全 文 ：林业科学研究摇 圆园员猿渊专刊冤院园园怨 园员苑云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员猿冤专刊鄄园园园怨鄄园怨
日本落叶松种子萌发过程中 员愿个
皂蚤砸晕粤泽的表达变化
吴摇 涛员袁圆袁 韩素英猿袁 张俊红员袁 李万峰员袁 杨文华员袁 齐力旺员鄢
渊员郾 中国林业科学研究院林业研究所袁 北京摇 员园园园怨员曰 圆郾 国家林业局云南珍稀濒特森林植物保护和繁育重点实验室袁
云南省森林植物培育与开发利用重点实验室袁 云南 昆明摇 远缘园圆园员曰 猿郾 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所袁 北京摇 员园园园怨员冤
收稿日期院 圆园员猿鄄园愿鄄圆源
基金项目院 国家野怨苑猿冶计划项目渊圆园园怨悦月员员怨员园远冤曰国家自然科学基金重点项目渊猿园愿猿园园愿远冤曰国家野愿远猿冶计划重点项目渊圆园员员粤粤员园园圆园猿袁
圆园员猿粤粤员园圆苑园源冤
作者简介院 吴摇 涛渊员怨苑怨要冤袁男袁云南宣威人袁助研袁主要从事林木生物技术方面的研究援 耘鄄皂葬蚤造院赠灶葬枣憎贼岳 员圆远援 糟燥皂袁电话院员猿缘圆怨圆员员苑猿远
鄢通讯作者院 分子遗传学博士袁研究员袁博士生导师袁从事林木遗传改良研究工作援 耘鄄皂葬蚤造院造憎择蚤岳 糟葬枣援 葬糟援 糟灶袁电话院园员园鄄远圆愿愿愿源源缘
摘要院运用 择砸栽鄄孕悦砸技术袁检测日本落叶松种子萌发过程中的 缘 个阶段要要要干种子 渊萌发培养 园 凿冤尧吸胀渊员 凿冤尧萌
动渊缘 凿冤尧胚根外露渊怨 凿冤和子叶展开渊圆愿 凿冤袁皂蚤砸员缘远尧皂蚤砸员缘怨 和 皂蚤砸员远园 等 员愿 个 皂蚤砸晕粤泽在其种胚内的表达模式袁并
对其目标基因进行生物信息学分析袁探讨 皂蚤砸晕粤在针叶林木种子萌发过程中的基因表达模式遥 结果表明院渊员冤从整
个萌发过程分析袁员愿 个 皂蚤砸晕粤泽的表达水平皆以干种子阶段最高袁吸胀和萌动阶段迅速下降曰干种子阶段的表达水
平分别是吸胀尧萌动尧胚根外露和子叶展开阶段的 源援 愿 源猿援 缘尧员苑援 圆 员 园园园援 园尧源缘援 缘 员 园园园援 园尧远圆援 缘 员 愿远圆援 圆 倍遥
渊圆冤从各个阶段分析袁皂蚤砸愿怨源 的表达水平在 缘 个阶段均最高袁皂蚤砸源园愿 均最低曰其余 员远 个 皂蚤砸晕粤泽在 缘 个阶段内的表
达水平各有变化袁综合排序结果从高到低依次为院皂蚤砸怨缘员尧皂蚤砸怨缘园尧皂蚤砸员缘远尧皂蚤砸员缘怨尧皂蚤砸猿怨远尧皂蚤砸猿怨愿尧皂蚤砸猿怨园尧
皂蚤砸员远园尧皂蚤砸怨源苑尧皂蚤砸员远缘尧皂蚤砸猿员怨尧皂蚤砸员远圆尧皂蚤砸员苑员尧皂蚤砸猿怨苑尧皂蚤砸猿怨缘 和 皂蚤砸员苑圆遥 渊猿冤皂蚤砸晕粤目标基因预测结果显示院
目标基因主要是 粤栽孕 辕 阅晕粤结合蛋白尧粤砸云等转录因子尧质膜和核糖体等细胞组分及 酝粤孕等激酶活性蛋白等蛋白编
码基因遥 渊源冤皂蚤砸员远园 对其目标基因 允砸员远园圆猿苑 具有切割作用袁切割位点发生在 皂蚤砸员远园 与目标基因互补结合位点第
员园 与 员员 位碱基之间遥 允砸员远园圆猿苑 在种子吸胀阶段表达水平迅速升高袁在萌动尧胚根外露和成苗阶段有所回落遥
关键词院皂蚤砸晕粤曰日本落叶松曰种子曰萌发曰择砸栽鄄孕悦砸
中图分类号院杂苑怨员援 圆圆猿 文献标识码院粤
员愿 皂蚤砸晕粤泽 蚤灶 蕴葬则蚤曾 噪葬藻皂责枣藻则蚤 阅怎则蚤灶早 杂藻藻凿 郧藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶
宰哉 栽葬燥员袁圆袁 匀粤晕 杂怎鄄赠蚤灶早猿袁 在匀粤晕郧 允怎灶鄄澡燥灶早员袁 蕴陨 宰葬灶鄄枣藻灶早员袁 再粤晕郧 宰藻灶鄄澡怎葬员袁 匝陨 蕴蚤鄄憎葬灶早员
渊员郾 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园园怨员袁 悦澡蚤灶葬曰
圆郾 再怎灶灶葬灶 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 再怎灶灶葬灶 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 枣燥则 云燥则藻泽贼 孕造葬灶贼 悦怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 葬灶凿 哉贼蚤造蚤扎葬贼蚤燥灶袁 运怎灶皂蚤灶早摇 远缘园圆园员袁 再怎灶灶葬灶袁 悦澡蚤灶葬曰
猿郾 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥则藻泽贼 耘糟燥造燥早赠袁 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼 葬灶凿 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园园怨员袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽澡藻 泽藻藻凿 燥枣 蕴葬则蚤曾 噪葬藻皂责枣藻则蚤 渊杂蚤藻遭燥造凿援 驭 在怎糟糟援 冤 郧燥则凿燥灶 憎葬泽 怎泽藻凿 葬泽 皂葬贼藻则蚤葬造 贼燥 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻 贼澡藻 责燥贼藻灶贼蚤葬造
皂燥造藻糟怎造葬则 则藻早怎造葬贼蚤燥灶 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂泽 燥枣 皂蚤砸晕粤 凿怎则蚤灶早 泽藻藻凿 早藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶援 栽澡藻 早藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 责则燥糟藻泽泽 燥枣 蕴援 噪葬藻皂责枣藻则蚤 泽藻藻凿
蚤灶糟造怎凿藻泽 贼澡藻 枣燥造造燥憎蚤灶早院 栽澡藻 蚤皂遭蚤遭蚤贼蚤燥灶 燥枣 凿则赠 泽藻藻凿 憎葬泽 糟燥皂责造藻贼藻凿 葬枣贼藻则 圆源 澡燥怎则泽 燥枣 泽燥糟噪蚤灶早曰 贼澡藻 贼藻泽贼葬 则怎责贼怎则藻 燥糟鄄
糟怎则则藻凿 葬枣贼藻则 缘 凿葬赠泽 葬灶凿 枣燥造造燥憎藻凿 遭赠 则葬凿蚤糟造藻 藻皂藻则早藻灶糟藻 渊增蚤凿藻造蚤糟藻贼袁 藻灶凿燥泽责藻则皂 则怎责贼怎则藻冤 葬枣贼藻则 怨 凿葬赠泽 燥枣 早藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶
糟怎造贼怎则藻曰 贼澡藻 糟燥贼赠造藻凿燥灶泽 藻曾责葬灶凿藻凿 枣怎造造赠 葬枣贼藻则 圆愿 凿葬赠泽援 栽澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 造藻增藻造 燥枣 员愿 皂蚤砸晕粤泽 憎葬泽 则藻造葬贼蚤增藻造赠 择怎葬灶贼蚤枣蚤藻凿 怎鄄
泽蚤灶早 择砸栽鄄孕悦砸 贼藻糟澡灶燥造燥早赠 葬皂燥灶早 枣蚤增藻 噪藻赠 泽藻藻凿 早藻则皂蚤灶葬贼蚤灶早 泽贼葬早藻泽袁 憎澡蚤糟澡 蚤灶糟造怎凿蚤灶早 凿则赠 泽藻藻凿 渊园 凿葬赠 葬枣贼藻则 早藻则皂蚤灶葬鄄
贼蚤灶早冤袁 蚤皂遭蚤遭藻凿 泽藻藻凿 渊员泽贼 凿葬赠 葬枣贼藻则 早藻则皂蚤灶葬贼蚤灶早冤袁 贼藻泽贼葬 则怎责贼怎则藻 渊缘贼澡 凿葬赠冤袁 则葬凿蚤糟造藻 藻皂藻则早藻灶糟藻 渊怨贼澡 凿葬赠冤 葬灶凿 糟燥贼赠鄄
造藻凿燥灶 藻曾贼藻灶泽蚤燥灶 渊圆愿贼澡 凿葬赠冤援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 葬则藻 葬泽 枣燥造造燥憎泽援 渊员冤栽澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 造藻增藻造泽 燥枣 员愿 皂蚤砸晕粤泽 憎藻则藻 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼 葬贼
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
凿则赠 泽藻藻凿 泽贼葬早藻 葬灶凿 贼澡藻灶 憎藻灶贼 凿燥憎灶 则葬责蚤凿造赠 葬贼 蚤皂遭蚤遭藻凿 泽藻藻凿 葬灶凿 贼藻泽贼葬 则怎责贼怎则藻 泽贼葬早藻援 栽澡藻 皂蚤砸晕粤泽 憎藻则藻 澡蚤早澡造赠 藻曾鄄
责则藻泽泽藻凿 蚤灶 凿则赠 泽藻藻凿 泽贼葬早藻 贼澡葬灶 蚤灶 泽怎遭泽藻择怎藻灶贼 泽贼葬早藻泽援 栽澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 造藻增藻造 蚤灶 凿则赠 泽藻藻凿 泽贼葬早藻 憎葬泽 源援 愿 贼燥 源猿援 缘 贼蚤皂藻泽袁
员苑援 圆 贼燥 员 园园园 贼蚤皂藻泽袁 源缘援 缘 贼燥 员 园园园 贼蚤皂藻泽 葬灶凿 远圆援 缘 贼燥 员 愿远圆援 圆 贼蚤皂藻泽 贼澡葬贼 燥枣 贼澡燥泽藻 蚤灶 蚤皂遭蚤遭藻凿 泽藻藻凿袁 贼藻泽贼葬 则怎责贼怎则藻袁
则葬凿蚤糟造藻 藻皂藻则早藻灶糟藻 葬灶凿 藻曾贼藻灶泽蚤燥灶 糟燥贼赠造藻凿燥灶 泽贼葬早藻袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 渊圆冤栽澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 造藻增藻造 燥枣 皂蚤砸愿怨源 憎葬泽 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼
葬灶凿 贼澡葬贼 燥枣 皂蚤砸源园愿 憎葬泽 贼澡藻 造燥憎藻泽贼 蚤灶 藻葬糟澡 泽贼葬早藻曰 葬灶凿 贼澡藻 燥贼澡藻则泽 枣造怎糟贼怎葬贼藻凿袁 则葬灶噪蚤灶早 枣则燥皂 澡蚤早澡 贼燥 造燥憎 葬泽 皂蚤砸怨缘员袁
皂蚤砸怨缘园袁 皂蚤砸员缘远袁 皂蚤砸员缘怨袁 皂蚤砸猿怨远袁 皂蚤砸猿怨愿袁 皂蚤砸猿怨园袁 皂蚤砸员远园袁 皂蚤砸怨源苑袁 皂蚤砸员远缘袁 皂蚤砸猿员怨袁 皂蚤砸员远圆袁
皂蚤砸员苑员袁 皂蚤砸猿怨苑袁 皂蚤砸猿怨缘 葬灶凿 皂蚤砸员苑圆援 渊猿冤栽澡藻 贼葬则早藻贼 早藻灶藻泽 葬灶凿 贼澡藻蚤则 责燥泽泽蚤遭造藻 枣怎灶糟贼蚤燥灶泽 责则藻凿蚤糟贼藻凿 怎泽蚤灶早 遭蚤燥蚤灶枣燥则鄄
皂葬贼蚤糟泽 皂藻贼澡燥凿泽 憎藻则藻 则藻泽责燥灶泽蚤遭造藻 枣燥则 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 葬 早则藻葬贼 灶怎皂遭藻则 燥枣 遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶泽袁 糟藻造造怎造葬则 糟燥皂责燥灶藻灶贼泽 葬灶凿
酝粤孕 噪蚤灶葬泽藻 责则燥贼藻蚤灶泽 葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿 憎蚤贼澡 泽藻藻凿 早藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶援 渊源冤 允砸员远园圆猿苑 憎葬泽 贼澡藻 贼葬则早藻贼 早藻灶藻 燥枣 皂蚤砸员远园袁 葬灶凿 贼澡藻
糟造藻葬增藻凿 枣则葬早皂藻灶贼泽 皂葬责责藻凿 藻曾葬糟贼造赠 贼燥 贼澡藻 责则藻凿蚤糟贼藻凿 糟造藻葬增葬早藻 泽蚤贼藻 渊遭藻贼憎藻藻灶 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻泽 员园 葬灶凿 员员 枣则燥皂 贼澡藻 缘忆藻灶凿 燥枣
皂蚤砸员远园冤援 允砸员远园圆猿苑 皂砸晕粤 则藻葬糟澡藻凿 贼澡藻 责藻葬噪 葬贼 蚤皂遭蚤遭藻凿 泽藻藻凿 泽贼葬早藻袁 贼澡藻灶 凿藻糟则藻葬泽藻凿 葬灶凿 凿赠灶葬皂蚤糟葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 葬贼
枣燥造造燥憎蚤灶早 泽贼葬早藻泽 憎蚤贼澡 泽皂葬造造 枣造怎糟贼怎葬贼蚤燥灶援
运藻赠 憎燥则凿泽院 皂蚤砸晕粤曰 蕴葬则蚤曾 噪葬藻皂责枣藻则蚤曰 泽藻藻凿曰 早藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶曰 择砸栽鄄孕悦砸
酝蚤糟则燥砸晕粤渊皂蚤砸晕粤冤是近年来发现的一类非编
码小分子 砸晕粤袁在转录和转录后水平调控目标基因
的表达水平袁是单细胞尧多细胞生物基因调控网络途
径中一种重要的上游作用分子袁高等生物中相当大
比例的基因可能受 皂蚤砸晕粤 的调控遥 对植物 皂蚤砸晕粤
的研究表明袁现知的植物 皂蚤砸晕粤 显示出很强的靶向
转录因子家族成员或其他发育控制基因的偏性袁并
且在人工创制新种质作物方面极具潜在用途袁如
悦澡怎糟噪等咱员暂将编码 圆 个串联 皂蚤砸员缘远 基因的玉米
悦早员 基因转化到一种常用于生产生物燃料的多年生
禾本科植物柳枝稷渊孕葬灶蚤糟怎皂 增蚤则早葬贼怎皂 蕴蚤灶灶援 冤中袁发
现过表达 悦早员 基因的柳枝稷植株保持幼态袁开花受
到抑制袁淀粉含量增加 圆缘园豫 袁消化性提高袁使其更
容易分解出用于生产生物燃料的单糖袁如葡萄糖遥
此途径既可以人工驯化新的生物能源作物袁因为转
悦早员 基因作物不能开花袁所以又能够限制转 悦早员 基
因作物可能带来的基因流污染遥 越来越多的研究结
果表明袁皂蚤砸晕粤 在植物的生长发育尧体内平衡的维
持尧响应环境信号等方面皆具有重要作用咱圆暂 遥 具体
针对 皂蚤砸晕粤在种子生物学方面的研究表明袁皂蚤砸员缘怨
和 皂蚤砸员远园 通过对其目标基因转录因子 酝再月猿猿 辕
酝再月员园员 和 粤砸云的剪切调控进而参与种子萌发过程
中的脱落酸和生长素等激素代谢途径袁从而参与种
子萌发的调控咱猿 原 源暂 遥
种子萌发过程中袁其内部发生一系列基因表达
及生理生化变化袁对于这些变化的深入研究袁是种子
萌发机理研究的一个重要部分袁而且和林木苗木质
量有极密切的关系遥 长期以来袁植物种子萌发的研
究多以服务农林生产为目的袁寻求促进种子萌发及
提高播种品质和苗木质量的方法与措施袁相关理论
研究内容包括种子萌发过程中淀粉尧脂肪和蛋白质
等贮藏物质的运转与利用袁物质代谢及其相关酶活
性袁呼吸强度及呼吸商袁内源激素变化袁环境因子及
物理化学处理对种子萌发的影响等诸多科学问
题咱缘 原 愿暂 曰但是袁这些研究多针对农作物和园艺类草本
植物袁而对于种类丰富的林木种子的研究较少袁尤其
是针叶树种遥 日本落叶松渊蕴葬则蚤曾 噪葬藻皂责枣藻则蚤 渊蕴葬皂遭援 冤
悦葬则则援 冤是我国北方中高山地区的重要纸浆材尧建筑
材及主要针叶速生造林树种咱怨暂 遥 目前袁针叶树人工
造林以实生播种育苗为主袁但落叶松种子产量不稳
定而使其生产育苗受到一定限制曰同时落叶松种子
萌发率不高袁一般为 员缘豫 远园豫 袁为提高落叶松种
子萌发率和苗木品质袁已通过雪藏或化学溶液处理
开展过研究咱员园暂 遥 从 皂蚤砸晕粤 水平进行研究有望为其
分子遗传调控机理提供新的视野遥 在本研究组已完
成的日本落叶松体细胞胚胎发生及实生苗 泽皂葬造造
砸晕粤文库测序与 皂蚤砸晕粤 鉴定的工作基础上咱员员 原 员圆暂 袁
选择 圆 个文库测序数据中鉴定的与其它植物保守的
员愿 个 皂蚤砸晕粤泽袁用 择砸栽鄄孕悦砸 技术研究其在日本落叶
松种子萌发过程中干种子尧吸胀尧萌动尧胚根外露和
子叶展开 缘 个阶段的表达变化模式袁增强关于 皂蚤砸鄄
晕粤参与针叶树种子萌发过程中复杂分子调控机理
的了解遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 实验材料
日本落叶松种子于 圆园员园 年由辽宁省清原县大孤
家林场种子园采种调制袁为天然授粉结实种子遥 干种
园员
专刊 吴摇 涛等院日本落叶松种子萌发过程中 员愿 个 皂蚤砸晕粤泽的表达变化
子千粒质量为 源援 愿 早袁含水量 愿援 园豫遥 源 益密封保存遥
员郾 圆摇 研究方法
员援 圆援 员摇 种子萌发培养摇 随机挑选颗粒包满的种子袁
用 园援 员豫升汞消毒 愿 皂蚤灶袁自来水漂洗 猿 次曰浸泡 圆源 澡
后置于灭过菌的 源 层纱布上袁覆盖 员 层纱布袁用灭菌
员 辕 员园 酝杂溶液始终保持纱布湿润但不积水遥 每个 员缘
糟皂培养皿放 员园园 粒种子袁重复 员园 次遥 圆缘 益袁员远 澡光
照曰圆园 益袁愿 澡黑暗条件下袁于 砸载在鄄源猿园月人工气候箱
内完成萌发过程遥
种子相对含水量测定采用 员园缘 益烘箱法遥 将待
测种子置于渊员园缘 依 圆冤益的烘箱中袁烘 源 远 澡袁直至
恒质量遥 计算公式如下院
含水量 越 渊种子烘干前质量 原 种子烘干后质
量冤 衣种子烘干前质量 伊员园园豫 遥
员援 圆援 圆摇 萌发阶段的划分及取样摇 日本落叶松干种
子浸泡后第 园 员 澡袁种子含水量从 愿援 园豫迅速升高
到 猿员援 远豫 曰第 员 圆源 澡袁种子含水量略有增长袁达到
猿猿援 苑豫 曰之后袁直至第 缘 凿 能观察到种子种皮裂开袁
种子含水量均保持在 猿缘援 远豫 曰第 怨 凿 胚根突破种皮
而外露曰第 圆员 凿统计发芽率袁平均值 源怨援 猿豫 遥 据此袁
把日本落叶松种子的萌发过程划分为 缘 个阶段袁分
别是玉阶段院干种子渊萌发 园 凿冤曰域阶段院种子吸胀
渊浸水后 员 凿袁种子处于吸水平台期袁为吸胀阶段冤曰
芋阶段院胚萌动渊萌发培养第 缘 凿袁外种皮裂开袁此时
是胚和胚乳萌发生理活动旺盛时期冤曰郁阶段院胚根
外露渊萌发培养第 怨 凿袁胚根突破胚乳而外露袁此时是
胚根尧胚轴旺盛生长阶段冤曰吁阶段院萌发成苗渊萌发
培养第 圆愿 凿袁子叶已开始展开袁外种皮还粘附于子叶
尖端尚未脱落袁此时胚已基本萌发成为一棵幼苗冤遥
从种子生理学的观点来看袁胚根突破种皮即标志着
种子萌发阶段已完成遥 本研究继续取该阶段的样
品袁是因为该阶段标志着幼苗生长的全面开始袁此时
的表型在林木培育与育种研究中与林木品质和分级
密切相关遥
玉 郁阶段分别用洁净手术刀和镊子剥取种子
中的胚袁每个阶段取胚 缘园 员园园 个曰吁阶段取萌发
成苗的全株苗 员缘 株遥 液氮保存备用遥
员援 圆援 猿摇 皂蚤砸晕粤 序列信息 摇 本研究组已对日本落
叶松不同发育阶段的体细胞胚的等量混合文库及
圆 年生实生幼苗的根尧茎和叶的等量混合文库分别
进行了 泽皂葬造造 砸晕粤 测序及 皂蚤砸晕粤 分析鉴定咱员员 原 员圆暂 遥
本文研究的 员愿 个 皂蚤砸晕粤泽为日本落叶松与其它植
物共同保守的 皂蚤砸晕粤 序列遥 参照 杂澡蚤 等咱员猿暂 对
皂蚤砸晕粤 引物设计的要求袁运用软件 孕则蚤皂藻则 耘曾鄄
责则藻泽泽猿援 园 分别设计特异正向引物袁反向引物均使用
野皂蚤砸晕粤 糟阅晕粤 杂赠泽贼澡藻泽蚤泽 运蚤贼 葬灶凿 皂蚤砸晕粤 择砸栽鄄孕悦砸
运蚤贼泽冶中的通用引物遥 皂蚤砸晕粤 序列及其引物具体信
息见表 员遥 以日本落叶松 缘援 愿杂 为内参袁缘援 愿杂 的引
物序列为院缘忆鄄粤悦郧栽悦栽郧栽悦栽郧郧郧悦郧栽悦郧鄄猿忆遥
表 员摇 日本落叶松种子萌发过程中检测的 皂蚤砸晕粤及其引物信息
皂蚤砸晕粤 序列渊缘忆鄄猿忆冤 长度 辕 灶贼 引物序列渊缘忆鄄猿忆冤
皂蚤砸员缘远 哉哉郧粤悦粤郧粤粤郧粤哉粤郧粤郧郧郧悦粤悦 圆员 栽栽郧粤悦粤郧粤粤郧粤栽粤郧粤郧郧郧悦粤悦
皂蚤砸员缘怨 哉哉郧郧哉哉哉郧粤粤郧郧郧粤郧悦哉悦哉粤悦 圆员 栽栽郧郧栽栽栽郧粤粤郧郧郧粤郧悦栽悦栽粤悦
皂蚤砸员远园 哉郧悦悦哉郧郧悦哉悦悦悦哉郧哉粤哉郧悦悦粤 圆员 悦栽郧郧悦栽悦悦悦栽郧栽粤栽郧悦悦粤粤粤
皂蚤砸员远圆 哉悦郧粤哉粤粤粤悦悦哉悦哉郧悦粤哉悦悦粤郧 圆员 栽悦郧粤栽粤粤粤悦悦栽悦栽郧悦粤栽悦悦粤郧粤粤
皂蚤砸员远缘 悦悦郧郧粤悦悦粤郧郧悦哉哉悦粤哉悦悦悦悦悦 圆员 郧郧粤悦悦粤郧郧悦栽栽悦粤栽悦悦悦悦悦粤粤粤
皂蚤砸员苑员 哉郧粤哉哉郧粤郧悦悦郧哉郧悦悦粤粤哉粤哉悦 圆员 栽郧粤栽栽郧粤郧悦悦郧栽郧悦悦粤粤栽粤栽悦
皂蚤砸员苑圆 粤郧粤粤哉悦悦哉郧粤哉郧粤哉郧悦哉郧悦粤哉 圆员 粤郧粤粤栽悦悦栽郧粤栽郧粤栽郧悦栽郧悦粤栽粤粤
皂蚤砸猿员怨 哉哉哉郧郧粤悦哉郧粤粤郧郧郧粤郧悦哉悦悦哉 圆员 栽栽郧郧粤悦栽郧粤粤郧郧郧粤郧悦栽悦悦栽粤粤
皂蚤砸猿怨园 粤粤郧悦哉悦晕郧郧粤郧郧郧粤哉粤郧悦郧悦悦 圆员 粤粤郧悦栽悦晕郧郧粤郧郧郧粤栽粤郧悦郧悦悦粤粤
皂蚤砸猿怨缘 郧哉哉悦悦哉哉悦粤粤哉悦粤悦哉哉悦郧哉悦郧 圆员 郧栽栽悦悦栽栽悦粤粤栽悦粤悦栽栽悦郧栽悦郧
皂蚤砸猿怨远 悦哉悦粤粤郧粤粤粤郧悦哉郧哉郧郧郧粤粤粤 圆园 悦栽悦粤粤郧粤粤粤郧悦栽郧栽郧郧郧粤粤粤
皂蚤砸猿怨苑 栽粤栽栽郧粤郧栽郧悦粤郧悦郧栽栽郧粤悦郧粤 圆员 粤栽栽郧粤郧栽郧悦粤郧悦郧栽栽郧粤悦郧粤粤
皂蚤砸猿怨愿 悦郧栽郧栽栽悦悦悦粤郧郧栽悦郧悦悦悦悦粤郧 圆员 栽郧栽栽悦悦悦粤郧郧栽悦郧悦悦悦悦粤郧粤粤
皂蚤砸源园愿 栽郧悦粤悦栽郧悦悦栽悦栽栽悦悦悦栽郧郧栽栽 圆员 悦粤悦栽郧悦悦栽悦栽栽悦悦悦栽郧郧栽栽粤粤
皂蚤砸愿怨源 悦郧哉哉哉悦粤悦郧哉悦郧郧郧哉哉悦粤悦悦粤 圆员 悦郧栽栽栽悦粤悦郧栽悦郧郧郧栽栽悦粤悦悦粤
皂蚤砸怨源苑 哉粤哉悦郧郧粤粤悦悦哉郧哉哉粤悦哉郧哉哉哉悦 圆圆 栽粤栽悦郧郧粤粤悦悦栽郧栽栽粤悦栽郧栽栽栽悦
皂蚤砸怨缘园 哉郧粤悦粤哉悦哉郧郧郧悦悦粤悦郧粤哉郧郧哉哉 圆圆 栽郧粤悦粤栽悦栽郧郧郧悦悦粤悦郧粤栽郧郧栽栽
皂蚤砸怨缘员 哉粤哉哉悦哉哉郧粤悦郧哉悦哉郧郧粤悦悦粤悦郧 圆圆 栽粤栽栽悦栽栽郧粤悦郧栽悦栽郧郧粤悦悦粤悦郧
员员
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
员援 圆援 源 摇 皂蚤砸晕粤 的提取尧反转录及 择砸栽鄄孕悦砸摇 使用
通用植物 皂蚤糟则燥砸晕粤 提取试剂盒渊月蚤燥栽藻运藻冤分别提
取上述 缘 个阶段所取样品的 皂蚤砸晕粤遥 超微量核酸蛋
白测定仪 晕阅员园园园 渊晕葬灶燥阅则燥责 栽藻糟澡灶燥造燥早蚤藻泽袁哉杂粤冤检
测核酸浓度和 韵阅 值遥 圆豫 琼脂糖凝胶电泳检测
皂蚤砸晕粤质量遥 缘 个萌发阶段的 皂蚤砸晕粤 样品均取 员
滋早袁用 皂蚤砸晕粤 糟阅晕粤 杂赠泽贼澡藻泽蚤泽 运蚤贼 葬灶凿 皂蚤砸晕粤 择砸栽鄄
孕悦砸 运蚤贼泽 渊陨灶增蚤贼则燥早藻灶冤进行反转录和 择砸栽鄄孕悦砸袁操作
按照步骤说明和仪器参数要求进行遥 择砸栽鄄孕悦砸仪为
粤月陨 苑缘园园 渊粤责责造蚤藻凿 月蚤燥泽赠泽贼藻皂泽袁哉杂粤冤袁每个反应做 源
次重复遥 择砸栽鄄孕悦砸程序为院怨缘 益袁圆 皂蚤灶曰源园 个循环院
怨缘 益袁员缘 泽曰远园 益袁员 皂蚤灶遥 扩增程序结束之后进行熔
解曲线分析并对扩增产物进行电泳袁确认扩增产物
的单一性遥 皂蚤砸晕粤 的表达水平采用 圆 原 驻驻悦贼法进行
择砸栽鄄孕悦砸相对定量分析方法计算遥
员援 圆援 缘摇 皂蚤砸晕粤目标基因的生物信息学分析摇 利用
植物 皂蚤砸晕粤 在线预测软件要责泽砸晕粤栽葬则早藻贼 渊 澡贼贼责院 辕 辕
责造葬灶贼早则灶援 灶燥遭造藻援 燥则早 辕 责泽砸晕粤栽葬则早藻贼 辕 冤 咱员源暂 袁以本研究组
的日本落叶松体细胞胚原胚团发育阶段渊孕耘酝玉冤转
录组数据 耘杂栽 作为目标基因筛选库袁对 员愿 个 皂蚤砸鄄
晕粤泽进行目标基因预测遥 筛选标准和参数设为默
认咱员源暂 遥 预测得分臆猿援 园 的序列再人工调整作为
皂蚤砸晕粤的候选目标基因遥 目标基因功能在 哉灶蚤孕则燥贼
数据库 渊澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 怎灶蚤责则燥贼援 燥则早 辕 冤中根据 郧韵 分类
系统进行注释遥
员援 圆援 远摇 缘忆砸粤悦耘验证 皂蚤砸员远园 目标基因及其定量表
达分析 摇 采用 栽则蚤扎燥造 砸藻葬早藻灶贼 渊 陨灶增蚤贼则燥早藻灶冤提取玉
郁阶段种胚和吁阶段小苗的总 砸晕粤袁晕阅员园园园 检测
韵阅圆远园 辕 韵阅圆愿园比值袁总 砸晕粤经 砸晕葬泽藻鄄枣则藻藻 阅晕葬泽藻 渊孕则燥鄄
皂藻早葬冤处理以消除可能的 阅晕粤污染袁使用 郧藻灶藻砸葬糟藻则
运蚤贼 渊陨灶增蚤贼则燥早藻灶冤进行 缘忆砸粤悦耘 渊砸葬责蚤凿 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣
糟阅晕粤 耘灶凿泽冤以对 皂蚤砸员远园 目标基因 允砸员远园圆猿苑 进行切
割位点验证遥 巢式 孕悦砸 第 员 轮引物为 缘忆鄄悦悦悦粤粤粤鄄
悦粤粤悦粤郧粤粤粤粤郧郧栽郧栽郧悦栽悦鄄猿忆袁第 圆 轮引物为 缘忆鄄
粤郧悦郧粤悦栽郧郧悦栽悦栽栽郧郧栽郧悦栽栽栽粤悦粤鄄猿忆遥 砸粤悦耘 陨灶灶藻则
孕悦砸 产物连接到 责耘粤杂再鄄栽猿 克隆载体上并转化到
栽则葬灶泽鄄栽员 感受态细胞袁挑取 员圆 个单克隆送 陨灶增蚤贼则燥早藻灶
公司进行测序遥 皂蚤砸员远园 目标基因的 择砸栽鄄孕悦砸 使用
一对跨切割位点的引物渊粤砸云鄄员云院缘忆鄄悦悦粤粤栽粤粤栽郧栽鄄
郧悦栽粤郧郧郧悦粤郧粤栽鄄猿忆袁 粤砸云鄄员砸院 缘忆鄄郧粤郧栽栽悦栽郧栽郧鄄
郧粤栽粤悦粤悦郧栽郧栽郧郧鄄猿忆冤和一对切割位点上游的引物
渊粤砸云鄄圆云院缘忆鄄郧郧郧悦粤悦悦粤栽栽栽悦栽栽悦悦郧栽栽鄄猿忆袁粤砸云鄄圆砸院
缘忆鄄郧粤粤粤悦粤粤悦悦栽悦悦粤悦悦粤栽悦悦粤粤鄄猿忆冤袁以日本落叶
松网格蛋白衔接因子复合体亚基 粤孕皂为内标渊晕悦月陨
基 因 编 号院 允砸员源园圆缘猿曰 云院 缘忆鄄悦郧悦粤粤栽郧粤悦悦悦栽郧鄄
郧粤粤粤郧鄄猿忆袁 砸院 缘忆鄄粤郧粤栽郧郧栽郧郧悦粤粤郧郧粤粤粤粤鄄猿忆冤遥
每孔重复 源 次遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 皂蚤砸晕粤提取质量及 择砸栽鄄孕悦砸检测结果
用 晕阅员园园园 检测所提取的小 砸晕粤的 韵阅值和浓
度袁结果表明袁韵阅圆远园 辕 韵阅圆愿园为 员援 愿园 员援 怨缘袁韵阅圆远园 辕
韵阅圆猿园的比值大于 员援 缘袁浓度为 缘园 圆园园 灶早窑滋蕴 原员遥
琼脂糖凝胶电泳检测结果表明院泳道 员园园 遭责 位置处
形成清晰单一条带袁说明提取的 皂蚤砸晕粤 满足反转录
和定量实验要求遥 同时袁员愿 个 皂蚤砸晕粤泽 的 择砸栽鄄孕悦砸
结果表明袁员愿 条引物在 源园 个扩增循环结束前扩增
曲线达到平台期袁非模板对照渊晕栽悦冤均未出现扩增
条带曰熔解曲线皆为单峰袁琼脂糖凝胶电泳结果均为
单一条带袁确保后续 皂蚤砸晕粤表达水平分析结果的可
靠性和准确性遥
圆郾 圆摇 员愿 个 皂蚤砸晕粤泽 在日本落叶松种子萌发过程中
的表达模式
摇 摇 以日本落叶松 缘援 愿杂作内参袁将 员愿个 皂蚤砸晕粤泽在域
阶段渊吸胀种子冤样品中的表达量设为参比袁通过
择砸栽鄄孕悦砸分析结果渊图 员袁再坐标刻度为 皂蚤砸晕粤表达
量的 造早对数值冤表明院员愿 个 皂蚤砸晕粤泽的表达水平在萌
发过程中整体呈现下降趋势袁都在干种子中丰度最
高袁显著高于萌发过程中域 吁阶段袁如 皂蚤砸猿员怨 在玉阶
段的表达量分别是域 吁阶段的 圆源郾 源尧猿猿猿援 猿尧缘园园援 园尧
员园园园援 园倍曰员愿 个 皂蚤砸晕粤泽 在玉阶段的表达水平分别是
域尧芋尧郁尧吁阶段的 源援 愿 源猿郾 缘尧员苑援 圆 员 园园园援 园尧源缘援 缘
员 园园园援 园尧远圆援 缘 员 愿远圆援 圆倍遥 具体分析 员愿 个 皂蚤砸鄄
晕粤泽在玉 吁阶段的表达变化模式袁均是玉 域阶段下降曰
域 芋阶段除 皂蚤砸猿怨缘 上升之外袁其余 皂蚤砸晕粤泽 仍呈下
降趋势曰芋 吁阶段在低表达水平略有变化袁大致可以
分为 源 种情况院渊员冤逐渐升高袁如 皂蚤砸晕粤员缘怨尧皂蚤砸鄄
晕粤员远圆尧 皂蚤砸晕粤员苑员尧 皂蚤砸晕粤猿怨远尧 皂蚤砸晕粤怨源苑 和 皂蚤砸鄄
晕粤怨缘员渊图 员粤冤曰渊圆冤逐渐降低袁如 皂蚤砸晕粤员远园尧皂蚤砸鄄
晕粤员苑圆尧皂蚤砸晕粤猿员怨尧皂蚤砸晕粤猿怨缘尧皂蚤砸晕粤猿怨苑尧皂蚤砸晕粤猿怨愿尧
圆员
专刊 吴摇 涛等院日本落叶松种子萌发过程中 员愿 个 皂蚤砸晕粤泽的表达变化
皂蚤砸晕粤源园愿和 皂蚤砸晕粤愿怨源渊图 员月冤曰渊猿冤先降低后升高袁
但表达水平变化幅度平缓袁如 皂蚤砸晕粤员缘远 和 皂蚤砸鄄
晕粤员远缘渊图 员悦冤曰渊源冤表达水平无变化袁如 皂蚤砸晕粤猿怨园和
皂蚤砸晕粤怨缘园渊图 员悦冤遥
玉院干种子曰域院种子吸胀曰芋院胚萌动曰郁院胚根外露曰吁院萌发成苗
图 员摇 员愿 个 皂蚤砸晕粤泽在日本落叶松种子萌发过程中的表达模式
猿员
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
圆援 猿摇 员愿 个 皂蚤砸晕粤泽在日本落叶松种子萌发各个阶
段的表达差异
摇 摇 用 凿藻造贼葬 悦贼方法表示 员愿 个 皂蚤砸晕粤泽在日本落叶
松种子萌发过程的第玉 吁阶段的表达量遥 以各个
阶段内表达量最高袁即荧光阈值渊悦贼冤最小的 皂蚤砸晕粤
为参照袁其余 皂蚤砸晕粤的 悦贼值分别与该 皂蚤砸晕粤 的 悦贼
值相减袁差值见表 圆遥 差值越大袁则表明此 皂蚤砸晕粤在
该阶段的表达量相对越低曰反之袁差值越小则该
皂蚤砸晕粤相对表达量越高遥 从表 圆 所列 凿藻造贼葬 悦贼 差值
可以看出院皂蚤砸愿怨源 在种子萌发的 缘 个时期表达水平
均是最高的袁皂蚤砸源园愿 表达水平均最低曰其余 员远 个
皂蚤砸晕粤在 缘 个时期内的表达水平各有变化袁综合排
序结果从高到低依次为院皂蚤砸怨缘员尧皂蚤砸怨缘园尧皂蚤砸员缘远尧
皂蚤砸员缘怨尧皂蚤砸猿怨远尧皂蚤砸猿怨愿尧皂蚤砸猿怨园尧皂蚤砸员远园尧皂蚤砸怨源苑尧
皂蚤砸员远缘尧皂蚤砸猿员怨尧 皂蚤砸员远圆尧 皂蚤砸员苑员尧 皂蚤砸猿怨苑尧 皂蚤砸猿怨缘
和 皂蚤砸员苑圆遥 皂蚤砸晕粤 通过对目标基因的切割或抑制
作用发挥基因调控功能袁因而推测不同 皂蚤砸晕粤 在日
本落叶松种子萌发的某个阶段袁其表达水平的不同
可能对其目标基因的差异表达起到调控作用袁最终
使种子向有利于萌发和成苗的方向发展遥
表 圆摇 员愿 个 皂蚤砸晕粤泽在日本落叶松种子萌发
过程中 缘 个阶段的平均 凿藻造贼葬 悦贼
皂蚤砸晕粤 种子萌发阶段玉 域 芋 郁 吁
皂蚤砸员缘远 远援 园远 缘援 愿猿 猿援 怨园 源援 远员 猿援 园愿
皂蚤砸员缘怨 苑援 猿缘 苑援 怨源 缘援 愿愿 缘援 远猿 源援 缘远
皂蚤砸员远园 怨援 苑园 愿援 苑缘 苑援 愿缘 愿援 圆员 苑援 猿圆
皂蚤砸员远圆 员员援 源源 员员援 怨愿 员员援 远员 员员援 苑圆 员园援 源猿
皂蚤砸员远缘 员员援 园员 员员援 园园 愿援 怨远 怨援 圆远 苑援 怨远
皂蚤砸员苑员 员圆援 猿缘 员圆援 苑员 员园援 源缘 员园援 园远 苑援 怨远
皂蚤砸员苑圆 员源援 园愿 员圆援 苑缘 员圆援 苑猿 员源援 员园 员源援 远园
皂蚤砸猿员怨 员员援 猿园 员员援 苑猿 员园援 缘缘 员园援 愿愿 员园援 缘源
皂蚤砸猿怨园 怨援 员圆 愿援 怨远 愿援 缘远 愿援 缘远 愿援 员缘
皂蚤砸猿怨缘 员猿援 猿园 员猿援 缘愿 愿援 员猿 怨援 缘圆 员员援 源苑
皂蚤砸猿怨远 员园援 员员 怨援 缘苑 怨援 源怨 苑援 怨愿 远援 猿缘
皂蚤砸猿怨苑 员圆援 园缘 员圆援 圆缘 员园援 源园 员圆援 猿园 员员援 远猿
皂蚤砸猿怨愿 怨援 源愿 怨援 圆苑 远援 远园 愿援 猿猿 苑援 缘愿
皂蚤砸源园愿 员远援 怨缘 员缘援 园员 员猿援 缘猿 员缘援 苑园 员缘援 苑源
皂蚤砸愿怨源 园援 园园 园援 园园 园援 园园 园援 园园 园援 园园
皂蚤砸怨源苑 员园援 员员 员园援 缘园 怨援 源远 愿援 怨远 远援 苑愿
皂蚤砸怨缘园 源援 缘猿 缘援 缘猿 源援 猿缘 源援 园愿 猿援 圆远
皂蚤砸怨缘员 缘援 猿缘 远援 远员 猿援 愿员 圆援 怨苑 员援 源猿
圆郾 源摇 皂蚤砸晕粤目标基因及其功能的生物信息学分析
为了进一步研究 员愿 个 皂蚤砸晕粤 在种子萌发过程
中的表达变化模式与种子萌发生命进程的可能关
系袁用在线植物 皂蚤砸晕粤 目标基因预测软件 责泽砸晕粤鄄
栽葬则早藻贼对 员愿 个 皂蚤砸晕粤泽 的目标基因进行预测分析遥
除皂蚤砸猿怨愿 和 皂蚤砸源园愿 未能用设定的参数搜索到目标
基因外袁其余的 员远 个 皂蚤砸晕粤泽 得到 员 愿 个目标基
因渊表 猿冤遥 从这些目标基因编码蛋白的功能可以看
出院员远 个 皂蚤砸晕粤泽的目标基因所编码的蛋白主要是
粤栽孕 辕 阅晕粤结合蛋白尧粤砸云 等转录因子尧质膜和核糖
体等细胞组分及 酝粤孕等激酶活性蛋白等遥 同时袁同
一个 皂蚤砸晕粤的目标基因有时不止 员 个袁而不同 皂蚤砸鄄
晕粤的目标基因可能具有相同的功能袁甚至 圆 个
皂蚤砸晕粤 同时靶向 员 个目标基因袁例如 皂蚤砸怨缘园 和
皂蚤砸怨缘员 的目标基因都包含 允砸员源怨缘圆园袁说明 皂蚤砸晕粤
可能通过对目标基因的一种复杂的网络调控机制参
与种子萌发生命进程的调控遥
圆援 缘摇 皂蚤砸员远园 目标基因切割位点检测及其在种子萌
发过程中的表达情况
摇 摇 皂蚤砸晕粤 在转录后水平通过剪切或抑制目标
基因 皂砸晕粤 的表达而发挥负调控功能遥 对目标
基因的预测发现袁皂蚤砸员远园 的目标基因 允砸员远园圆猿苑
编码转录因子 粤砸云员远遥 缘忆砸粤悦耘 验证结果渊图 圆冤
表明院员圆 个克隆的测序结果均显示目标基因
允砸员远园圆猿苑 在 皂蚤砸员远园 互补结合序列第 员园 与第 员员
位碱基之间发生切割袁与 杂怎灶噪葬则 等 咱员缘暂报道的切
割位点结果一致遥
以 粤孕皂 作为内参基因袁利用 择砸栽鄄孕悦砸 技术对
允砸员远园圆猿苑 渊粤砸云员远冤基因进行种子萌发不同阶段的
转录表达分析遥 结果表明院允砸员远园圆猿苑 基因在种子萌
发的各个阶段中均有表达袁但表达量有差异 渊图
猿冤遥 将 粤砸云鄄员 辕 鄄圆 在干种子中的表达量设为参比 员袁
粤砸云鄄员 在种子吸胀阶段的表达水平迅速升高袁为干
种子的 缘援 苑源 倍曰在萌动尧胚根外露和成苗阶段有所
回落袁但均比干种子中的高袁其表达量分别为干种子
的 圆援 怨愿尧员援 怨怨尧圆援 缘远 倍曰粤砸云鄄圆 表达水平持续升高袁
吸胀尧萌动尧胚根外露和成苗阶段分别为干种子阶段
的 员援 员怨尧圆援 远员尧源援 员远尧源援 园员 倍遥
源员
专刊 吴摇 涛等院日本落叶松种子萌发过程中 员愿 个 皂蚤砸晕粤泽的表达变化
表 猿摇 皂蚤砸晕粤目标基因的生物信息学预测及注释
皂蚤砸晕粤 目标基因 注释 参考蛋白 分值 耘值
皂蚤砸员缘远 允砸员缘园圆源苑 磷酸酶活性曰金属粒子结合蛋白 晕孕赃员怨怨愿缘员援 圆 员源园援 园 源援 园园耘鄄猿源
允砸员远苑猿缘员 粤栽孕结合蛋白曰微管组分 晕孕赃员愿怨园园怨援 圆 圆猿怨援 园 员援 园园耘鄄远猿
允砸员苑圆猿员怨 粤栽孕结合蛋白曰质膜组分 晕孕赃员怨远苑源远援 圆 怨源援 园 缘援 园园耘鄄圆猿
允砸员怨圆源猿远 脂质结合蛋白 晕孕赃缘远愿怨园源援 员 缘源援 猿 苑援 园园耘鄄员源
允砸员怨猿缘源员 粤栽孕结合蛋白曰细胞组分 晕孕赃缘远愿苑源远援 员 远缘援 员 源援 园园耘鄄员猿
皂蚤砸员缘怨 允砸员缘圆园愿园 假定的蛋白激酶活性蛋白 晕孕赃员怨远缘远源援 员 员源员援 园 缘援 园园耘鄄猿源
允砸员缘源愿猿怨 序列特异性 阅晕粤结合转录因子 晕孕赃员怨怨源员园援 圆 员苑员援 园 愿援 园园耘鄄源猿
允砸员远园员远员 玉米黄素环氧化酶活性蛋白 晕孕赃圆园员缘园源援 圆 猿源缘援 园 圆援 园园耘鄄怨缘
皂蚤砸员远园 允砸员远园圆猿苑 粤砸云员远 转录因子 晕孕赃缘远苑愿源员援 员 圆园员援 园 愿援 园园耘鄄缘圆
皂蚤砸员远圆 允砸员源员怨源员 粤栽孕结合蛋白 晕孕赃员愿园员圆猿援 员 圆愿援 缘 圆援 员园
允砸员源圆员怨猿 粤栽孕结合蛋白 晕孕赃员怨源园源苑援 圆 员园圆援 园 员援 园园耘鄄圆圆
允砸员愿猿苑缘怨 胡豆苷合成酶 晕孕赃远愿园员愿怨援 员 员园园援 园 源援 园园耘鄄圆圆
允砸员愿源园苑苑 阅晕粤 辕 粤栽孕结合蛋白 晕孕赃员怨源圆员园援 圆 愿园援 员 缘援 园园耘鄄员远
皂蚤砸员远缘 允砸员源园苑远园 粤栽匀月鄄愿 转录因子 晕孕赃员怨缘园员源援 员 猿圆缘援 园 猿援 园园耘鄄愿怨
皂蚤砸员苑员 允砸员远猿源猿苑 粤栽孕结合蛋白 晕孕赃缘远远员源源援 圆 圆源缘援 园 圆援 园园耘鄄远缘
允砸员苑园远苑缘 细胞膜组分 晕孕赃缘远缘猿圆愿援 员 员源园援 园 愿援 园园耘鄄猿源
允砸员苑园怨缘远 细胞膜组分 晕孕赃缘远缘猿圆愿援 员 缘苑援 愿 圆援 园园耘鄄园怨
皂蚤砸员苑圆 允砸员源愿员缘圆 核酸结合活性蛋白 晕孕赃员怨苑猿愿圆援 猿 员员怨援 园 愿援 园园耘鄄圆愿
允砸员源怨源苑怨 锌粒子结合蛋白 晕孕赃圆园园愿苑怨援 员 员远猿援 园 圆援 园园耘鄄源园
允砸员缘源苑员猿 假定的琥珀酸辅酶 粤连接酶 晕孕赃员苑怨远猿圆援 员 员缘远援 园 圆援 园园耘鄄猿愿
允砸员缘缘猿圆员 酝粤孕激酶活性蛋白 晕孕赃员怨苑源园圆援 员 猿园愿援 园 园援 怨源
允砸员远员圆怨圆 假定的琥珀酸辅酶 粤连接酶 晕孕赃员苑怨远猿圆援 员 猿怨圆援 园 员援 园园耘鄄员园怨
允砸员远愿远源圆 翻译起始因子 晕孕赃员怨缘员猿苑援 缘 远园愿援 园 员援 园园耘鄄员苑源
允砸员愿怨苑圆远 阅晕粤结合蛋白 晕孕赃员苑员怨愿园援 员 苑员援 圆 猿援 园园耘鄄圆猿
允砸员愿源怨园苑 蛋白激酶活性蛋白 晕孕赃员苑猿缘苑愿援 圆 猿猿援 怨 猿援 苑园耘鄄园圆
皂蚤砸猿员怨 允砸员源苑圆愿园 酝粤孕员 激酶活性蛋白 晕孕赃缘远苑园员愿援 源 猿远愿援 园 员援 园园耘鄄员园圆
允砸员源愿猿源愿 蛋白结合蛋白 晕孕赃缘远苑愿缘愿援 员 圆园员援 园 圆援 园园耘鄄愿苑
皂蚤砸猿怨园 允砸员缘员源园园 锌粒子结合蛋白 晕孕赃缘远缘怨远圆援 员 猿园援 园 园援 苑苑
允砸员缘圆园园员 蛋白结合蛋白 晕孕赃员苑员怨猿源援 员 源员援 圆 员援 园园耘鄄园猿
皂蚤砸猿怨缘 允砸员远员猿园员 锌粒子结合蛋白 晕孕赃员愿园苑猿怨援 圆 圆怨员援 园 圆援 园园耘鄄苑怨
允砸员远缘猿苑远 假定的锚蛋白激酶活性蛋白 晕孕赃愿缘园远园远援 员 员愿圆援 园 员援 园园耘鄄源远
皂蚤砸猿怨远 允砸员源员源缘园 假定的顺反异构酶活性蛋白 晕孕赃员怨怨远远愿援 员 圆苑猿援 园 员援 园园耘鄄苑猿
允砸员源员远怨源 细胞核组分 晕孕赃圆园园愿远缘援 员 员员缘援 园 圆援 园园耘鄄圆远
允砸员缘源愿愿远 假定的蛋白激酶活性蛋白 晕孕赃缘远源远园怨援 猿 源圆远援 园 员援 园园耘鄄员员怨
允砸员苑源苑圆愿 水合酶 辕异构酶活性蛋白 晕孕赃员怨员远员园援 猿 圆苑援 猿 源援 远园
皂蚤砸猿怨苑 允砸员远园苑员源 漆酶 晕孕赃圆园园愿员园援 员 缘远援 圆 源援 园园耘鄄员员
允砸员远愿怨园怨 核糖体结构组分 晕孕赃员怨园源苑园援 员 怨苑援 源 圆援 园园耘鄄圆员
皂蚤砸愿怨源 允砸员缘猿远愿远 核糖体结构组分 晕孕赃员愿员愿猿员援 员 猿缘圆援 园 猿援 园园耘鄄怨苑
皂蚤砸怨源苑 允砸员缘圆园园园 核糖体结构组分 晕孕赃员怨圆缘苑缘援 圆 苑源苑援 园 园援 园园
皂蚤砸怨缘园 允砸员源远远怨猿 跨膜受体蛋白 晕孕赃员怨苑圆怨园援 员 源苑援 园 怨援 园园耘鄄园远
允砸员源怨缘圆园 肽酶 晕孕赃员苑源圆愿怨援 圆 猿员援 远 园援 员缘
允砸员苑远远愿源 假定的抗病性蛋白 晕孕赃员怨愿愿圆远援 员 猿远援 圆 缘援 园园耘鄄园猿
皂蚤砸怨缘员 允砸员源怨缘圆园 肽酶 晕孕赃员苑源圆愿怨援 圆 猿员援 远 园援 员缘园耘
允砸员远猿怨远猿 锌粒子结合蛋白 晕孕赃员怨源圆园园援 员 猿苑园援 园 员援 园园耘鄄员园圆
允砸员愿源园苑圆 肽链内切酶 晕孕赃员苑缘怨猿圆援 圆 猿苑援 苑 园援 园园圆
缘员
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
图 圆摇 皂蚤砸员远园 与目标基因 允砸员远园圆猿苑 的切割位点验证
图 猿摇 种子萌发过程中 皂蚤砸员远园 与目标基因 允砸员远园圆猿苑 渊粤砸云冤的
表达变化
猿摇 结论与讨论
皂蚤砸晕粤是植物快速响应环境变化的重要基因
调控因子袁其在种子萌发过程中的表达模式是种子
生物学研究的一个基础内容遥 本研究运用 择砸栽鄄孕悦砸
技术袁对日本落叶松种子萌发过程中的干种子尧吸
胀尧萌动尧胚根外露和子叶展开 缘 个关键时期的 员愿
个 皂蚤砸晕粤泽表达水平进行检测袁发现 皂蚤砸晕粤 的表达
水平在干种子中最高袁萌动阶段最低袁总体呈逐渐降
低的趋势曰种子萌发的各个时期袁皂蚤砸愿怨源 的表达水
平均最高袁皂蚤砸源园愿 最低曰皂蚤砸晕粤 目标基因的生物信
息学分析结果表明袁员愿 个 皂蚤砸晕粤泽 的目标基因编码
蛋白主要是结合蛋白 辕转录因子和细胞组分及激酶
活性蛋白等袁表明 皂蚤砸晕粤的时序性表达可能通过参
与细胞的信号传导尧物质运输尧细胞周期和细胞组分
生成等重要的细胞生物学过程袁在种子萌发过程中
发挥调控功能遥
皂蚤砸晕粤在植物生长尧发育和响应生态因子及逆
境胁迫等生命活动过程中通过对目标基因的切割或
抑制作用袁担负着重要的基因调控功能遥 对以玉米
为代表的单子叶植物和以拟南芥为代表的双子叶植
物的研究表明袁种子发育程序受到某一类 皂蚤砸晕粤 及
其目标基因的调控咱员远 原 员苑暂 遥 种子萌发在本质上是种
胚从生命活动相对静止状态恢复到生理代谢旺盛的
连续生长状态袁胚能够迅速生长是关键袁这要求有利
于核糖体蛋白尧细胞组分等蛋白质的合成袁以支持胚
根和胚轴的旺盛生长遥 针叶树种子萌发过程中的生
理生化研究表明袁其萌发是贮藏物质降解和水解酶
活性旺盛的生理活动过程咱员愿 原 圆园暂 遥 本研究结果显示袁
日本落叶松种子萌发过程中袁员愿 个 皂蚤砸晕粤泽 在种胚
中的表达水平以干种子中最高袁种子吸胀后到子叶
展开期间的表达水平均远低于干种子袁这可能有利
于其目标基因编码的结合蛋白 辕转录因子尧翻译起始
因子尧细胞膜成分和激酶等蛋白质和酶的合成袁促进
胚内细胞的旺盛分裂和生长袁这与种子萌发的生理
生化基础相一致遥
皂蚤砸晕粤在种子生物学中的功能研究才刚刚兴
起袁现有的研究主要集中在种子胚胎发生及种子发
育与成熟阶段袁种子休眠尧萌发及成苗阶段的研究相
对较少遥 对种子萌发阶段的 皂蚤砸晕粤 研究表明袁
皂蚤砸员缘怨尧皂蚤砸员远园 在种子萌发早期尧胚根外露之前发
挥主要的调控作用袁皂蚤砸员缘远 在胚根外露之后发挥作
用袁其中袁皂蚤砸员缘怨 通过调低目标基因 酝再月 的表达量
进而参与种子对 粤月粤 响应的调节遥 皂蚤砸员缘怨 过表达
种子的 酝再月猿猿 和 酝再月员园员 转录本均呈低表达水平袁
表现为 粤月粤 不敏感袁这与 皂赠遭猿猿 和 皂赠遭员园员 突变体
种子的 粤月粤脱敏性表型一致遥 同时袁过表达 栽怎酝灾
孕员 辕 匀悦鄄孕则燥病毒沉默抑制蛋白的种子 渊 栽怎酝灾 孕员 辕
匀悦鄄孕则燥能抑制 皂蚤砸晕粤的功能冤袁表现为 粤月粤过敏性
表型咱圆员 原 圆圆暂 遥 施用一定量的外源 粤月粤 会抑制拟南芥
吸胀种子的萌发袁且能导致 皂蚤砸员缘怨 的积累袁这是种
子的一种内稳机制袁它介导 酝再月猿猿 和 酝再月员园员 转录
本降解袁使种子对 粤月粤信号失去敏感性咱猿暂 遥 这些证
据表明袁皂蚤砸晕粤的调控功能在吸胀种子正常的 粤月粤
敏感性响应途径中是必需的遥 本研究中袁皂蚤砸员缘怨 在
吸胀种子中表达水平远低于干种子袁但在胚萌动尧胚
根外露和子叶展开阶段袁其表达水平逐渐略有回升袁
这一方面说明干种子中高水平的 皂蚤砸员缘怨 有助于减
轻休眠种子对 粤月粤 的敏感性袁另一方面说明
皂蚤砸员缘怨 在种子吸胀阶段表达量迅速降低袁增强种子
对 粤月粤的响应袁预示着种子吸胀阶段是 皂蚤砸员缘怨 调
控种子萌发对 粤月粤 响应的关键时期袁且 皂蚤砸员缘怨 是
调控种子休眠与萌发的重要因素袁其表达水平降低
有利于种子萌发遥
皂蚤砸员远园 对目标基因 粤砸云员园 的抑制作用在拟南
芥种子萌发调控中起着关键作用咱源暂 遥 本研究对
皂蚤砸员远园 的目标基因进行了切割位点验证及定量表
达分析遥 粤砸云鄄圆 位于切割位点上游 缘爷端袁其表达丰
远员
专刊 吴摇 涛等院日本落叶松种子萌发过程中 员愿 个 皂蚤砸晕粤泽的表达变化
度随着种子萌发而升高曰而 粤砸云鄄员 跨切割位点袁其丰
度在种子吸胀阶段发生明显的升高袁萌动至萌发成
苗阶段其表达丰度均高于干种子袁但变化不大袁说明
允砸员远园圆猿苑 渊粤砸云员远冤在种子萌发过程中的转录水平
是升高的遥 游离渊自由态冤的 皂蚤砸员远园 丰度随着萌发
而降低袁这可能与高丰度的目标基因 粤砸云 使许多
皂蚤砸员远园 被结合至 粤郧韵蛋白复合体中有关遥 皂蚤砸员远园
与目标基因 允砸员远园圆猿苑 的作用位点位于蛋白质编码
区袁皂蚤砸员远园 通过切割作用而调控其蛋白质水平遥
日本落叶松种子萌发的各个时期袁皂蚤砸源园愿 表达
水平最低袁而 皂蚤砸愿怨源 最高遥 目前这 圆 个 皂蚤砸晕粤 的
有关研究还十分有限袁仅知道 皂蚤砸源园愿 在蒺藜苜蓿
渊酝藻凿蚤糟葬早燥 贼则怎灶糟葬贼怎造葬 郧葬藻则贼灶援 冤水分亏缺胁迫下高表
达袁与其目标基因质体蓝素蛋白下调相关联咱圆猿暂 曰
皂蚤砸愿怨源 在葡萄渊灾蚤贼蚤泽 增蚤灶蚤枣藻则葬 蕴蚤灶灶援 冤花序中的表达水
平高于卷须咱圆源暂 袁在二粒小麦 渊 栽则蚤贼蚤糟怎皂援 凿蚤糟燥糟糟燥蚤凿藻泽
运燥皂援 冤受干旱胁迫下表达上调咱圆缘暂 遥 它们在种子萌
发中的具体调控作用尚不清楚遥 当前袁人们对 皂蚤砸鄄
晕粤的鉴定尧表达和功能已有一定的认识袁但是对其
在种子生物学中的了解还十分有限遥 本研究采用
择砸栽鄄孕悦砸技术袁检测针叶树种子萌发过程中 皂蚤砸晕粤
的表达模式袁为 皂蚤砸晕粤在林木种子生物学中的研究
提供基础资料袁以期更深入地理解种子萌发生物学
中基因功能调控网络的复杂过程遥
参考文献院
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