全 文 ：第 ww卷 第 v期
u s s {年 v 月
林 业 科 学
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¤µqou s s {
农杆菌介导 ΒΑ∆Η基因转化美丽胡枝子的研究
胡冬南t ou 陈晓阳u 李 伟u 骈瑞琦u 赵 杨v
kt1 江西农业大学园林与艺术学院 南昌 vvsswx ~ u1 北京林业大学林木花卉遗传育种教育部重点实验室 北京 tsss{v ~
v1 贵州大学林学院 贵阳 xxssuxl
摘 要 } 以子叶节为外植体 o草丁膦为选择剂 o对根癌农杆菌 …„wwsw介导的美丽胡枝子遗传转化进行研究 o建
立美丽胡枝子遗传转化体系 o获得转 ΒΑ∆Η基因植株 o最高转化率可达 u{ h ∀抗性植株经分子检测表明 o目的基因
已整合进美丽胡枝子基因组中 ∀ ‘¤≤¯ 胁迫下 o转基因植株能积累更多的甜菜碱 o证明 ΒΑ∆Η基因在转化植株中得
到正常表达 ∀
关键词 } 美丽胡枝子 ~ ΒΑ∆Η基因 ~基因转化 ~甜菜碱
中图分类号 }≥zt{1wy ~±|wv1u 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kuss{lsv p sszy p sx
收稿日期 }ussz p st p ux ∀
基金项目 }/ {yv0国家高新技术项目/豆科饲料型灌木抗逆新品种选育0 kussu„„uwttttl ∀
Τρανσφορµατιον οφ Λεσπεδεζα φορµοσα ωιτη ΒΑ∆Η Γενε Μεδιατεδ βψ Αγροβαχτεριυµ τυµεφαχιενσ
‹∏⁄²±ª±¤±tou ≤«¨ ± ÷¬¤²¼¤±ªu ¬• ¬¨u °¬¤± •∏¬´¬u «¤² ≠¤±ªv
kt1 Χολλεγε οφ Λανδσχαπε Αρχηιτεχτυρε ανδ Αρτoϑιανγξι Αγριχυλτυραλ Υνιϖερσιτψ Νανχηανγ vvsswx ~ u1 ΚεψΛαβορατορψοφ Γενετιχσ ανδ
Βρεεδινγ ιν Φορεστ Τρεεσ ανδ Ορναµενταλ Πλαντσo Μινιστρψοφ Εδυχατιον Βειϕινγ Φορεστρψ Υνιϖερσιτψ Βειϕινγ tsss{v ~
v1 Φορεστρψ Χολλεγε οφ Γυιζηου Υνιϖερσιτψ Γυιψανγ xxssuxl
Αβστραχτ} ׫¨ ª¨ ±¨ ·¬¦·µ¤±¶©²µ°¤·¬²± ²© Λεσπεδεζα φορµοσα °¨ §¬¤·¨§¥¼ Αγροβαχτεριυµ τυµεφαχιενσ º¤¶¶·∏§¬¨§¥¼ ∏¶¬±ª·«¨
¦²·¼¯ §¨²±¤µ¼ ±²§¨¶¤¶ ¬¨³¯¤±·¶¤±§·«¨ Š¯∏©²¶¬±¤·¨kŠ¯∏l ¤¶¤¶¨¯¨ ¦·²µq׫¨ ª¨ ±¨ ·¬¦·µ¤±¶©²µ°¤·¬²± ¶¼¶·¨° ²© Λεσπεδεζα φορµοσα
º¤¶§¨√¨ ²¯³¨ §¤±§·«¨ ΒΑ∆Η·µ¤±¶ª¨±¬¦³¯¤±·¶º¨ µ¨ ¤¦«¬¨√¨ §q׫¨ «¬ª«¨¶··µ¤±¶©²µ°¤·¬²±©µ¨ ∏´¨±¦¼ º¤¶¤¥¯¨·²µ¨¤¦«·²u{ h q
׫¨ °²¯ ¦¨∏¯¤µ¤±¤¯¼¶¬¶¶«²º¨ §·«¤··«¨ ΒΑ∆Η ª¨ ±¨ º¤¶¬±·¨ªµ¤·¨§¬±·²ª¨±²°¨ ²© Λqφορµοσαq׫¨ ·µ¤±¶ª¨±¬¦³¯¤±·¶º¨ µ¨ ¤¥¯¨·²
¤¦¦∏°∏¯¤·¨ °²µ¨ ¥¨·¤¬±¨ ·«¤±·«¨ ∏±·µ¤±¶©²µ°¨ §²±¨ ¶∏±§¨µ‘¤≤¯ ¶·µ¨¶¶oº«¬¦«§¨ °²±¶·µ¤·¨§·«¨ ·µ¤±¶ª¨±¬¦³¯¤±·¶º¨ µ¨ ¤¥¯¨·²
¬¨³µ¨¶¶ ΒΑ∆Η ª¨ ±¨ ±²µ°¤¯ ¼¯ q
Κεψ ωορδσ} Λεσπεδεζαφορµοσα~ ΒΑ∆Η ª¨ ±¨ ~ª¨ ±¨ ·µ¤±¶©²µ°¤·¬²±~¥¨·¤¬±¨
豆科k¨ª∏°¬±²¶¤¨ l胡枝子属kΛεσπεδεζαl植物约有 tss种 o我国约有 ys余种 o广泛分布于我国东北地区及
内蒙古 !山东 !山西 !河南 !湖北及陕西等省区 k孙秀殿等 ot|||l ∀胡枝子具有许多优良特性 o在多方面为人
们所利用 o如水土保持和改良土壤 !青饲料和干饲料源 !绿肥和薪炭材等 o有的胡枝子还具有药用功能 ∀但
是 o多数胡枝子耐盐性不强 o如果将其进行改良 o使其能在盐渍地上生长 o则一方面可扩大胡枝子的栽培利用
面积 o另一方面又可起到改良盐渍地和利用盐渍地的目的 ∀
甜菜碱是植物抗盐过程中一种重要的渗透调节物质 o而甜菜碱醛脱氢酶基因k ΒΑ∆Ηl又是调控甜菜碱合
成的一个关键基因 ∀众多试验已证明 o植物中导入 ΒΑ∆Η基因 o其耐盐性能得到明显提高k刘凤华等 ot||z ~
Ž¬¶«¬·¤±¬ετ αλqousss ~陈传芳等 oussw ~刘永军等 oussx ~付光明等 oussy ~邹维华等 oussyl ∀本研究把 ΒΑ∆Η
基因导入到胡枝子体内 o以期获得耐盐性有所提高的胡枝子新品种 ∀
t 材料与方法
111 材料
植物材料为引自美国密西西比州的美丽胡枝子 k Λεσπεδεζα φορµοσαl o根癌农杆菌 k Αγροβαχτεριυµ
τυµεφαχιενσl菌株为 …„wwsw o所带质粒为 ³…Œ…„⁄‹¥¤µo该质粒抗性标记基因为卡那霉素基因kŽ¤±l o×2⁄‘„区
含 vx≥启动子 !目的基因 ΒΑ∆Η !植物抗性筛选标记基因 βαρ k图 tl ∀
112 培养基类型
分化培养基 }≥ n y2…„ s1x °ª#pt n u ow2⁄t1s °ª#pt n ‘„„ s1t °ª#pt n蔗糖 v h ~
图 t 质粒 ³…Œ…„⁄‹¥¤µ的结构
ƒ¬ªqt ⁄¬¤ªµ¤° ²©³¯¤±·¨ ¬³µ¨¶¶¬²±
√¨ ¦·²µ³…Œ…„⁄‹¥¤µ
增殖培养基 }≥ n y2…„ t1s °ª#pt n ‘„„ s1t °ª#pt
n蔗糖 v h ∀
培养基经高压灭菌 o待其温度降至 wx ε 以下但未凝固
之前加入抗生素或草丁膦kŠ¯ ∏l o充分摇匀后分装 o冷凝后
待用 ∀
113 方法
t1v1t 外植体的获得 本试验之前 o以茎段 !叶片和子叶节 v种材料为外植体进行了离体再生试验 o结果发
现只有子叶节能高效再生 o茎段和叶片很难分化出不定芽 ∀因此 o遗传转化时选用了无菌实生苗的子叶节作
为外植体 ∀无菌条件下将美丽胡枝子种子接种于 ≥基本培养基上 o苗龄约 x §时取其子叶节k去除上胚轴 o
保留 s1x ¦°下胚轴l o沿胚轴纵切成两半 o供进一步试验用 ∀
t1v1u 草丁膦敏感性试验 将外植体置于添加不同浓度草丁膦ks1x ot1s ot1x ou1s °ª#ptl的分化培养基
上 o观察草丁膦对外植体生长情况和诱导不定芽的影响 ∀
t1v1v 农杆菌的活化及转化 挑取单菌落 o于含 xs °ª#ptŽ¤±的 ≠∞…液体培养基中 u{ ε 振荡培养过夜 o
次日取 t1s °菌液加至 ws °新鲜液体 ≠∞…培养基中k不含抗生素l ou{ ε 继续振荡培养致 ’⁄yss约为 s1{ ∀
将预培养 t §的美丽胡枝子子叶节k沿胚轴纵切l浸入菌液 o再用无菌滤纸稍微吸干菌液 o共培养后进行脱菌
培养和选择培养 ∀
t1v1w 影响转化效果的因素研究 以影响转化效果的因素为变量 o设置不同处理 o各处理均设 x次重复 o每
重复 ts个子叶节 o转化 vs §后统计抗性芽数量 o计算转化率 o转化率 €抗性芽数Π子叶节数 ∀主要因素为 }侵
染时间kts !us !vs °¬±l !共培养时间ku !v !w §l !延迟选择时间ks !u !w !y !{ §l ∀
t1v1x 转化植株的检测 tl 分子检测 采用 ≤ׄ…法提取植株总 ⁄‘„ o对其进行 °≤• 和 °≤•2≥²∏·«¨µ±检测
及 ≥²∏·«¨µ±2¥¯²·分析 o检测分析时参照5植物基因工程6k王关林等 oussul中的方法进行 o杂交时使用的标记为
地高辛 ∀ul ‘¤≤¯ 胁迫下转基因植株甜菜碱含量分析 将转基因美丽胡枝子和对照同期分别接入含有 y °ª#
pt‘¤≤¯ 的生长培养基中 o在第 y !tu !t{天时分别取样 o采用高效液相色谱法测定其甜菜碱含量 ∀
u 结果与分析
211 草丁膦对子叶节不定芽分化的影响
草丁膦kŠ¯ ∏l作为选择剂 o在子叶节与农杆菌共培养 u ∗ v §o即侵染之后才使用 o故该试验中的子叶节均
经过了 v §的预培养 ∀从表 t Š¯ ∏处理的结果可看出 o美丽胡枝子对 Š¯ ∏非常敏感 o在试验浓度范围内所有
含 Š¯ ∏的培养基对其子叶节不定芽的诱导均有抑制作用 o随浓度的提高 o子叶节的分化频率逐渐降低 o分化
的不定芽数量也渐少 o当 Š¯ ∏浓度大于或等于 t1s °ª#pt时 o子叶节的分化率明显降低 o大于 t ¦°芽数量也
明显减少 o且芽弱小色黄 ∀所以在用 Š¯ ∏作为选择剂筛选转化植株时 o其临界浓度定为 t1s °ª#pt ∀
表 1 草丁膦(Γλυ)对子叶节不定芽分化的影响
Ταβ .1 Εφφεχτ οφ Γλυ ον τηε ρεγενερατιον οφ αδϖεντιτιουσ βυδσφροµ χοτψλεδοναρψ νοδεσ
Š¯ ∏Πk°ª#ptl
子叶节数k个l
„°²∏±·²©
¦²·¼¯ §¨²±¤µ¼ ±²§¨¶
再生率
• ª¨¨ ±¨ µ¤·¬±ª
µ¤·¨Πh
不定芽数k个l
„°²∏±·²©
¤§√ ±¨·¬·¬²∏¶¥∏§¶
不定芽形态
²µ³«²¯²ª¼ ²©
¤§√¨ ±·¬·¬²∏¶¥∏§¶
≤Ž uw tss yv 健壮 !叶绿 ∂¬ª²µ²∏¶o¯ ¤¨√ ¶¨¤µ¨ ªµ¨ ±¨
s1x uw zx tv 矮 !叶小 ≥«²µ·o¯ ¤¨√¨ ¶¤µ¨ ¶°¤¯¯
t1s uw vw v 弱小 !叶黄 °∏±¼ o¯ ¤¨√¨ ¶¤µ¨ ¼¨ ¯¯²º
t1x uw uw t 弱小 !干枯 °∏±¼oº ¤¨½¨ ±
u1s uw { s 无不定芽 ‘²¤§√ ±¨·¬·¬²∏¶¥∏§¶
212 侵染时间和共培养时间对子叶节转化的影响
农杆菌侵染外植体需要一个时间过程 o如果浸泡时间太短 o则共培养过程中无农杆菌生长 o无法转化 o而
浸泡时间太长 o外植体又会因农杆菌毒害缺氧而软腐 ∀从本试验结果可知 o侵染 us °¬±或 vs °¬±比侵染 ts
°¬±获得的转化率稍微高一些 o而 us °¬±和 vs °¬±之间差别很小 o且均未出现软腐现象 ∀因此 o侵染时间应
控制在 us ∗ vs °¬±∀
zz 第 v期 胡冬南等 }农杆菌介导 ΒΑ∆Η基因转化美丽胡枝子的研究
菌株接种到外植体上后 o在共培养的过程中进行增殖 ∀如果共培养时间过短 o外植体切口边缘只有很少
的农杆菌生长 o则细胞被转化的机率就很小 ~而且农杆菌接种到外植体上后 o往往要在创伤部位生存 ty «后
才能实现转化 ∀但如果培养时间过长 o农杆菌在外植体四周过度增殖 o会对外植体产生毒害 o使其腐烂死亡 ∀
因此 o共培养时间对转化率有着重要的影响 ∀本试验结果显示 o共培养 v §或 w §的处理转化效果明显优于
共培养 u §的处理 o而以共培养 w §的转化率最高k图 ul ∀因此 o在侵染过程中 o共培养时间以 w §较为合适 ∀
213 延迟选择对子叶节转化的影响
延迟选择是在不定芽诱导培养一定时间后 !不定芽形成前加入选择压 o采用这种方法进行选择既有利于
转化细胞生长又不会产生较多的嵌合体 ∀本试验设计了延迟 s !u !w !y !{ §处理 o结果表明 o延迟选择有利于
提高转化率 o但延迟时间不能太长 o以 w §较好 o转化率能达到 u{ h k图 vl ∀
图 u 侵染时间和共培养时间对转化效果的影响
ƒ¬ªqu ∞©©¨¦·¶²©¬±©¨¦·¬²±·¬°¨ ¤±§¦²¦∏¯·¬√¤·¬²±
³¨µ¬²§²±·µ¤±¶©²µ°¤·¬²±©µ¨ ∏´¨ ±¦¬¨¶
图 v 延迟选择对转化效果的影响
ƒ¬ªqv ∞©©¨¦·²© ¤¯·¨ ¶¨¯¨ ¦·¬²± ²±
·µ¤±¶©²µ°¤·¬²±©µ¨ ∏´¨ ±¦¬¨¶
214 转化植株的 ΠΧΡ 鉴定及 ΠΧΡ2Σουτηερν鉴定
通过上述转化试验 o共获得 wv个抗性株系 ∀提取转化植株的基因组 ⁄‘„ o以其为模板进行 °≤• 扩增 o
产物经 t h琼脂糖凝胶电泳 ∀图 w是部分株系 °≤• 鉴定的结果 o从图中可以看出 o参与试验的 x个转化株和
质粒阳性对照均出现约 t xus ¥³的特异性条带 o这与目的基因 ΒΑ∆Η的大小相一致 ~而阴性对照非转化植
株则无任何特异性条带出现 o说明目的基因 ΒΑ∆Η已被转化到美丽胡枝子体内 ∀对其他 v{个抗性株系先后
检测 o结果均呈阳性 ∀
为了进一步证明 °≤• 扩增产物是目的基因片段 o将 °≤• 扩增产物进行 °≤•2≥²∏·«¨µ±杂交检验 ∀从图 x
杂交结果可以看出 o质粒扩增的片段和转化植株扩增的片段均出现杂交信号 ∀由此可证明 o转化植株中检测
到的序列与目的基因的序列是一致的 o这进一步说明 ΒΑ∆Η基因已被转化到美丽胡枝子体中 ∀
图 w 转化植株 ΒΑ∆Η基因 °≤• 检测
ƒ¬ªqw °≤• §¨·¨¦·¬²± ²© ΒΑ∆Η ª¨ ±¨ ¬±·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³¯¤±·¶
图 x 转 ΒΑ∆Η基因植株的 °≤•2≥²∏·«¨µ±杂交结果
ƒ¬ªqx °≤•2≥²∏·«¨µ± ¥¯²·¬±ª¤±¤¯¼¶¬¶²© ΒΑ∆Η ª¨ ±¨
¬±·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³¯¤±·¶ }⁄‘„ °¤µ®¨µ~≤Žp }未转化植株 ‘²±2·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³¯¤±·~
≤Žn }质粒 °¯ ¤¶°¬§~t ∗ x }转化植株 ×µ¤±¶ª¨ ±¬¦³¯¤±·¶q下同 ∀ ׫¨ ¶¤°¨ ¥¨ ²¯º q
{z 林 业 科 学 ww卷
215 转基因植株的 Σουτηερν2βλοτ分析
由于 °≤• 扩增十分灵敏 o有时会出现假阳性扩增 o所以 °≤•2≥²∏·«¨µ±的结果只能证明转化植株体内存在
目的基因 o而目的基因是否整合到植物的基因组中 o还需要进行 ≥²∏·«¨µ±杂交来最后确定 ∀提取 °≤• 检测为
阳性的转化植株的 ⁄‘„ o分别用 Σαχ´和 Βαµ ‹ ´进行双酶切 | «以上 o电泳分离后进行 ≥²∏·«¨µ±杂交 ∀结果
显示 o阴性对照和 t !u !w号株系没有出现杂交信号 o阳性对照和 v !x号株系在同一位置出现了杂交带 o由于
阳性对照加的是质粒的 °≤• 产物 o因此 o阳性对照的杂交信号很强 o而 v号和 x号株系的杂交信号相对较弱
k图 yl ∀由此可判断 o目的基因 ΒΑ∆Η已整合到 v号和 x号 u个株系的基因组中 ∀
图 y 转 ΒΑ∆Η基因植株的 ≥²∏·«¨µ±印迹分析
ƒ¬ªqy ≥²∏·«¨µ± ¥¯²·¬±ª¤±¤¯¼¶¬¶²© ΒΑ∆Η
ª¨ ±¨ ¬±·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³¯¤±·¶
216 转基因植株甜菜碱含量分析
从图 z中可看出 o无论是转基因植株还是对照植株 o都
能够检测到甜菜碱 o在没有胁迫的情况下 o两者体内甜菜碱
的含量均较低 o使用盐胁迫后 o则表现出不同的变化趋势 ∀
胁迫 y §后 o转基因植株与对照的甜菜碱含量都有所上升 o
但上升幅度不大 o转基因植株的含量稍微比对照大些 ∀胁
迫 tu §后 o无论是对照还是转基因植株 o体内的甜菜碱含量
大幅度上升 o且上升的幅度有明显差异 o对照增加了 s1|ys
°ª#ªpt o转基因株系则增加了 t1v{x °ª#ªpt o其甜菜碱含量
是对照的 t1w倍 ~此时对照植株已表现出一定程度的损伤 ∀
随着胁迫时间的延长 o对照植株的损伤程度加剧 o逐渐呈枯
萎状 o转基因株系中有个别植株出现叶片损伤现象k图 {l o
t{ §时 o测定各自体内的甜菜碱含量 o发现转基因植株和对
照体内的甜菜碱含量均有一定程度的下降 o但转基因植株下降幅度较小 o减少量为 s1tuu °ª#ªpt o而对照则
下降了 s1{wx °ª#ªpt o此时转基因植株体内的甜菜碱含量是对照的 x1z倍 ∀由此可见 o转基因美丽胡枝子具
有更强的耐盐能力 o这应该是外源 ΒΑ∆Η基因在其体内表达的结果 ∀
图 z ‘¤≤¯ 胁迫下转基因美丽胡枝子甜菜碱含量变化
ƒ¬ªqz ≤«¤±ª¨¶²©¥¨·¤¬±¨ ¦²±·¨±·¬±·µ¤±¶ª¨ ±¬¦
³¯¤±·¶∏±§¨µ‘¤≤¯ ¶·µ¨¶¶
图 { 转基因美丽胡枝子的抗性ky °ª#pt ‘¤≤¯ 胁迫 tx §l
ƒ¬ªq{ • ¶¨¬¶·¤±¦¨¶²©·µ¤±¶ª¨ ±¬¦ Λq φορµοσα
k¶·µ¨¶¶¨§∏±§¨µy °ª#pt ‘¤≤¯ ©²µtx §l
v 结论与讨论
本研究以美丽胡枝子子叶节为外植体 o采用根癌农杆菌介导的方法 o借助于 βαρ基因作为标记 o将甜菜
碱醛脱氢酶基因k ΒΑ∆Ηl成功地导入到了美丽胡枝子的基因组中 o获得了耐盐性增强的转基因美丽胡枝子 ∀
νπτΙΙ基因是目前植物基因工程中最广泛使用的筛选标记基因 o该基因编码新霉素磷酸转移酶k±³·µl o
它能使 Ž¤±k卡那霉素l等氨基糖苷类抗生素磷酸化 o使转化细胞具有抗氨基糖苷类抗生素的能力 ∀以 Ž¤±
作为选择剂已在很多植物的转化中成功运用 o但不同植物对卡那霉素的敏感性不同 ∀研究表明 o美丽胡枝子
对 Ž¤±具有较高水平的抗性 oŽ¤±浓度必须大于 vxs °ª#pt才能有效抑制其子叶节分化 o以 Ž¤±为选择剂筛
|z 第 v期 胡冬南等 }农杆菌介导 ΒΑ∆Η基因转化美丽胡枝子的研究
选效率较低k杜金友 oussxl ∀据此原因 o本研究没有采用 νπτΙΙ基因 o而使用了抗草丁膦的 βαρ基因作为选择
标记基因 ∀不同植物不同品种对草丁膦的敏感性差异也较大 o其使用浓度一般为 x ∗ tx °ª#ptk莽克强等 o
t||{l o从本试验研究的结果来看 o美丽胡枝子对草丁膦非常敏感 ot1s °ª#pt Š¯ ∏即能抑制其子叶节的分化
与生长 o以其为选择剂能获得较好的效果 ∀
遗传转化是一个非常复杂的过程 o其间涉及许许多多的环节 o转化方法是否得当直接影响着外源基因的
转化效率 ∀本试验对影响转化效果的主要因素进行了研究 o确定了适宜的侵染时间 !共培养时间和选择剂加
入时间 ∀有效的转化方法为 }以美丽胡枝子子叶节为外植体 o预培养 t §o用 ’⁄yss约为 s1{的菌液侵染 us ∗
vs °¬±o共培养 w §o脱菌培养 w §后加入 t1s °ª#pt Š¯ ∏进行选择 o最高转化率达到了 u{ h ∀
≥²∏·«¨µ±杂交是将转基因株系的基因组与目的基因同源的探针杂交 o其检测结果比 °≤•2≥²∏·«¨µ±更可
靠 o但该方法对 ⁄‘„纯度 !长度和浓度都有一定的要求 o当用于杂交的样品纯度不合格或浓度过小时 o杂交
常无信号 ∀本试验中 x个转化株系的 °≤• 和 °≤•2≥²∏·«¨µ±结果均呈阳性 o但 ≥²∏·«¨µ±杂交却只有 u个株系出
现杂交信号 o另 v个株系和对照都没有杂交信号 o分析其原因 o可能是样品中 ⁄‘„浓度太小所致 o也有可能
这 v个株系是假阳性 oΒΑ∆Η基因虽然进入了植株体内但没有整合到其基因组中 ∀
许多研究表明 o甜菜碱的积累与盐胁迫密切相关 o盐浓度的变化影响着甜菜碱生物合成过程中相关基因
的表达 k ¦≤∏¨ ετ αλqot||u ~肖岗等 ot||x ~ • µ¨¨·¬¯±¼® ετ αλqot||sl o而其中响应最为明显的是 ΒΑ∆Η
k‹²¯ °¶·µ²° ετ αλqousssl ∀本试验对转化植株和非转化植株都进行盐胁迫的结果显示 o当存在盐胁迫时 o转基
因植株合成的甜菜碱量明显要比非转化植株多 o且随着胁迫时间延长 o非转化植株合成的甜菜碱急剧减少 o
而转基因植株仍然能够维持较高的水平 o这说明 ΒΑ∆Η基因的转入能明显增加甜菜碱的合成量和积累量 o使
植株具有更强的抗盐能力 ∀
本研究中 o转基因美丽胡枝子的耐盐性试验是以试管苗为材料在组培室进行的 o且胁迫时只用了 ‘¤≤¯
这一种盐 o这与大田k盐碱地l的实际情况有很大差别 ∀转基因植株移栽后 o其耐盐性如何 ‚它们能在什么样
的盐碱地上生长 ‚获得的耐盐性是否能稳定遗传 ‚这一系列的问题都有待于后续作更为深入的研究 ∀
参 考 文 献
陈传芳 o李义文 o陈 豫 o等 qussw1 通过农杆菌介导法获得耐盐转甜菜碱醛脱氢酶基因白三叶草 q遗传学报 ovtktl }|z p tst q
杜金友 qussx1 胡枝子干旱胁迫下渗透物质变化以及外源基因 ≥¤¦…对美丽胡枝子的遗传转化研究 q北京林业大学博士学位论文 q
付光明 o苏 乔 o吴 畏 o等 qussy1 转 …„⁄‹基因玉米的获得及其耐盐性 q辽宁师范大学学报 }自然科学版 ou|kvl }vww p vwz q
刘凤华 o郭 岩 o谷冬梅 o等 qt||z1 转甜菜碱醛脱氢酶基因植物的耐盐性研究 q遗传学报 ouwktl }xw p x{ q
刘永军 o孙耀中 o东方阳 o等 qussx1 转甜菜碱醛脱氢酶基因水稻种子萌发和苗期耐盐性研究 q种子 ouwk|l }t| p ut q
莽克强 o陈受宜 o李季伦 o等 qt||{1 农业生物工程 q北京 }化学工业出版社 q
孙秀殿 o李纯丽 o张峰下 qt|||1 胡枝子的栽培利用 q经济植物 okul }vv p vx q
王关林 o方宏筠 qussu q植物基因工程 qu版 q北京 }科学出版社 q
肖 岗 o张耕耘 o刘风华 o等 qt||x1 山菠菜甜菜碱醛脱氢酶基因研究 q科学通报 owsk{l }zwt p zwx q
邹维华 o赵 强 o崔德才 o等 qussy1 反义磷脂酶 ⁄Χ基因与几丁质酶基因转化美洲黑杨 Šu1 林业科学 ouwktl }vz p wu q
‹²¯ °¶·µ²° Žo≥²° µ¨¶¤¯² ≥ o ¤±§¤¯ „ o ετ αλqusss1 Œ°³µ²√ §¨·²¯ µ¨¤±¦¨ ·²¶¤¯¬±¬·¼ ¤±§ ²¯º ·¨°³¨µ¤·∏µ¨ ¬±·µ¤±¶ª¨ ±¬¦·²¥¤¦¦²³µ²§∏¦¬±ªª¯¼¦¬±¨ ¥¨·¤¬±¨ q²∏µ±¤¯
²© ∞¬³¨µ¬° ±¨·¤¯ …²·¤±¼ovwv }tzz p t{x q
Ž¬¶«¬·¤±¬≥ oפ®¤±¤°¬× o≥∏½∏®¬ oετ αλqusss1 ≤²°³¤·¬¥¬¯¬·¼ ²©ª¯¼¦¬±¨ ¥¨·¤¬±¨ ¬±µ¬¦¨ ³¯¤±·¶ √¨¤¯∏¤·¬²± ∏¶¬±ª·µ¤±¶ª¨ ±¬¦µ¬¦¨ ³¯¤±·¶º¬·«¤ª¨ ±¨ ©²µ³¨µ²¬¬¶²°¤¯
¥¨·¤¬±¨ ¤¯§¨«¼§¨ §¨«¼§µ²ª¨ ±¤¶¨ ©µ²° ¥¤µ¯¨ ¼ q°¯ ¤±·≤¨¯¯ ∞±√¬µ²±ouv }tsz p ttw q
¦≤∏¨ Žƒ o‹¤±¶²± „ ⁄qt||u1 ≥¤¯·2¬±§∏¦¬¥¯¨¥¨·¤·¬±¨ ¤¯§¨«¼§¨ §¨«¼§µ²ª¨ ±¤¶¨ ©µ²°¶∏ª¤µ¥¨ ·¨}¦⁄‘„ ¦¯²±¬±ª¤±§ ¬¨³µ¨¶¶¬²±q°¯¤±·²¯ ¦¨∏¯¤µ…¬²¯²ª¼ ot{ }t p
tt q
• µ¨¨·¬¯±¼® ∞ „ o‹¤±¶²± „ ⁄qt||s1 ²¯ ¦¨∏¯¤µ¦¯²±¬±ª²©¤ ³¯¤±·¥¨·¤¬±¨ ¤¯§¨«¼§¨ §¨«¼§µ²ª¨ ±¤¶¨ o¤± ±¨½¼°¨¬°³·¯¬¦¤·¨§¬± ¤§¤³·¤·¬²±·²¶¤·¬±¬·¼ ¤±§§µ²∏ª«·q
°µ²¦‘¤·¯ „¦¤§≥¦¬˜≥„ o{z }uzwx p uzw| q
k责任编辑 徐 红l
s{ 林 业 科 学 ww卷