全 文 ：林业科学研究摇 圆园员源袁圆苑渊员冤院员圆愿 员猿圆云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员源冤园员鄄园员圆愿鄄园缘
适合酝杂粤孕分析的核桃子叶 阅晕粤提取方法
周贝贝袁 陈凌娜袁 张俊佩袁 裴摇 东鄢
渊中国林业科学研究院林业研究所袁林木遗传育种国家重点实验室袁北京摇 员园园园怨员冤
收稿日期院 圆园员圆鄄员员鄄园缘
基金项目院 林业公益性行业科研专项渊圆园员园园源园源愿袁源 原 源远冤
作者简介院 周贝贝渊员怨愿缘要冤袁男袁山东泰安人援博士研究生袁主要从事核桃生根调控机制方面的研究援
鄢 通讯作者院研究员袁博导袁主要从事经济林研究援 耘鄄皂葬蚤造院责藻蚤早怎岳 糟葬枣援 葬糟援 糟灶
关键词院核桃曰子叶曰阅晕粤提取曰多糖曰酝杂粤孕
中图分类号院杂苑员愿援 源远 文献标识码院粤
阅晕粤 耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 酝藻贼澡燥凿 燥枣 宰葬造灶怎贼 悦燥贼赠造藻凿燥灶 杂怎蚤贼葬遭造藻 枣燥则 酝杂粤孕 粤灶葬造赠泽蚤泽
在匀韵哉 月藻蚤鄄遭藻蚤袁悦匀耘晕 蕴蚤灶早鄄灶葬袁在匀粤晕郧 允怎灶鄄责藻蚤袁 孕耘陨 阅燥灶早
渊砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 杂贼葬贼藻 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 栽则藻藻 郧藻灶藻贼蚤糟泽 葬灶凿 月则藻藻凿蚤灶早
燥枣 杂贼葬贼藻 云燥则藻泽贼则赠 粤凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园园怨员袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽燥 燥遭贼葬蚤灶 澡蚤早澡鄄择怎葬造蚤贼赠 阅晕粤 泽怎蚤贼葬遭造藻 枣燥则 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶鄄泽藻灶泽蚤贼蚤增藻 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂 渊酝杂粤孕冤袁 葬鄄
灶葬造赠泽蚤泽袁 贼澡藻 皂葬贼怎则藻 糟燥贼赠造藻凿燥灶 葬灶凿 贼蚤泽泽怎藻 糟怎造贼怎则藻凿 糟燥贼赠造藻凿燥灶 燥枣 憎葬造灶怎贼 糟怎造贼蚤增葬则 耶蕴蚤葬燥灶蚤灶早鄄员爷 憎藻则藻 怎泽藻凿 葬泽 贼澡藻 贼藻泽贼蚤灶早
皂葬贼藻则蚤葬造泽 蚤灶 贼澡藻 则藻泽藻葬则糟澡 燥枣 阅晕粤 蚤泽燥造葬贼蚤燥灶 遭赠 猿 皂藻贼澡燥凿泽 渊杂阅杂袁 澡蚤早澡 泽葬造贼 悦栽粤月 葬灶凿 皂燥凿蚤枣蚤藻凿 澡蚤早澡 泽葬造贼 悦栽粤月冤 葬灶凿
贼澡藻 皂葬贼怎则藻 造藻葬枣 贼蚤泽泽怎藻 憎葬泽 贼葬噪藻灶 葬泽 贼澡藻 糟燥灶贼则燥造援 栽澡藻 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 葬灶凿 蚤灶贼葬糟贼灶藻泽泽 燥枣 贼澡藻 藻曾贼则葬糟贼藻凿 阅晕粤 憎藻则藻 凿藻贼藻则鄄
皂蚤灶藻凿 怎泽蚤灶早 葬 泽责藻糟贼则燥皂藻贼藻则 葬灶凿 遭赠 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 蚤灶 园援 愿豫 渊憎 辕 增冤 葬早葬则燥泽藻 早藻造泽 葬早葬蚤灶泽贼 泽贼葬灶凿葬则凿 泽燥造怎贼蚤燥灶泽 燥枣 造葬皂遭凿葬
阅晕粤援 匀蚤早澡 择怎葬造蚤贼赠 阅晕粤 憎葬泽 藻曾贼则葬糟贼藻凿 枣则燥皂 造藻葬枣 贼蚤泽泽怎藻泽 怎泽蚤灶早 贼澡藻 澡蚤早澡 泽葬造贼 悦栽粤月 皂藻贼澡燥凿 葬灶凿 贼澡藻 皂燥凿蚤枣蚤藻凿 澡蚤早澡 泽葬造贼
悦栽粤月 皂藻贼澡燥凿援 晕燥 凿藻贼藻糟贼葬遭造藻 阅晕粤 憎葬泽 藻曾贼则葬糟贼藻凿 枣则燥皂 贼澡藻 皂葬贼怎则藻 糟燥贼赠造藻凿燥灶 葬灶凿 糟怎造贼怎则藻凿 糟燥贼赠造藻凿燥灶 怎泽蚤灶早 杂阅杂 皂藻贼澡鄄
燥凿援 栽澡藻 阅晕粤 憎蚤贼澡 澡蚤早澡 择怎葬造蚤贼赠 遭怎贼 造蚤贼贼造藻 择怎葬灶贼蚤贼赠 憎葬泽 藻曾贼则葬糟贼藻凿 枣则燥皂 贼澡藻 皂葬贼怎则藻 糟燥贼赠造藻凿燥灶 遭怎贼 灶燥贼 贼澡藻 藻曾贼则葬糟贼 糟怎造鄄
贼怎则藻凿 糟燥贼赠造藻凿燥灶 怎泽蚤灶早 贼澡藻 澡蚤早澡 泽葬造贼 悦栽粤月 皂藻贼澡燥凿援 栽澡藻 阅晕粤 憎蚤贼澡 澡蚤早澡 择怎葬灶贼蚤贼赠 葬灶凿 择怎葬造蚤贼赠 泽怎蚤贼葬遭造藻 枣燥则 酝杂粤孕 葬灶葬造赠鄄
泽蚤泽 枣则燥皂 遭燥贼澡 皂葬贼怎则藻 糟燥贼赠造藻凿燥灶 葬灶凿 糟怎造贼怎则藻凿 糟燥贼赠造藻凿燥灶 憎葬泽 藻曾贼则葬糟贼藻凿 怎泽蚤灶早 贼澡藻 皂燥凿蚤枣蚤藻凿 澡蚤早澡 泽葬造贼 悦栽粤月 皂藻贼澡燥凿援 栽澡藻
阅晕粤 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿 燥枣 憎葬造灶怎贼 糟燥贼赠造藻凿燥灶 泽怎蚤贼葬遭造藻 枣燥则 酝杂粤孕 葬灶葬造赠泽蚤泽 憎葬泽 藻泽贼葬遭造蚤泽澡藻凿袁 憎澡蚤糟澡 糟燥怎造凿 造葬赠 枣燥怎灶凿葬贼蚤燥灶
枣燥则 凿燥憎灶泽贼则藻葬皂 皂燥造藻糟怎造葬则 遭蚤燥造燥早赠 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼 葬灶凿 责则燥增蚤凿藻 葬 则藻枣藻则藻灶糟藻 贼燥 贼澡藻 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻 则藻皂燥增葬造 则藻泽藻葬则糟澡 蚤灶 阅晕粤
藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 责则燥糟藻凿怎则藻援
运藻赠 憎燥则凿泽院允怎早造葬灶泽 则藻早蚤葬曰 糟燥贼赠造藻凿燥灶曰 阅晕粤 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶曰 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻曰 酝杂粤孕
核桃渊允怎早造葬灶泽 则藻早蚤葬 蕴援 冤营养价值高袁含有丰富
的脂肪酸和蛋白质咱员暂 袁子叶是核桃重要的营养储存
器官袁作为常用的实验材料袁可用来组织培养进行生
根实验等相关研究咱圆 原 猿暂 遥 酝杂粤孕 是在 粤云蕴孕 基础上
建立起来的在全基因组范围检测 缘爷鄄悦悦郧郧 位点的
胞嘧啶甲基化变化的实验技术咱源暂 袁具有多态性高尧无
需预知 阅晕粤序列的优点袁但其需要提取高质量的基
因组 阅晕粤袁存在于 阅晕粤中的多糖等杂质会对酶切等
后续实验造成较大影响咱缘暂 遥 目前袁核桃组织全基因
组 阅晕粤 提取方法主要集中在叶片组织咱远 原 苑暂 遥 雷玲
等咱远暂以 员猿 个河北核桃优系叶片为材料袁比较了高盐
低 责匀值法尧杂阅杂 法和 悦栽粤月 法提取基因组 阅晕粤 的
效果袁确定含 猿豫 孕灾孕的高盐低 责匀 值法为河北核桃
叶片 阅晕粤提取的最适方法曰然而袁核桃子叶的 阅晕粤
提取目前没有较为有效的方法遥 本试验以耶辽宁 员
号爷核桃品种近成熟子叶和经过组织培养的子叶为
第 员 期 周贝贝等院适合 酝杂粤孕分析的核桃子叶 阅晕粤提取方法
材料袁以叶片为对照袁研究 猿 种不同的 阅晕粤 提取方
法渊杂阅杂尧高盐 悦栽粤月尧改良高盐 悦栽粤月冤所提取 阅晕粤
纯度尧含量尧多糖残留等方面的差别袁以期找到适合
酝杂粤孕分析的核桃子叶 阅晕粤 提取方法袁为以子叶为
实验材料的分子生物学研究奠定基础袁为深入研究
阅晕粤提取过程多糖的去除提供参考遥
员摇 材料与方法
员援 员摇 材料
实验材料为近成熟渊雌花盛花后 员猿园 凿冤的耶辽
宁 员 号爷核桃青果和核桃成熟叶片袁于 圆园员员 年 愿 月 远
日采自河北农业大学核桃种质资源圃遥 采集后将种
实保存于 源 益条件下备用袁叶片经干冰保存带回实
验室袁置于 原 圆园 益冰箱备用遥 核桃子叶采集根据周
贝贝咱愿暂的方法袁子叶的培养用 员 辕 源阅运宰咱怨暂 垣 猿 皂早窑
蕴 原员 陨月粤培养基袁培养基分装到 缘园 皂蕴 的三角瓶中袁
于培养的第 员园 天进行采样遥 培养采用院将子叶平放
于固体培养基上袁每瓶接种 源 个外植体遥 培养条件
为渊圆缘 士 猿冤益袁暗培养遥
员援 圆摇 试验方法
员援 圆援 员 摇 杂阅杂 方法 摇 杂阅杂 方法参考 郧燥造凿藻灶遭藻则早藻则
等咱员园暂 尧粤造躁葬灶葬遭蚤等咱员员暂 尧砸燥澡造葬灶凿等咱员圆暂报道的方法遥
员援 圆援 圆 摇 高盐 悦栽粤月 方法 摇 高盐 悦栽粤月 参考 杂燥怎鄄
扎葬咱员猿暂 尧在澡葬灶早等咱员源暂报道的方法遥
员援 圆援 猿摇 改良高盐 悦栽粤月方法摇 渊员冤称取 园援 员 早 实验
材料液氮研磨成粉末袁放入 员援 缘 皂蕴 离心管中遥 渊圆冤
加入 缘园园 滋蕴 耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 遭怎枣枣藻则渊员园园 皂皂燥造 栽则蚤泽鄄匀悦造 责匀
值 愿援 园尧园援 猿缘 皂燥造 泽燥则遭蚤贼燥造尧缘 皂皂燥造 耘阅栽粤 责匀值 愿援 园袁用
之前加 员豫 茁鄄巯基乙醇冤袁冰浴 员园 皂蚤灶袁源 益 员园 园园园
则窑皂蚤灶 原员离心 员园 皂蚤灶袁重复 员 次遥 渊猿冤去上清并用
缘园园 滋蕴 耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 遭怎枣枣藻则 悬浮沉淀袁加入 猿缘园 滋蕴高盐
悦栽粤月 遭怎枣枣藻则 渊缘园 皂皂燥造窑蕴 原员 栽则蚤泽鄄匀悦造 责匀 值 愿援 园尧源
皂燥造窑蕴 原员 晕葬悦造尧员援 愿豫 悦栽粤月尧圆缘 皂皂燥造窑蕴 原员 耘阅栽粤
责匀 值 愿援 园尧缘 皂燥造窑蕴 原员 孕灾孕尧圆缘 皂皂燥造窑蕴 原员 晕葬圆杂圆韵缘冤
和 猿园 滋蕴 蕴葬怎则燥怎赠造 杂葬则糟燥泽蚤灶藻袁缘缘 益温浴 远园 皂蚤灶遥 渊源冤
加入 猿园豫 终浓度乙醇袁等体积的酚 辕氯仿 辕异戊醇
渊圆缘颐 圆源颐 员冤袁混匀袁员园 园园园 则窑皂蚤灶 原员离心 员园 皂蚤灶袁用氯
仿 辕异戊醇重复 员 次遥 渊缘冤转移上清到一新的离心
管袁加入 员 辕 员园 体积的 晕葬粤糟 和 圆 辕 猿 体积异丙醇袁混
匀袁 原 圆园 益放置 猿园 皂蚤灶遥 渊远冤愿 园园园则窑皂蚤灶 原员离心 员园
皂蚤灶袁弃上清遥 渊苑冤苑园豫乙醇洗涤沉淀袁弃乙醇袁室温
下微干袁加入 员园园 滋蕴 栽耘 溶解 阅晕粤遥 渊愿冤加入终浓
度 缘园 滋早窑滋蕴 原员的 砸晕葬泽藻袁猿苑 益保温 员 澡遥 渊怨冤阅晕粤
溶液补足至 猿园园 滋蕴袁加入终浓度 圆 皂燥造窑蕴 原员的 晕葬粤糟
和等体积氯仿 辕异戊醇抽提 员 次遥 渊员园冤上清液中加
入 圆 辕 猿 体积异丙醇袁 原圆园 益放置 猿园 皂蚤灶遥 渊员员冤愿 园园园
则窑皂蚤灶 原员离心 员园 皂蚤灶袁弃上清遥 渊员圆冤苑园豫乙醇洗涤
沉淀袁自然干燥后溶于 圆园 滋蕴 栽耘中遥
员援 圆援 源 摇 阅晕粤 检测 摇 取 圆 滋蕴 阅晕粤 样品用 晕葬灶燥
愿 园园园测定波长 圆远园尧圆愿园尧圆猿园 灶皂 处的光吸收值渊韵阅
值冤尧韵阅 攒 韵阅 比值尧韵阅 辕 韵阅 比值和 阅晕粤 浓
度曰取 猿 滋蕴 阅晕粤在 园援 愿豫的琼脂糖凝胶尧员 伊 栽月耘缓
冲液 猿 增 辕 糟皂 电压条件下电泳袁以已知含量的 阅晕粤
酝葬则噪藻则渊鼎国生物工程公司冤为对照袁耘月 染色 员缘
皂蚤灶袁检测 阅晕粤 的浓度和纯度袁在 哉灾孕 凝胶成像系
统上观察和拍照遥
员援 圆援 缘摇 阅晕粤 的 酝杂粤孕分析摇 阅晕粤 的 酝杂粤孕 分析实
验方法参考 孕燥则贼蚤泽 等咱员缘暂 孕藻则葬扎葬鄄耘糟澡藻增藻则则蚤葬 等咱员远暂的方
法袁对基因组 阅晕粤 进行酶切尧连接尧预扩增尧选择性
扩增尧远豫聚丙烯酰胺凝胶电泳尧银染染色尧读带和数
据整理袁试验中所用接头尧预扩尧选择性扩增引物序
列同 在澡葬灶早等咱员苑暂 尧蕴燥灶早等咱员愿暂实验所用引物渊表 员冤遥
表 员摇 酝杂粤孕分析的接头和引物序列
接头和引物渊缘爷寅猿爷冤 序列
接头
预扩增引物 渊缘爷寅猿爷冤
选扩增引物 渊缘爷寅猿爷冤
耘糟燥砸 陨 葬凿葬责贼燥则泽渊云燥则憎葬则凿冤 悦栽悦郧栽粤郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦
耘糟燥砸 陨 葬凿葬责贼燥则泽渊砸藻增藻则泽藻冤 粤粤栽栽郧郧栽粤悦郧悦粤郧栽悦栽粤悦
匀责葬 陨陨鄄酝泽责 陨 葬凿葬责贼燥则泽渊云燥则憎葬则凿冤 郧粤悦郧粤栽郧粤郧栽悦栽粤郧粤粤
匀责葬 陨陨鄄酝泽责 陨 葬凿葬责贼燥则泽渊砸藻增藻则泽藻冤 悦郧栽栽悦栽粤郧粤悦栽悦粤栽悦
耘 垣 粤 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤
匀 辕 酝 垣 栽 郧粤栽郧粤郧栽悦栽粤郧粤粤悦郧郧栽
耘 垣 粤粤悦 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤粤悦
耘 垣 粤粤郧 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤粤郧
耘 垣 粤悦粤 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤悦粤
匀 辕 酝 垣 栽粤悦 郧粤栽郧粤郧栽悦栽粤郧粤粤悦郧郧栽粤悦
匀 辕 酝 垣 栽粤郧 郧粤栽郧粤郧栽悦栽粤郧粤粤悦郧郧栽粤郧
怨圆员
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆苑 卷
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 阅晕粤吸光值检测
杂阅杂尧高盐 悦栽粤月尧改良高盐 悦栽粤月 猿 种方法提取
的核桃成熟子叶尧组培子叶和成熟叶片 阅晕粤 的吸光
值检测结果见表 员遥 韵阅圆远园 辕 韵阅圆愿园用于评估 阅晕粤 纯
度袁用 杂阅杂方法提取的核桃成熟子叶尧组培子叶和成
熟叶片 阅晕粤 的 韵阅圆远园 辕 韵阅圆愿园比值分别为 圆援 远园尧猿援 员园
和 圆援 怨园袁表明 阅晕粤 降解较严重曰用高盐 悦栽粤月 方法
提取的核桃成熟子叶尧组培子叶和成熟叶片 阅晕粤 的
韵阅圆远园 辕 韵阅圆愿园比值分别为 圆援 园圆尧员援 怨猿 和 员援 愿圆袁表明所
提取的成熟子叶和组培子叶 阅晕粤 纯度较高袁有轻度
降解或 砸晕粤残留袁成熟叶片 阅晕粤 质量较好曰用改良
高盐 悦栽粤月方法提取的核桃成熟子叶尧组培子叶和
成熟叶片 阅晕粤 的 韵阅圆远园 辕 韵阅圆愿园比值分别为 员援 苑怨 尧员郾 愿员 和 员援 愿园袁表明 阅晕粤 纯度较高遥 韵阅圆远园 辕 韵阅圆猿园用
于评估碳水化合物尧多肽尧苯酚等杂质残留袁用 杂阅杂
方法提取的核桃成熟子叶尧组培子叶和成熟叶片
阅晕粤的 韵阅圆远园 辕 韵阅圆猿园比值分别为 员援 猿圆尧员援 员远 和 员援 圆猿袁
表明多糖残留较多曰高盐 悦栽粤月 方法提取的核桃成
熟子叶尧组培子叶和成熟叶片 阅晕粤 的 韵阅圆远园 辕 韵阅圆猿园
比值分别为 员援 苑远尧员援 远员 和 圆援 远员袁表明所提取的成熟
子叶和组培子叶 阅晕粤多糖残留较多袁成熟叶片 阅晕粤
纯度较高袁组织间差异较大曰改良高盐 悦栽粤月 方法提
取的核桃成熟子叶尧组培子叶和成熟叶片 阅晕粤 的
韵阅圆远园 辕 韵阅圆猿园比值分别为 圆援 缘远尧圆援 源愿 和 圆援 缘圆袁表明阅晕粤纯度较高袁基本无多糖残留遥 对 阅晕粤 的浓度
检测而言袁除 杂阅杂 方法提取的 阅晕粤 浓度很低
渊远园郾 缘猿尧猿园援 远源尧员园猿援 远圆 灶早窑滋蕴 原员 冤外袁其余 阅晕粤 浓
度均较高袁适合分子生物学下游操作遥
表 圆摇 猿 种方法提取的 阅晕粤吸光值检测结果
方法 材料 韵阅圆远园 辕 韵阅圆愿园 韵阅圆远园 辕 韵阅圆猿园 浓度 辕 渊灶早窑滋蕴 原员 冤
杂阅杂 成熟子叶 圆援 远园 员援 猿圆 远园援 缘猿
组培子叶 猿援 员园 员援 员远 猿园援 远源
成熟叶片 圆援 怨园 员援 圆猿 员园猿援 远圆
高盐 悦栽粤月 成熟子叶 圆援 园圆 员援 苑远 苑远猿援 远源
组培子叶 员援 怨猿 员援 远员 远园源援 缘愿
成熟叶片 员援 愿圆 圆援 远员 苑缘源援 远愿
改良高盐 成熟子叶 员援 苑怨 圆援 缘远 源愿猿援 源苑
悦栽粤月 组培子叶 员援 愿员 圆援 源愿 远猿远援 怨远
成熟叶片 员援 愿园 圆援 缘圆 愿园缘援 员远
圆援 圆摇 阅晕粤电泳检测结果
阅晕粤电泳检测结果渊图 员冤中袁杂阅杂 方法提取的
核桃成熟子叶和组培子叶 阅晕粤 在泳道 员 和 圆袁阅晕粤
条带不清晰袁呈现弥散状袁表明降解严重曰高盐 悦栽粤月
方法提取的核桃成熟子叶和组培子叶 阅晕粤在泳道 源
和 缘袁阅晕粤 条带较亮袁表明浓度较高袁泳道呈轻微弥
散状袁有轻度 阅晕粤 降解或有多糖等杂质残留曰改良
高盐 悦栽粤月 方法提取的核桃成熟子叶和组培子叶
阅晕粤在泳道 远 和 苑袁阅晕粤 条带较亮袁表明浓度较高袁
泳道清晰袁阅晕粤 稳定袁无多糖等杂质残留遥 对照条
带较亮袁泳道清晰袁表明 阅晕粤质量较好遥
员 和 圆 分别为 杂阅杂方法提取的成熟子叶和组培子叶 阅晕粤曰猿援 阅晕粤
酝葬则噪藻则曰源 和 缘 分别为高盐 悦栽粤月方法提取的成熟子叶和组培子叶
阅晕粤曰远 和 苑 分别为改良高盐 悦栽粤月方法提取的成熟子叶和组培子
叶 阅晕粤曰愿援对照叶片组织提取的 阅晕粤
图 员摇 猿 种方法提取的 阅晕粤电泳结果
圆援 猿 摇 改良高盐 悦栽粤月 提取的成熟子叶 阅晕粤 的
酝杂粤孕分析
吸光值比较和电泳检测表明院改良高盐 悦栽粤月
方法提取的成熟子叶 阅晕粤 质量较好袁高盐 悦栽粤月 方
法提取的成熟子叶 阅晕粤有部分多糖的残留袁为比较
多糖残留对酶切的影响袁本研究将 圆 种 阅晕粤 在
猿苑 益酶切渊耘糟燥砸 陨 辕酝泽责 陨冤 圆援 缘 澡袁然后进行琼脂糖凝
胶电泳检测渊图 圆冤遥 泳道 员 为高盐 悦栽粤月 提取的成
熟子叶 阅晕粤酶切渊耘糟燥砸 陨 辕酝泽责 陨冤电泳图袁姿 阅晕粤 所
指示的 阅晕粤 条带处 阅晕粤 未完全降解袁表明多糖残
留对酶切有一定影响曰泳道 圆 为改良高盐 悦栽粤月 提
取的成熟子叶 阅晕粤 酶切渊耘糟燥砸 陨 辕酝泽责 陨冤电泳图袁泳
道呈均匀弥散状袁阅晕粤酶切完全遥
为进一步验证改良高盐 悦栽粤月提取的成熟子叶
阅晕粤可用于 酝杂粤孕分析袁本研究对酶切产物进行了
预扩增与选择性扩增袁预扩增产物进行琼脂糖凝胶
电泳检测渊图 猿冤袁对选择性扩增产物进行 缘豫变性
聚丙烯酰胺凝胶电泳检测渊图 源冤遥 预扩增产物在
圆园园 员 园园园 遭责范围内呈弥散状分布袁表明酶切连接
效果较好曰选择性扩增产物经变性聚丙烯酰胺凝胶
电泳袁源 对 酝杂粤孕引物除引物 圆 外袁其余 猿 对引物组
合泳道均有清晰条带咱员源暂 袁多态性均较高袁表明用改
园猿员
第 员 期 周贝贝等院适合 酝杂粤孕分析的核桃子叶 阅晕粤提取方法
泳道 员 为高盐 悦栽粤月提取的成熟子叶 阅晕粤酶切渊耘糟燥砸 陨 辕 酝泽责 陨冤电泳
图袁泳道 圆 为改良高盐 悦栽粤月 提取的成熟子叶 阅晕粤 酶切渊耘糟燥砸 陨 辕
酝泽责 陨冤电泳图
图 圆摇 阅晕粤酶切电泳图
良高盐 悦栽粤月 方法提取的成熟子叶 阅晕粤 可用于
酝杂粤孕分析咱员苑暂 遥
图 猿摇 成熟子叶 阅晕粤 预扩电泳图
猿摇 结论与讨论
我国核桃种质资源丰富咱员怨暂 袁为核桃优良性状的
形成规律尧进化尧生物多样性等相关研究提供了丰富
的实验材料袁而高质量的 阅晕粤是进行此类研究的基
础遥 阅晕粤的提取主要有细胞壁和细胞膜破碎尧抽
提尧沉淀和溶解 源 步咱圆园暂 遥 在提取步骤中袁多糖的许
多理化性质与核酸相似袁用酚仿抽提尧选择性沉淀等
方法不能有效地去除多糖咱圆员暂 遥 目前袁用于提取木本
植物基因组 阅晕粤 的方法主要有 悦栽粤月 法尧杂阅杂 法和
高盐低 责匀值法咱远 原 苑袁圆圆暂 遥 杂阅杂法和高盐低 责匀值法得
泳道 员 源 为成熟子叶 阅晕粤 以不同引物组合 渊匀 辕 酝 垣 栽栽悦鄄耘 垣
粤粤郧袁匀 辕 酝 垣 栽栽悦鄄耘 垣 粤悦粤袁匀 辕 酝 垣 栽栽悦鄄耘 垣 粤悦栽袁匀 辕 酝 垣 栽栽悦鄄耘 垣
粤悦悦冤扩增的产物
图 源摇 成熟子叶 阅晕粤引物筛选 酝杂粤孕电泳图
到的 阅晕粤含杂质渊糖类及酚类物质冤较多袁多糖尧多
酚尧色素等会影响酶的活性袁对分子生物学下游实验
造成不利影响袁限制了这 圆 种方法在多糖多酚含量
高的核桃组织 阅晕粤 提取中的应用遥 悦栽粤月 法所提
阅晕粤纯度高尧分子量大袁目前广泛应用于核桃叶片
的 阅晕粤提取咱远 原 苑袁圆圆暂 遥
本研究中 杂阅杂提取的 阅晕粤降解较严重尧含量低
且有多糖等杂质残留袁表明其应用于核桃子叶的
阅晕粤提取还需较大改进曰高盐 悦栽粤月 方法提取的
阅晕粤浓度较高袁多糖残留较少袁对下游的酶切有一
定影响曰改良高盐 悦栽粤月 方法提取的 阅晕粤 质量较
高袁经后续的酶切尧扩增和电泳的分析表明袁适合进
行 酝杂粤孕分析遥 核桃脂肪酸和蛋白质含量高袁酚对
蛋白的变性效果优于氯仿袁为有效去除这 圆 种物质袁
实验中抽提步骤加入酚 辕氯仿 辕异戊醇渊圆缘院圆源院员冤袁
取得较好效果遥 前人对 阅晕粤 提取过程中去除多糖
残留的研究袁进行了许多探索袁云葬灶早 等咱圆猿暂认为袁高浓
度的 晕葬悦造有助于去除多糖袁杂怎 等咱圆源暂使用 运粤糟 结合
乙醇提取褐藻 砸晕粤 去除多糖的效果明显袁蕴燥责藻扎 原
郧燥皂藻扎等咱圆缘暂采用加入 园援 圆缘 倍体积无水乙醇和 园援 员员
倍体积的 缘皂燥造 运粤糟匀浆溶液去除多糖杂质袁提取芒
果中果皮的 砸晕粤遥 本研究为彻底去除多糖袁采用改
良高盐 悦栽粤月 方法并在抽提前加入 猿园豫终浓度乙
醇咱圆远暂和纯化步骤加入终浓度 圆 皂燥造的 晕葬粤糟袁结果表
明袁多糖的去除效果较高盐 悦栽粤月方法的好遥
核桃多糖尧多酚含量存在较大的组织差异性袁子
叶是其重要的营养储存器官袁脂肪酸尧蛋白质和多糖
含量较高袁本研究中采用酚 辕氯仿 辕异戊醇渊圆缘院圆源院
员冤进行抽提袁酚是强烈的蛋白质变性剂袁能有效去除
蛋白质袁氯仿有强烈的脂溶性袁能有效去除脂类杂
质袁最后为去除核酸溶液中的残留酚用氯仿 辕异戊醇
员猿员
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆苑 卷
渊圆源院员冤抽提 员 次遥 子叶经过组织培养后袁脂肪酸会
逐渐分解为多糖和单糖袁同时会产生较多次生代谢
物袁本研究通过添加 茁鄄巯基乙醇尧孕灾孕和 晕葬圆杂圆韵缘 抑
制多酚等次生代谢物氧化袁降低对 阅晕粤 质量的影
响袁取得较好效果遥 成熟叶片组织的多糖含量较子
叶低袁脂肪酸和蛋白质含量较低袁通过高盐 悦栽粤月 和
改良高盐 悦栽粤月 均提取到纯度较高的 阅晕粤袁而同样
用高盐 悦栽粤月提取的子叶 阅晕粤 有多糖残留袁这与子
叶中多糖含量较高有关袁表明 阅晕粤 提取方法的通用
性受组织差异的影响袁应根据不同组织建立或优化
差异性的 阅晕粤提取方法袁以适应特殊需要遥
本研究找到了适合 酝杂粤孕分析的核桃子叶 阅晕粤
提取方法袁为下游分子生物学实验奠定基础袁同时可
为其它木本植物 阅晕粤 提取过程中多糖去除的研究
提供参考遥
参考文献院
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