全 文 ：第 wt卷 第 u期
u s s x年 v 月
林 业 科 学
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栓皮栎体胚诱导关键影响因素研究
张存旭 姚增玉 赵 忠
k西北农林科技大学 杨凌 ztutssl
关键词 } 栓皮栎 ~未成熟合子胚 ~体胚发生
中图分类号 }≥zt{1wy ~≥zuu1vn z ~±|wv1t 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kussxlsu p stzw p sw
收稿日期 }ussw p sz p tx ∀
基金项目 }陕西省自然科学研究项目kussu≤tsvl和黄土高原林木培育实验室开放研究课题kussul ∀
ΦαχτορσΙνφλυενχινγ τηεΙνδυχτιον οφ Σοµατιχ Ε µ βρψογενεσισιν Θυερχυσϖαριαβιλισ
«¤±ª≤∏±¬∏ ≠¤²  ±¨ª¼∏ «¤² «²±ª
k Νορτηωεστ ΣχιpΤεχη Υνιϖερσιτψοφ Αγριχυλτυρε ανδ Φορεστρψ Ψανγλινγ ztutssl
Αβστραχτ} Œ°°¤·∏µ¨ ½¼ª²·¬¦ °¨¥µ¼²¶²© Θυερχυσ ϖαριαβιλισ º¨ µ¨ ¤¶ ¬¨³¯¤±·¶·²¬±§∏¦¨ ¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶q≥¨ √¨ µ¤¯ ©¤¦·²µ¶
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Κεψ ωορδσ} Θυερχυσϖαριαβιλισ~¬°°¤·∏µ¨ ½¼ª²·¬¦ °¨¥µ¼²~ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶
栓皮栎k Θυερχυσϖαριαβιλισl广泛分布于华北 !华南 !西南地区 o除能进行木材 !薪材 !食用菌 !天麻 !橡子 !栲
胶生产外 o还是最主要的软木资源树种 ∀栓皮栎通常采用种子繁殖 o由于橡实象鼻虫的侵害和种子不耐储
藏 o加之扦插繁殖困难 o目前主要依靠天然更新k闻天声 ot||tl ∀利用器官发生和体细胞胚胎发生离体繁殖
栎类树种优良基因型k张存旭等 oussw¦l o国外已有不少研究报道k • ¬¯«¨¯° ousss ~°∏§§¨³«¤·ετ αλqot||z ~
•²°¤±² ετ αλqot||ul o虽然已有栓皮栎茎段离体培养的初步研究k张存旭等 oussw¤~ussw¥l o体胚再生植株的
研究尚属空白 ∀本试验以栓皮栎未成熟合子胚为材料 o研究了基本培养基 !培养条件 !采样时期 !激素 !基因
型 !手术方式等对体胚诱导的影响 ∀
1 材料与方法
t qt 材料 未成熟合子胚 ∀ussu年 z月中旬 !{月中旬 oussv年 y月中旬 !z月中旬 o于陕西省周至县楼观台
镇西楼村西南紫云殿东侧栓皮栎天然林中 o从彼此相距 xs °以上的 w株树上采集未成熟果实 o用塑料袋分
装带回实验室 o放入 w ε 的冰箱内保存备用 ∀
t qu 方法 tl表面消毒 接种前以修枝剪剥去壳斗 o取出完整小坚果用自来水冲洗干净 ∀先放入 zs h的
酒精中 vs¶o接着在 s qt h氯化汞中消毒 tx ∗ us °¬±o最后用无菌水冲洗 v ∗ x次 ∀无菌条件下用解剖刀剥去
果皮 ∀z !{月份所采的材料去除种皮后接种 ~y月份所采的材料将种子取出后 o用解剖针将种皮扎破伤口向
下接种于培养基上 o而并不去掉种皮和胚乳 ∀ul体胚诱导培养基 ≠以 ≥ !• ° 为基本培养基 o同时添加
t qs °ª#pt×⁄和 u ow2⁄~以 ≥为基本培养基 o单独添加 s !s qx !t qs !u qs °ª#pt y2…„ ~≈以 ≥ 为基本培
养基 o同时添加 s !s qx !t qs !u qs °ª#pt y2…„和 s qt !s qx °ª#ptu ow2⁄∀vl光照条件试验 将 ussu年 z月采
集的未成熟合子胚接种于 t号体胚诱导培养基上 o分光 !暗 u种培养条件进行培养 ∀wl合子胚采样时期试验
将 ussu年 {月中旬 !ussv年 y月和 z月中旬采自同一母树的未成熟合子胚接种于 u号体胚诱导培养基上 ∀
xl母树基因型试验 将 ussv年 z月采自 w株树上的未成熟合子胚 o分别接种于添加 s qx °ª#pt y2…„的 ≥
培养基上 ∀yl合子胚手术试验 将 ussv年 z月采自同一株树上的合子胚切去部分器官 o分别以 ≠近根端的
半个胚 ~具胚轴的整片子叶 ~≈无胚轴的整片子叶 ~…具胚轴的整片子叶作为外植体 o分别接种于添加 s qx
°ªqpty2…„的 ≥培养基上 o全胚为对照 ∀zl培养环境 培养室温度kux ? vl ε o光照强度 t sss ∗ u sss ¬¯o
光照周期 ty «#§pt o相对湿度 ws h ∗ zs h ∀暗培养置于同一温度条件下 o无光照 o并在培养瓶上覆 u层黑布 ∀
{l统计分析 所有处理均为 ts个外植体 o重复 v次 ∀以上各试验中 o外植体首先在上述培养基中诱导 w ∗ x
周 o再转入相应的无激素培养基中诱导体胚的分化和发育 ∀{周后观察记录体胚诱导情况 ∀采用 ≥„≥ 软件
对数据进行处理 ∀|l形态观察 采用 ²·¬¦解剖镜观察外部形态并记录照相 ∀
2 结果与分析
u qt 基本培养基对体胚诱导的影响 将栓皮栎未成熟合子胚以全胚的方式接种于同时添加 t qs °ª#pt
×⁄和 u ow2⁄的 ≥和 • ° 培养基上 ot周左右即见在伸长的胚轴上有白色半透明或无色透明的早期体胚 o
以及颗粒状愈伤组织 ∀诱导率见表 t o与 • ° 相比 o培养于 ≥上的合子胚不但生长健壮 o胚轴伸长迅速 o诱
导出的体胚数量较多 o个体较大 o而且诱导率也较高k Φt o| € y| quv o Π s qsss tl ∀
表 1 不同培养基 !培养条件下的体胚诱导率
Ταβ . 1 Τηεινδυχτιον ρατεσ οφ εµ βρψο χυλτυρεδ ιν ϖαριουσ
βασαλ µεδιυµ ανδ χονδιτιονσ
培养基
 §¨¬∏°
培养条件
≤∏¯·∏µ¨
¦²±§¬·¬²±
外植体数
‘∏°¥¨µ²©
¬¨³¯¤±·¶
诱导胚数
‘∏°¥¨µ²©
¬±§∏¦¨§ °¨¥µ¼²¶
诱导率
Œ±§∏¦·¬²±
µ¤·¨Πh
≥ 光培养 ¬ª«· vs ux {v qv暗培养 ⁄¤µ® vs uv zy qz
• ° 光培养 ¬ª«· vs tx xs qs暗培养 ⁄¤µ® vs tw wy qz
表 2 不同采样时期体胚诱导率 ≠
Ταβ . 2 Τηεινδυχτιον ρατεσ οφ εµ βρψο χυλτυρεδ ιν µεδιυµ
χολλεχτεδ ατ τηε ϖαριουσ δατε
y2…„Πk°ª#ptl y月中旬¬§§¯¨²©∏±¨
z月中旬
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{月中旬
¬§§¯¨²© „∏ª∏¶·
s v qv ty qz ¦ v qv ¥
s qx v qv xv qv ¥ us qs ¤
t qs y qz yv qv ¥ vv qv ¤
u qs y qz {y qz ¤ uv qv ¤
平均  ¤¨± { q| ¦ y| qu ¤ ut qt ¥
≠不相同字母表示有显著差异kΑ€ s qsxl ∀  ¤¨±¶º¬·«§¬©©¨µ¨±·
¯¨ ·¨µ¶¤µ¨ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·§¬©©¨µ¨±·¤··«¨ Π€ s qsx ¯¨ √¨ ¯ k⁄∏±¦¤±. ¶·¨¶·l q下同 ∀
׫¨ ¶¤°¨¥¨ ²¯º q
u qu 培养条件对体胚诱导的影响 光照条件下 o合
子胚生长旺盛 o一段时间后子叶变绿 o下胚轴停止伸
长 o少数长出根 ∀暗培养条件下 o外植体能长时间保
持新鲜 o下胚轴伸长的同时也有根的形成 ∀无论是
光培养还是暗培养 o合子胚萌发形成的根均不能正
常生长 o而是膨大并形成米黄色的紧实愈伤组织 ∀
这类愈伤组织虽然生长最为迅速 o但经过数代培养
仍无体胚发生 ∀培养条件对体胚诱导率并无显著影
响 k Φt o| € u qzz o Π€ s qtvs xl o但光培养下的体胚生
长迅速而且健壮 o多为乳白色或淡黄绿色k图版 ´ p
xl o个体较大 ~暗培养下的体胚则多为无色透明或白
色半透明 o部分体胚在发育过程中会愈伤组织化 ∀
暗培养诱得的胚性愈伤组织颜色较淡 o生长旺盛 o但
在去掉激素后需要较长的时间才能有体胚发生 ∀
u qv 未成熟合子胚不同采样时期对体胚诱导的影
响 将不同采样时期的未成熟合子胚 o接种于不同
浓度 y2…„的 ≥培养基上 o体胚诱导率见表 u ∀z月
中旬的合子胚体胚诱导率远高于其他 u 个时期
kΦu ovs € w{ qw{ o Π s qsss tl ∀y月中旬的合子胚初
代培养 w周后才出现鱼雷形体胚 o|周后才有部分
体胚发育到子叶期 ∀z月中旬和 {月中旬的合子胚培养 t周左右 o即见在伸长的胚轴上有白色半透明或无
色透明的早期体胚以及颗粒状愈伤组织形成 ou周后即有部分直接体胚发育至子叶期 o将初代愈伤组织继代
于无激素 ≥培养基上 y周后 o即见有间接体胚发育至子叶期 ∀
u qw 激素对体胚诱导的影响 栓皮栎未成熟合子胚在无激素的 ≥培养基上也能诱导体胚发生 o但诱导率
较低k表 ul o添加激素可以显著提高 z月份和 {月份未成熟合子胚的体胚诱导率k表 t ∗ vl ∀
单独使用 y2…„以直接体胚发生为主 o合子胚萌发后 o在胚轴上形成簇生的体胚 o有些合子胚萌发形成的
幼嫩苗茎上也产生了单生体胚k图版 ´ p x l o少数合子胚在膨大的子叶上也有体胚形成 ∀这些体胚为乳白
色或淡黄绿色 o个体较大且大小较为一致 o发生较早 o发育迅速 ou周后即有部分体胚发育至子叶期 ∀
xzt 第 u期 张存旭等 }栓皮栎体胚诱导关键影响因素研究
表 3 2 ,42∆与 62ΒΑ不同浓度组合培养基中体胚诱导率
Ταβ . 3 Τηεινδυχτιον ρατεσ οφ σοµατιχ εµ βρψοσ χυλτυρεδ
ιν µεδιυµ ωιτη ϖαριουσ χοµ βινατιον οφ 2 ,42∆ ανδ 62ΒΑ
u ow2⁄Π
k°ª#ptl
y2…„Π
k°ª#ptl
外植体数
‘∏°¥¨µ²©
¬¨³¯¤±·¶
诱导胚数
‘∏°¥¨µ²©
¬±§∏¦¨§ °¨¥µ¼²¶
诱导率
Œ±§∏¦·¬²±
µ¤·¨Πh
s qt s vs uu zv qv ¦
s qt s qx vs uw {s qs ¥¦
s qt t qs vs t| yv qv §
s qt u qs vs ty xv qv ¨
s qx s vs ux {v qv ¤¥
s qx s qx vs uz |s qs ¤
s qx t qs vs uy {y qz ¤¥
s qx u qs vs uw {s qs ¥¦
表 4 2 ,42∆与 62ΒΑ不同浓度组合培养基中
体胚诱导率方差分析表
Ταβ . 4 Τηε ϖαριανχε αναλψσισ οφινδυχτιον ρατεσφορ εµ βρψο
χυλτυρεδ ιν µεδιυµ ωιτη ϖαριουσ χοµ βινατιον οφ 2 ,42∆ ανδ 62ΒΑ
变异来源
≥²∏µ¦¨
自由度
⁄ƒ
均方
 ¤¨± ≥ ∏´¤µ¨ Φ
概率值 Π
Πρ  Φ
u ow2⁄ t t {vz1xs {{ qus  s qsss t
y2…„ v vw{1yt ty qzv  s qsss t
u ow2⁄≅ y2…„ v ttx1uz x qxv s qss{ w
误差 ∞µµ²µ ty us1{v
表 5 不同基因型的体胚诱导率
Ταβ . 5 Τηεινδυχτιον ρατεσ οφ σοµατιχ εµ βρψοσ
ωιτη ϖαριουσ γενοτψπεσ
基因型
Š¨ ±²·¼³¨
外植体数
‘∏°¥¨µ²©
¬¨³¯¤±·¶
诱导胚数
‘∏°¥¨µ²©
¬±§∏¦¨§ °¨¥µ¼²¶
诱导率
Œ±§∏¦·¬²±µ¤·¨Πh
tf vs z uv qv¦
uf vs uu zv qv¤
vf vs tw yv qv¤
wf vs t| wy qz¥
u ow2⁄无论是单独使用还是与 y2…„ 或 ×⁄ 配
合使用 o均以间接体胚发生为主 ∀在合子胚伸长的
胚轴上形成米黄色或无色透明的颗粒状愈伤组织
k图版 ´ p tl ∀这些愈伤组织生长迅速 o在转入无激
素培养基后会分化出大量体胚k图版 ´ p ul o但是如
果长时间在含有 u ow2⁄的培养基上培养 o则会在其
表面产生白色细腻质地松软的新愈伤组织 ∀间接体
胚多呈簇生状k图版 ´ p ul o一般数个体胚合生在一
起 ∀有些体胚则在基部产生次生体胚k图版 ´ p yl ∀
单独使用 u ow2⁄时合子胚萌发受到抑制 o胚轴的伸
长和膨大缓慢 o形成的胚性愈伤组织不多 ∀u ow2⁄
与 y2…„ 或 ×⁄ 配合使用时 o虽然胚轴的伸长受到
一定的抑制 o但其膨大迅速 o表面形成的愈伤组织较
多 o诱导率也较高 ∀
u qx 基因型对体胚诱导的影响 统计分析表明 }母
树基因型对体胚诱导率有显著影响k Φv o{ € wv qss oΠ
 s qsss tl ∀uf和 vf诱导率较高 owf次之 otf最低
k表 xl ∀采自 tf和 wf母树的部分合子胚朝正常发
育途径进行 o即长根和抽梢 ∀观察发现 uf !vf母树
合子胚的体积明显小于 tf和 wf o同时也发现在采
种地的同一林分中 o不同个体上的种子发育程度不
同 o物候不齐 o果落期前后相差近半月 ∀
u qy 合子胚的手术对体胚诱导的影响 将合子胚
按不同手术方式接种 o全胚为对照 ∀结果发现 o胚的
手术加剧了褐变 o部分体胚因褐变而死亡 ∀在伤口
处并无体胚或愈伤组织产生 ∀合子胚手术后 o胚轴
伸长受抑 o子叶也膨大较少 o整个外植体长势较弱 ∀
合子胚的手术对诱导率有显著影响k Φw ots € xy q|v o
Π s qsss tl ∀全胚接种不仅诱导率最高 o而且长出
的体胚数量也多 o品质也好 ∀手术切除部分子叶后体胚仍然主要发生于胚轴k图版 ´ p wl ∀无胚轴的子叶体
胚诱导率较低k表 yl ∀
表 6 不同手术方式的未成熟合子胚体胚诱导率
Ταβ . 6 Τηε ρεσπονσε ρατεσ οφ σοµατιχ εµ βρψοστο ϖαριουσσυργερψτρεατµεντσ
处 理
×µ¨¤·°¨ ±·
外植体数
‘∏°¥¨µ²© ¬¨³¯¤±·¶
诱导胚数
‘∏°¥¨µ²©¬±§∏¦¨§ °¨¥µ¼²¶
诱导率
• ¶¨³²±¶¨ µ¤·¨Πh
近根端的半个胚 ‹¤¯© °¨¥µ¼² ±¨ ¤µµ¤§¬¦¯¨ vs ty xv qv¥
具胚轴的整片子叶 ≤²·¼¯ §¨²±­²¬±¨ §·²«¼³²¦²·¼¯ vs z uv qv¦
无胚轴的整片子叶 ∞±·¬µ¨ ¦²·¼¯ §¨²± ±²­²¬±¨ §«¼³²¦²·¼¯ vs t v qv§
远轴端的半片子叶 ‹¤¯©¦²·¼¯ §¨²±©¤µ«¼³²¦²·¼¯ vs v ts qs§
全胚 ∞±·¬µ¨ °¨¥µ¼²k≤Žl vs uu zv qv¤
3 讨论
栎属植物体胚诱导大多以 ≥或 • ° 为基本培养基k张存旭等 oussw¦~• ¬¯«¨¯° ousssl ∀本试验结果表
明 o≥的无机盐含量高 o微量元素种类齐全 o浓度也较高k李浚明 ot||ul o有利于栓皮栎幼胚的体胚发生 ∀特
别是 ≥中含有重金属 ≤²un o可以提高体胚诱导频率 o加速胚性愈伤组织发生 o是乙烯形成酶k∞ƒ∞l的抑制
剂 ∀乙烯抑制体胚发生 o多胺促进体胚发生 o而乙烯和多胺的生物合成又是相互抑制的k黄学林等 ot||xl ∀
yzt 林 业 科 学 wt卷
不同树种不同外植体对光的敏感性不同 ∀欧洲白栎k Θq ρυβραl 的幼嫩叶盘只有在光下才会有体胚发
生 o而幼胚则在 ty «光下和暗培养中均有体胚发生 o但后者诱导率较高k•¤±¦¬¯¯¤¦ ετ αλqot||yl ~青冈栎
kΧψχλοβαλανοπσισ γλαυχαl的体胚诱导只能在光下进行 o移至黑暗处则不再形成体胚 o转而形成愈伤组织k王亚
男 ousstl ~北美鹅掌楸kΛιριοδενδρον τυλιπιφεραl胚状体在黑暗条件下发育健壮 o在光下多形成畸形胚 o且生长缓
慢k µ¨®¯¨ot||sl ∀光照和暗培养均能诱导栓皮栎未成熟合子胚的体胚发生 o诱导率无显著差异 o但光培养下
诱导出的体胚品质较佳 ∀
一般来讲 o处于分化程度较低的组织更有利于体胚的诱导发生 ∀未成熟合子胚是诱导体胚发生的最好
材料 o尤以心形胚期到早子叶期幼胚为最佳k • ¬¯«¨¯° ousssl ∀但是 o处于发育早期的合子胚体积小 o分离困
难 o而且抗性差 o离体培养容易夭亡 o对培养基要求较为严格 ∀不同发育时期的未成熟合子胚体胚诱导率差
异很大 o花后第 u年 z月中旬的未成熟合子胚体胚诱导率较高 ∀
激素是影响体胚发生发育的重要因素之一 ∀y2…„和 ×⁄是常用于体胚诱导的 u种细胞分裂素 o可单独
使用也可与生长素类激素配合使用 ∀在以往 oy2…„可单独使用来诱导体胚 o效果不错 ~近年来 o组织培养诱
导体胚时最常用的则是 ×⁄ o其不仅对外植体种类作用范围大 o且诱导率也较高 ∀y2…„和 ×⁄的体胚诱导
效率可能因物种和使用浓度而异 ∀本试验以未成熟合子胚作为外植体对单独使用 y2…„或 ×⁄作了比较 ∀
二者相比 }y2…„诱导速度快 o诱导出的体胚数量较多 o大小一致 o品质较佳 ~×⁄ 诱导出的体胚数量少 o品质
差 o同时也能诱导出少量的愈伤组织 ∀王亚男等kusstl以青冈栎的未成熟合子胚作为外植体 o也得到类似的
结果 ∀y2…„或 ×⁄与 u ow2⁄配合使用时 o诱导效果无明显差异 ∀据徐华松等kt||yl报道 ×⁄ 可以促进乙烯
的产生 o其促进效应远大于 y2…„ ∀u ow2⁄是诱导体胚发生的重要激素 ∀细胞分裂素和生长素间交互效应对
体胚诱导影响显著 o有的树种对细胞分裂素和生长素的配比有一定要求 o如欧洲白栎叶片诱导体胚时 u类激
素之比不能小于 tk•¤±¦¬¯¯¤¦ ετ αλqot||yl ∀以栓皮栎未成熟合子胚外植体诱导体胚发生时 o在诱导培养基中
含有 u ow2⁄时以间接体胚发生为主 o同时诱导愈伤组织和体胚形成 o而只有去掉 u ow2⁄后才会有大量体胚形
成 ∀否则会抑制体胚的正常发育 o诱导产生球形次生体胚 o部分愈伤组织变为水煮状而死亡 ∀
基因型是影响体细胞胚胎发生的重要内在因素 ∀麻栎k Θq αχυτισσιµαl的各个家系幼胚的大小和培养条
件都相同时 o有的家系体胚诱导率高达 |t qu h o而有的家系没有体胚发生kŽ¬° ετ αλqot||zl ~不同地理起源
的欧洲白栎幼苗叶片体胚诱导率变化也很大ks ∗ xy h lk•¤±¦¬¯¯¤¦ ετ αλqot||yl ∀本试验中 w棵母树诱导率的
差异最高达 v倍多 o这种差异说明 o体胚发生能力很大程度受遗传的影响 ∀当然 o同一母树在不同培养基及
其激素组合上的表现也有不同k表 ul ∀因此 o体胚诱导率不仅取决于基因型 o而且受环境的影响 ∀
胚的离体手术试验是研究胚的各个组成部分形态发生潜力的重要手段之一k李浚明 ot||ul ∀本试验观
察到未成熟合子胚伸长的胚轴是体胚发生的主要部位 ∀但是在胚轴的伸长过程中 o子叶起着重要作用 ∀失
去部分子叶后 o胚轴伸长受到抑制 o因而诱导出的体胚数量减少 ∀切割刺激 o并未使切口处形成愈伤组织或
体胚 o反而影响了胚轴的伸长和合子胚的健康生长 o加剧了褐变 o对合子胚造成了毒害 ∀
参 考 文 献
黄学林 o李筱菊 qt||x q乙烯和多胺的生物合成与植物体细胞胚胎发生 q植物生理学通讯 ovtkul }{t p {x
李浚明 qt||u q植物组织培养教程 q北京 }中国农业大学出版社 ouvv p uvy
王亚男 o章友萱 qusst q青冈栎之组织培养 ) ) ) 体胚之诱导 q中华林学季刊 ovwkul }twz p tx|
闻天声 qt||t q栓皮栎的培养与用途 q中国林副特产 otzkul }u|
徐华松 o徐九龙 o黄学林 qt||y q×⁄在植物组织培养中的作用 q广西植物 otyk¯ l }zz p {s
张存旭 o宋 敏 o赵 忠 o等 qussw¤q植物生长调节物质对栓皮栎茎芽增殖和生长的影响 q西北林学院学报 ot|kul }yw p yy
张存旭 o宋 敏 o赵 忠 qussw¥q栓皮栎茎段离体培养的研究 q西北植物学报 ouwkzl }tuys p tuyx
张存旭 o姚增玉 qussw¦q栎属植物体细胞胚胎发生研究现状 q西北植物学报 ouwkul }vxy p vyu
Ž¬° ≠ • o ≠²∏± ≠ o‘²« ∞ • o ετ αλqt||z q≥²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶¤±§³¯¤±·µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²±©µ²°¬°°¤·∏µ¨ °¨¥µ¼²¶²©©¬√¨ ©¤°¬¯¬¨¶²© Θυερχυσ αχυτισσιµα q°¯ ¤±·
≤¨¯¯ • ³¨oty }{y| p {zv
 µ¨®¯¨≥ „ qt||s q ¤·∏µ¤·¬²± ¤±§¦²±√ µ¨¶¬²± ²© Λιριοδενδρον τυλιπιφερᶲ°¤·¬¦ °¨¥µ¼²¶qŒ± ∂¬·µ² ≤¨¯¯ ⁄¨ √ …¬²¯ ouy }ts{y p ts|v
°∏§§¨³«¤·Œ o „¯ §¨µ¶²± ° Š o •µ¬ª«·‘ „ q t||z qŒ±©¯∏¨±¦¨ ²© ¬¨³¯¤±·¶²∏µ¦¨ o ³¯¤±·ªµ²º·« µ¨ª∏¯¤·²µ¤±§ ¦∏¯·∏µ¨ ±¨√¬µ²±°¨ ±·²± ¦∏¯·∏µ¨ ¬±¬·¬¤·¬²± ¤±§
¶¨·¤¥¯¬¶«° ±¨·²© Θυερχυσροβυρq ιν ϖιτρο q²∏µ±¤¯ ²© ¬¨³¨µ¬°¨ ±·¤¯ ¥²·¤±¼ovs|kw{l }|xt p |yu
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