全 文 ：利用 AFLP分子标记鉴定新疆梨的分类地位
鲁凤娟　(中国环境管理干部学院,河北秦皇岛 066004)
摘要　[目的 ]为新疆梨的分类地位提供DNA水平上的依据。 [方法]利用 AFLP分子标记技术 ,通过聚类分析和遗传相似系数分析 ,对
新疆梨进行分类研究。 [结果]当阈值为 15时 ,新疆梨品种兰州长把和花长把首先聚在一起 ,然后再与西洋梨品种巴梨、红巴梨、红茄、
茄梨、保利阿斯卡、朱丽比恩和新疆梨品种其力阿木提聚在一起。 7个新疆梨品种中 ,群体内品种之间欧式距离为 2.646 ～ 10.050,与砂
梨系统、西洋梨系统 、白梨系统 、秋子梨系统各品种间最小欧式距离分别为 7.746、7.746、7.810、8.165。 [结论]新疆梨与西洋梨系统有
较近亲缘关系。
关键词　分子标记;新疆梨;分类地位;AFLP
中图分类号　S661.2　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2010)05-02281-02
ClassificationPositionofXinjiangPearIdentifiedbyAFLP
LUFeng-juan　(ChinaEnvironmentalManagementColege, Qinhuangdao, Hebei066004)
Abstract　[ Objective] TheaimwastoprovideDNAlevelbasisforXinjiangPearclassificationposition.[ Method] Throughclusteranalysis
andgeneticsimilaritycoeficientanalysis, theclassificationstudyonXinjiangPearwascarriedoutbyusingAFLPmolecularmarkertechnique.
[ Result] Whenthethresholdvalueis15, XinjiangPearcultivarLanzhouchangbaholdtogetherwithHuachangbafirst, thenwithPyruscommu-
nisL.cultivarsBali, Hongbali, Hongqie, Qieli, Baoliasika, ZhulibienandXinjiangPearcultivarQiliamuti.AmongsevenXijiangPearculti-
vars, theeuclideandistanceamongspecieswithinthegrouprangedfrom2.646to10.050.AndthesmalesteuclideandistancebetweenXin-
jiangPearandP.BretschneideriRehd, P.communisL., P.usuriensisMaxim, andP.pyrifoliaNakaiwere7.746、7.746、7.810、8.165re-
spectively.[ Conclusion] XinjiangPearhastheclosestrelationshipwithP.communisL..
Keywords　Molecularmarker;XinjiangPear;Classificationposition;AFLP
基金项目　河北省自然科学基金项目(302240)。
作者简介　鲁凤娟(1978-),女 ,河北昌黎人 ,讲师 ,从事园艺与绿色食
品研究。
收稿日期　 2009-12-04
　　新疆梨产于新疆 、青海 、甘肃等省区 ,其种果形近似西洋
梨 ,惟果柄特长 ,而叶片具有锐锯齿 ,形态变异很大 。很多学
者对其进行了形态学 、酶学 、孢粉学的研究 ,但关于分类地位
一直存在争议 。为了对新疆梨的分类地位提供 DNA水平上
的依据 ,笔者选用 44份材料 ,利用 AFLP分子标记技术进行
了分析 ,着重探讨了新疆梨在 DNA水平上的分类地位 ,旨在
为其分类归属提供依据。
1　材料与方法
1.1　供试材料及试剂　供试材料取自中国农业科学院果树
研究所国家梨种质资源圃(辽宁兴城)和河北农业大学标本
园 ,共 44个品种 ,其中包括 7个新疆梨品种(表 1)。试剂:
MseI购自 NewEnglandBiolabs公司;T4DNAligase购自 Promega
表 1　用于 AFLP分析的 44个梨属植物供试材料
Table1　44testedPyrusmaterialsusedforAFLPanalysis
编号
No.
品种
Cultivars
所属系统
System
编号
No.
品种
Cultivars
所属系统
System
1 王子廿世纪 Wangziershishiji 砂梨 23 胎黄梨Taihungli 白梨
2 爱甘水 Aiganshui 砂梨 24 金花梨Jinhuali 白梨
3 新星 Xinxing 砂梨 25 金花 4号 Jinhua4hao 白梨
4 黄金 Jinxing 砂梨 26 苹果梨Pinguoli 不详
5 今村秋 Jincunqiu 砂梨 27 苹香Pingxiang 苹果梨 ×延边谢花甜
6 巴梨 Bali 西洋梨 28 锦香Jinxiang 南果梨 ×巴梨
7 红巴梨 Hongbali 西洋梨 29 中梨 1号 Zhongliyihao 新世纪 ×早酥
8 红茄 Hongqie 西洋梨 30 贵妃Guifeili 西洋梨
9 保利阿斯卡 Baoliasika 西洋梨 31 天生伏Tianshengfu 白梨
10 朱丽比恩Zhulibien 西洋梨 32 早熟句句 Zaoshujuju 新疆梨
11 其力阿木提 Qiliamuti 新疆梨 33 爱宕Aidang 砂梨
12 武威冰珠梨 Wuweibingzhuli 新疆梨 34 雪花Xuehua 白梨
13 花长把 Huachangba 新疆梨 35 晋酥Jinsu 白梨
14 兰州长把Lanzhouchangba 新疆梨 36 秦丰Qinfeng 白梨
15 库尔勒香梨 Kuerlexiangli 新疆梨 37 黄县长把 Huangxianchangba 白梨
16 南果 Nanguo 秋子梨 38 柠檬黄Ningmenghuang 京白梨 ×西洋梨
17 红南果 Nanguoli 秋子梨 39 栖霞大香水 Qixiadaxiangshui 白梨
18 小香水 Xiaoxiangshui 秋子梨 40 黄酸梨Huangsuanli 新疆梨
19 鸭梨 Yali 白梨 41 二宫白Ergongbai 鸭梨 ×真瑜
20 晋县大鸭梨 Jinxiandayali 白梨 42 铁头Tietou 不详
21 赵县大鸭梨 Zhaoxiandayali 白梨 43 京白Jingbai 秋子梨
22 垂枝鸭梨Chuizhiyali 白梨 44 茄梨Qieli 西洋梨
公司;EcoRI, TaqDNApolymerase和 dNTP购自大连宝(TaK-
aRa)生物工程有限公司;所用的接头 、引物由上海生工生物
工程有限公司合成;其他试剂均购自保定市化学试剂经
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2010, 38(5):2281-2282 责任编辑　李婷婷　责任校对　傅真治
营部。
1.2　方法
1.2.1　DNA提取 。健康植株新梢上的成熟叶片用于提取
DNA, DNA提取采用 CTAB法 [ 1-2] 。
1.2.2　AFLP分析。参照鲁凤娟等 [ 3]的方法。应用筛选出
的 10对引物组合(表 2)进行扩增。
表 2　筛选引物的名称及其选择性碱基
Table2　Thescreeningprimersandtheirselectivebases
引物组合
Primercombination
选择性碱基
Selectivebases
引物组合
Primercombina-
tion
选择性碱基
Selectivebases
M2/E5 M-CAG/E-ACG M5 /E6 M-CTC/E-AGCM2/E6 M-CAG/E-AGC M6 /E5 M-CTG/E-ACGM2/E7 M-CAG/E-AGG M6 /E7 M-CTG/E-AGGM3/E8 M-CAT/E-ACT M7 /E5 M-CTT/E-ACGM5/E4 M-CTC/E-ACC M7 /E6 M-CTT/E-AGC
1.2.3　结果记录。每个引物的扩增产物选稳定而清晰的条
带作为统计数据。 “有 ”条带记为 “1”, “无 ”记为 “0”。最后
将多态性统计数据输入计算机。
1.2.4　聚类分析。利用统计软件 SPSSforWindows计算供
试材料之间的欧氏距离。利用离差平方和法进行聚类分析 ,
输出欧氏距离表并产生聚类树状图 。
2　结果与分析
2.1　聚类结果　从构建的 44个梨品种类型的聚类图(图 1)
可知 ,当阈值为 15时 ,新疆梨品种兰州长把和花长把首先聚
在一起 ,然后再与西洋梨品种巴梨 、红巴梨 、红茄 、茄梨 、保利
阿斯卡 、朱丽比恩和新疆梨品种其力阿木提聚在一起 。
图 1　供试部分梨属植物基于 AFLP的聚类树状图
Fig.1　DendrogramofsometestedPyrusmaterialsbasedon
AFLP
2.2　欧式距离　根据 AFLP扩增的结果可以计算出在 7个
新疆梨品种中 ,群体内品种之间欧式距离为 2.646 ～ 10.050,
与砂梨系统 、西洋梨系统 、白梨系统和秋子梨系统各品种间
最小欧式距离分别为 7.746、7.746、7.810和 8.165。说明新
疆梨与砂梨系统 、西洋梨系统有较近的亲缘关系。
3　结论与讨论
20世纪 50年代中期 ,俞德浚教授把新疆梨从别的梨种
中分离出来 ,并在《中国果树分类学 》中确立了新疆梨的独立
地位 ,并认为新疆梨是西洋梨和白梨的杂交种 [ 4] 。 2001年 ,
Wen等 [ 5]对原产中国的梨属植物 13个种进行分析 ,探讨了
新疆梨的分类地位。李秀根等 [ 6] 2002年利用花粉形态数量
化分析对中国梨属植物起源 、演化和分类进行进一步分析 ,
发现秋子梨与新疆梨的亲缘关系较密切 ,这说明 3个系统在
遗传上具有相同或相似的亲代。 Kimura等 [ 7]利用 SSR标记
技术对亚洲梨(28日本梨和 19中国梨)和欧洲梨进行了 SSR
分析发现中国梨中的白梨 、砂梨和新疆梨并没有明显区分
开 , 3个豆梨类型也没有聚在一起 。新疆梨之所以没有和白
梨及砂梨区分开 ,可能与所用新疆梨在基因组成上更偏向于
白梨或砂梨有关。赵国芳 [ 8]研究表明 ,新疆梨与白梨系统 、
西洋梨系统有较近的亲缘关系 ,可能为白梨与西洋梨的杂交
品种。与邹乐敏 [ 9]通过孢粉学研究结果一致 。该试验结果
标明 , 7个新疆梨品种与砂梨系统 、西洋梨系统 、白梨系统 、秋
子梨系统各品种间最小欧式距离分别为 7.746、7.746、
7.810、8.165。聚类结果表明 ,当阈值为 15时 ,新疆梨品种兰
州长把和花长把首先聚在一起 ,然后再与西洋梨品种聚在一
起。综合研究表明 ,新疆梨与西洋梨系统有较近亲缘关系 。
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