全 文 ：书苜蓿总黄酮对妊娠雌鼠繁殖性能及
相关基因表达量的影响
王伟，田苗苗，梁新平，张红瑞，王成章，严学兵
（河南农业大学牧医工程学院，河南 郑州４５０００２）
摘要：为了研究苜蓿总黄酮对动物妊娠期间繁殖性能、繁殖器官、激素水平及下丘脑－垂体－卵巢性腺轴相关基因
表达量的影响，本实验以雌性大鼠为模式动物，分为５个试验组：３个苜蓿总黄酮剂量组（１２０，４００，１２００ｍｇ／ｋｇ）和
２个对照组（己烯雌酚０．５ｍｇ／ｋｇ、空白对照组），结果显示，苜蓿总黄酮中、高剂量组雌二醇（Ｅ２）显著升高（犘＜
０．０５），低剂量组Ｅ２极显著升高（犘＜０．０１）。各试验组的血清中孕酮（Ｐ）含量不存在显著性差异（犘＞０．０５）。苜蓿
总黄酮３个剂量组的活胎数均显著提高（犘＜０．０５），高剂量组的胎仔重极显著增重（犘＜０．０１），而苜蓿总黄酮各剂
量组的黄体数差异不显著，但存在随着剂量的增加而降低的趋势，己烯雌酚的黄体数与空白对照组相比显著减少
（犘＜０．０５）。苜蓿总黄酮３个剂量组的产仔数均显著高于空白对照组（犘＜０．０５），而初生窝重则极显著高于对照组
（犘＜０．０１）。苜蓿总黄酮和己烯雌酚均显著降低下丘脑中ＧｎＲＨ的表达量（犘＜０．０１），同时垂体的ＦＳＨ表达量显
著降低（犘＜０．０１），卵巢中苜蓿总黄酮高剂量组的ＦＳＨＲ表达量显著降低（犘＜０．０５），ＬＨＲ表达量显著升高（犘＜
０．０５），其他基因表达量与空白对照相比差异不显著（犘＞０．０５）。从以上可以看出，苜蓿总黄酮通过影响下丘脑－
垂体－卵巢性腺轴，改善了妊娠期间雌鼠的繁殖性能，提高了产仔数和初生窝重。
关键词：苜蓿总黄酮；下丘脑－垂体－卵巢性腺轴；初生窝重；产仔数；大鼠；荧光定量
中图分类号：Ｓ８１６．３２；Ｑ９５９．８３７　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１３）０６０２４９０８
犇犗犐：１０．１１６８６／ｃｙｘｂ２０１３０６３１　　
　　黄酮类化合物具有雌激素样作用及抗氧化等功能，紫花苜蓿（犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪）作为一种优质牧草，营养活
性成分十分丰富［１］。王先科等［２］对苜蓿皂甙的研究已发现其具有降低机体对胆固醇的吸收等功能。对苜蓿黄酮
的前期研究发现，仅在妊娠前饲喂苜蓿黄酮对雌性大鼠的繁殖性能影响不显著［３］。妊娠期是雌性动物繁殖的最
关键时期，这个时期任何外界因素的摄入都可能直接影响到胎儿的成长及发育。２００６年，美国国家毒理规划中
心［４］曾对啮齿类动物妊娠期间口饲（１００ｍｇ／ｋｇ·ｄ）或皮下注射（０．５ｍｇ／ｋｇ）植物雌激素（三羟异黄酮），发现对
雌性动物及其后代有毒性作用。植物雌激素可能是通过胎盘的转移产生的作用，但具体的机制还不是很清楚［４］。
但国内的研究也发现，在妊娠期间饲喂大豆黄酮可以有利于提高雌性动物的泌乳及其后代的初生窝重，刘根桃
等［５］报道，在母猪妊娠后期（预产前１个月）至产后７ｄ在日粮中添加０．００５ｍｇ／ｋｇ的大豆黄酮，使仔猪初生窝重
显著提高（犘＜０．０５），胰岛素样生长因子及泌乳量也都显著升高（犘＜０．０５）。此外，尹艳云等［６］在妊娠期间给大
鼠饲喂大豆异黄酮，其产仔数显著提高（犘＜０．０５）。紫花苜蓿作为一种优质的饲料植物其黄酮的含量也比较高，
高微微［７］对４５个紫花苜蓿品种的测定发现，７０％以上品种的总黄酮含量大约为０．６％～０．９％。薄亚光等［８］对６
个不同品种的紫花苜蓿的茎、叶中的总黄酮进行测定，含量最高的７．０８ｍｇ／ｇ，最低的６．３２ｍｇ／ｇ。而据崔学平
等［９］报道，大豆中黄酮的含量为０．１％～０．５％。可见，紫花苜蓿中的黄酮含量要高于大豆黄酮，尽管Ｂａｋｅｒ等［１０］
早在１９７４年就报道，在妊娠期日粮中添加脱水５％或１８％的紫花苜蓿，并没有改变母猪的繁殖性能。但随着紫
花苜蓿在畜牧生产中的广泛应用，苜蓿总黄酮对妊娠期间的影响是有利还有害，以及作为饲料添加剂在何时添
加，添加剂量等问题上，还需要更多的研究与探索。下丘脑－垂体－卵巢性腺轴对雌性动物各个生理时期的生殖
第２２卷　第６期
Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．６
草　业　学　报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ 　　
２４９－２５６
２０１３年１２月
收稿日期：２０１３０３２４；改回日期：２０１３０５２７
基金项目：国家”十二五”科技支撑计划（２０１１ＢＡＤ１７Ｂ０４），河南省杰出青年基金（１１４１００５１００２２）和国家牧草产业技术体系（ｎｙｃｙｔｘ３５）资助。
作者简介：王伟（１９８５），男，河南郑州人，在读硕士。Ｅｍａｉｌ：ｗｗｅｉ８５＠１２６．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｙｘｂｂｊｚｚ＠１６３．ｃｏｍ
内分泌系统起着重要的调节作用，其相关基因表达量的变化，也会对妊娠期产生影响。因此，本研究初步探索饲
喂苜蓿总黄酮对妊娠雌鼠繁殖性能、相关激素以及下丘脑－垂体－卵巢基因表达的影响。
１　材料与方法
１．１　试验动物及材料
大鼠为无特定病原体动物（ｓｐｅｃｉｆｉｃｐａｔｈｏｇｅｎｆｒｅｅ，ＳＰＦ），６５日龄雌鼠７５只，由河南省实验动物中心提供。
雌鼠自由采食饮水，室温控制在１８～２２℃，湿度为４０％～７０％，光照时间１４ｈ光／１０ｈ暗。苜蓿总黄酮纯度
３５％，由西安和霖生物工程有限公司生产。己烯雌酚由合肥久联制药有限公司生产。试验期为２０１２年８－１０
月，河南农业大学草业科学实验室进行。
１．２　动物的饲养与分组
６５日龄雌鼠分为５组，每组１５只，每只大鼠作为１个重复。分别为空白对照组、苜蓿总黄酮１２０ｍｇ／ｋｇ、苜
蓿总黄酮４００ｍｇ／ｋｇ、苜蓿总黄酮１２００ｍｇ／ｋｇ、己烯雌酚０．５ｍｇ／ｋｇ。配种前连续灌胃１５ｄ，之后按１∶２公母
合笼配种，通过阴道涂片，在大鼠阴道内发现大量精子确认为妊娠第０天，确定妊娠后继续灌胃至１８ｄ，每组各处
死孕鼠５只。
１．３　样品的采集与处理
灌胃至妊娠第１８天，每组各处死孕鼠５只，采用心脏采血的方法，采集血液３ｍＬ放入４℃冰箱中过夜后，
３０００ｒ／ｍｉｎ２０ｍｉｎ，取上清液血清放入－２０℃中保存。取大鼠下丘脑、垂体组织，在液氮中冷冻，放入－８０℃冰
箱中保存。取出卵巢后观察记录其黄体数后放入液氮中，－８０℃冰箱保存。再将子宫剥离记录胎仔总重、活胎
数、死胎数、吸收胎数、胎盘重。
１．４　激素的测定
采集的大鼠血清在郑州市人民医院，采用微粒子化学发光免疫分析法测定孕酮（ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ，Ｐ）、雌二醇
（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ，Ｅ２）含量。
１．５　下丘脑－垂体－卵巢性腺轴相关基因表达量的测定
用ＴＲＩｚｏｌ核酸提取试剂提取下丘脑、垂体、卵巢组织总ＲＮＡ，测定ＲＮＡ样品含量及浓度，ＯＤ值在１．８～
２．０之间，满足分子生物学试验要求。在ＮＣＢＩ上查找犌狀犚犎、犉犛犎、犔犎、犉犛犎犚、犔犎犚、犘犚、犆犢犘１９犃１、犮犃犕犘
基因序列。使用ＰｒｉｍｅｒＰｒｅｍｉｅｒ５．０软件设计相应引物。由北京六合华大基因科技有限公司合成，以ＧＡＤＰＨ
为内参，具体序列见表１。
反转录体系：总反应体系２０μＬ，先在ＥＰ管中加入总ＲＮＡ１０μＬ、Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）１８Ｐｒｉｍｅｒ１μＬ、焦炭酸二乙酯
（ｄｉｅｔｈｙｌｐｙｒｏｃａｒｂｏｎａｔｅ，ＤＥＰＣ）水１μＬ混合液，７０℃保温１０ｍｉｎ后迅速在冰上急冷２ｍｉｎ以上，离心数秒。在
将上述反应液中加入５×ＭＭＬＶＢｕｆｆｅｒ４μＬ、ｄＮＴＰ混合剂０．５μＬ、ＲＮａｓｅＭＭＬＶ１μＬ、ＲＮａｓｅ抑制剂０．２５
μＬ、ＤＥＰＣ水２．２５μＬ，４２℃保温１ｈ，７０℃保温１５ｍｉｎ后冰上冷却，即得到ｃＤＮＡ，放入－２０℃冰箱中保存。
各基因的表达量采用相对实时荧光定量ＰＣＲ测定，ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲ反应条件为：９５℃２ｍｉｎ，９５℃２０ｓ，
６０℃２０ｓ，７２℃２０ｓ，共４０个循环。
１．６　统计分析
采用ＳＰＳＳ１３．０分析软件进行单因素方差分析，数据相关分析结果采用平均数±标准差（ｍｅａｎ±ＳＤ）表示。
犘＜０．０５为差异显著，犘＜０．０１为差异极显著。
２　结果与分析
２．１　苜蓿总黄酮对血清中雌二醇、孕酮的影响
与对照组相比，灌胃苜蓿总黄酮和己烯雌酚的大鼠血清中雌二醇浓度均升高，其中苜蓿黄酮中、高剂量组显
著升高（犘＜０．０５），低剂量组极显著升高（犘＜０．０１），但各剂量组组间不存在差异性。而对于血清中孕酮的浓度，
各试验组之间都不存在差异性。但与空白对照组相比，除低剂量组外，苜蓿总黄酮中、高剂量组和己烯雌酚组孕
酮浓度略有降低（表２）。
０５２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．６
表１　引物序列
犜犪犫犾犲１　犗犾犻犵狅狀狌犮犾犲狅狋犻犱犲狆狉犻犿犲狉狊
基因名称Ｇｅｎｅｎａｍｅ 序列Ｓｅｑｕｅｎｃｅ 产物Ｐｒｏｄｕｃｅｓｉｚｅ（ｂｐ）
犌狀犚犎 ５′ＡＡＡＴＧＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＡＧＡＡＣ３′ ２１４
５′ＡＡＴＧＣＧＧＡＡＧＣＣＣＡＣＡＣＡＡＴ３′
犔犎 ５′ＧＣＡＴＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＣＣＡＧＣＡＴ３′ ２８１
５′ＴＧＧＴＴＡＧＡＡＣＡＣＣＴＧＣＴＧＧＣＴＣ３′
犉犛犎 ５′ＡＴＣＣＴＡＣＴＣＴＧＧＴＧＣＴＴＧＡ３′ １７９
５′ＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＴＴＴＧＧＴＣＴＡ３′
犔犎犚 ５′ＣＴＴＴＴＡＣＡＡＡＣＣＴＣＣＣＴＣＧ３′ １７８
５′ＡＣＡＧＡＣＴＣＧＴＴＡＴＴＣＡＴＣＣＣＴ３′
犉犛犎犚 ５′ＡＡＡＣＡＴＣＣＡＣＡＴＣＧＴＴＧＣＣ３′ １２８
５′ＧＴＴＣＡＴＣＴＡＧＣＴＧＡＧＴＴＣＣＧＴ３′
犆犢犘１９犃１ ５′ＣＴＧＡＣＡＡＣＴＣＧＧＧＣＴＡＣＧ３′ １４５
５′ＡＧＴＧＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＡＴＴＡ３′
犮犃犕犘 ５′ＧＧＴＴＧＣＣＴＣＴＡＧＣＣＧＴＴＴＣ３′ １５１
５′ＧＧＧＡＧＴＡＴＣＴＧＧＧＴＣＣＴＣＡＴＣ３′
犘犚 ５′ＧＡＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣ３′ １９２
５′ＣＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＴＴＧＴＣＡＴ３′
犌犃犇犘犎 ５′ＡＣＡＴＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧ３′ １１８
５′ＴＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＧＡＡＴＧＧＧＡＧＴＴ３′
表２　各剂量组大鼠激素含量
犜犪犫犾犲２　犎狅狉犿狅狀犲犾犲狏犲犾狅犳狉犪狋狊犻狀狆狉犲犵狀犪狀犮狔犻狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋犱狅狊犲犵狉狅狌狆
组别Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ 个数Ｎｕｍｂｅｒ 雌二醇Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ（ｐｇ／ｍＬ） 孕酮Ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ（ｎｇ／ｍＬ）
苜蓿总黄酮Ａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ（１２０ｍｇ／ｋｇ） ５ ９８．６７±３２．５２Ａａ １３９．０６±１５．７７ａ
苜蓿总黄酮Ａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ（４００ｍｇ／ｋｇ） ５ ８９．９７±１６．４９ａｂ １３０．３０±８．００ａ
苜蓿总黄酮Ａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ（１２００ｍｇ／ｋｇ） ５ ８２．６７±１９．６０ａｂ １２７．２３±３．４９ａ
己烯雌酚Ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌ（０．５ｍｇ／ｋｇ） ５ ６２．３３±１８．８２ｂｃ １１６．０３±２２．７４ａ
空白对照Ｃｏｎｔｒｏｌ ５ ４７．００±９．５４Ｃｃ １３２．１０±２５．８５ａ
　注：不同小写字母者表示差异显著（犘＜０．０５），不同大写字母者表示差异极显著（犘＜０．０１），下同。
　Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｅｔｔｅｒｓｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（犘＜０．０５），Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃａｐｉｔａｌｌｅｔｔｅｒｓｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（犘＜０．０１）．Ｔｈｅｓａｍｅ
ｂｅｌｏｗ．
２．２　苜蓿总黄酮对活胎数、胎仔重、黄体数、胎盘重的影响
通过解剖妊娠１８ｄ的大鼠发现，与对照组相比，苜蓿总黄酮各剂量组的活胎数皆显著提高（犘＜０．０５）；胎仔
重也均增加，其中高剂量组极显著增重（犘＜０．０１），中、高剂量组之间差异显著（犘＜０．０５）；黄体数方面，苜蓿总黄
酮各剂量组差异不显著，但存在随着剂量的增加而降低的趋势；胎盘重方面，低、中剂量组与空白对照相比显著降
低（犘＜０．０５）。与己烯雌酚组比，苜蓿总黄酮各剂量组的活胎数显著提高（犘＜０．０５），高剂量组的胎仔重极显著
增加（犘＜０．０１）。己烯雌酚的黄体数极显著低于低剂量组的苜蓿总黄酮（犘＜０．０１），显著低于中剂量组（犘＜
０．０５）；胎盘重各处理组差异不显著（表３）。
２．３　苜蓿总黄酮对初生窝重及产仔数的影响
通过对产仔数和初生窝重的统计，苜蓿总黄酮３个剂量组的产仔数均显著高于空白对照组（犘＜０．０５），而初
生窝重则极显著高于空白对照组（犘＜０．０１）。己烯雌酚组与空白对照组相比，产仔数和初生窝重都出现下降的
趋势，与苜蓿总黄酮组比产仔数和初生窝重都极显著降低（犘＜０．０１）（表４）。
１５２第２２卷第６期 草业学报２０１３年
２．４　苜蓿总黄酮对下丘脑－垂体－卵巢性腺轴相关基因表达量的影响
苜蓿总黄酮和己烯雌酚均显著降低了下丘脑中犌狀犚犎 的表达量（犘＜０．０１），并同时使垂体的犉犛犎 表达量
也显著的降低（犘＜０．０１），但犔犎 的表达量随着苜蓿总黄酮剂量的增加略有增加，但差异不显著。在卵巢中与空
白对照组相比，苜蓿总黄酮中、高剂量组以及己烯雌酚组的犉犛犎犚 表达量显著降低（犘＜０．０５）。高剂量组的
ＬＨＲ表达量和空白对照相比显著升高（犘＜０．０５），和低、中剂量以及己烯雌酚组相比极显著升高（犘＜０．０１），而
ＰＲ苜蓿总黄酮各剂量组之间不存在显著性差异，但与空白对照组相比有下降的趋势。己烯雌酚和空白对照组
相比显著降低（犘＜０．０５）。苜蓿总黄酮各剂量组的犮犃犕犘和犆犢犘１９犃１基因表达量与空白对照组相比差异均不
显著，但ｃＡＭＰ表达量有降低的趋势。己烯雌酚组中犆犢犘１９犃１的表达量与空白对照组和苜蓿黄酮各剂量组都
有显著性差异（犘＜０．０５）（表５）。
表３　各剂量组大鼠的活胎数、胎仔重、黄体数、胎盘重
犜犪犫犾犲３　犜犺犲狀狌犿犫犲狉狅犳犾犻狏犲犳犲狋狌狊，狑犲犻犵犺狋狅犳犾犻狏犲犳犲狋狌狊，狀狌犿犫犲狉狅犳犾狌狋犲狌犿犪狀犱狑犲犻犵犺狋狅犳狆犾犪犮犲狀狋犪狅犳狉犪狋狊犻狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋犱狅犲狊犵狉狅狌狆
组别
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
个数
Ｎｕｍｂｅｒ
活胎数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆｌｉｖｅｆｅｔｕｓ
胎仔重
Ｗｅｉｇｈｔｏｆｌｉｖｅｆｅｔｕｓ（ｇ）
黄体数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆｌｕｔｅｕｍ
胎盘重
Ｗｅｉｇｈｔｏｆｐｌａｃｅｎｔａ（ｇ）
苜蓿总黄酮 Ａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ（１２０ｍｇ／ｋｇ） ５ １２．６０±２．５０ａ ７９．８２±１０．６５ａｂ １５．３３±３．６７Ａ ７．４８±１．４７ｂ
苜蓿总黄酮Ａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ（４００ｍｇ／ｋｇ） ５ １２．８０±１．９２ａ ７７．１６±３．９４ｂ １４．２０±２．７７ａ ７．６８±０．６１ｂ
苜蓿总黄酮Ａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ（１２００ｍｇ／ｋｇ） ５ １３．２０±２．３９ａ ８８．７８±１５．２０Ａａ １３．４０±２．６１ａｂ ８．５５±１．０４ａｂ
己烯雌酚Ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌ（０．５ｍｇ／ｋｇ） ５ １０．２０±１．１０ｂ ７１．２０±１８．７０Ｂ １０．４０±１．１４Ｂｂ ６．２５±０．８４Ｂｂ
空白对照Ｃｏｎｔｒｏｌ ５ １０．４０±１．１４ｂ ６９．７４±１８．６８Ｂ １４．８６±２．７９ａ ９．２６±１．９０Ａａ
表４　各剂量组大鼠产仔数、初生窝重
犜犪犫犾犲４　犔犻狋狋犲狉狊犻狕犲，狀犲狑犫狅狉狀犾犻狋狋犲狉狑犲犻犵犺狋狅犳狉犪狋狊犻狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋犱狅狊犲犵狉狅狌狆
组别Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ 个数Ｎｕｍｂｅｒ 产仔数Ｌｉｔｔｅｒｓｉｚｅ 初生窝重Ｎｅｗｂｏｒｎｌｉｔｔｅｒｗｅｉｇｈｔ（ｇ）
苜蓿总黄酮 Ａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ（１２０ｍｇ／ｋｇ） １１ １２．９０±２．０７Ａａ ８５．００±１２．７３Ａ
苜蓿总黄酮Ａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ（４００ｍｇ／ｋｇ） １１ １２．７３±１．６２Ａａ ７７．７２±１０．８１Ａ
苜蓿总黄酮Ａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ（１２００ｍｇ／ｋｇ） １３ １２．６２±２．２９Ａａ ７５．９７±１２．６０Ａ
己烯雌酚Ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌ（０．５ｍｇ／ｋｇ） １０ ８．３０±３．０６Ｂｂ ３６．０４±１０．１２Ｂ
空白对照Ｃｏｎｔｒｏｌ １３ １０．６９±２．９８ｂ ４８．９２±１６．８１Ｂ
表５　各剂量组大鼠性腺轴相关基因表达量
犜犪犫犾犲５　犌犲狀犲犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犻狀犵狅狀犪犱犪犾犪狓犻狊狅犳狉犪狋狊犻狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋犱狅犲狊犵狉狅狌狆
基因
Ｇｅｎｅ
苜蓿总黄酮
Ａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
１２０ｍｇ／ｋｇ
苜蓿总黄酮
Ａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
４００ｍｇ／ｋｇ
苜蓿总黄酮
Ａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
１２００ｍｇ／ｋｇ
己烯雌酚
Ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌ
０．５ｍｇ／ｋｇ
空白对照
Ｃｏｎｔｒｏｌ
犌狀犚犎 ０．０６±０．０７Ｂ ０．０２±０．０２Ｂ ０．０５±０．０６Ｂ ０．２０±０．３１Ｂ １．０７±０．４２Ａ
犉犛犎 ０．１４±０．０９Ｂ ０．０８±０．０１Ｂ ０．２８±０．２２Ｂ ０．２３±０．３１Ｂ １．０３±０．３４Ａ
犔犎 ０．８６±０．３６ａ １．１１±０．０９ａ １．１５±０．５４ａ ０．８２±０．５０ａ １．０４±０．３０ａ
犉犛犎犚 ０．６８±０．０５ａｂ ０．５５±０．３９ｂ ０．５８±０．１７ｂ ０．４９±０．１４ｂ １．０２±０．３０ａ
犔犎犚 ０．８９±０．８０Ｂ ０．９０±０．７０Ｂ ２．８４±１．０２Ａａ ０．５６±０．１６Ｂ １．０６±０．４１ｂ
犘犚 ０．９８±０．６８ａｂ ０．６３±０．２６ａｂ ０．４３±０．２６ａｂ ０．２５±０．１０ｂ １．３３±０．８７ａ
犆犢犘１９犃１ ０．９８±０．２１ａ ０．９８±０．３３ａ １．１１±０．４１ａ ０．４２±０．４８ｂ １．０１±０．３１ａ
犮犃犕犘 ０．９６±０．４７ａ ０．７３±０．４０ａ ０．５１±０．０３ａ ０．５８±０．４３ａ １．１０±０．５４ａ
２５２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．６
３　讨论
随着生活水平的日益提高，人们对各类畜产品的要求，已从单纯的“量”转向“高产优质”，安全、可靠的畜产品
源头逐渐成为社会各个方面关注的焦点。而近些年来，不断有在动物饲料中添加各种违禁添加剂的报道，己烯雌
酚、雌二醇、丙酸睾丸酮、玉米赤霉醇等激素被肆意添加到动物饲料当中，给人类健康带来重大威胁。因此，从植
物中提取的各种具有和激素相同功能的生物活性物质成为新的热点［１１１２］。目前，国内外大量研究已经证明，以苜
蓿黄酮为代表的植物提取物具有雌激素样作用，可以在动物体内发挥和雌激素相似的功能，并对不同生理期哺乳
动物体内的内分泌系统产生相应的影响，进而影响到动物的生殖生长以及改善妇女绝经后的雌激素分泌不
足［１３１９］。本研究发现，苜蓿总黄酮中、高剂量组都显著性升高了雌鼠妊娠期间的雌二醇含量，低剂量组极显著增
加了Ｅ２水平，也表明苜蓿总黄酮产生了雌激素效应。这与 Ｈａｒｒｉｓｏｎ等［２０］给妊娠期间的恒河猴，按体重８ｍｇ／
ｋｇ饲喂三羟异黄酮，则孕猴的雌二醇和孕酮水平皆升高的结果相似。但本试验中孕酮水平与空白对照相比差异
不大并略有下降。此外，苜蓿总黄酮组的产仔数显著提高，初生窝重都极显著提高，说明在妊娠期间添加适量的
苜蓿总黄酮有利于改善动物的繁殖性能，与尹艳云等［６］通过大豆异黄酮饲喂妊娠期小鼠显著提高产仔数的结论
一致。彭宝安等［２１］用苜蓿鲜草替代部分妊娠母猪饲料中的部分精料，初生窝重及产仔数均有提高。由于苜蓿中
黄酮含量较高，也从侧面说明苜蓿黄酮有利于动物繁殖性能。
对于黄酮的弱雌激素样作用机理，普遍认为是通过下丘脑－垂体－卵巢性腺轴的正负反馈调节，从而影响哺
乳动物的生殖内分泌系统。韩忠刚等［２２］认为，这种弱雌激素样作用是通过和下丘脑、垂体上Ｅ２受体结合，提高
这２个组织的受体数目，从而影响性腺轴。Ｓｔｒａｕｓｓ等［２３］认为，黄酮植物雌激素的机制与雌激素受体、生殖激素
关键酶和非激素样作用有关，并且不同的黄酮类化合物可能选择不同的方式发挥作用。Ｗｕ等［２４］报道，大豆黄酮
通过影响性腺轴使大鼠血清中的犌狀犚犎、犉犛犎、犔犎 水平下降，与本试验中通过荧光定量分析的结果相似，苜蓿
总黄酮对下丘脑犌狀犚犎、垂体犉犛犎 的表达显著抑制（犘＜０．０１），高剂量组对卵巢中犉犎犛犚的显著抑制，对犔犎犚
显著促进（犘＜０．０５）。从而说明苜蓿总黄酮是通过干扰性腺轴产生相应作用的，这一结果印证了上述雌激素样
作用机制。此外，Ｃｈｉｌｄｓ［２５］以及Ｈｕｌ和Ｈａｒｖｅｙ［２６］都认为，生长激素（ＧＨ）是一种共促性腺激素，协同影响促生
长轴和性腺轴。熊小文等［２７］在雌性麻鸡饲料中添加３００ｍｇ／ｋｇ的苜蓿黄酮提取物，１５ｄ后体重和日增重显著升
高（犘＜０．０５）。说明黄酮类化合物在影响性腺轴的同时，有可能会引起生长轴的正负反馈调节，而这也可能与产
仔数及初生窝重同时提高有关联。
本试验中Ｅ２与犌狀犚犎 呈反向关系，雌鼠血清中Ｅ２的显著升高使下丘脑犌狀犚犎 表达受到抑制，这也验证了
雌激素对生殖内分泌轴具反馈调节作用［２８］。在雌性哺乳动物的生殖过程中，犌狀犚犎 扮演着十分重要的角色，它
对垂体分泌的犉犛犎、犔犎，卵巢分泌的雌激素、黄体酮等生殖激素，都有直接或间接的影响。本试验中犌狀犚犎 表
达量的降低，直接促使犉犛犎 的表达受到抑制，但同时犔犎 的表达并未受到抑制并有增加，而卵巢中犉犛犎、犔犎 受
体的表达与上游垂体中犉犛犎、犔犎 的表达呈正向关系，且高剂量苜蓿总黄酮犔犎犚的表达显著升高。犉犛犎 及
犉犛犎犚 对雌性动物有刺激卵巢发育，促排卵的作用，但其作用主要在性成熟前。性成熟之后则逐渐转为对犔犎
的依赖，并且犔犎 参与黄体的形成，妊娠黄体在维持妊娠的过程中发挥重要作用［２９３０］。这可能与解剖孕鼠后，活
胎数、胎仔重显著增加有关联，但黄体数差异不显著。说明苜蓿总黄酮有可能加强了孕鼠胚胎的着床，减少了母
体自身对胚胎的吸收作用，提高子宫耐受力有保胎作用。中医认为，菟丝子（黄酮类化合物）具有滋补肝肾，安胎
明目，固精缩尿等功效。此外，研究还发现菟丝子可以提高血清中孕酮的水平，调节与大鼠流产相关的基因表达，
改善生殖性能［３１３２］。因此，苜蓿黄酮也具有类似菟丝子的功能。但苜蓿总黄酮使胎盘的重量减轻，胎盘作为产生
激素和提供营养的重要组织，其重量的减轻也说明苜蓿总黄酮有不利的一面。
犮犃犕犘是哺乳动物卵母细胞成熟过程中十分重要的一个因素，卵母细胞减数分裂成熟的关键在于犮犃犕犘浓
度的降低，反之则抑制成熟［３３３５］。本试验中，犮犃犕犘的表达量和黄酮的剂量呈反向关系。说明苜蓿黄酮对卵母
细胞的成熟产生积极效应，也有利于之后产仔数的提高。Ｐ４５０芳香化酶是体内雌激素合成的关键酶，ＣＹＰ１９Ａ１
的表达可以干扰局部或系统中雌激素浓度［３６］。但本试验中，ＣＹＰ１９Ａ１表达差异不显著，仅高剂量组表达略有
上升。
３５２第２２卷第６期 草业学报２０１３年
４　结论
本试验的结果发现，从妊娠前至妊娠全过程中，饲喂苜蓿总黄酮使血清中雌激素浓度显著升高，但苜蓿总黄
酮各剂量之间的差异不大。苜蓿总黄酮干扰了下丘脑－垂体－卵巢性腺轴相关激素、受体及酶的表达，并使雌性
动物的产仔数和初生窝重增加，其原因与下丘脑－垂体－卵巢性腺轴对生殖激素的调控密切相关，苜蓿总黄酮的
雌激素样作用使大鼠子宫的耐受力增强，生殖激素改变，可能产生了相应的保胎作用。但是由于生殖系统一个十
分精密的调控过程，植物雌激素的非激素作用机制是否也参与了这个过程还不是很清楚。此外，试验发现苜蓿总
黄酮对胎盘也具有一定的不利影响。黄酮的雌激素样作用，对其母体及后代的利弊，目前还没统一的说法。因
此，在生产应用中添加剂量还需根据不同生产目的和动物生理状况谨慎对待，但作为一种可以替代激素的生物活
性物质，其应用前景广泛。
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５５２第２２卷第６期 草业学报２０１３年
犈犳犳犲犮狋狅犳犪犾犳犪犾犳犪犳犾犪狏狅狀狅犻犱狊狅狀狉犲狆狉狅犱狌犮狋犻狏犲狆犲狉犳狅狉犿犪狀犮犲狅犳犳犲犿犪犾犲狉犪狋狊犻狀狆狉犲犵狀犪狀犮狔犪狀犱
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ＷＡＮＧＷｅｉ，ＴＩＡＮＭｉａｏｍｉａｏ，ＬＩＡＮＧＸｉｎｐｉｎｇ，ＺＨＡＮＨｏｎｇｒｕｉ，
ＷＡＮＧＣｈｅｎｇｚｈａｎｇ，ＹＡＮＸｕｅｂｉｎｇ
（ＣｏｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，ＨｅｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００２，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙａｉｍｅｄｔｏｅｌｕｃｉｄａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｏｎｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ｒｅｐｒｏｄｕｃ
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ａｎｉｍａｌｓ．Ｔｈｒｅｅｄｏｓｅｓｏｆａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ（１２０，４００ａｎｄ１２００ｍｇ／ｋｇ）ａｎｄｔｗｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｓ（ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｅｓ
ｔｒｏｌ０．５ｍｇ／ｋｇ，ｂｌａｎｋｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ）ｗｅｒｅｕｓｅｄ．Ｔｈｅｍｉｄｄｌｅａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅｓｏｆａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ
（犘＜０．０５）ｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｅｓｔｒａｄｉｏｌ（Ｅ２）（犘＜０．０５），ｗｈｉｌｅｔｈｅｌｏｗｄｏｓｅｏｆａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｈｉｇｈｌｙｓｉｇ
ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（犘＜０．０１）ｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＥ２．Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｅｖｉｄｅｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅｌｅｖｅｌｂｅｔｗｅｅｎ
ｔｈｅｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｌｉｖｅｆｅｔｕｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（犘＜０．０５）ｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｔｈｒｅｅｄｏｓｅｓｏｆａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ，ｔｈｅ
ｗｅｉｇｈｔｏｆｌｉｖｅｆｅｔｕｓｗａｓｈｉｇｈｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（犘＜０．０１）ｉｎｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｈｉｇｈｄｏｓｅｏｆａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ．Ｔｈｅｒｅ
ｗａｓｎｏｅｖｉｄｅｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｌｕｔｅｕｍａｌｔｈｏｕｇｈｔｈｅｒｅｗａｓａｄｅｃｌｉｎｉｎｇｔｒｅｎｄ．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｃｏｍｐａｒｅｄ
ｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌ，ｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｌｕｔｅｕｍ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ
ｔｈｒｅｅｄｏｓｅｓｏｆａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（犘＜０．０５）ｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｌｉｔｔｅｒｓｉｚｅ，ａｎｄｔｈｅｎｅｗｂｏｒｎｌｉｔｔｅｒｗｅｉｇｈｔ
ｉｎｃｒｅａｓｅｗａｓｈｉｇｈｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（犘＜０．０１）．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆ犌狀犚犎ｉｎｔｈｅｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓａｎｄ犉犛犎ｉｎｔｈｅｐｉｔｕｉｔａ
ｒｙｗｅｒｅｈｉｇｈｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（犘＜０．０１）ｒｅｄｕｃｅｄｂｙａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｎｄｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌ．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ
犉犛犎犚ｉｎｔｈｅｏｖａｒｉｅｓｗａｓｒｅｄｕｃｅｄｂｙｔｈｅｈｉｇｈｄｏｓｅｏｆａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ，ｂｕｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ犔犎犚ｗａｓｉｎ
ｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｏｔｈｅｒｇｅｎｅｓｓｈｏｗｅｄｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｉｎ
ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ，ｔｈｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｒａｔｓｗａｓｉｍｐｒｏｖｅｄ，ｂｅｃａｕｓｅｔｈｅａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄｔｈｅ
ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓｐｉｔｕｉｔａｒｙｏｖａｒｉａｎｇｏｎａｄａｌａｘｉｓ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ａｌｆａｌｆａｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓｐｉｔｕｉｔａｒｙｏｖａｒｉａｎｇｏｎａｄａｌａｘｉｓ；ｎｅｗｂｏｒｎｌｉｔｔｅｒｗｅｉｇｈｔ；ｌｉｔｔｅｒｓｉｚｅ；
ｆｅｍａｌｅｒａｔ；ｑＰＣＲ
６５２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．６