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Effects of Several Phenolic Acids on Germ ination ofPhy llostachys heterocycla Seeds

几种酚酸对毛竹种子发芽的影响



全 文 :林业科学研究  2007, 20( 6): 835~ 840
Forest R esearch
  文章编号: 10011498( 2007) 06083506
几种酚酸对毛竹种子发芽的影响
郑仁红 1, 顾小平 1* , 岳晋军 1, 苏文会 2
( 1.中国林业科学研究院亚热带林业研究所,浙江富阳 311400; 2. 国际竹藤网络中心,北京  100102 )
摘要: 针对连续多年覆盖后雷竹林产生的衰退减产问题, 从竹林覆盖物料对竹子的化感作用角度对衰退的原因进行
了分析。利用外施不同浓度和种类的酚酸以及稻草、竹叶水浸液对毛竹种子进行发芽实验,以探求酚酸等化感物质
对竹子生长的影响。试验结果表明,随处理液浓度的上升, 几种酚酸和稻草、竹叶水浸液对毛竹种子的抑制作用增
强。稻草、竹叶 2种覆盖物 1倍浸提母液处理后长出的种子胚根迅速失活死亡, 5、10倍 2种浸提母液对发芽势、胚
根长度、胚根质量有促进作用。 100 mg L- 1酚酸或混合酚酸液使胚根长度与对照相比减少 24. 49% ~ 48. 99% , 胚
根质量减少 9. 17% ~ 38. 08% ; 500 mg L- 1酚酸或混合酚酸液可使胚根长度减少 73. 48% ~ 88. 63% , 胚根质量减少
76. 00% ~ 90. 83%。据此认为, 覆盖物产生并在土壤中累积的大量酚酸可抑制竹林根系生长,并导致雷竹林经连续
多年覆盖后衰退和减产。
关键词: 酚酸;化感作用; 雷竹;衰退; 种子发芽
中图分类号: S795. 7 文献标识码: A
收稿日期: 20060330
基金项目: 国家自然科学基金项目 覆盖栽培对笋用竹林衰退的生化他感效应 ! ( 30571480) ,并得到浙江省森林培育重中之重学科开
放基金资助
作者简介: 郑仁红 ( 1979∀ ) ,男,四川宜宾人,生态学硕士, Em ai:l bam boo_yb@ 163. com
* 通讯作者
Effects of Several Phenolic Acids on Germ ination of
Phy llostachys heterocycla Seeds
ZHENG Renhong 1, GU X iaop ing 1, YUE Jinjun1, SU W enhui2
( 1. Research Ins titu te of Subtrop ical Forestry, CAF, Fuyang 311400, Zhej iang, Ch ina;
2. In ternat ional C enter for Bamboo and Rattan, B eijing 100102, Ch ina)
Abstract: A fter cont inual covering for several years, the y ield and quality ofPhyllostachy s p raecox w ill decline seri
ously. A imedat at th is problem, w e detected the effects from a llelochem ica ls of the materia ls w hich are used for
covering. The so lution of several pheno lic ac ids, includ ing phydroxy benzo ic acid, van illic acid, pcoumaric acid,
feru lic acid and the irm ix ture, and d istilled so lu tion o f different concentrat ions from rice straw and bamboo leaves
w ere used on germ ination o fPhyllo stachys heterocy cla seeds. M other d istilled so lution made radical dead in a short
time, but bo th 5 and 10 t imes of mo ther solution promoted length and w e igh t of radica;l 100 mg L- 1 is the low est
concentration o f pheno lic acids so lution and the irm ix ture, the leng th o f rad icalw hich treated by them was 24. 49%
~ 48. 99% less than the contro,l 9. 17% ~ 38. 08% was the w eigh;t compare w ith 100 mg L- 1, the length and
the w eight o f radicalwh ich treated by 500mg L- 1 were 73. 48% ~ 88. 63% and 76. 00% ~ 90. 83% less than the
contro l, respectively.
Key words: pheno lic acids; a lle lopathy; Phy llostachy s praecox; decline; generation
林  业  科  学  研  究 第 20卷
近年来,农户反馈与科学调查都证实, 随着林地
实施覆盖栽培的年限增加, 许多雷竹 ( Phy llostachy s
p raecox C. D. Chu et C. S. Chao)林都会出现衰退,
表现为竹笋产量持续、明显下降,严重的将导致全林
无生产能力,开花率和感病率上升等 [ 1]。这一现象
已成为笋用竹林可持续经营的最大障碍, 也是竹区
农户提出最多的、需迫切解决的关键技术难题。许
多学者为了探索其退化机理, 对连续多年覆盖后的
竹林结构及生理生化特征作了大量的调查研究, 涉
及到叶面积指数、鞭根结构、土壤养分、酶活性、微生
物数量等方面 [ 2~ 6] , 但针对覆盖物分泌物 ∀ 竹林土
壤 ∀ 竹子生长之间关系的研究未见报道。
稻草是农户用来覆盖雷竹林地的主要物料。研
究表明,稻草等有机物料在淋洗和腐解过程中会释
放出大量的酚酸类次生物质, 其中含量最高的是对
羟基苯甲酸 ( hydroxybenzo ic)、香草酸 ( van illic)、香
豆酸 ( coumaric )和阿魏酸 ( ferulic) , 占干质量的
0. 002% ~ 0. 037%; 稻草鲜样中的醚可溶性总酚酸
含量高达 0. 34%,腐解后醚可溶性总酚酸占干质量
的 0. 28% [ 7, 8 ]。水稻秸秆还田腐解过程中产生的酚
酸类物质导致台湾双季稻减产约 20% [ 9 ] ,麻生末雄
等证实了稻草腐解过程中产生的酚酸类物质抑制了
水稻 ( Oryza sativa L. )根的正常生长 [ 10] , 麦秸中的
阿魏酸达到一定浓度时会抑制玉米 ( Zea may s L. )
和大豆 ( G iy cinemax ( L. ) M errill)根系的生长 [ 11]。
作者在前期分析了不同覆盖年限雷竹林土壤总
酚酸含量,与未覆盖竹林相比,覆盖 2、4、7 a的竹林
土壤总酚酸含量分别增加了 18. 25%、48. 95% 和
79. 28%。结合这些研究结果,有理由推测酚酸会对
雷竹林的鞭根产生一定程度的抑制作用,但是,外加
酚酸及覆盖物水浸液对成竹鞭根进行试验存在诸多
难以控制的影响, 因而在实验室内检测酚酸对种子
发芽的影响是一条可行的途经, 也可为下一步进行
田间模拟试验, 深入研究化感物质对竹子生长的影
响奠定基础。本文利用竹子种子发芽试验说明酚酸
是否对竹子种子萌发产生化感效应, 以期为解决连
年覆盖后造成笋用竹林衰退问题寻找一条新的思
路,同时也丰富化感作用的研究内容。
1 材料与方法
1. 1 材料来源
由于在生产上很难采集到雷竹等散生笋用竹种
子, 本试验采用同为散生竹刚竹属的毛竹 ( Phy l
lostachy s heterocy cla var. pubescens ( M aze.l ) Ohw .i )
种子为实验材料, 种子取自广西壮族自治区。稻草、
竹叶取自浙江省富阳市春建乡。
1. 2 处理液配制
1. 2. 1 覆盖物水浸液 分别称取风干、粉碎后过 2
mm筛的稻草、毛竹叶等量, 按照 1#5的比例与蒸馏
水混合,低于 30 ∃ 条件下, 震荡提取 24 h后调 pH
至 7. 0,过滤, 在低于 40 ∃ 条件下减压浓缩至原体积
的 1 /5作为母液,灭菌后置于冰箱中冷藏备用。
1. 2. 2 酚酸及酚酸混合溶液  称取对羟基苯甲
酸、香草酸、香豆酸、阿魏酸 4种酚酸 ( F luka公司生
产 )各 0. 10 g, 用 2 mL无水乙醇溶解后定溶至 100
mL ,得 1 000mg L- 1单样母液;再将母液分别稀释
至质量浓度为 500、300、100 mg L- 1的单样和 4种
酚酸含量相同的混合样 100 mL, 置于冰箱中冷藏
备用。
1. 3 处理方法
恒温箱用 1%苯扎溴胺溶液擦洗, 静置 2~ 3 d;
培养皿 (直径 9 cm )及定性滤纸于 105 ∃ 高温灭菌 2
h后备用; 剥好的毛竹种子先进行水选,去除漂浮空
粒,用 3%升汞溶液消毒 20 m in, 用蒸馏水冲洗后置
于滤纸上。
1. 3. 1 覆盖物水浸液处理 在培养皿中放入 2张
定性滤纸, 分别转移稻草、竹叶水浸液 5. 0、2. 5、
1. 0、0. 5、0. 0 mL入培养皿, 用蒸馏水补充至 5 mL,
即得 1、2、5、10倍稀释液和对照; 5次重复。每个培
养皿均匀放置消毒后的种子 50粒,置于恒温培养箱
中,设定发芽条件为温度 ( 25 & 2 ) ∃ , 相对湿度
60% ,每 2 d添加蒸馏水 1mL。
1. 3. 2 酚酸溶液与其混合液处理 分别取质量浓
度为 500、300、100mg L - 1的酚酸及混合液各 5mL
加入培养皿中,另取蒸馏水 5 mL作对照; 5次重复。
每个培养皿均匀放置消毒后的种子 50粒,置于恒温
培养箱中,设定发芽条件为温度 ( 25 & 2) ∃ , 相对湿
度 60% ,每 2 d添加蒸馏水 1 mL。
1. 4 统计分析
本试验根据对照的发芽情况, 在第 4天时发芽
数最多,第 10天后几乎再无发芽种子, 故以处理当
日为第 1天, 从第 3天起开始记录发芽率,取前 4 d
发芽数计算发芽势, 在第 10天结束发芽率统计, 测
定胚根长度、质量。将所得到的数据进行统计分析。
发芽势 =发芽初期 ( 4 d)发芽的种子粒数 /供试
种子粒数 ∋ 100%
836
第 6期 郑仁红等: 几种酚酸对毛竹种子发芽的影响
发芽率 =发芽终期 ( 10 d)发芽的种子粒数 /供
试种子粒数 ∋ 100%
2 结果与分析
2. 1 稻草、竹叶水浸液对毛竹种子发芽的影响
2. 1. 1 稻草和竹叶水浸液对发芽率和发芽势的影
响 从表 1中可以看出, 稻草水浸液对毛竹种子发
芽率的影响达到极显著水平 (F= 8. 626* * ) ,各浓度
水浸液处理后发芽率与对照相比降低了 15. 66% ~
36. 14%。竹叶水浸液对毛竹种子发芽率的影响相对
较小,整体上未达到统计学的显著水平, 但各浓度水
浸液处理后发芽率与对照相比降低了 7. 23% ~
21. 69%。以上数据表明,稻草、竹叶浸提液对种子发
芽率起抑制效应, 并且随着浸提液浓度的加大, 抑制
作用增强。
表 1 稻草、竹叶水浸液对毛竹种子发芽的影响
处理液 稀释倍数 发芽率 /% 发芽势 /% 胚根长度 / cm 胚根质量 /m g
稻草
0 83 a A 45 ab AB 2. 55 b B 8. 73 ab A
10 70 ab AB 61 a A 4. 16 a A 9. 23 a A
5 57 b B 48 a AB 3. 80 ab AB 7. 53 ab A
2 53 b B 56 ab AB 2. 68 b B 6. 67 b A
1 59 b AB 34 b B 0. 001 c C 0. 001 c B
F值  8. 626* *   6. 083* *  27. 947* *   25. 219* * 
竹叶
0 83   45 ab AB   2. 55 ab AB 8. 73 a A 
10 77   59 a AB   3. 72 a A  8. 43 a A 
5 79   64 a A    3. 56 a A  6. 97 a A 
2 75   49 abAB   1. 36 b BC 2. 83 b B 
1 65   29 b B   0. 001c C 0. 001 c B 
F值 3. 123 6. 276* * 17. 676* *  32. 573* *  
  注:表中 F值为方差检验结果, * * 表示差异极显著, * 表示差异显著。经多重比较检验,同一列中不同字母表示差异显著,小写字母表示
P < 0. 05水平,大写字母表示 P < 0. 01水平,下同。
  稻草水浸液对种子发芽势的影响达到了极显著
水平 (F < 6. 083* * ), 10、5倍母液使种子发芽势上
升了 35. 56%和 6. 67%, 但 1倍母液却使发芽势降
低了 24. 44%。竹叶水浸液对发芽势的影响与稻草
水浸液效果相似: 10、5倍水浸液使种子发芽势提高
了 31. 11%和 42. 22%, 1倍母液处理使发芽势下降
了 35. 56%。
由以上分析可知,随水浸液浓度的增大,稻草、竹
叶水浸液均对毛竹种子的发芽率表现出渐强的抑制
作用;其对发芽势的影响则体现出低浓度时为促进作
用,高于一定浓度后变为抑制作用的规律。这与复合
农林系统中水杉 (M etasepuo ia G lyptostrobo ides Hu et
Cheng)林下土壤水浸液对小麦 (Triticum aestivum L. )
种子萌发的影响 [ 12]、农业生产上油蒿 (Artem isia ordo
sica K rasch. )水浸液对萝卜 (Raphanus Sativus L. )和
小麦等种子发芽率的影响 [ 13]、蟛蜞菊 (Wedelia chinen
sis(Osb. ) M err. )水浸液对花生 (Arachis hypogaea L. )
和水稻种子萌发的影响 [ 14]结果相似。
2. 1. 2 稻草、竹叶水浸液对毛竹幼苗胚根长度、质
量的影响 稻草、竹叶水浸液对胚根长度、质量的影
响均达到极显著水平 (见表 1的 F 值 )。经各浓度
水浸液处理的种子,胚根生长都表现出低浓度促进
或轻度抑制, 高浓度强烈抑制的规律,并且经稻草、
竹叶 1倍水浸液母液处理的种子, 在萌发之后随即
死亡。
10、5、2倍 3个较低浓度稻草水浸液处理随着
浓度升高,促进作用逐渐减弱,胚根长度与对照相比
分别增加了 63. 14%、49. 02%、5. 10%, 用 1倍母液
处理的胚根长度约为 0。竹叶水浸液的影响效果与
稻草水浸液的相似, 10、5倍母液处理促进了根系的
生长,胚根长度较对照增加了 45. 88%和 39. 61% ,
但 2倍母液处理使胚根长度减少了 46. 67%, 1倍母
液处理的胚根长度约为 0。
稻草水浸液对胚根质量的影响也表现出先促进
后抑制的规律: 10倍母液使胚根质量比对照增加了
5. 73%, 5、2倍母液则减少了 13. 75%和 23. 60%; 竹
叶水浸液对胚根质量的影响更为明显, 从 10倍母液
开始便有轻微的抑制作用, 5倍母液处理后胚根质
量比对照下降了 20. 16%, 2倍母液处理后下降了
67. 58%, 并与对照有极显著差异 ( p< 0. 01) ; 1倍稻
草、竹叶水浸液处理后胚根质量均约为 0。
雷日平等 [ 15]研究表明 1#10的华山松、锐齿栎
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林  业  科  学  研  究 第 20卷
林下土壤及凋落物浸提液对油松种子胚根生长有显
著促进作用,本实验中稀释倍数较高的覆盖物水浸
液也促进了毛竹种子的胚根生长。经稻草、竹叶 1
倍水浸液母液处理后,正常发芽的毛竹种子由于强
烈的抑制作用, 幼嫩的胚根迅速失去活力并停止生
长,胚根长度、质量均约为 0。
2. 2 酚酸对毛竹种子发芽的影响
2. 2. 1 酚酸对毛竹种子发芽率和发芽势的影响
2. 2. 1. 1 对发芽率的影响 如表 2所示, 各种酚
酸的不同质量浓度处理液对种子发芽率的影响均表
现为抑制效应。阿魏酸对种子发芽率的影响达到了
统计意义上的极显著水平 (F = 8. 654* * ) ;香豆酸对
种子发芽率的影响达到显著水平 ( F = 3. 554* ) ;香
兰素和对羟基苯甲酸对种子发芽率的影响虽没达到
显著水平,但 4种酚酸均表现出随着质量浓度增大,
抑制作用增强的趋势。质量浓度为 500 mg L- 1的
香豆酸及质量浓度为 300、500 mg L- 1的阿魏酸处
理的种子发芽率与对照的差异均极显著。曹光球
等 [ 16 ]研究了阿魏酸对杉木种子发芽的抑制效应,本
文结果与之相似。
表 2 酚酸对毛竹种子发芽率的影响
质量浓度 / (m g L- 1 ) 种子发芽率 /%香豆酸 香兰素 阿魏酸 对羟基苯甲酸 混合酚酸
0 86 a 86 86 A 86 86 a
100 74 ab 69 72AB 77 69 b
300 72 ab 75 60 B 69 75 ab
500 65 b 78 64 B 79 82 a
F值  3. 554*  3. 006   8. 654* *  3. 172   4. 415*
2. 2. 1. 2 对发芽势的影响 从表 3可以看出, 不
同质量浓度的香豆酸、香兰素、阿魏酸、对羟基苯甲
酸以及混合酚酸处理液对种子发芽势的影响与稻
草、竹叶水浸液处理结果相似,均具有低质量浓度促
进,高质量浓度抑制的规律。阿魏酸和混合酚酸对
种子发芽势的影响达到显著水平 (见 F 值 ), 香豆
酸、香兰素和对羟基苯甲酸对种子发芽势的影响达
到极显著水平 (见 F值 )。经 100 mg L- 1单一酚酸
或混合酚酸液处理的种子发芽势与对照相比增加了
37. 21%以上, 300、500 mg L- 1的任何一种处理液
处理后发芽势均有所减弱, 但仍然高于对照的发芽
势。这说明低质量浓度的酚酸有可能消除毛竹种子
内源抑制物质对萌发的作用, 与芦荟 (A loe vera L.
var. ch inesis (H aw. ) Berger)浸泡液浸种可促进棉花
(Gossyp ium herbacem L. )、小麦、大麦 (H ordeum vul
gare L. )等作物种子的萌发的结果相似 [ 17]。
表 3 酚酸对毛竹种子发芽势的影响
质量浓度 / (m g L- 1 ) 种子发芽势 /%香豆酸 香兰素 阿魏酸 对羟基苯甲酸 混合酚酸
0 43 b 43 b 43 b 43 c B 43 b
100 59 ab 62 a 61 a 69 a A 63 a
300 63 a 61 a 57 ab 59 ab AB 59 ab
500 42 b 46 b 45 b 53 b c AB 52 ab
F值   5. 724    7. 167   5. 197  8. 759    3. 565
2. 2. 2 酚酸对毛竹幼苗胚根长度、质量的影响
2. 2. 2. 1 对胚根长度的影响 由表 4所示, 香豆
酸、香兰素、阿魏酸、对羟基苯甲酸和 4种酚酸的混
合液不同质量浓度处理对种子胚根长度的影响均表
现为抑制效应,并且随着质量浓度的增大, 抑制作用
增强。各种酚酸和混合酚酸对种子胚根长度的影响
均达到极显著水平 (见 F值 )。 100 mg L- 1的 5种
处理液使胚根长度与对照相比减少了 24. 49% ~
48. 99%, 300 mg L- 1的任一处理液可使胚根长度
减少 59. 85~ 75. 76%, 500mg L- 1的任一处理液可
使胚根长度减少 73. 48% ~ 88. 63%。 100 mg L- 1
的香兰素、混合酚酸液以及 300、500 mg L - 1的任
何一种处理液处理结果, 与对照相比有极显著差异
(p < 0. 01)。
2. 2. 2. 2 对胚根质量的影响 根据表 5的结果,
香豆酸、香兰素、阿魏酸、对羟基苯甲酸和 4种酚酸
的混合液不同质量浓度处理对种子胚根质量的影响
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第 6期 郑仁红等: 几种酚酸对毛竹种子发芽的影响
均表现为抑制效应,并且随着质量浓度的增大,抑制
作用增强。各种酚酸和混合酚酸对种子胚根质量的
影响均达到极显著水平 (见 F值 )。 100 mg L- 1的
5种处理液处理使胚根质量减少了 9. 17% ~
38. 08% , 300 mg L- 1的任一酚酸或混合酚酸液使
胚根质量减少 45. 83 ~ 60. 25% , 500 mg L - 1的任
一酚酸或混合酚酸液可使胚根质量减少 76. 00% ~
90. 83%。 100 mg L- 1的香兰素及 300 mg L - 1的
阿魏酸、对羟基苯甲酸、混合酚酸处理结果与对照的
差异均极显著 ( p < 0. 01) ; 香豆酸在 500 mg L- 1
时,与对照相比差异也达到了极显著水平 ( p <
001)。
表 4 酚酸对毛竹幼苗胚根长度的影响
质量浓度 / (m g L- 1 ) 胚根长度 / cm香豆酸 香兰素 阿魏酸 对羟基苯甲酸 混合酚酸
0 3. 96 A 3. 96A 3. 96 A 3. 96 A 3. 96 A
100 2. 49 AB 2. 02 B 2. 99 AB 2. 82 AB 2. 18 B
300 1. 49 AB 1. 59 B 1. 00 B 1. 19 BC 0. 96 C
500 0. 53 B 1. 05 B 0. 78 B 0. 45 C 0. 53 C
F值 8. 124  16. 151  14. 664  17. 245  40. 587 
表 5 酚酸对毛竹幼苗胚根质量的影响
质量浓度 / (m g L- 1 ) 胚根质量 / g香豆酸 香兰素 阿魏酸 对羟基苯甲酸 混合酚酸
0 12. 00 a A 12. 00A 12. 00 A 12. 00A 12. 00 a A
100 8. 50 bA 7. 43 B 10. 30 AB 10. 90AB 8. 00 bAB
300 6. 50 bA 5. 13 BC 5. 00 BC 4. 77 BC 5. 07 b BC
500 2. 14 c B 2. 88 C 1. 61 C 1. 90 C 1. 10 c C
F值 31. 934  30. 591  20. 768  23. 759  41. 335 
3 结论与讨论
外施稻草、竹叶水浸液对毛竹种子发芽的试验
结果表明,水浸液对胚根生长及发芽率的影响均表
现为随浓度升高,抑制作用加强;对发芽势的影响表
现为促进作用, 且低浓度促进作用较强。 1倍母液
处理后影响最严重,可致种子萌发后迅速死亡,胚根
完全不能生长,若在其刚萌发后换为蒸馏水培养, 则
可正常生长,说明雷竹林覆盖物 ∀ ∀ ∀ 稻草、竹叶水浸
液中含有抑制性化感物质。
香豆酸、香兰素、阿魏酸、对羟基苯甲酸等是稻
草等覆盖物料中的主要化感物质 [ 7]。这 4种酚酸及
其混合液对毛竹种子胚根长度、质量的影响均表现
为显著的抑制效应, 且质量浓度越大抑制作用越显
著;对种子发芽势的影响表现为促进效应, 质量浓度
越低其促进效应越明显;香兰素和混合酚酸液对发
芽率的影响表现为随处理液质量浓度增加, 发芽率
升高并接近对照处理;其余各种酚酸处理后发芽率
受到抑制,质量浓度越高发芽率越低。
在实际生产中, 农户为追求生产效益而往往对
竹林连续多年覆盖栽培。覆盖有机物中的木质素经
微生物分解形成酚酸,一定量的酚酸在适宜的酸碱
度、氧气浓度条件下由多酚氧化酶作用和氨基酸或
多肽缩合成腐殖质 [ 18]。从植物营养角度上看, 化肥
使用量的增加和覆盖物翻埋腐解释放的矿质营养足
以满足竹林的营养需求, 理论上完全可以保证连续
高产;但是连年的翻埋也为竹林土壤输入了大量的
酚酸类物质, 酚酸等化感物质可通过抑制细胞的分
裂和伸长,使根细胞膜透性增加,内溶物外溢而导致
根系生长缓慢或死亡。例如, 饱和的香豆素水溶液
可完全阻断洋葱 ( A llium cepa L. )和百合 ( L ilium
spp. )根细胞的分裂, 也可破坏纺锤体, 终止中期累
积,阻碍有丝分裂,使黄瓜 (Cucum is sativus L. )根细
胞的伸长受到抑制,横向扩展增加 [ 19] ; 酚酸作用于
大豆和燕麦 (Avena spp. )时,造成膜脂过氧化, 造成
了原生质体膜的破坏, K +外溢增加, 根系吸收功能
遭破坏 [ 20, 21]。本试验结果表明,在酚酸的化感作用
下,毛竹种子萌发及幼苗的根系生长受到严重抑制。
那么,如果竹林土壤中酚酸含量达到一定浓度后, 是
否如同 Shilling D G. 等 [ 11]研究报道的, 竹林根系的
吸收和转运功能遭到破坏而影响竹子的正常生长,
导致笋产量降低和竹林的衰退? 这有待于进行田间
试验进一步验证。
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林  业  科  学  研  究 第 20卷
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