全 文 ：第 6 卷 第 2 期
1 9 9 3 年 4 J]
林业 科 学 研 究
FO R E S T R E S E A R C H
V o l
.
6
,
N o
.
2
A P r
。 ,
1 9 9 3
迁粉蝶核型多角体病毒的初步研究
杨明挥 林 尤洞 梁世平 哀爱华 孙富林
关 . 润 迁粉躲 、 菜粉蛛 、 核型多角体病毒 、 交又感染
迁粉蝶 (c at oP sl’l’a Po 二an a F 。 ) , 又名铁刀木粉蝶 , 是铁刀木 、 腊肠 树 、 愈疮木等热带
林木的食叶害虫 。 虫情严重时 , 树木仅留下秃枝光杆 。 在海南省 , 该虫一年发生13 ~ 14 代 ,
终年危害。在广东 、广西 、 台湾、 福建等省 (区》也有分布 。 1 9 9 0年 , 在海南尖峰岭热带林业研
究所试验站树木园采到迁粉蝶幼虫自然催病死亡虫尸 , 从中分离出一种核型多角体病毒 。 本
文报道该病毒的分离 、 初步鉴定、 回接感染和对菜粉蝶 (P‘er is ra pae L . ) 交 叉感染试验的
结果 。
1 材料和方法
1
.
1 病弃的获得和初步鉴定
野外采集获得迁粉蝶幼虫 自然催病 虫尸 , 外形尚完整 , 轻刺表皮即破 , 流出呈灰白色浓
液 , 无臭味。 沾取灰白色浓液涂片 、 染色(1 . 0 %苦味酸一。. 5 % 氨基黑 10 B ) , 显 微 镜 下观
察 , 仅见 多角体样颗粒。 吸取少量灰白色浓液 , 稍作纯化处理 (加 1 m l蒸馏水吹打洗涤 , 台
式高速离心机5 0 0 r/ m in , 3 m in 沉淀。离心 、洗涤二轮次)后 , 加等体积的O。 1 m ol N a声 0 3一
。. 16 m ol N a cl 、 p H 10 . 8 的碱液降解 , 不同时间取样制备透射电子显微镜 样 品 , 碱解样品
经 2 %P T A (P H 7 . 0) 负染 , 未碱解样品不负染 。 JEM一 1 0 oC 电子显微镜下作病原形态学鉴
定 。
1
.
2 回接感染试脸
取适量灰 白色浓液 , 加入灭菌水 , 吹打均匀后 , 显微镜下计数 , 测得多角 体 为 1 . 2 x 1 o .
PIB s/ m l
, 涂抹浸润铁刀木嫩枝叶面 , 枝条水养保鲜 , 室内感染 4 0 头 2 一 5 龄期的迁粉蝶
幼 虫。 供食24 h 后更换充足的新鲜枝叶。 在同批幼虫中随机取25 头作健康对照 。 记录感病症
状 , 显微镜检查感病组N PV 病死亡虫数及对照组N PV 病 死亡虫数 , 最后计算感病死亡百分率 。
1
.
3 交叉感染莱粉级试脸
回接感染获得的典型 N PV 病死虫尸 , 经粗略纯化处理 (研磨 , 20 0 目尼 龙纱过滤 , 5 0
r / m in 离心 2 m in , 上清液再经 3 s oo r / m in 离心 2 5 m in , 取沉淀 ) , 用灭菌蒸馏水(加吐温一 8 0
到 0 . 2编 )配制成 1 . 2 x 10 . PIBs/ m l的多角体悬液 , 浸润甘兰叶面 , 在室内感染 3 一 5 龄期菜
粉蝶37 头 。 供食24 h 更换新鲜叶 。 对照组 15 头 , 以含。. 2 喻吐温一 80 的稀释水浸润甘兰叶代替
1 9 9 1一 07一 0 8收稿 。
杨明辉助理 研究员 , 梁世平 , 袁爱华 , 孙富林(中国科 学院武汉病称研究所 , 湖北 武昌 , ,3 。0 71 ) , 林尤 润 (中国林业
科 学研究院热带林业研究所 ) 。
2 期 杨明辉等 : 迁粉裸核型多角体病毒的初步研究
有毒叶。 病 死虫逐条涂片在显微镜下检查死因。 并按 N PV 常规提纯的方法【’J分别从感染迁
粉蝶和菜粉蝶虫尸中分离N PV , 在电子显微镜下作两种来源的 N PV 形态学比较 , 分析两者
的异同点 。
2 结果和分析
2
。
1 病毒鉴定结果
自然催病迁粉蝶虫尸液化 、 不臭的现象符合 N PV 病的临床症状。 电子显微镜下观察到灰
白色浓液中含有大量近似三角形 、 四边形和 圆形的多角体 , 直径 约 。. 7~ 1 . 6 协m , 长短直径
比约 1 . 0~ 1 . 3 , 平均为1 . 1( 图版 I 一 1 ) 。 多角体内含有数 目不等、 粗细不一的杆 状 病 毒 束
(图版 工一 2 ) , 病毒束内含 1 ~ 4 个约 52 n m x 3 50 n m 的杆状核衣壳 (图版 工一 4 )。 电镜下可
观察到少量异形多角体 , 形似两个多角体而成 (图版 I 一 1 箭头所示 )。
根据国际分类委员会《病毒分类与命名》的第四次报告 , 从形态学特征可初步鉴定该多角
体属杆状病毒科 A组成员 。
2
.
2 感染迁粉蟋结果
饲 N PV 的第二天 , 幼虫表现食欲不振 , 第三天开始死亡 , 第四天达死亡高峰 , 第六天死
亡率达10 0 % , 无细菌病因死亡 , 对照组无N PV 病死亡。 死亡虫尸倒挂 、液化呈灰白色浓液 ,
无臭味 , 与自然催病虫尸症状相 同 , 电子显微镜下病毒形态与原病毒亦相同。 也含有异形多
角体(图版 工一 3 )。 该感染结果证明所获 N PV 即为迁粉蝶幼虫 自然催病死亡病原 。
2
.
3 感染菜粉螺结果
饲 N PV 的第二天有幼虫开始化蛹 , 第三天幼虫表现明显食欲不振 , 第四天出现幼虫死亡
至第七天幼虫全部死亡 , 除两头蛹正常羽化外 , 其它蛹亦变黑死亡 。 最终死亡率为96 . 4 % 。 ’
在显微镜下对死亡幼虫逐条检查 , 均见大量多角体颗粒 , 对照组无多角体病死亡 。 幼虫死亡
病症 : 体色由绿色消褪为黄绿色 , 虫体软 , 肿胀不严重 , 内部组织液化 , 无 臭 味。 蛹 内亦
液化 。
电镜观察证明感染菜粉蝶获得的N PV 与迁粉蝶 N PV 有以下相似处 : ¹ 多角体的大小、
形态相同。 º 含有异形多角体 (图版 工一 5 ) 。 » 为 多粒包埋型 N PV , 病毒束内核衣壳 通 常
不超过 4 个 。 核衣壳约为 53 . 5 n m x 344 n m ( 图版 I 一6一7 ) , 与迁粉蝶原始 N PV 核衣壳 52
n m x 350 n m 相比 , 差异不显著 。
从以上结果分析说明感染菜粉蝶所得 NPV 与迁粉蝶 N PV 具有相似性 , 认为菜粉蝶的玫
死原因为饲 N P V 感染所致 。
3 讨论
对迁粉蝶自然催病病原物的形态学鉴定和回接感染 , 证明所获得的多角体是核型多角体
病毒 。 该病毒对菜粉蝶的感染结果证明也有明显的致死能力 。 在广谱杀虫剂 的研究中 , 该病
毒将是一种有意义的生物资源 。
杆状病毒的异形包涵体 , 在杆状病毒科 B 组即颗粒体病毒中较为多见 。 该病毒的异形多
竺耐2 3 0 林 业 科 学 研 究
角体的图像 , 为认识杆状病毒科A 组形态的多样性提供了新的证据 。
参 考
严家琪 , 胡国律 , 林栖风 , 等 . 昆虫病毒 核液的研究
学集刊第一 集 , 1 9 9 2 , 1 5 3 ~ 1 0 1 .
文 献
工 . 柞蚕和蓖麻蚕核吧多角体 D N 、的分离和提纯 .
P r e li川in a r夕 S tu d 夕 。林 C a to Ps ilia Po , , : a n a N P U
Y a n g M in g h u i L in Yo u d o n g L ia t g Sh iPili g Y u a n A ih u a S u n F u liri
A b str a e t A N PV s tr a in w a s iso la t e d fro m sPo n e a n e o u s d e a d m o r ta l la r v a e
o f C a to p silia p o , n a 儿a Fa b r ie iu s
.
T h e m o r ta lity o f C
。
p o 爪 a n a Ia r v a e w hie h w e re
in fe e te d b y th e N P V o f 1
.
2 x 1 0 3 PIB s / m l w a s 1 0 0 %
。
W he n th is N PV w a s
us e d to in fe e te d the P i
er a e 犷a p a o la r v a e o f th e 3 r d ~ st h in s ta r s w ith th e s a m e
e o n e e n tr a t io n
,
it sh o w e d 9 4
。
6 % m o r t a lity
.
T h e e r o s
一
in fe e t io n t e st re v e a le d
t h a t th is C
.
p o 沉a 龙9 N PV s tr a in 15 a u se fu l n a t u r a l r eso u rc e s in b ro a d s Pe e tr u m
in s e e t ie id e r e s e a r e h
。
K e y w o r d s C a才o p : ilia p o 从a n a , P ie ris r a Pa e , n u e le a r Po lyh e d r o s is v irus
(N PV )
, e r o s
一
in fe e t io n
Y a n g M in g h u i
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A s s ist a n t P ro fe s s o r
,
L ia n g S h iPin g
,
Y u a n 八 ihu a , Su n Fu lin (W u h a n In stltu te
o f V ir o lo g y
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Ch in e s e 八 e a d e m y o f S c ie n e e W u ha n j3 0 0 71 ), I
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in Y o u d o n g (1
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he R e s e a r e h In stitu te
o f T r o p ie a l Fo r e s tr y
,
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.
、
中林 1巧等三个抗溃疡病杨树新品种选育在京通过鉴定
杨树溃疡病是我国杨树干部重要病害之一 , 对杨树生长造成较大危害 , 如1 9 9洲卜北京大兴县主栽的小
美早杨彼疡病发病率达 10 写。 为了解决杨树生产中的这一问题 , 山中国林科院林业研究所等单位组成的课
题组 , 经过10 多年的联合攻关 , 取得重要成果。 1 9 93年 1 月 13 日在北京通过鉴定 。
专家们认为 , 此项研究在国内外首次选用69 杨为母本 , 欧亚黑杨及其种内杂种为父本进行了抗杨树溃
疡病杂交育种 , 选 出中林 1 1 5 、 中林 3 了9 、 中林34 三个抗溃疡病杨树新品种 。 经过13 年区域性栽培 、 接种对
比试验 , 与国内外现有良种北京杨 、 I一 2讨杨 、 沙兰杨等品种相比 , 属抗病虫良种 , 并具有速生 、 优质 、
易成活等优点。
中林1 15 等三个杨树新品种在华北地区进行了大面积推广应少11, l盯积达 1 万 hm “。 己列入国家和有关省
地的推广计划 , 取得了显著的经 济效益 。仅以推广的 1 万 h m “计算 , 可新增产值7 846 万元 , 年增金额 1 26 9 . 8万
元 , 新增税利 890 万元 。
专家们指出 , 该项研究 , 试验设计合理 , 符合育种程序 , 方法正 确, 数据可靠 , 在抗溃疡病杨树新 品
种选育方而达列了国际上 同类研究的先进水平。
(黄鹤羽)
杨明辉等 : 迁粉蝶核型多角体病毒的初步研究 图版 I
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l 迁粉蝶 N PV 的 多角休图像 , 箭头指示 一个异形 多角体 ,
2 一个迁粉蝶N PV 多角体的碱降解图像 ;
3 一个迁粉蝶N PV 异形多角体碱 降解图像 , 箭头指示多角体膜 ;
J 迁粉蝶N PV 的病毒束和正在释放的核衣 壳 ,
5 迁粉蝶 N P V 感染菜粉蝶获得的 多角体 图像 , 箭头指示异形 多角体 ,
6
、
7 迁粉蝶 N P V 感染菜粉蝶获得的病毒束和正 在释放的核衣壳 。