全 文 ：第 wv卷 第 u期
u s s z年 u 月
林 业 科 学
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富含多酚的麻栎种子中蛋白质提取的探讨 3
辛 霞t ou 景新明t 孙红梅t ou 于文文t ou
kt1 中国科学院植物研究所 北京 tsss|v ~ u1中国科学院研究生院 北京 tsssv|l
摘 要 } 采用单因素试验和正交试验的方法 o对影响麻栎种子中蛋白质提取的主要因素进行分析 o找出最佳提取
条件 o即采用含有 t °°²¯#pt ∞⁄ׄ ot °°²¯#pt „¶„ ot °°²¯#pt ⁄×× ot °°²¯#pt Š≥‹ ox °°²¯#pt ª≤¯ u os1sx h
×µ¬·²± ÷ptss 和 us h甘油的 xs °°²¯#pt磷酸钾缓冲液k³‹值 z1xl o加入与材料等质量的不溶性聚乙烯多聚吡咯烷
酮k°∂°°l与材料共同研磨 o即可获得大量的蛋白质 ∀其中最主要的影响因素是 °∂°°的用量 o°∂°°阻止了多酚与
蛋白质的结合 o并将多酚沉淀 o从而增加了蛋白质的溶解性 ∀
关键词 } 麻栎 ~种子蛋白质 ~多酚 ~°∂°°
中图分类号 }≥zt{1wv 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kusszlsu p ssuy p sx
收稿日期 }ussx p tt p su ∀
基金项目 }中国科学院知识创新工程重要方向项目kŽ≥≤÷u p ≥• p ttzl和国家重点基础研究发展计划项目kŠusssswy{syl ∀
3 景新明为通讯作者 ∀感谢中国科学院西双版纳热带植物园刘勇博士对本文提出的宝贵意见 ∀
Προτειν Εξτραχτιον φροµ ΠολψπηενολpΡιχη Σεεδσ οφ Θυερχυσ αχυτισσιµα
÷¬± ÷¬¤tou ¬±ª÷¬±°¬±ªt ≥∏± ‹²±ª°¨ ¬tou ≠∏ • ±¨º¨ ±tou
kt1 Ινστιτυτε οφ Βοτανψo Χηινεσε Αχαδεµψοφ Σχιενχεσ Βειϕινγ tsss|v ~ u1 Γραδυατεσ Σχηοολοφ Χηινεσε Αχαδεµψοφ Σχιενχεσ Βειϕινγ tsssv|l
Αβστραχτ} ׫¨ ¶¨ §¨¶²© Θυερχυσ αχυτισσιµα ¤µ¨ µ¬¦«¬± ³²¯¼³«¨ ±²¯¶o º«¬¦« ¦¤∏¶¨ ³µ²·¨¬± ³µ¨¦¬³¬·¤·¬²± ¤±§¦²¯²µ¤·¬²± ²©
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³²¯¼³«¨ ±²¯ ³µ¨√¨ ±·¬±ª¬·©µ²° ¥¬±§¬±ª º¬·« ³µ²·¨¬± ¤¶ ¤¨µ¯¼ ¤¶³²¶¶¬¥¯¨o ¤±§ °∂°° ¦¤± ¤¯¶² «¨ ³¯ «²°²ª¨ ±¬½¨ ·«¨ °¤·¨µ¬¤¯
·«²µ²∏ª«¯¼q
Κεψ ωορδσ} Θυερχυσ αχυτισσιµα~¶¨ §¨³µ²·¨¬±~³²¯¼³«¨ ±²¯ ~°∂°°
蛋白质提取是蛋白质研究及酶学分析等许多工作的基础 ∀但是由于蛋白质组研究相关技术体系建立时
间较短 o仍存在许多有待改进之处 o特别是在蛋白质样品制备方面k兰彦等 ousstl ∀野生植物尤其是木本植
物中往往含有大量的多酚和醌等次生代谢物质 o它们能与蛋白质和核酸等生物大分子发生结合反应 o给提取
带来很大麻烦 ∀多酚最具特征性的反应之一便是与蛋白结合产生沉淀k石碧等 ousssl ∀另外 o在提取过程
中 o多酚容易氧化成醌类物质 o后者与蛋白质的氨基和巯基反应 o导致蛋白质失活 o并加剧蛋白质沉淀 o同时
使组织提取液变成棕色 o严重影响蛋白质的提取效率及品质k王中仁 ot||y ~…²µ±¨ °¤± ετ αλqousstl ∀
一般认为 o蛋白质 p多酚的结合作用是通过在蛋白质表面形成多配位键 k包括疏水作用和氢键l o使分
离的蛋白质产生交联k‹¤¶¯¤° ot|{{ ~ ƒ¨¯§°¤± ετ αλqot||| ~ ≤¤µ√¤¯«² ετ αλqoussw ~ ‹¤ª¨µ°¤± ετ αλqot|{t ~
Ασθυιτη ετ αλqot|{yl ∀蛋白质 p多酚的结合是可逆的 o受多种因素的影响 }蛋白质结构 !蛋白质和单宁的浓
度 !溶剂成分 !离子强度 !³‹值和其他物质 o如多糖等 ∀一般而言 o高 ³‹值环境或有机溶剂都会减少多酚与
蛋白质的结合k„¶´∏¬·« ετ αλqot|{y ~ ‹¤ª¨µ°¤± ετ αλqot|z{ ~t|{t ~≤¤µ√¤¯«² ετ αλqoussw ~‘¤¦½® ετ αλqot||y ~
ussyl ∀人工合成的多聚体 o如聚乙烯吡咯烷酮k°∂°l !聚乙烯多聚吡咯烷酮k°∂°°l及聚乙二醇k°∞Šl o常被
用于去除提取液中的多酚k²±¨ ¶ot|yxl ∀°∂°°具有类似蛋白质的内酰胺结构 o具有较强的生物相容性和极
性 o可以通过其内酰胺结构中的 ‘原子和 ’ 原子与多酚形成氢键 o从而吸附多酚并使其从溶液中沉淀下来
k黎新明等 oussul ∀
麻栎k Θυερχυσ αχυτισσιµαl种子含有丰富的多酚k杜怡斌 ousssl o在材料的处理过程中易发生褐变 o试验中
发现 o常规的提取方法k„ ¥¨¬ot|{v ~Ž±²µ½¨ µετ αλqot||yl不能有效获得蛋白质 ∀本文针对多酚与蛋白质结合的
特性 o采取了抑制两者结合以及去除多酚的措施来探讨有效提取麻栎种子中蛋白质的最优方法 ∀
t 试验材料与方法
111 试验材料
试验材料为麻栎种子 oussw年采集于中国科学院植物研究所植物园内 ∀|月份待果皮由绿色转为褐色
时 o从母树摇落 ∀种子收集后进行清选 o去除壳斗 !杂质及受到虫害的种子 o室内通风处风干 tu «后装入尼
龙编织袋内 o贮藏于 x ε 备用 ∀在冰浴条件下用刀片将种子切碎 o经液氮冷冻研磨成粉末 o分装后贮存于
p zs ε 低温冰箱中备用 ∀
112 蛋白质含量测定
采用 …µ¤§©²µ§kt|zyl的考马斯亮蓝 Š2uxs法测定蛋白质含量 ∀
113 常规提取
参照 „ ¥¨¬kt|{vl和 Ž±²µ½¨ µ等kt||yl的方法 o采用复杂的 ×µ¬¶p‹≤¯ 缓冲液≈xs °°²¯ #pt o³‹z1s o含有
t °°²¯#pt乙二胺四乙酸钠 k∞⁄ׄl ot °°²¯#pt抗坏血酸 k„¶„l ot °°²¯#pt二硫苏糖醇 k⁄××l ot °°²¯#
pt还原性谷胱甘肽 kŠ≥‹l ox °°²¯#pt ª≤¯ u os1sx h ×µ¬·²± ÷ptss和 us h甘油 o以及 t h °∂°° 进行提取 ∀
准确称取 s1u ª材料 o加 u °上述缓冲液 o冰浴研磨 o充分匀浆后转入 u °∞³管 ou次离心kts sss ≅ ªow ε o
y °¬±~tx sss ≅ ªow ε otx °¬±l后 o取上清液测定蛋白质含量 ∀离心后的沉淀分别用 s1t °²¯#pt ‘¤’‹或者
s1x h ‘¤u ≤’v 溶解k碱解l otx sss ≅ ªow ε 条件下离心 tx °¬±o测定上清液蛋白质含量 ∀
114 提取比例对蛋白质提取率的影响
采用上述提取缓冲液 o按照材料Β提取缓冲液k ΩΒςl分别为 tΒts !tΒx和 tΒu的比例提取蛋白质 o提取方
法同上 ∀
115 提取缓冲液种类对蛋白质提取率的影响
分别采用上述 ×µ¬¶2‹≤¯ 缓冲液和磷酸氢二钠 p磷酸二氢钠缓冲液k简称磷酸钠缓冲液 o°…≥ oxs °°²¯#
pt o³‹z1s o含有 t °°²¯#pt ∞⁄ׄ ot °°²¯#pt „¶„ ot °°²¯#pt ⁄×× ot °°²¯#pt Š≥‹ ox °°²¯#pt ª≤¯ u o
s1sx h ×µ¬·²± ÷2tss和 us h甘油 o以及 t h °∂°°l o按照相同的提取比例 ktΒxl和方法提取蛋白质 ∀
116 提取缓冲液 πΗ值对蛋白质提取率的影响
采用 ³‹值分别为 z1s oz1x o{1s o{1x o|1s o|1x ots1s ots1x ott1s和 tt1x的 ×µ¬¶2‹≤¯ 提取缓冲液kxs °°²¯#
pt o含有 t °°²¯#pt ∞⁄ׄ ot °°²¯#pt „¶„ ot °°²¯#pt ⁄×× ot °°²¯#pt Š≥‹ ox °°²¯#pt ª≤¯ u os1sx h
×µ¬·²± ÷2tss和 us h甘油 o以及 t h °∂°°l o按照上述方法提取蛋白质 ∀
117 Πς ΠΠ用量对蛋白质提取率的影响
研磨时 o分别按照材料Β°∂°°用量k ΩΒ Ωl为 tΒs1ux otΒs1x和 tΒt的比例 o将 °∂°°粉末直接加入研钵 o
与材料一起研磨 o待研磨成粉末后 o加入上述 ×µ¬¶2‹≤¯ 缓冲液 o按照上述方法提取蛋白质 ∀由于加入与材料
等量的 °∂°°时 o材料匀浆已经很粘稠 o考虑到试验方便性 o不再采用更大量的 °∂°°∀
118 正交试验设计
根据单因素试验结果 o进行正交优化试验 ∀选择缓冲液种类 !缓冲液 ³‹值和 °∂°°用量作为影响因素 o
进行 | kvvl 正交试验设计 ∀试验因素和水平见表 t ∀
v种提取缓冲液均含有相同的保护物质 ∀加入 °∂°°与材料一起研磨 o提取方法同上 ∀
zu 第 u期 辛 霞等 }富含多酚的麻栎种子中蛋白质提取的探讨
表 1 正交试验因素与水平表
Ταβ .1 Φαχτορσ ανδ λεϖελσ οφ ορτηογοναλτεστ
水平
¨√¨¯
因素 ƒ¤¦·²µ¶
„ }缓冲液种类
…∏©©¨µ
…}缓冲液 ³‹值
³‹ √¤¯∏¨ ²©¥∏©©¨µ
≤ }°∂°°用量≈材料Β°∂°° ΩkªlΒ Ωkªl 
„°²∏±·²©°∂°° ≈ ¤·¨µ¬¤¯Β °∂°° ΩkªlΒ Ωkªl 
t 磷酸钠缓冲液 °…≥ z1s tΒs1ux
u 磷酸钾缓冲液°²·¤¶¶¬∏° ³«²¶³«¤·¨ ¥∏©©¨µ z1x tΒs1x
v ×µ¬¶2‹≤¯缓冲液×µ¬¶2‹≤¯ ¥∏©©¨µ {1s tΒt
119 丙酮沉淀法提取蛋
白质
参照林金科等kussvl
介绍的丙酮提取法提取麻
栎种子中的蛋白质 ∀
u 试验结果及分析
211 常规提取
采用常规的提取缓冲液进行提取 o上清液里几乎不能测得蛋白质 o而离心后的沉淀经碱解以后 o可获得
z1| °ª#ªpt鲜质量kƒ • o©µ¨¶« º ¬¨ª«·l蛋白质 ∀说明提取液中的蛋白质被沉淀 o而经碱解以后可以获得较多的
蛋白质 o初步表明种子中的蛋白质可能已被多酚沉淀 ∀
212 提取比例对蛋白质提取率的影响
按照材料Β提取缓冲液k ΩΒςl分别为 tΒts !tΒx和 tΒu的比例提取蛋白质 o获得的蛋白质量略有差别 o分
别为 }不能测得 !ks1y| ? s1stl °ª#ªpt ƒ • 和ks1vt ? s1tsl °ª#ªpt ƒ • o其中以 tΒx的提取效果略好 o过低或
者过高的提取比例都会降低蛋白质获得率 ∀但提取得到的蛋白质量仅为沉淀经碱解获得的蛋白质量的
tΠts o效果甚微 ∀
213 提取缓冲液种类对蛋白质提取率的影响
提取缓冲液的种类对蛋白质的提取有影响 o磷酸盐缓冲液的提取效果好于 ×µ¬¶2‹≤¯ 缓冲液 o相同提取条
件下 o×µ¬¶2‹≤¯ 和 °…≥分别获得蛋白质ks1y| ? s1stl °ª#ªpt ƒ • 和kt1ux ? s1vul °ª#ªpt ƒ • o差异显著k Π
s1sxl ∀有文献表明 o×µ¬¶p‹≤¯ 缓冲液会抑制某些酶蛋白的活性k王中仁 ot||y ~吴冠芸等 oussvl o而且 ×µ¬¶p
‹≤¯ 缓冲液的 ³‹值对温度敏感性高于磷酸盐缓冲液 o可能是提取效果不如磷酸盐缓冲液的原因 ∀
214 提取缓冲液 πΗ值对蛋白质提取率的影响
提取缓冲液 ³‹值对蛋白质的提取有较大影响k图 tl ∀缓冲液 ³‹ 值由 z1s逐步升高 o蛋白质提取率逐
步升高 o此规律在 ³‹值 z1s ∗ |1x之间更为明显 ~³‹值继续升高 o蛋白质提取率上升幅度减小 ∀此试验结果
与茶叶蛋白质提取相一致k王洪新等 ousswl ∀提取液呈棕褐色 o而且提取缓冲液 ³‹ 值越高 o提取液颜色越
深 ∀³‹值影响麻栎种子蛋白质的提取可能有 u个原因 }一是蛋白质的等电点不同 o不同的 ³‹值条件下 o蛋
白质的溶解度不一样 ~二是碱性环境抑制多酚与蛋白质的结合 o同时酚氧化酶把酚转化成醌类物质 o后者将
和蛋白质的氨基和硫氢基反应 o使提取液变成棕色k王中仁 ot||yl ∀
215 Πς ΠΠ用量对蛋白质提取率的影响
试验结果表明 °∂°°用量显著影响麻栎种子蛋白质的提取率k图 ul ∀材料Β°∂°° 用量为 tΒs1st o
tΒs1ux otΒs1x和 tΒt时 o测得蛋白质含量分别为ks1vt ? s1tsl !ku1|s ? s1tsl !k{1xw ? s1ysl和kut1tw ? s1|{l
°ª#ªpt ƒ • ∀随着 °∂°°用量的增加 o蛋白质提取率显著增加 k Π s1stl o可见 °∂°°可大量吸附并沉淀材料
中的多酚 o从而促进蛋白质的溶解 ∀
图 t 提取缓冲液 ³‹值对蛋白质提取率的影响
ƒ¬ªqt ∞©©¨¦·²©³‹ √¤¯∏¨ ²© ¬¨·µ¤¦·¬²± ¥∏©©¨µ²± ³µ²·¨¬± ¬¨·µ¤¦·¬²±
图 u °∂°°用量对蛋白质提取率的影响
ƒ¬ªqu ∞©©¨¦·²©¤°²∏±·²©°∂°° ²± ³µ²·¨¬± ¬¨·µ¤¦·¬²±
添加大量 °∂°°后提取出的蛋白质可以测得酶蛋白有活性 o说明采用该方法提取的蛋白质保持活性状
{u 林 业 科 学 wv卷
态 o证明 °∂°°具有保护酶活性的作用 ∀汪昌俊等kusssl在对茶树k Χαµελλια σινενσισl鲜叶中 Βp葡萄糖苷酶
的研究中发现 o°∂°°用量从 tΒs增加到 tΒt时 o蛋白质提取比率显著增加 o酶活性也显著增加 ∀肖厚荣等
kussvl对烟草k Νιχοτιανα ταβαχυµl中硝酸还原酶的研究也发现 o在一定范围内 o硝酸还原酶的活性随着 °∂°
用量的增加而增强 ∀
另外 o样品研磨中加入 °∂°° o不但可以有效吸附多酚等物质 o而且还可起到类似石英砂的作用 o增大样
品研磨面积 o使得样品破碎得更为完全 ∀
表 2 正交试验数据及结果分析 ≠
Ταβ .2 Ρεσυλτ οφ ορτηογοναλτεστ
„ … ≤ 蛋白质含量 °µ²·¨¬± ¦²±·¨±·
t t t t u1ws
u t u u u1yw
v t v v x1yx
w u t u v1su
x u u v ut1{z
y u v t t1v|
z v t v v1|x
{ v u t s1{{
| v v u s1{s
Žt v1xy v1tu t1xy
Žu {1zy {1wz u1tx
Žv t1{{ u1yt ts1w|
• y1{{ x1{x {1|v
≠ Žt oŽu oŽv分别为各因素同一水平的效应平均值 o例如 Žt„为 „因素 t水平蛋白质
含量的平均值 o以此类推 ∀ • 为极差 o即同一因素各水平中极大值与极小值之差 o• 值大
小反映各因素主次顺序 ∀ Žt oŽu ¤±§Žv ¶·¤±§©²µ° ¤¨± √¤¯∏¨ ²© ¤¨¦«©¤¦·²µ²±·«¨ ¶¤°¨¯¨ √¨¯ o
©²µ ¬¨¤°³¯¨Žt„ ¬¶·«¨ °¨ ¤± √¤¯∏¨ ²©©¤¦·²µ„ ²± ¯¨ √¨¯ ²±¨ o¤±§¶² ²±q • º¤¶§¬©©¨µ¨±¦¨ ¥¨·º¨¨ ±
°¤¬q¤±§ °¬±q²©·«¨ ©¤¦·²µq
216 正交试验
由表 u可以看出 o各因素的主次
顺序为 ≤ !„ !…o即 °∂°°用量 !缓冲液
种类 !缓冲液 ³‹ 值 ∀经分析得出 o麻
栎种子蛋白质的最佳提取条件为
≤v „u …u o即采用 ³‹ z1x的磷酸钾提取
缓冲液 o材料Β°∂°°用量为 tΒt o采用
该条件所提取的蛋白质量为kut1{z ?
u1{|l °ª#ªpt ƒ • o显著高于其他条件
k Π s1stl ∀
各因素的影响水平见图 v o其中
°∂°°用量的影响是 tΒt  tΒs1x 
tΒs1ux o与单因素试验结果一致 ∀缓
冲液种类的影响效果是磷酸钾 磷酸
钠  ×µ¬¶2‹≤¯ 缓冲液 ∀缓冲液 ³‹ 值
的影响效果是 z1x  z1s  {1s ∀³‹ 值的影响与单因素试验的结果不一致 o可能是由于缓冲液的 ³‹ 值与
°∂°°相互作用引起的 ∀有试验表明 o°∂°°对多酚的吸附作用在酸性或者中性条件下最好 o³‹ 过高会影响
°∂°°对多酚的吸附作用k王中仁 ot||yl ∀
图 v 各因素效应曲线图
ƒ¬ªqv ∞©©¨¦·¶²©·«µ¨¨©¤¦·²µ¶
„ !…和 ≤分别代表缓冲液种类 !缓冲液 ³‹值和 °∂°°用
量 ∀t ou和 v分别代表各因素的 v个水平 ∀见表 t ∀„ o
… ¤±§≤ ¶·¤±§©²µ®¬±§¶²©¥∏©©¨µo³‹ √¤¯∏¨¶²©·«¨ ¥∏©©¨µ¤±§
·«¨ ¤°²∏±·²© °∂°° oµ¨¶³¨¦·¬√¨ ¼¯ qt ou ¤±§v ¶·¤±§©²µ·«¨
·«µ¨¨¯¨ √¨¯¶²© ¤¨¦«©¤¦·²µq≥¨¨ פ¥qt1
217 丙酮沉淀法
丙酮作为一种有机溶剂 o在蛋白质提取中主要有两方面的
作用 }一是沉淀蛋白质 ~二是作为多酚 !色素等物质的优良溶剂 o
可以去除多酚等的影响 ∀但在本试验中 o采用丙酮沉淀法提取
蛋白质 o只获得ky1yx ? s1wvl °ª#ªpt ƒ • 蛋白质 o显著低于正交
试验中最佳提取条件所获得的蛋白质量k Π s1stl ∀而且此法
操作复杂 o对温度条件要求较严格 o操作不当易使蛋白质凝结变
性 ∀丙酮沉淀以后蛋白质的溶剂要求复杂 o容易造成蛋白质溶
解不完全 ∀这种提取方法通常应用于蛋白质电泳中蛋白质的提
取 o用裂解液可以充分溶解蛋白质沉淀 o但是此法提取的蛋白质
已经变性 o不适用于酶学分析 ∀
v 结论与讨论
由单因素和正交试验结果可以看出 o诸多试验因素影响麻
栎种子中蛋白质的提取效果 o包括提取缓冲液的种类 !缓冲液的
³‹值和 °∂°°的用量 ∀经正交试验优化确定麻栎种子蛋白质的最佳提取条件为 }采用含有 t °°²¯ #pt
∞⁄ׄ ot °°²¯#pt „¶„ ot °°²¯#pt ⁄×× ot °°²¯#pt Š≥‹ ox °°²¯#pt ª≤¯ u os1sx h ×µ¬·²± ÷2tss和 us h甘
油的 xs °°²¯#pt磷酸钾缓冲液k³‹值 z1xl o加入与材料同等量的 °∂°°与材料共同研磨提取 ∀
文章所涉及的因素中 o影响最大的因素为 °∂°°的用量 ∀在通常的试验中 o采取在缓冲液中添加 t h ∗
u h的 °∂°°∀ • ¤¯®¨µ等kt|zwl研究表明 °∂°肽键中的氧与酚羟基上的质子牢固地结合 o从而防止酚与酶中
的肽键结合 o可以保护酶蛋白 ~但 °∂°加入量过多也可与蛋白质的肽键结合而抑制酶的活性 ∀于凤鸣kt|||l
|u 第 u期 辛 霞等 }富含多酚的麻栎种子中蛋白质提取的探讨
在研究玫瑰香葡萄kςιτισϖινιφερα ¦√ q ∏¶¦¤·l !桃kΑµψγδαλυσ περσιχαl !杏kΑρµενιαχα ϖυλγαρισl叶片中 °’⁄活性时
也发现 o随着缓冲液中 °∂°加入量的增加 o°’⁄活性逐渐升高 o继续加入 °∂° o活性则下降 ∀可能是 °∂°结
合并抑制了 °’⁄的活性 ∀但是 o麻栎种子中多酚含量较高 o采用 t h的 °∂°°几乎不能提取出蛋白质 o而当
°∂°°用量增加到 tΒt时 o才能有效提取出蛋白质 ∀提取缓冲液的种类对蛋白质的提取效果也有较大的影
响 o本试验范围内以磷酸钾缓冲液的效果为最好 ∀
另外从正交试验结果可以看出 o各种因素的影响作用并不是独立的 o往往存在相互的作用 o如缓冲液 ³‹
值与 °∂°°的用量之间存在相互影响 ∀在试验中盲目地照搬前人的方法是不可取的 o不同试验材料的最适
提取条件不尽相同 o而正交试验设计是一个很好的化繁为简的工具 ∀
参 考 文 献
杜怡斌 qusss1河北野生资源植物志 q保定 }河北大学出版社 owu
兰 彦 o钱小红 o王 阁 o等 qusst1 蛋白质组分析中蛋白质分步提取方法的建立 q生物化学与生物物理进展 ou{ kvl }wtx p wt{
黎新明 o崔英德 qussu1 交联 °∂°对茶多酚的吸附作用 q食品与发酵工业 ou{kwl }z p ts
林金科 o郑金贵 o袁 明 o等 qussv1 茶树蛋白质提取及双向电泳的改良方法 q茶叶科学 ouvktl }ty p us
石 碧 o狄 莹 qusss1 植物多酚 q北京 }科学出版社
汪昌俊 o李叶云 o王朝霞 qusss1 茶树鲜叶中 Βp葡萄糖苷酶提取条件的研究 q南京农业大学学报 ouvkul }|v p |y
王洪新 o胡昌云 qussw1 茶叶蛋白质提取及初步纯化研究 q食品工业科技 oux ktul }y| p zv
王中仁 qt||y q植物等位酶分析 q北京 }科学出版社
吴冠芸 o潘华珍 o吴 qussv1 生物化学与分子生物学试验常用数据手册 q北京 }科学出版社 otw
肖厚荣 o戴喜庆 o杨传秒 o等 qussv1 烟草中硝酸还原酶激活与抑制的研究 q安徽农业科学 ovtkyl }|{s p |{u
于凤鸣 qt||| q聚乙烯吡咯烷酮对果树叶片中 °’⁄活性的影响 q河北农业技术师范学院学报 otv ktl }wt p wv
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k责任编辑 徐 红l
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