全 文 ：书文心兰多倍体诱导及其鉴定
崔广荣，张子学，张从宇，胡能兵，隋益虎，李杰勤
（安徽科技学院植物科学学院，安徽 凤阳２３３１００）
摘要：以类原球茎薄切片为外植体，用秋水仙素对离体薄切片再生类原球茎过程进行多倍体诱导，建立文心兰多倍
体离体化学诱变技术体系。探讨了不同浓度的秋水仙素在不同诱变时间内对离体薄切片类原球茎形成及苗再生
的诱变效应，比较了二倍体和多倍体试管苗的形态特征、叶片下表皮组织细胞结构特征，并对多倍体根尖细胞染色
体数进行了鉴定。结果表明，秋水仙素对文心兰离体薄切片类原球茎的形成及其再生苗产生较大影响，较高浓度
的秋水仙素处理较长时间时，形成类原球茎的薄切片比率及再生苗数减少明显，但多倍体形成的比率相对较高；多
倍体苗叶片厚实、紧凑、植株较矮；叶片下表皮组织细胞、气孔结构与二倍体存在一定差异，细胞核明显较大，染色
体加倍成功。
关键词：文心兰；离体培养；秋水仙素；化学诱变；多倍体
中图分类号：Ｑ９４３；Ｑ９４９．７１＋８．４３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１０）０１０１８４０７
文心兰（犗狀犮犻犱犻狌犿）又名跳舞兰、金粉蝶兰、瘤瓣兰，属复茎类洋兰，附生或地生［１］，同其他兰科植物一样，按
照传统的分株繁殖方法，繁殖系数较低，因而其种苗快速繁殖主要通过组织培养技术完成。国外学者们分别以茎
的顶端分生组织［２］、顶芽［３］、茎尖［４］、根尖［５］、叶片［６］等为外植体分别建立了文心兰组培快繁体系。国内的彭晓明
等［７］以茎尖和花梗为外植体、陈兴贻［８］以茎尖和花穗、崔广荣等［９１１］以花原芽、茎尖分生组织为外植体各自建立
了文心兰的离体快繁体系及高效丛芽增殖体系，其他一些学者在改进培养基、培养方法、提高组培快速繁殖效率
等方面也作了较多的工作［１２１４］。国内外有关兰花研究多集中于离体快速繁殖方面，而离体化学诱变的报道相对
较少［１５，１６］。利用秋水仙素进行化学诱变获得多倍体是园艺植物育种中的重要方法之一，将化学诱变技术与组织
培养技术结合进行诱变育种，具有其独特的优势［１７，１８］。秋水仙素在诱导植物产生多倍体方面的研究成果不胜枚
举，将加倍技术应用于靠无性繁殖的花卉产生多倍体则更有价值［１９］。化学诱变剂能有效渗入组织细胞并能有效
再生植株是离体化学诱变成功与否的２个重要环节［１７，１８］。越来越多的研究表明，兰花类原球茎形成过程是典型
的体细胞胚胎发生发育过程，且是单细胞起源的［６，２０２３］，这为文心兰离体化学诱变提供了理论基础。最近，崔广
荣等［２４］以文心兰类原球茎薄切片（ｔｈｉｎｃｅｌｌａｙｅｒｓ，ＴＣＬｓ）为外植体，成功建立了高效类原球茎再生体系，为文心
兰的离体化学诱变奠定了试验基础。文心兰不同品种染色体数目差异较大，而且染色体数目与文心兰花色、花
型、株型及其抗逆性等生物学性状密切相关［２５］，表明诱变文心兰多倍体在生产上具有较大的潜在应用价值，国内
有关文心兰多倍体诱导尚未见报道。本试验用不同浓度的秋水仙素对文心兰类原球茎薄切片再生类原球茎过程
进行不同时间处理，探讨秋水仙素浓度及处理时间对类原球茎发生及其成苗的影响，并比较再生苗的形态特征、
细胞染色体数、叶片下表皮组织细胞学特征，旨在建立简单、快速的文心兰多倍体诱导技术体系，为文心兰多倍体
育种奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 植物材料 材料为安徽科技学院通过茎尖培育的文心兰成熟的类原球茎（ｐｒｏｔｏｃｏｒｍｌｉｋｅｂｏｄｉｅｓ，
ＰＬＢｓ），直径３．０～４．０ｍｍ，文心兰品种为黄花系‘金西’（２狀＝２ｘ＝４２）。
１．１．２ 培养基 类原球茎诱导培养基：１／２ＭＳ（ｍｕｒａｓｈｉｇｅａｎｄｓｋｏｏｇ）＋４．０ｍｇ／Ｌ６ＢＡ（６ｂｅｎｚｙｌａｄｅｎｉｎｅ）＋
１８４－１９０
２０１０年２月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第１９卷 第１期
Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．１
收稿日期：２００９０１１５；改回日期：２００９０３１３
基金项目：安徽省自然科学基金项目（０７０４１１０１０）和安徽省教育厅省级自然科学基金项目（ＫＪ２００７Ｂ０５３）资助。
作者简介：崔广荣（１９６４），男，安徽长丰人，副教授，在职博士。Ｅｍａｉｌ：ｃｕｉｇｒ６４＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
２．０ｍｇ／ＬＡｄ（ａｄｅｎｉｎｅｓｕｌｐｈａｔｅ）＋１．０ｍｇ／ＬＮＡＡ（ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｏｘｙａｃｅｔｉｃａｃｉｄ）＋１００ｍＬ／Ｌ椰汁＋２０ｇ／Ｌ蔗糖
＋４．０ｇ／Ｌ琼脂粉［２４］；苗分化培养基：１／２ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ＋２０ｇ／Ｌ蔗糖＋４．０ｇ／Ｌ琼脂
粉；试管苗生根培养基：１／２ＭＳ＋０．５ｍｇ／ＬＩＢＡ＋２０ｇ／Ｌ蔗糖＋４．０ｇ／Ｌ琼脂粉。培养基高压灭菌前用１．０
ｍｏｌ／ＬＫＯＨ溶液调节ｐＨ值为５．５。
１．１．３ 主要药品 主要植物生长调节剂６苄基腺嘌呤（６ＢＡ）、腺嘌呤硫酸盐（Ａｄ）、奈乙酸（ＮＡＡ）及秋水仙素、
８羟基喹啉等购于上海稼丰园艺用品有限公司，蔗糖为市售白沙糖，椰汁由市售新鲜椰子提取。
１．２ 方法
将文心兰的成熟类原球茎切成厚度约１．０ｍｍ的薄片，接种于类原球茎诱导固体培养基表面（弃去类原球茎
边缘的切片），每瓶接种７块，每处理接种１０瓶，置于培养室培养。培养室温度（２５±１）℃，光照强度约１５００ｌｘ
（光源为４０Ｗ 日光灯），光照时间１２ｈ／ｄ。待薄切片有点状突起形成（８ｄ）时［２５］，在净化工作台上分别滴加
０．１％，０．２％和０．４％秋水仙素（过滤灭菌），确保秋水仙素溶液浸润每块切片，并以滴加无菌水设１个空白对照。
各秋水仙素浓度处理均设５，１０和２０ｄ３个处理时间，由此形成９个处理和１个空白对照，各处理详见表１。秋
水仙素处理完毕后，分别用无菌水漂洗３次，将切片转移至苗分化培养基上继续培养，直至芽苗形成，然后将芽苗
接种于生根培养基中生根培养３０ｄ。观察切片表面生长变化情况，３０ｄ统计切片诱导ＰＬＢｓ发生频率（诱导率＝
ＰＬＢｓ发生的切片块数／接种切片总数），６０ｄ统计牙苗形成数。试管苗根长至１～２ｃｍ时，各处理随机取３０棵
苗，剪下１条根（纵切２半）作常规细胞压片技术进行染色体检测（０．００２ｍｏｌ／Ｌ８羟基喹啉预处理２ｈ、卡诺氏固
定液固定２４ｈ、１ｍｏｌ／Ｌ盐酸及无水乙醇１∶１解离液解离３０ｍｉｎ、改良苯酚品红染液染色１０ｍｉｎ），撕取突变苗
及对照苗叶片下表皮用１．０％Ｉ２－ＫＩ染液染色３ｍｉｎ，观察组织细胞及气孔结构特征。细胞组织学检测用
ＯＰＴＥＣ数码显微镜（ＢＨ３００ＤＭ２０００，中国）观察拍照，试管苗用数码相机拍照。试验于２００８年２－１２月在安徽
科技学院植物组织培养室进行。
表１ 秋水仙素对薄切片类原球茎形成及其分化成苗的影响
犜犪犫犾犲１ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犮狅犾犮犺犻犮犻狀犲狊狅狀狋犺犲犘犔犅狊犳狅狉犿犪狋犻狅狀犪狀犱狊犺狅狅狋狉犲犵犲狀犲狉犪狋犻狅狀犳狉狅犿犜犆犔狊犻狀狏犻狋狉狅犮狌犾狋狌狉犲
处理编号
Ｎｏ．ｏｆ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
诱变时间
Ｔｉｍｅｏｆ
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ（ｄ）
秋水仙素浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆ
ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｓ（％）
接种切片块数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆ
ｉｎｎｏｃｕｌａｔｅｄＴＣＬｓ
产生类原球茎切片块数
ＮｕｍｂｅｒｏｆＴＣＬｓｆｏｒｍｅｄ
ＰＬＢｓ
产生类原球茎切片比率
ＴｈｅｒａｔｅｏｆＴＣＬｓｆｏｒｍｅｄ
ＰＬＢｓ（％）
再生苗总数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆｓｈｏｏｔ
ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
１ ２０ ０．１ ７０ ３８ ５４．３ ７４
２ ２０ ０．２ ７０ ２７ ３８．６ ５６
３ ２０ ０．４ ７０ ２２ ３１．４ ４６
４ １０ ０．１ ７０ ４９ ７０．０ ９０
５ １０ ０．２ ７０ ３７ ５２．９ ８３
６ １０ ０．４ ７０ ３０ ４２．９ ７７
７ ５ ０．１ ７０ ６０ ８５．７ １０１
８ ５ ０．２ ７０ ５３ ７５．７ ９３
９ ５ ０．４ ７０ ４１ ５８．６ ８０
１０（ＣＫ） ０ ０．０ ７０ ６６ ９４．３ １２９
注：苗高小于１．０ｃｍ不计入苗分化总数。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅｈｅｉｇｈｔｏｆｓｈｏｏｔｓｌｅｓｓｔｈａｎ１．０ｃｍｄｉｄｎ’ｔｃａｌｃｕｌａｔｅｉｎｎｕｍｂｅｒｏｆｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｓｈｏｏｔｓ．
２ 结果与分析
２．１ 秋水仙素处理对薄切片类原球茎及苗形成的影响
不同浓度的秋水仙素及不同时间处理对文心兰类原球茎ＴＣＬｓ形成新的类原球茎及新类原球茎再生苗均产
生较大影响，表现出对类原球茎ＴＣＬｓ的伤害或毒性作用（表１）。秋水仙素浓度越大、处理时间越长，其伤害或
５８１第１９卷第１期 草业学报２０１０年
毒性作用越明显。在秋水仙素浓度为０．２％、处理时间为２０ｄ时，部分ＴＣＬｓ逐渐褐化死亡（图１Ａ），而在相同秋
水仙素浓度处理时间分别为１０和５ｄ时，ＴＣＬｓ的死亡率则低很多（图１Ｂ、Ｃ）。与对照（图１Ｄ）相比，在秋水仙素
处理后，各处理ＴＣＬｓ新形成的类原球茎普遍表现出膨大且颜色较深（图１Ａ～Ｃ），表现出较为强烈的秋水仙素诱
变效应，膨大的类原球茎部分再生苗幼叶肿大，呈肉质状（图１Ｅ、Ｆ），表现出一定的“畸形”状，且生长缓慢，这种
“畸形苗”在后期继代生长过程中大部分缓慢死亡，这可能与秋水仙素处理造成细胞染色体重复加倍有一定关系，
因为多次染色体加倍后植株往往难以成活。这种类型的再生苗比例随秋水仙素浓度增大及处理时间延长而提
高，表现出明显的正相关效应。
图１ 秋水仙素对犜犆犔狊形成类原球茎及分化苗的影响
犉犻犵．１ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犮狅犾犮犺犻犮犻狀犲狊狅狀犘犔犅狊犳狅狉犿犪狋犻狅狀犪狀犱狊犺狅狅狋狉犲犵犲狀犲狉犪狋犲犱犳狉狅犿犜犆犔狊
Ａ：０．２％秋水仙素处理２０ｄ（处理２）再生ＰＬＢｓ形态及生长状况ＴｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆＰＬＢｓｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｆｒｏｍＴＣＬｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ０．２％
ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｓｆｏｒ２０ｄ；Ｂ：０．２％秋水仙素处理１０ｄ（处理５）再生ＰＬＢｓ形态及生长状况ＴｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆＰＬＢｓｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｆｒｏｍＴＣＬｓ
ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ０．２％ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｓｆｏｒ１０ｄ；Ｃ：０．２％秋水仙素处理５ｄ（处理８）再生ＰＬＢｓ形态及生长状况ＴｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆＰＬＢｓｒｅｇｅｎ
ｅｒａｔｅｄｆｒｏｍＴＣＬｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ０．２％ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｓｆｏｒ５ｄ；Ｄ：对照处理类原球茎的生长状况ＴｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆＰＬＢｓｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｆｒｏｍ
ＴＣＬｓｏｆｃｏｎｔｒｏｌｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔ；Ｅ：０．２％秋水仙素处理１０ｄ（处理５）苗再生状况ＳｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｏｍＰＬＢｓｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ５；Ｆ：秋水仙素诱导
的“畸形”苗继代生长状况Ｔｈｅｇｒｏｗｔｈｓｔａｔｅｏｆａｂｎｏｒｍａｌｓｈｏｏｔｆｏｒｍｅｄｂｙｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｓｔｒｅａｔｍｅｎｔ
２．２ 不同处理再生试管苗根尖染色体倍性鉴定及诱变率
所有诱变处理中均检测出一定数量的多倍体，但对照中未能检测出多倍体（表２），表明再生试管苗的形成是
秋水仙素诱变形成的，而不是组织培养过程中因无性系变异所产生的，各处理间诱变频率差异明显，因秋水仙素
浓度不同、处理时间长短而异。总体上看，在相同处理时间的条件下，秋水仙素浓度越高，多倍体的诱变频率越
高，反之亦然；在相同秋水仙素浓度处理条件下，处理时间越长，多倍体诱变频率也越高。在所有诱变处理中只检
测到１例嵌合体，表明此诱变方法是比较可靠的文心兰多倍体诱变方法。图２所示为四倍体苗（图２Ａ）及对照苗
（图２Ｂ）根尖细胞中期染色体检测情况，其中对照苗细胞染色体数为２狀＝２ｘ＝４２，多倍体苗细胞染色体数加倍。
２．３ 多倍体试管苗形态特征及叶片下表皮气孔组织学特征
生根培养的四倍体试管苗在形态上与二倍体对照苗有着较为明显的差异：四倍体苗平均高度较二倍体苗矮
１．３ｃｍ，根长平均短０．８ｃｍ，叶片厚实，叶片间紧凑，而二倍体苗叶片较薄、长而松散（图３Ａ）。四倍体与二倍体
叶片下表皮组织学观察表明，四倍体与二倍体叶片下表皮单位面积气孔数量上没有差异（图３Ｂ、Ｃ），这可能与二
６８１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．１
表２ 不同处理再生试管苗染色体加倍频率差异
犜犪犫犾犲２ 犇犻犳犳犲狉犲狀犮犲狊犪犿狅狀犵犪犾狋狉犲犪狋犿犲狀狋狊犻狀犮犺狉狅犿狅狊狅犿犲狊犱狅狌犫犾犲犱
处理编号
Ｎｏ．ｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔ
检测苗数
Ｔｅｓｔｎｕｍｂｅｒｏｆｐｌａｎｔｌｅｔｓ
染色体加倍苗数
Ｐｌａｎｔｌｅｔｎｕｍｂｅｒｏｆｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓｄｏｕｂｌｅｄ
嵌合体数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆｍｏｓａｉｃ
诱变率
Ｒａｔｅｏｆｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｔｅｄ（％）
１ ３０ ４ ０ １３．３
２ ３０ ５ ０ １６．７
３ ３０ ８ ０ ２６．７
４ ３０ ３ ０ １０．０
５ ３０ ４ ０ １３．３
６ ３０ ８ ０ ２６．７
７ ３０ ２ ０ ６．７
８ ３０ １ １ ３．３
９ ３０ ２ ０ ６．７
１０（ＣＫ） ３０ ０ ０ ０．０
注：诱变率＝染色体加倍苗数／检测苗总数，嵌合体不计入染色体加倍苗数。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅｒａｔｅｏｆｍｕｔａｔｉｏｎ＝ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓｄｏｕｂｌｅｄｐｌａｎｔｌｅｔｓ／ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｔｅｓｔｅｄｐｌａｎｔｌｅｔｓ，ｍｏｓａｉｃｗｅｒｅｎｏｔｃｏｕｎｔｅｄｉｎｔｈｅｍｕｔａｔｅｄ
ｐｌａｎｔｌｅｔｓ．
图２ 四倍体和二倍体根尖细胞染色体数
犉犻犵．２ 犆犺狉狅犿狅狊狅犿犲狀狌犿犫犲狉狅犳狉狅狅狋狋犻狆犮犲犾狅犳狋犺犲狋犲狋狉犪狆犾狅犻犱犪狀犱犱犻狆犾狅犻犱
Ａ：四倍体，２狀＝４ｘ＝８４Ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ，２狀＝４ｘ＝８４；Ｂ：二倍体，２狀＝２ｘ＝４２（１０×４０）Ｄｉｐｌｏｉｄ，２狀＝２ｘ＝４２
图３ 四倍体与二倍体试管苗及其叶片下表皮细胞组织特征
犉犻犵．３ 犜犺犲狆犾犪狀狋犾犲狋狅犳狋犺犲狋犲狋狉犪狆犾狅犻犱犪狀犱犱犻狆犾狅犻犱犪狀犱狋犺犲犻狉犺犻狊狋狅犾狅犵犻犮犪犾犮犺犪狉犪犮狋犲狉狅犳犾狅狑犲狉犲狆犻犱犲狉犿犪犾犮犲犾狅犳犾犲犪犳
Ａ：四倍体（左）与二倍体（右）试管苗Ｐｌａｎｔｌｅｔｏｆｔｈｅｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ（ｌｅｆｔ）ａｎｄｄｉｐｌｏｉｄ（ｒｉｇｈｔ）；Ｂ：四倍体叶片下表皮细胞组织特征（箭头所示细胞核）（５×
１０）Ｔｈｅｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｏｆｌｏｗｅｒｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｏｆｐｌａｎｔｌｅｔｌｅａｆｏｆｔｈｅｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ（ａｒｒｏｗｄｉｒｅｃｔｎｕｃｌｅｉ）（５×１０）；Ｃ：二倍体叶片下表皮细胞组织特
征（箭头所示细胞核）（５×１０）Ｔｈｅｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｏｆｌｏｗｅｒｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｏｆｐｌａｎｔｌｅｔｌｅａｆｏｆｔｈｅｄｉｐｌｏｉｄ（ａｒｒｏｗｄｉｒｅｃｔｎｕｃｌｅｉ）（５×１０）
７８１第１９卷第１期 草业学报２０１０年
者均在培养瓶中的生长条件有关，而与其他植物有关报道的在田间表现有所不同，但气孔张度稍有不同，四倍体
气孔张度略大。二者最为明显的区别是四倍体下表皮细胞核较二倍体几乎大１倍（图３Ｂ、Ｃ），且细胞核普遍靠近
细胞边缘。
３ 结论与讨论
３．１ 讨论
前人研究表明，兰花类原球茎的诱导形成过程是典型的胚状体发生发育过程，而且是单细胞起源［６，２０２３］，这
为离体化学诱变提供了方便，单个细胞既有利于于诱变剂的渗入，也有利于在秋水仙素作用后进一步形成纯合的
多倍体植株，而较少产生嵌合体。本试验结果表明，在较高浓度秋水仙素和较长时间的处理条件下，未检测出嵌
合体，仅在低浓度、短时间秋水仙素处理条件下产生了１株嵌合体。因此在离体条件下，用秋水仙素诱导植物多
倍体应依据培养条件、外植体状况等情况适当延长诱变时间和增加秋水仙素浓度可减少嵌合体产生的比例。从
其他园艺植物利用秋水仙素进行多倍体诱导的结果看［２６３１］，不同材料所用的秋水仙素浓度及处理的时间不尽相
同，因此确定特定植物、组织、器官的最佳秋水仙素处理浓度及处理时间，需要不断探索。需要指出的是培养基中
的外源激素也能诱导多倍体的产生［３２］，离体培养的细胞或愈伤组织也可自然发生体细胞无性系变异［３３］，这些都
将丰富生物技术育种的内容和方法［３４］。
把化学诱变育种技术与植物组织和细胞离体培养技术相结合，对遗传变异的诱发、繁殖、改良、选择技术具有
独特的优势和发展潜力，具有不受环境条件限制、节省大量人工和时间、扩大变异谱和提高变异率等优点［３５３７］。
通过植物离体组织诱导同源四倍体已经成为获得多倍体的有效途径［３８］。利用秋水仙素或其他诱导剂离体诱导
多倍体在许多园艺植物上都有报道，如谷晓峰和罗正荣［３９］获得了‘罗田甜柿’（犇犻狅狊狆狔狉狅狊犽犪犽犻）十二倍体再生植
株、张志胜等［２８］离体诱导获得了红掌（犃狀狋犺狌狉狋狌犿犪狀犱狉犪犲犪狀狌犿）四倍体再生植株等。影响植物离体组织加倍的
主要因素有基因型、外植体的种类、诱导组织块大小、培养基、诱导方式、诱导剂的浓度和处理时间等［１７，３７］。本研
究结果进一步证明了诱导剂秋水仙素的浓度及处理时间对诱变率大小的关键性作用。从本试验结果看，进一步
提高诱变剂浓度及延长处理时间，还有可能提高诱变率，但不能忽视高浓度秋水仙素和长时间处理会降低诱变苗
的成活率，本试验中０．２％～０．４％秋水仙素处理１０～２０ｄ时，类原球茎再生苗总数已经明显减少，且有部分类原
球茎在成苗过程中逐渐死亡现象。诱变剂有效渗入植物离体组织中是获得诱变多倍体的重要条件之一［１７］。文
心兰同其他洋兰一样，生长速度缓慢，但在本研究中，文心兰类原球茎薄切片再生类原球茎效率高、速度快［２４］，这
对于秋水仙素有效渗入类原球茎组织或正在分裂增殖的组织细胞起着重要作用，也是能够获得较高诱变率的原
因之一。有关文心兰多倍体在田间表现及其他生物学特征尚有待于进一步研究。
３．２ 结论
利用秋水仙素在文心兰类原球茎薄切片离体高效再生类原球茎过程中诱导多倍体苗获得成功。离体薄切片
出现点状突起时滴加０．２％～０．４％秋水仙素处理１０～２０ｄ为宜，最高诱导率可达２６．７％。多倍体苗在形态特
征、叶片下表皮气孔结构、与对照二倍体苗存在一定的差异，叶片下表皮细胞核大，根尖细胞染色体数目加倍。秋
水仙素对离体类原球茎薄切片再生类原球茎的发生发育及其成苗都会产生影响，表现出对植物组织、细胞的伤害
或毒性作用，随秋水仙素浓度增大及处理时间延长伤害或毒性作用加大。
参考文献：
［１］ 陈璋，蔡幼华．洋兰［Ｍ］．福州：福建科学技术出版社，２０００：４７５１．
［２］ ＫｈａｗＣＨ，ＯｎｇＨＴ，ＮａｉｒＨ．Ｈｏｒｍｏｎｅｓｉｎｔｈｅｎｕｔｒｉｔｉｏｎｏｆｏｒｃｈｉｄｔｉｓｓｕｅｓｉｎｍｅｒｉｃｌｏｎｉｎｇ［Ｊ］．ＭａｌａｙＯｒｃｈｉｄＲｅｖｉｅｗ，１９７８，
１３：６０６５．
［３］ ＬｉｍＨｏＣＬ．ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｆｉｎｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｏｆｏｒｃｈｉｄｈｙｂｒｉｄｓａｔｔｈｅＳｉｎｇａｐｏｒｅＢｏｔａｎｉｃａｌＧａｒｄｅｎｓ［Ｊ］．Ｇａｒｄｅｎｓ
Ｂｕｌｅｔｉｎ，１９８７，３４：１４８１６０．
［４］ ＳａｇａｗａＹ，ＫｕｎｉｓａｋｉＪＴ．Ｃｌｏｎａｌｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎｏｆｏｒｃｈｉｄｓｂｙｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ［Ａ］．ＦｕｒｕｓａｗａＷ．Ｐｒｏｃ５ｔｈＰｌａｎｔＴｉｓｓｕｅＣｅｌＣｕｌｔ［Ｃ］．
Ｔｏｋｙｏ：ＳｃｉｅｎｃｅＰｕｂｌｉｓｈｅｒ，１９８２：６８３６８４．
８８１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．１
［５］ ＫｅｒｂａｕｙＧＢ．Ｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆ犗狀犮犻犱犻狌犿ｖａｒｉｃｏｓｕｍ（ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）ｂｙｍｅａｎｓｏｆｒｏｏｔｔｉｐｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌＲｅｐｏｒｔ，
１９８４，３：２７２９．
［６］ ＣｈｅｎＪＴ，ＣｈａｎｇＣ，ＣｈａｎｇＷＣ．Ｄｉｒｅｃｔｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｏｎｌｅａｆｅｘｐｌａｎｔｓｏｆ犗狀犮犻犱犻狌犿ｇｏｗｅｒｒａｍｓｅｙａｎｄｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ
ｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌＲｅｐｏｒｔｓ，１９９９，１９：１４３１４９．
［７］ 彭晓明，曾宋君，张京丽，等．文心兰的茎尖及花梗组织培养和快速繁殖［Ｊ］．园艺学报，２０００，２７（２）：１２７１２９．
［８］ 陈兴贻．文心兰的组织培养［Ｊ］．植物生理通讯，１９８９，２：４９．
［９］ 崔广荣，刘云兵，张俊长，等．文心兰的组织培养［Ｊ］．园艺学报，２００４，３１（２）：２５３２５５．
［１０］ 崔广荣，刘士勋，刘敏，等．文心兰茎尖组织培养的研究［Ｊ］．种子，２００４，２３（１２）：１６１９．
［１１］ 崔广荣，刘士勋，何玉华，等．文心兰试管苗丛生芽高效增殖体系的建立［Ｊ］．西北植物学报，２００５，２５（３）：５６２５６７．
［１２］ 何松林，十鸟三和子，孔德政，等．基本培养基及凝固剂对文心兰试管苗生长发育的影响［Ｊ］．北京林业大学学报，２００１，
２３（１）：２９３１．
［１３］ 何松林，孔德政，杨秋生，等．碳源和有机添加物对文心兰原球茎增殖的影响［Ｊ］．河南农业大学学报，２００３，３７（２）：１５４
１５７．
［１４］ 崔广荣，张子学，张从宇，等．文心兰原球茎液体增殖培养研究［Ｊ］．激光生物学报，２００７，１６（３）：３３８３４３．
［１５］ 张志胜，谢利，萧爱兴，等．秋水仙素处理兰花原球茎对其生长和诱变效应的影响［Ｊ］．核农学报，２００５，１９（１）：１９２３．
［１６］ 陈超，王桂兰，乔永旭，等．蝴蝶兰类圆球茎的化学诱变试验［Ｊ］．核农学报，２００６，２０（２）：９９１０２．
［１７］ 刘进平，郑成木．诱变结合植物组织培养在植物育种中的应用［Ｊ］．上海农业学报，２００４，２０（１）：１９２１．
［１８］ ＳｔｅｆａｎｏＰ．Ｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｉｎｉｍｐｒｏｖｉｎｇｆｒｕｉｔｓ［Ｊ］．ＰａｌｎｔＣｅｌ，ＴｉｓｓｕｅａｎｄＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ，２００１，６４：
１８５２１０．
［１９］ ＭａｎｉｓｈａＭ，ＳｈａｒａｍａＤＲ．Ｉｎｖｉｔｒｏｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｃｅｌｓｅｌｅｃｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｂｌａｃｋｒｏｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｃａｕｌｉｆｌｏｗｅｒ［Ｊ］．
ＪｏｕｒｎａｌｏｈＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００２，７７（３）：２６８２７２．
［２０］ ＣｈｅｎＪＴ，ＣｈａｎｇＷＣ．Ｄｉｒｅｃｔｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｏｍｌｅａｆｅｘｐｌａｎｔｓｏｆ犘犺犪犾犪犲狀狅狆狊犻狊犪犿犪犫犻犾犻狊［Ｊ］．
ＢｉｏｌｏｇｉａＰｌａｎｔａｒｕｍ，２００６，（６）：１６９１７３．
［２１］ 崔广荣，侯喜林，张子学，等．蝴蝶兰叶片离体培养胚状体的发生及组织学观察［Ｊ］．园艺学报，２００７，３４（２）：４３１４３６．
［２２］ ＫｕｏＨＬ，ＣｈｅｎＪＴ，ＣｈａｎｇＷＣ．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈｄｉｒｅｃｔｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｆｒｏｍｌｅａｆｅｘｐｌａｎｔｓｏｆ
Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ‘ｌｉｔｔｌｅｓｔａｅｖｅ’［Ｊ］．ＩｎＶｉｔｒｏＣｅｌｕｌａｒａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＢｉｏｌｏｇｙＰｌａｎｔ，２００５，４１（４）：４５３４５６．
［２３］ 秦凡，周吉源．不同生长调节剂对蝴蝶兰快速繁殖的影响［Ｊ］．武汉植物学研究，２００３，２１（５）：４５２４５６．
［２４］ 崔广荣，张子学，张从宇，等．文心兰、蝴蝶兰类原球茎薄切片高频诱导ＰＬＢｓ［Ｊ］．安徽科技学院学报，２００９，２３（１）：
６４７０．
［２５］ ＦｅｌｉｘＬＰ，ＧｕｅｒｒａＭ．Ｂａｓｉｃｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｎｕｍｂｅｒｓｏｆｔｅｒｒｅｓｔｒｉａｌｏｒｃｈｉｄｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｙｓｔｅｍａｔｉｃｓａｎｄＥｖｏｌｕｔｉｏｎ，２００５，２５４（３）：
１３１１４８．
［２６］ 周朴华，何立珍，刘选明．组织培养中用秋水仙素诱发黄花菜同源四倍体的研究［Ｊ］．中国农业科学，１９９５，２８（１）：４９５５．
［２７］ 王小华，熊丽，曲云慧，等．中国桔梗多倍体诱导与鉴定［Ｊ］．云南植物研究，２００６，２８（６）：５９３５９８．
［２８］ 张志胜，黎扬辉，姜蕾，等．红掌四倍体的离体诱导及其鉴定［Ｊ］．园艺学报，２００７，３４（３）：７２９７３４．
［２９］ ＫｉｍＭＳ，ＷｏｎＪＹ，ＳｏｎｇＣＨ，犲狋犪犾．ＰｏｌｙｐｌｏｉｄｙｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆＣｙｍｂｉｄｉｕｍｋａｎｒａｎｂｙｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｓ犻狀狏犻狋狉狅［Ｊ］．
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅＳｃｉｅｎｃｅ，１９９７，３９（１）：７３７６．
［３０］ ＫａｄｏｔａＭ，ＮｉｍｉＹ．ＩｎｖｉｔｒｏｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｅｔｒａｐｏｉｄｐｌａｎｔｓｆｒｏｍａｄｉｐｌｏｉｄＪａｐａｎｅｓｅｐｅａｒｃｕｌｔｉｖａｒ（犘狔狉狌狊狆狔狉犻犳狅犾犻犪Ｎ．ｃｖ．Ｈｏ
ｓｕｉ）［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌＲｅｐｏｒｔｓ，２００２，２１（３）：２８２２８６．
［３１］ 张振超，张蜀宁，张伟，等．四倍体不结球白菜的诱导及染色体倍性鉴定［Ｊ］．西北植物学报，２００７，２７（１）：２８３２．
［３２］ 马文芳，黄惠英，王清．外源激素对甘草愈伤组织诱导及染色体加倍的影响［Ｊ］．草业学报，２００８，１７（３）：１４２１４５．
［３３］ 王婷婷，徐国荣，张举仁，等．细胞工程技术选育的草地早熟禾新种质的耐热性分析［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（２）：６０６５．
［３４］ 朱晓花，孙吉雄，粱慧敏，等．低温预处理与植物生长调节剂对结缕草愈伤组织诱导的影响［Ｊ］．草业科学，２００９，２６（４）：
１２１１２６．
［３５］ 夏英武．作物诱变育种［Ｍ］．北京：中国农业出版社，１９９７：２４３０．
［３６］ 董颖苹，连勇，何庆才，等．植物化学诱变技术在育种中的运用及其进展［Ｊ］．种子，２００５，２４（７）：５４５８．
９８１第１９卷第１期 草业学报２０１０年
［３７］ 李红，李波，赵洪波，等．诱变处理苜蓿愈伤组织抗碱性的研究［Ｊ］．草业科学，２００９，２６（７）：３２３５．
［３８］ 刘文革，阎志红．植物离体组织染色体加倍诱导同源四倍体［Ｊ］．植物学通报，２００５，２２（增刊）：２９３６．
［３９］ 谷晓峰，罗正荣．秋水仙素处理‘罗田甜柿’获得１２倍体再生植株［Ｊ］．园艺学报，２００３，３０（３）：３２５３２７．
犘狅犾狔狆犾狅犻犱犻狀犱狌犮狋犻狅狀犪狀犱犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犗狀犮犻犱犻狌犿
ＣＵＩＧｕａｎｇｒｏｎｇ，ＺＨＡＮＧＺｉｘｕｅ，ＺＨＡＮＧＣｏｎｇｙｕ，ＨＵＮｅｎｇｂｉｎｇ，ＳＵＩＹｉｈｕ，ＬＩＪｉｅｑｉｎ
（ＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅＳｃｈｏｏｌｏｆＡｎｈｕｉＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｅｎｇｙａｎｇ２３３１００，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｅｔｈｉｎｃｅｌｌａｙｅｒｓ（ＴＣＬｓ）ｏｆｐｒｏｔｏｃｏｒｍｌｉｋｅｂｏｄｉｅｓ（ＰＬＢｓ）ｏｆ犗狀犮犻犱犻狌犿ｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｅｘｐｌａｎｔｓｆｏｒ
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ｍａｔｉｏｎａｎｄｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｏｍＴＣＬｓｏｆ犗狀犮犻犱犻狌犿犻狀狏犻狋狉狅．ＴｈｅｒａｔｅａｔｗｈｉｃｈＴＣＬｓｆｏｒｍｅｄＰＬＢｓａｎｄｔｈｅ
ｎｕｍｂｅｒｓｏｆｓｈｏｏｔｓｗｅｒｅｒｅｄｕｃｅｄ，ｂｕｔｔｈｅｒａｔｅｏｆｐｏｌｙｐｌｏｉｄｐｌａｎｔｌｅｔｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗａｓｈｉｇｈｅｒｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｗｉｔｈ
ｈｉｇｈｅｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｓｆｏｒｌｏｎｇｅｒｔｉｍｅｓ．Ｐｏｌｙｐｌｏｉｄｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｓｈｏｒｔａｎｄｓｔｏｕｔｗｉｔｈｔｈｉｃｋｌｅａｖｅｓ．
Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｓｏｍｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｌｏｗｅｒｅｐｉｄｅｒｍａｌｔｉｓｓｕｅａｎｄｃｅｌａｎｄｓｔｏｍａｔａｏｆｄｉｐｌｏｉｄａｎｄ
ｐｏｌｙｐｌｏｉｄｙｐｌａｎｔｌｅｔｓ．Ｔｈｅｎｕｃｌｅｉｏｆｐｏｌｙｐｌｏｉｄｃｅｌｓｗｅｒｅｂｉｇｇｅｒａｎｄｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓｗａｓｄｏｕｂｌｅｄ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犗狀犮犻犱犻狌犿；犻狀狏犻狋狉狅ｃｕｌｔｕｒｅ；ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｓ；ｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｄｕｃｔｉｏｎ；ｐｏｌｙｐｌｏｉｄ
０９１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．１