏｌ６８发酵条件的筛选．浙江农业学报，２０１２，２４（３）：４５９４６３．
［１２］　李健，李美，高兴祥，等．马唐生防真菌ＺＣ２０１３０１的筛选及其致病力测定．山东农业科学，２０１５，４７（６）：９３９６．
［１３］　梁雪杰，刘邮洲，张荣胜，等．生防菌ＰＴＳ３９４发酵培养基及培养条件的优化．扬州大学学报（农业与生命科学版），２０１３，
３４（３）：７５８２．
［１４］　杨成德，畅涛，薛莉，等．珠芽蓼内生细菌ＺＡ１的抑菌物质产生条件的优化及其稳定性测定．草业学报，２０１５，２４（９）：１０４
１１２．
［１５］　杜新法，孙漱沅，郑重，等．梨孢属真菌的产孢研究．浙江农业学报，１９９５，７（６）：４６８４７２．
９３２第２５卷第３期 草业学报２０１６年