全 文 ：第 !" 卷 第 #$ 期
% $ # # 年 #$ 月
林 业 科 学
&’()*+(, &(-.,) &(*(’,)
./01!"!*/1#$
2345!% $ # #
舞毒蛾不同地理种群基于,Q-S分子标记的遗传分析
钱6路6安榆林6徐6梅6杨晓军6朱宏斌
"江苏出入境检验检疫局6南京 %#$$$#$
摘6要!6舞毒蛾是一种食性很广%危害很大的世界性林木害虫!根据其地理分布和生活特性!现在被分为亚洲型
和欧洲型 % 种& 对来自俄罗斯远东地区%蒙古%日本%美国和中国 9 个地理种群!共 %8 份舞毒蛾样品进行 ,Q-S分
子标记研究& 成功建立并优化舞毒蛾 ,Q-S分析体系!从 #8 对引物组合中筛选出 7 对扩增条带多%多态检出率高
的荧光标记引物组合!利用 ’)]A:$$$ 遗传分析仪进行毛细管电泳及数据分析!共检测到 9$" 个多态性位点& 通
过 S,qS软件对 ,Q-S数据进行 qShf和 *J树的聚类分析以及遗传距离分析!结果表明’ 9 个地理种群舞毒蛾明
显分成欧洲型"美国种群$和亚洲型!其中亚洲型又可分成俄罗斯%日本%中国及蒙古 7 个类群& 美国种群间遗传变
异比其他种群较大!中国种群与美国种群遗传距离最大!而与蒙古种群遗传分化最小& 从分子水平上研究舞毒蛾
不同种群的遗传分类情况!揭示利用 ,Q-S分子标记技术可以区分舞毒蛾不同地理种群的基因型!为研究舞毒蛾的
起源%入侵与扩散%遗传与变异以及检疫措施的制定等方面提供科学依据&
关键词’6舞毒蛾# ,Q-S# 分子标记# 遗传多样性
中图分类号! &"#:1"666文献标识码!,666文章编号!#$$# A"!::"%$####$ A$#$! A$"
收稿日期’ %$#$ A$7 A#$# 修回日期’ %$#$ A$: A$!&
基金项目’国家质检总局亚洲型和欧洲型舞毒蛾分子标记研究项目"%$$;(B%88$ # 科技部中美货物木质包装害虫调查监测及处理技术研
究国际合作项目"%$$;HQ,7#;9$$ &
=56.=’#&9/%/,0H%00*-*’$L*,4-#";%:.,"<&#$%,’/,0$;*L9"/9 D,$;!
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X/CNV4V5,33/CUDFE4/4?NDCEN/ECIK?D3I0UDV4CDYP4D/F IFU YD/0/EW3?ICI34NCDV4D3V! 4?NWMNCNUD[DUNU DF4/4?N,VDIF IFU
)PC/KNIF 4WKNV/XK/KP0I4D/FV5RNPVNU I@K0DXDNU XCIE@NF40NFE4? K/0W@/CK?DV@ ",Q-S$ 4/UN4N34ENFN4D3UD[NCVD4DNV
MD4?DF IFU I@/FE4?NEWKVW@/4? K/KP0I4D/FV5+?CNNX0P/CNV3NF4‘0IYN0NU ,Q-SKCD@NC3/@YDFI4D/FVMNCNPVNU /F %8 9!
A-&=1$VI@K0NV3/0N34NU XC/@ UDXNCNF40/3I4D/FV/XkPVVDI! f/FE/0DI! JIKIF! qFD4NU &4I4NV/X,@NCD3IIFU ’?DFI!
UN4N34DFEI4/4I0/X9$" K/0W@/CK?D3XCIE@NF4V5hNFN4D3VD@D0ICD4DNVYIVNU /F 4?NVNUI4IMNCN3I03P0I4NU IFU 30PV4NC
IFI0WVDVMIVKNCX/C@NU 4/ECIK?D3I0WUDVK0IWEC/PKDFEVYN4MNNF K/KP0I4D/FV59!A-&=1$VI@K0NVXC/@4?NVNICNIVMNCN
EC/PKNU 4/EN4?NC3/CCNVK/FUDFE4/4?NDC/CDEDF5+?NCNVP04VPKK/C4NU IF /YVNC[I4D/F 4?I4,@NCD3IF K/KP0I4D/F ?IVECNI4NC
ENFN4D3[ICDI4D/F 4?IF /4?NCK/KP0I4D/FVIFU ?IVI0/FENV4ENFN4D3UDV4IF3NMD4? 4?NK/KP0I4D/F /X’?DFI5+?NCNMIV4?N
V@I0NV4ENFN4D3UDXNCNF4DI4D/F YN4MNNF f/FE/0DIF K/KP0I4D/F IFU 4?N’?DFNVN5+?NCNVP04VUN@/FV4CI4N4?I4,Q-SIFI0WVDV
DVIVNFVD4D[N4N3?FDlPNX/CUDV4DFEPDV?DFEENF/4WKNVXC/@UDXNCNF4EN/ECIK?D3/CDEDFVIFU KC/[DUNVVPXD3DNF4IU[D3NX/C4?N
V4PUW/X4?N/CDEDFV/X4?NEWKVW@/4?! DF[IVD/F IFU KC/0DXNCI4D/F! ?NCNUD4WIFU [ICDI4D/F! IVMN0IVUN[N0/KDFElPICIF4DFN
@NIVPCNV5
>*9 ?,-(/’6EWKVW@/4?# @/0N3P0IC@ICZNC# I@K0DXDNU XCIE@NF40NFE4? K/0W@/CK?DV@",Q-S$# ENFN4D3UD[NCVD4W
6 6 舞 毒 蛾 " 9(G12’$-1 A-&=1$$ 属 鳞 翅 目
"-NKDU/K4NCI$! 毒 蛾 科 " -W@IF4CDUIN$! 毒 蛾 属
"9(G12’$-1$!其原产地为欧亚大陆!北到瑞典%挪
威%俄罗斯远东地区!南到非洲西北海岸线!东到日
本岛"hDNVN%’1*5! #;";$& 舞毒蛾的寄主范围广!危
害大!是世界性林业大害虫"王丽珍等! %$$8$&
S/EPN等"%$$"$根据雌性舞毒蛾翅的有无或飞
行能力的强弱!将舞毒蛾分为 7 个亚种!即欧美亚种
"9!A-&=1$A-&=1$$%亚洲亚种" 9!A-&=1$1&-1’-.1$%日
本亚种"9!A-&=1$Q1=#2-.1$& 而在这之前!欧洲亚种
被称为欧洲型舞毒蛾!而亚洲亚种和日本亚种则被
统称为亚洲型舞毒蛾"BNNFI! #;;!# #;;8# RI0FNC
6第 #$ 期 钱6路等’ 舞毒蛾不同地理种群基于 ,Q-S分子标记的遗传分析
%’1*5! #;;!# #;;9# GICIF3?DZ/[! #;:; $& #:8; 年!
欧洲型舞毒蛾被错误引入美国马萨诸塞州"Q/CYPV?
%’1*5! #:;8$!后在美国东北部和加拿大东南部迅速
扩散!为害林木面积达 %$$ 万 ?@% "钱天荣! %$$$$&
#;;# 年在加拿大温哥华港口附近首次发现亚洲型
舞毒蛾!随后在加拿大哥伦比亚%范库弗峰!美国华
盛顿%俄勒冈%北卡莱罗纳%爱达荷%得克萨斯等地也
相继发现"hDYY/FV! #;;;$& 美国对发现的疫情实施
了根除措施& 为了防止亚洲型舞毒蛾再次传入!美国
先后对来自俄罗斯远东地区%日本等地的船舶实施特
别检疫措施& %$$" 年以来!美国也曾多次与中国举
行会谈!提出拟对来自中国的船舶%货物及木包装实
施同类检疫措施& 因此!为了应对相关技术问题的需
要!避免来源地的混淆!研究舞毒蛾不同地理种群的
差异!提出其鉴定方法!显得极为重要&
尽管舞毒蛾存在生物学和形态学上的差异!但
至今仍没有完全可信的形态和行为特征可以用来区
分舞毒蛾不同基因型& 因此!生化标记和基因标记
技术常被用来区分舞毒蛾不同地理种群& 同工酶实
验揭示了日本%欧洲%美国种群间的基因差异
"TICCDV/F %’1*5! #;:7$!G/EUIF/MD3^等"#;;7$报道
了用线粒体 H*,作为舞毒蛾来源的示踪诊断!
SXNDXNC等"#;;9$运用 S’k与内切酶技术分析核糖
体 H*,!区分了亚洲和北美种群& 近年来!k,SH技
术和 ,Q-S技术也被用来作为舞毒蛾不同种群的分
子标记"hICFNC%’1*5! #;;8# kNDFNZN%’1*5! #;;;$&
,Q-S"I@K0DXDNU XCIE@NF40NFE4? K/0W@/CK?DV@$
是在 k,SH和 kQ-S的基础上发展起来的新一代分
子标记技术& 由于它既具有 k,SH标记的随机性!
方便性!又具有 kQ-S标记的专一性和可靠性!所以
被称为*最有力的分子标记+ "nIYNIP %’1*5! #;;7#
郑先云等! %$$7$& 笔者利用 ,Q-S技术研究了采
自俄罗斯远东地区%蒙古%日本%美国和中国 9 个地
理种群%共 %8 份舞毒蛾样品的遗传多样性!为研究
舞毒蛾的起源%入侵与扩散%遗传与变异以及检疫措
施的制定等方面提供科学依据&
#6材料与方法
@F@A供试昆虫
选用来自俄罗斯远东地区%蒙古%日本%美国和
中国 9 个地理种群!%8 份舞毒蛾成虫"卵$!另 % 份
栎毒蛾" 9(G12’$-1 G1’/0$1$样品作外类群分析!详
见表 #& 除黑龙江和吉林品系为作者采集外!其余
虫样均为美国农业部动植物检疫局王宝德博士馈
赠& 所有样品 A"$ d保存&
表 @A试验所用虫样信息!
)#2B@AL*,4-#";%:&,:#$%,’#’(9*#-,0:,&*:$%,’,0
=-3/)’$*#’(=-2$(,"*$ 地点
-/3I4D/F
简称
&?/C4X/C@
形态
f/CK?/0/EW
采集时间
ONIC/X
3/0N34D/F
俄罗斯! 沃斯托尼
./V4/3?FWW!kPVVDI
k.2# 成虫 IUP04 %$$"
俄罗斯! 沃斯托尼
./V4/3?FWW!kPVVDI
k.2% 卵 NEE %$$"
俄罗斯! 海参崴
.0IUD[/V4/Z! kPVVDI
k.-# 成虫 IUP04 %$$"
俄罗斯! 海参崴
.0IUD[/V4/Z! kPVVDI
k.-% 卵 NEE %$$"
俄罗斯! 海参崴
.0IUD[/V4/Z! kPVVDI
k.-7 成虫 IUP04 %$$"
俄罗斯! 纳霍德卡
*I?/UZI! kPVVDI
k*# 成虫 IUP04 %$$"
俄罗斯! 纳霍德卡
*I?/UZI! kPVVDI
k*% 成虫 IUP04 %$$"
俄罗斯! 斯拉维扬卡
&0I[WIFZI! kPVVDI
k& 卵 NEE %$$"
蒙古 f/FE/0DI fh# 成虫 IUP04 %$$"
蒙古 f/FE/0DI fh% 成虫 IUP04 %$$"
日本 JIKIF J,S# 成虫 IUP04 %$$"
日本 JIKIF J,S% 成虫 IUP04 %$$"
美国! 西弗吉尼亚州
RNV4.DCEDFDI! q&,
R.# 成虫 IUP04 %$$:
美国! 西弗吉尼亚州
RNV4.DCEDFDI! q&,
R.% 成虫 IUP04 %$$:
美国! 马萨诸塞州
fIVVI3?PVN4V! q&,
f,# 成虫 IUP04 %$$:
美国! 马萨诸塞州
fIVVI3?PVN4V! q&,
f,% 成虫 IUP04 %$$:
美国! 缅因州
fIDFN! q&,
f)# 成虫 IUP04 %$$:
美国! 缅因州
fIDFN! q&,
f)% 成虫 IUP04 %$$:
美国! 新泽西州
*NMJNCVNW! q&,
*J# 成虫 IUP04 %$$:
美国! 新泽西州
*NMJNCVNW! q&,
*J% 成虫 IUP04 %$$:
美国! 宾夕法尼亚州
SNFFVW0[IFDI! q&,
S,# 成虫 IUP04 %$$:
美国! 宾夕法尼亚州
SNFFVW0[IFDI! q&,
S,% 成虫 IUP04 %$$:
中国! 吉林
JD0DF! ’?DFI
J-# 成虫 IUP04 %$$;
中国! 吉林
JD0DF! ’?DFI
J-% 成虫 IUP04 %$$;
中国! 黑龙江
TND0/FE\DIFE! ’?DFI
T-J# 成虫 IUP04 %$$;
中国! 黑龙江
TND0/FE\DIFE! ’?DFI
T-J% 卵 NEE %$$;
美国 q&, -f# 成虫 IUP04 %$$;
美国 q&, -f% 成虫 IUP04 %$$;
66! -f#!-f%’ 栎毒蛾样本!作为外类群分析 9!G1’/0$1! X/C
/P4EC/PKV5
9$#
林 业 科 学 !" 卷6
@BCA主要试剂
限制性内切酶 <.#k%%I&%%"fG(公司$!+! A
H*,连接酶%J1SH*,聚合酶"+IZICI公司$# ,Q-S
接头’<.#k% IUIK4NC%I&%% IUIK4NC# ,Q-S引物’)$
和 f$"预扩增引物$%选择性扩增引物 )A,’,%f
A’,h%fA’,+%fA’+’!接头和引物均由英俊公
司合成!序列信息详见表 %# GN3Z@IF 公司 ’)]试
剂’H*,标准分子量"U*,&D^N&4IFUICU BD4A8$$$%
分离缓冲液 "VNKICI4D/F YPXNC$%分离胶 "VNKICI4D/F
EN0$%上样缓冲液"0/IUDFEYPXNC$&
表 CA荧光 =56.分析中的接头$预扩增和
选择性扩增引物序列!
)#2BCA[&%4,’<:&*,$%(*#(#"$,-/#’("-%+*-/
名称 *I@N 代码’/UN 序列 &NlPNF3NV
<.#k%接头 9bA’+’h+,h,’+h’h+,’’A7b
<.#k%IUIK4NC 9bA,,++hh+,’h’,h+’+,’A7b
I&%接头 9bAh,’h,+h,h+’’+h,hA7b
I&%IUIK4NC 9bA+,’+’,hh,’+’,+A7b
预扩增引物
SCN‘I@K0DXD3I4D/F KCD@NC
)$ 9bAh,’+h’h+,’’,,++’,A7b
f$ 9bAh,+h,h+’’+h,h+,,’A7b
选择扩增引物
&N0N34D[NI@K0DXD3I4D/F
KCD@NC
)A,’, 9bAh,’+h’h+,’’,,++’,’,A7b
fA’,h 9bAh,+h,h+’’+h,h+,,’,hA7b
fA’,+ 9bAh,+h,h+’’+h,h+,,’,+A7b
fA’+’ 9bAh,+h,h+’’+h,h+,,’+’A7b
66!)A,’,经 ’O9 荧光标记!)A,’,分别与 fA’,h%fA
’,+%f A’+’组成引物对& )A,’, MIV0IYN0NU YW’O9! IFU
3/@YDFNU MD4? fA’,h!fA’,+!fA’+’5
@FEA试验方法
#171#6H*,提取6基因组 H*,的提取参照 G/W3N
等"#;:;$的方法!根据实际情况对试验步骤做了部分
修改& 用镊子挑取舞毒蛾成虫胸部肌肉或单个卵块
中挑 9 粒卵!用蒸馏水冲洗 7 遍!后将样品置于
#19 @-离心管中& 加8$$ $-S+)浸泡液于离心管中
在! d条件下过夜& 弃浸泡液!在解剖镜下挑取所浸
泡胸部肌肉或卵粒于新离心管中!用剪刀充分剪碎后
加匀浆缓冲液8$$ $-!99 d水浴过夜& 取水浴材料
加8$$ $-饱和酚!离心管上下颠倒% @DF混匀后放入
低温离心机: $$$ C)@DF A#离心#$ @DF& 离心结束取
上清液重复上步操作 # 次& 取上清液加8$$ $-氯仿a
异戊 醇! 颠 倒 % @DF 混 匀 后 放 入 低 温 离 心 机
: $$$ C)@DF A#离心#$ @DF& 取上清液加预冷 #$$>乙
醇"预置于 A" d$# @-混匀后放入 A%$ d冰箱保存
% ?沉淀 H*,& 于低温离心机 #% $$$ C)@DF A# 离心
9 @DF!弃 上 清 液 加 预 冷 乙 醇 " "9>$ # @-! 在
#% $$$ C)@DF A#离心9 @DF"此步重复 # 次$& 弃上清
液加预冷乙醇"#$$>$ # @-!在#% $$$ C)@DF A#离心
9 @DF!弃上清液取沉淀!晾干后加 7$ $-# e+)
"#$ @@/0)-A# +CDVA’0! KT:1$# # @/0)-A# )H+,!
KT:1$$溶解 H*,!放入 A%$ d冰箱中保存&
#171%6酶切&连接6采用限制性内切酶 <.#k%和
I&%%对 H*,进行双酶切& 酶切体系包括"总体积
%$ $-$’UUT%2#%1"9 $-!#$ e GPXNC%1$ $-!I&%
% "# q)$-A# $ %19 $-& <.#k% " #$ q)$-A# $
$1%9 $-!模板 H*,"#$$ FE)$-A# $ %19 $-& 7" d
酶切7 ?!89 d 处理#$ @DF& 酶切完成的 H*,加入
+! AH*,连接酶和人工接头!#8 d连接过夜&
#17176预扩增反应6取 ! $-酶切连接产物!加人
f$%)$"79 FE)$-
A#$各 # $-!#! $-,Q-S’/CNfD_!
包 含 UUT%2 "1: $-! fE’0% #18 $-! U*+SV
"%19 @@/0)-A#$ #18 $-! +Il 酶 " # q)$-A# $
# $-! #$ eGPXNC% $-! S’k反应 条件’ ;! d
% @DF# ;! d %$ V! 98 d 7$ V! "% d % @DF!
%$ 个循环# 8$ d 7$ @DF# 产物用 $1# e+)稀释 %$
倍备用&
#171!6选择性扩增反应6取 ! $-稀释后预扩增产
物!加入选择扩增引物组合 % $-!#! $-,Q-S’/CN
fD_& 反应条件’ ;! d % @DF# ;! d %$ V! 88 d
7$ V!"% d % @DF!每个循环降 # d!共 #$ 个循环#
;! d %$ V!98 d 7$ V!"% d % @DF!%$ 个循环#
8$ d 7$ @DF&
#17196’)]毛细管电泳检测 6选择性扩增的
,Q-S产物在 ’)]:$$$ hNFN4D3,FI0WVDV&WV4N@仪器
上进行毛细管电泳检测& 每个反应孔加人 7 $-稀
释 #$ 倍后的选择扩增产物!$1% $-标准分子量!
%$ $-上样缓冲液和约 #$ $-矿物油!上机检测& 电
泳结束后!通过软件自动采集数据!参照分子量内标
选取各引物对在 9$ c!$$ YK 的检测区域内的扩增
片段进行分析&
#17186数据分析6由 ’)]:$$$ 遗传分析仪采集数
据分析得到*$+%*#+矩阵!将每对引物的原始矩阵
合并为综合原始矩阵!用作分析& 用 S,qS! YN4I
!1$Y#$ 软件计算种群遗传距离并进行非加权组平
均法"qShf,$和邻结法"*J$聚类树分析&
%6结果与分析
CF@A舞毒蛾 =56.试验体系的优化
,Q-S分析对样品 H*,的质量要求较高!笔者
曾尝试使用不同方法提取样品的 H*,!最终使用
#171# 中描述的方法进行操作!所提样品的 H*,纯
度较好!2H%8$a%:$值在 #18 c#1; 之间!琼脂糖凝胶电
泳检测结果显示基因组 H*,较为完整!适合 ,Q-S
分析& <.#k%和 I&%%同步酶切和分开酶切效果相
8$#
6第 #$ 期 钱6路等’ 舞毒蛾不同地理种群基于 ,Q-S分子标记的遗传分析
当!建议双酶切同时进行!如图 # 所示& 还比较了酶
切%连接 # 步法和 % 步法的效果!发现酶切后再连接
比 # 步法更加稳定可靠& 预扩增产物经琼脂糖电泳
检测呈现弥散状!片段大小集中在 %$$ c# $$$ YK!
如图 % 所示&
图 76部分样品 ,Q-S荧光图谱
QDE576HI4I/XXD[N9!A-&=1$VI@K0NVX0P/CNV3NF3NVKN34CIYW,Q-SIFI0WVDV
引物组合’)A,’,afA’+’# IAN依次为样品 J-#!fh#!k*#!JS#!S,#5SCD@NC3/@YDFI4D/FV’
)A,’,afA’+’5IAN’ J-#!fh#!k*#!JS#!S,#
图 #6所提部分样品 H*,及酶切电泳
QDE5#6)_4CI34D/F IFU UDENV4D/F /XVI@K0NV4N@K0I4NH*,
# 为 H*,fICZNC%$$$! % 为 H*,样品! 7!! 为 <.#k%单酶切!
9!8 为 <.#k%aI&%%双酶切# %! 7! 9 为样品 -f#!!! 8 为样品
J-#& -IFN#! H*,fICZNC%$$$# -IFN%! -f# H*,# -IFNV7!!!
<.#k% UDENV4D/F# -IFNV9!8! <.#k%aI&%% UDENV4D/FV5
图 %6部分样品预扩产物电泳检测
QDE5%6SCN‘I@K0DXD3I4D/F EN0N0N34C/K?/CNVDV/X
9(G12’$-1 A-&=1$VI@K0NV
#’ H*,fICZNC%$$$# % A;’ k.2#!k.-#!k*#!k&!fh#!J,S#!
R.#!f,#
CFCA=56.扩增片段多态性
试验选用了 #8 对引物组合进行选择扩增!根据
最后的毛细管电泳峰图显示!确定了 )A,’,afA
’,h%)A,’,afA’,+%)A,’,afA’+’这 7 对
引物组合进行 ,Q-S分析& 图 7 是部分代表性样品
的 ,Q-S荧光图谱& ’)]A:$$$ 遗传分析仪是根据
"$#
林 业 科 学 !" 卷6
荧光信号强度来记录多态位点的信息!因此要比传
统银染法更加灵敏%精确!检测到的多态性位点相对
也更加丰富& 上述 7 对引物分别测定到 #8;!#8$!
#": 共计 9$" 个多态性位点&
CFEA种群遗传多样性
用 S,qS! YN4I!1$Y#$ 软件计算 %8 份舞毒蛾样
本基于 ,Q-S数据的遗传距离!7 对引物检测的数据
分析表明’ 俄罗斯种群内遗传距离为$1$7; 77 c
$1#8% ;%# 蒙古种群内遗传距离为$1$9$ 98# 中国种
群内遗传距离为$1$!! ;! c$1#$8 "!# 日本种群内遗
传距离为$1$8# :$# 美国种群内遗传距离$1$!! ;! c
$1%!" #;"表 7$& 中国种群与俄罗斯%蒙古%日本和美
国种群的平均遗传距离分别是$1#"# "!!$1$:" $:!
$1%77 #!!$1%;8 79&以上数据表明’ 美国种群间遗传
变异比其他种群较大!中国种群与美国种群遗传分化
最大!而与蒙古种群遗传分化最小&
表 EACV 份舞毒蛾样本基于 =56.数据的基因差异!
)#2BEAL*’*$%:(%00*-*’:*,0CV =-3/)’$*/#+"&*/2#/*(,’=56.(#$#
6 6 # % 7 ! 9 8 " : ; #$ ## #% #7
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66!对角线上为遗传距离!对角线下为多态位点差异数& hNFN4D3UDV4IF3N"IY/[NUDIE/FI0$ IFU K/0W@/CK?D3UDXNCNF3N" YN0/MUDIE/FI0$5
:$#
6第 #$ 期 钱6路等’ 舞毒蛾不同地理种群基于 ,Q-S分子标记的遗传分析
CFGA聚类分析
基于 ,Q-S分子标记的 $! # 数据矩阵! 用
S,qS! YN4I!1$Y#$ 软件中 qShf,和 *J法构建
了本试验 %8 份舞毒蛾和 % 份栎毒蛾的树状图 "图
!!9$& 从图 ! 可以看出’ #$ 份来自美国的舞毒蛾
构成一个单系类群!并得到 #$$>的支持率# 余下的
#8 份亚洲舞毒蛾聚为一类!支持率是 "7>& 亚洲型
又可细分为 7 个小类群!俄罗斯%日本各自聚为一
支!支持率分别为 8%>和 #$$>!中国和蒙古聚为一
支!支持率为 #$$>& 本文使用的 7 对引物组合中
任一对都能将不同地理种群的舞毒蛾区分开!但为
了增加准确性和可信度!把 7 组引物所得的所有数
据一同分析!最后通过 % 种计算方法得到的聚类树
结果一致&
图 !6%8 份舞毒蛾样品及 % 份栎毒蛾样品
基于 ,Q-S分析的 qShf,聚类图
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/P4EC/PKVCN[NI0NU YWqShf,30PV4NCIFI0WVDV/XENFN4D3VD@D0ICD4DNV
76讨论
,Q-S分子标记对于检测物种不同种群之间的
遗传变异具有高的灵敏性!是一种高效的分子标记
技术"成飞雪等! %$$9# 罗倩等! %$$"# 杜传印等!
%$$:# 上官凌飞等! %$$;$& kNDFNZN等"#;;;$利用
传统聚丙烯胺银染的方法成功对不同地理种群舞毒
蛾进行遗传分析!本文利用较少的不同引物组合成
图 96%8 份舞毒蛾样品及 % 份栎毒蛾样品
基于 ,Q-S分析的 *J聚类图
QDE59 6 HNFUC/ECI@ /X%8 9!A-&=1$DV/0I4NVIFU % 9!G1’/0$1
/P4EC/PKVCN[NI0NU YW*J30PV4NCIFI0WVDV/XENFN4D3VD@D0ICD4DNV
功建立并优化了舞毒蛾 ,Q-S分析体系!并利用
’)]A:$$$ 遗传分析仪对 ,Q-S的扩增产物进行毛
细管电泳!自动检测条带和分析结果!简化了传统的
电泳及银染的步骤!提高了 ,Q-S结果的灵敏性%准
确性和重复性& 由此可见!,Q-S技术及其改良技
术可以很好地应用于种群遗传分化的研究&
kNDFNZN等 "#;;;$分析了欧洲%亚洲%北美种
群的遗传关系!聚类分析显示欧洲相同地理种群
或邻近地理种群能够聚在一起!但未详细给出亚
洲种群和北美种群的聚类结果!本文在此基础上
利用 7 对荧光引物组合的 ,Q-S多态性分析!准确
测定了亚洲和北美 9 个不同地理来源!共 %8 份舞
毒蛾样品的基因关系!qShf和 *J树的聚类分析
均将能将这 9 个地理种群分为欧洲型"北美种群$
和亚洲型!其中亚洲型又可分为俄罗斯%日本%中
国及蒙古 7 个类群& 聚类结果与地理来源具有明
显的相关性& 美国种群间遗传变异比其他种群较
大!中国种群与美国种群遗传距离最大!而与蒙古
种群遗传分化最小& 本研究丰富了舞毒蛾不同地
理种群的遗传分化研究成果!为揭示舞毒蛾的起
源%入侵与扩散%遗传与变异以及检疫措施的制定
等提供了科学依据&
;$#
林 业 科 学 !" 卷6
参 考 文 献
成飞雪! 成新跃! 谢丙炎5等5%$$91松材线虫种群遗传多样性,Q-S
标记的建立及其应用5植物病理学报! 79 "9$ ’ !#$ A!#;1
杜传印! 王玉军! 李斯深!等5%$$:17; 个烤烟种质亲缘关系的
,Q-S分析5中国农业科学! !# ";$ ’ %"!# A%"!"5
罗6倩! 冯6夏! 吕利华!等5%$$"1小菜蛾对阿维菌素抗性基因的
,Q-S连锁图谱的构建5昆虫学报! 9$ "9$ ’ !"! A!:$1
钱天荣5%$$$1舞毒蛾在美国发生危害及美国农业部采取的措施5
植物检疫! #! "9$ ’ 7#" A7#:1
上官凌飞! 李晓颖! 房经贵!等5%$$;1果梅"@$020&G0G%$品种的荧
光 ,Q-S指纹分析5果树学报! %8 "!$ ’ !"9 A!:$1
王丽珍! 段立清! 特木钦!等5%$$81寄主植物对舞毒蛾生长发育的
影响5中国森林病虫! %9"#$ ’ %# A%71
郑先云! 马恩波! 郭亚平5%$$71,Q-S分子标记技术在昆虫学研究
中的应用5昆虫知识! !$"9$ ’ !$9 A!$;1
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!责任编辑6朱乾坤"
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