全 文 ：第 wt卷 第 x期
u s s x年 | 月
林 业 科 学
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≥ ³¨qou s s x
桃幼胚及幼胚子叶再生的研究 3
吴延军t ou 张上隆t 谢 鸣u 陈俊伟u 秦永华t 秦巧平t
kt1浙江大学园艺系 杭州 vtssu| ~ u1 浙江省农业科学院园艺所 杭州 vtssutl
摘 要 } 以玉露桃和湖景蜜露桃幼胚及幼胚子叶为试材 o研究基本培养基类型 !激素 !损伤方式等因素对再生的
影响 ∀结果表明 }培养基是影响幼胚诱导愈伤组织的最重要因素 o≥适合供试材料诱导愈伤组织 ~激素诱导愈伤
组织因品种而异 o‘„„ t1s °ª#pt对 wx §!s1x °ª#pt对 xx §玉露 o…„ s1x °ª#pt对 xx §湖景蜜露效果较好 o在试验
浓度范围内 u ow p ⁄对供试幼胚均无明显效果 ~幼胚的发育状态是影响诱导愈伤组织的另一因素 o玉露桃 wx §愈伤
组织诱导率最高 o达 |y1y h o而 xx §诱导率为 {t1y h ∀愈伤组织可在 ≥ n s1sx °ª#pt ‘„„ n t1s °ª#pt …„培养
基上分化成芽 o再生芽在 tΠu ≥ n t1s °ª#pt Œ…„培养基上生根 ∀幼胚子叶不定芽再生培养基的激素配比为 ‘„„
s1xs °ª#pt n …„ ts1s °ª#pt !‘„„ s1sx °ª#pt n ×⁄ v1s °ª#pt ~带胚芽子叶纵向刻伤再生率高 ~不定梢k芽l在
tΠu ≥ n u h蔗糖 n z1x ª#pt琼脂 n Œ…„ t1s °ª#pt n „§us °ª#pt的培养基上能生根 ∀
关键词 } 桃 ~幼胚 ~子叶 ~愈伤组织 ~离体再生
中图分类号 }≥zt{1wy ~ ±|wv1t ~≥yyu1t 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kussxlsx p sswx p sy
收稿日期 }ussw p ts p ty ∀
基金项目 }宁波市科委项目/桃转基因研究0kusss农业项目资助l和浙江省农业科学院人才引进项目资助 ∀
3 张上隆为通讯作者 ∀
Πλαντλετσ Ρεγενερατιον φροµ Ιµ µατυρε Εµ βρψοσ ανδ Χοτψλεδονσ οφ Πεαχη
• ∏≠¤±­∏±tou «¤±ª≥«¤±ª¯²±ªt ÷¬¨ ¬±ªu ≤«¨ ±ª∏±º¨ ¬u ±¬± ≠²±ª«∏¤t ±¬± ±¬¤²³¬±ªt
kt1 ∆επαρτµεντ οφ Ηορτιχυλτυρε o Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ Ηανγζηου vtssu| ~ u1 Ινστιτυτε οφ Ηορτιχυλτυρε o Ζηεϕιανγ Αχαδεµψ
οφ ΑγριχυλτυραλΣχιενχεσ Ηανγζηου vtssutl
Αβστραχτ } ׫¨ °¤¬± ¦²°³²¶¬·¬²±²©¦∏¯·∏µ¨ °¨ §¬¤¶∏¦«¤¶·«¨ ¥¤¶¬¦°¨ §¬∏°¤±§«²µ°²±¨ ¶º¨ µ¨ ·¨¶·¨§©²µ·«¨¬µ¨ ©©¨¦·¶²± °¨ ¤¦«
kΠρυνυσ περσιχαl ¦¤¯ ∏¯¶©µ¨ ∏´¨±¦¼ ©µ²° ¬°°¤·∏µ¨ °¨¥µ¼²¶kº«¬¦«³¬¦®¨ §¤©·¨µ©∏¯¯ ©¯²º¨ µwx §¤¼¶¤±§xx §¤¼¶µ¨¶³¨¦·¬√¨ ¼¯l
∏±§¨µkuy ? tl ε º¬·«²∏·¯¬ª«·¬±¤±²µ·«²ª²±¤¯ ¬¨³¨µ¬°¨ ±·q„±§¤ °¨ ·«²§©²µ³¯¤±·µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²±©µ²°¬°°¤·∏µ¨ ¦²·¼¯ §¨²±¶kxx
§l «¤¶¥¨ ±¨ §¨ √¨ ²¯³¨ §¥¼ ¦∏¯·∏µ¨§²± ≥ °¨ §¬¤¶∏³³¯ °¨¨ ±·¨§ º¬·«u h ¶∏¦µ²¶¨ ¤±§s1zx h ¤ª¤µ¤±§«²µ°²±¨ ¬± √¤µ¬²∏¶
¦²°¥¬±¤·¬²±¶q׫¨ µ¨¶∏¯·¶¶«²º¨ §·«¤·}׫¨ ¥¤¶¤¯ °¨ §¬∏° º¤¶·«¨ °²¶·¬°³²µ·¤±·©¤¦·²µ©²µ¬±§∏¦¬±ª¦¤¯ ∏¯¶©µ²° °¨¥µ¼²¶q ≥
º¤¶¤§¤³·¨§·²−≠∏¯∏. kwx §¤±§xx §l ¤±§−‹∏­¬±ª°¬¯∏. kxx §l q‘„„ t1s °ª#pt ¤±§s1x °ª#pt º¨ µ¨ ¥¨·¨µ©²µ−≠∏¯∏.
kwx §¤±§xx §oµ¨¶³¨¦·¬√¨ ¼¯l o…„ s1x °ª#pt º¤¶¥¨·¨µ©²µ−‹∏­¬±ª°¬¯∏. kxx §l o¥∏·u ow2⁄«¤§±.·¤±¼¬°³²µ·¤±·¨©©¨¦·²±
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¦¤¯ ∏¯¶©µ¨ ∏´¨±¦¼©µ²° wx §¬°°¤·∏µ¨ °¨¥µ¼²¶º¤¶|y1y h ¤±§¬·º¤¶{t1y h ©µ²° xx § °¨¥µ¼²¶q≥«²²·¶µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²± ²¦¦∏µµ¨§
º«¨ ± ¦¤¯ ∏¯¶º¤¶·µ¤±¶©¨µµ¨§·²¤ °¨ §¬∏°¬± º«¬¦«·«¨ ‘„„ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± º¤¶s1sx °ª#pt ¤±§…„ º¤¶t1s °ª#pt q≥«²²·
µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¨§µ²²·¶¬±·«¨ °¨ §¬∏° ²©tΠu ≥ n t1s °ª#pt Œ…„ qu ·¼³¨¶²©«²µ°²±¨ ¦²°¥¬±¤·¬²±¶k‘„„ s1xs °ª#pt n …„
ts1s °ª#pt o‘„„ s1sx °ª#pt n ×⁄ v1s °ª#ptl º¨ µ¨ ©¤√²µ¤¥¯¨·²¶«²²·¶§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±©²µ·«¨ ¬°°¤·∏µ¨ ¦²·¼¯ §¨²±¶1
׫¨ µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²± º¤¶¦«¤±ª¨§º«¨ ±¦²·¼¯ §¨²±¶º¨ µ¨ º²∏±§¨§«²µ¬½²±·¤¯ ¼¯ ¥¼ ¤µ¤½²µ¥¯¤§¨ q׫¨ ¥¨¶·µ¨¶∏¯·¶º¨ µ¨ ²¥·¤¬±¨ §º«¨ ±
¦²·¼¯ §¨²±¶º¬·« °¨¥µ¼²±¬¦¤¬¬¶¤±§º²∏±§¨§¬±·«¨ ¶∏µ©¤¦¨ q„§√¨ ±·¬·¬²∏¶¶«²²·¦²∏¯§µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¨ ²±·«¨ tΠu≥ °¨ §¬∏° º¬·«Œ…„
t1s °ª#pt ¤±§„§us °ª#pt q
Κεψ ωορδσ} °¨ ¤¦«k Πρυνυσ περσιχαl ~¬°°¤·∏µ¨ °¨¥µ¼²¶~¦²·¼¯ §¨²±¶~¦¤¯ ∏¯¶~µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²±
高频再生系统是遗传转化研究的基础 ∀国内外学者对桃kΠρυνυσ περσιχαl离体培养均有研究k‹¤°°¨ µ¶¦«¯¤ª
ετ αλqot|{x ~≥¦²µ½¤ ετ αλqot||s ~•¬¤¤² ετ αλqot||{l o但相对于其他核果类果树 o桃经愈伤组织诱导率低 o再生
频率低且效果不稳定 o通过愈伤组织和体细胞途径再生的研究进展缓慢 ∀桃子叶再生报告较少 o目前仅见
¤±·¨等kt|{|l利用盛花后 zs §的幼胚子叶 ow ε 放 u{ §后培养在含 ×⁄和 Œ…„的 ≥培养基上及 °²²¯ µ¨等
kt||xl用贮藏于 w ε t ∗ v年的桃砧木成熟子叶培养获得再生芽 o但研究多以砧木为主且普遍存在诱导效率
不高 o培养程序复杂等问题 ∀桃再生系统的研究已严重制约了遗传转化工作k…¼µ±¨ oussul ∀本研究运用正交
设计研究愈伤组织诱导 !分化及完整植株形成 o并在前期筛选品种和幼胚子叶发育时间的基础上k吴延军等 o
ussvl o对影响幼胚子叶再生的一些因子开展详细研究 o试图建立分化频率较高 !培养方法简单 !成本低廉的
再生体系 o为桃遗传转化工作打下基础 ∀
t 材料与方法
111 试验材料
以浙江省奉化水蜜桃研究所种植的玉露k Πq περσιχα ¦√ q ≠∏¯∏l和湖景蜜露k Πq περσιχα ¦√ q ‹∏­¬±ª°¬¯∏l桃
幼果为试材 o于盛花后 wx §kx月 v日l oxx §kx月 tv日l取样 ∀
112 试验方法
t1u1t 桃幼胚的预处理及培养条件 选果型正常 !大小均一 !无伤无虫果 o常规消毒后除去果肉并剥开果
核 o取出幼胚接种在愈伤组织诱导培养基或子叶生长培养基k≥l上 okuy ? tl ε 暗中培养 ∀每处理 us个幼
胚 o重复 v次 ∀us §后统计愈伤组织诱导率 o并将愈伤组织接入分化培养基 o光照强度 u sss ∗ v sss ¬¯o光暗
周期 ty «Π{ «下培养 o培养温度同上 ∀us §后统计愈伤组织分化成芽的比例 ∀从子叶生长培养基上挑出幼
胚子叶 o作为子叶培养的外植体 o其不定芽诱导及生根培养条件与愈伤组织分化条件相同 ∀
t1u1u 愈伤组织诱导培养基 愈伤组织诱导培养基采用正交 w因素 w水平 tykwwl设计k表 tl o因素k水平l
分别为基本培养基类型kטŽ!• ° !≥和 ≥‹l !u ow p ⁄浓度ks !s1x !t1s和 t1x °ª#ptl !…„浓度ks1s !s1ux !
s1xs和 s1zx °ª#ptl和 ‘„„浓度ks1s !s1x !t1s和 t1x °ª#ptl ∀
表 1 幼胚诱导愈伤组织培养基
Ταβ .1 Μεδιυµ υσεδ φορ ινδυχινγ χαλλυσφροµ ιµ µατυρε εµβρψο οφ πεαχη
处理
×µ¨¤·° ±¨·
因素 ƒ¤¦·²µ¶
基本培养基
…¤¶¬¦° §¨¬∏°
激素 ‹²µ°²±¨ Πk°ª#ptl
u ow p ⁄ …„ ‘„„
×t טŽktl s1ssktl s1uxktl s1xsktl
×u טŽktl s1xskul s1sskul s1sskul
×v טŽktl t1sskvl s1xskvl t1sskvl
×w טŽktl t1xskwl s1zxkwl t1xskwl
• t • °kul s1ssktl s1sskul t1sskvl
• u • °kul s1xskul s1uxktl t1xskwl
• v • °kul t1sskvl s1zxkwl s1xsktl
• w • °kul t1xskwl s1xskvl s1sskul
t ≥kvl s1ssktl s1xskvl t1xskwl
u ≥kvl s1xskul s1zxkwl t1sskvl
v ≥kvl t1sskvl s1uxktl s1sskul
w ≥kvl t1xskwl s1sskul s1xsktl
≥t ≥‹kwl s1ssktl s1zxkwl s1sskul
≥u ≥‹kwl s1xskul s1xskvl s1xsktl
≥v ≥‹kwl t1sskvl s1sskul t1xskwl
≥w ≥‹kwl t1xskwl s1uxktl t1sskvl
t1u1v 愈伤组织分化培养基 分化培养基
以 ≥为基本培养基 o选用 ‘„„ 和 …„ 激素
组合 ∀ ‘„„浓度固定在 s1sx °ª#pt o…„ 设
w个浓度ks1x !t1s !t1x和u1s °ª#ptl ~…„浓
度固定在 s1x °ª#pt o‘„„设 v个浓度ks1t !
s1tx和 s1u °ª#ptl ∀
t1u1w 幼胚子叶分化培养基 以 ≥为基
本培养基 o激素配比分为 v组 }tl …„固定在
x1s °ª#pt o‘„„设 w个浓度ks1ux !s1x !s1zx
和 t1s °ª# pt l ~ ul ‘„„ 浓度固定在
s1x °ª#pt o…„ 设 y 个浓度ku1x !x1s !z1x !
ts1s !tu1x和 tx1s °ª#ptl ~vl ‘„„浓度固
定在 s1sx °ª#pt o×⁄ 设 w 个浓度ku1s !
v1s !w1s和 x1s °ª#ptl ∀
t1u1x 幼胚子叶切割处理 从子叶生长培
养基上挑出幼胚子叶作如下损伤处理 }tl带
胚芽单瓣子叶纵向刻伤 ~ul去胚芽单瓣子叶
纵向刻伤 ~vl沿子叶中心纵切成 u等份 ~wl
沿子叶中心纵切成 u等份并纵向刻伤 ~xl子叶横切分 v段 ~yl子叶横切分 v段并纵向刻伤 ~zl子叶横切成薄
片 ~{l子叶纵切成薄片 ∀
t1u1y 生根培养基 以 tΠu≥为基本培养基 o附加不同浓度的 Œ…„ ∀
以上培养基均加蔗糖 u h o琼脂 z1x ª#pt o调 ³‹ x1{ ∀tut ε 高压灭菌 us °¬±∀培养基中所用激素 …„ !
‘„„和 Œ…„采用高压灭菌 o×⁄采用过滤灭菌 ∀
t1u1z 统计分析 正交分析参考李春喜等kt||zl的方法 ∀用 ≥„≥统计软件包分析方差 ∀
yw 林 业 科 学 wt卷
u 结果与分析
211 幼胚愈伤组织的诱导及分化
u1t1t 愈伤组织的诱导 幼胚诱导愈伤组织的试验结果k表 ul经正交分析证明 o供试 w个因素中以基本培
养基类型k图 t„l最为关键 ∀盛花后 wx §玉露桃幼胚愈伤组织诱导最佳培养基为 ≥和 • ° o二者平均出愈
率分别为 {t1w h 和 {s1{ h o而 ≥‹ 为 ys1| h oטŽ最差仅为 v{1w h ∀其中最好组合是 • t o其出愈率达
|y1| h o其次为 tk|s h l !wk{{1| h l和 vk{y1z h l o最低为 ×u o仅 uu1u h o与 • t 上的相比相差 w倍多 ∀盛
花后 xx §玉露桃幼胚出愈率基本规律与 wx §相似 o最高者亦为 ≥ o平均出愈率达 z{1x h o后依次为 • °
kx{1v h l !טŽkxu1v h l o≥‹最低为 xt1z h ∀与 wx §幼胚相比 o培养基间差异明显缩小 o最高最低组合相差
仅为 uy1{ h o出愈率最好者是 w 和 v o分别达 {t1z h和 {s1s h o最差的是 ≥w o为 ux1s h ∀与盛花后 wx §幼
胚相比 o盛花后 xx §幼胚出愈率有较明显下降 o说明幼胚发育时间的长短会导致出愈率差异 ∀xx §湖景蜜
露幼胚出愈率的总趋势与玉露桃幼胚基本相似 o即 ≥培养基最好 o平均达 xw1z h oטŽ最差 o为 uv1w h o而
• ° 与 ≥‹出愈率相近 o分别为 vz1x h和 v|1v h ∀与同期玉露幼胚相比出愈率大大下降 o以 ≥为例二者相
差 uv1{ h o说明湖景蜜露桃出愈能力低于玉露桃k图版 ´ p t oul
图 t 基本培养基类型 !激素对桃幼胚愈伤组织诱导的影响
ƒ¬ªqt ∞©©¨¦·²©¥¤¶¬¦° §¨¬¤¤±§«²µ°²±¨ ²±·«¨ ¦¤¯ ∏¯¶
¬±§∏¦·¬²±©µ²°¬°°¤·∏µ¨ °¨¥µ¼²¶²©³¨¤¦«
v种激素对试材出愈率影响的研究表明k图 t… !
≤ !⁄l }u ow p ⁄为 t1x °ª#pt时 o盛花后 wx §的玉露
桃幼胚出愈率最高 o达 y{1| h o但各浓度间出愈率差
异不显著 ~u ow p ⁄浓度为 t1s °ª#pt时 o盛花后 xx §
的湖景蜜露桃幼胚出愈率最高 o达 x|1z h o各浓度间
差异不显著且各水平均较低kvz1t h ∗ wt1{ h l ∀说
明不同浓度 u ow p ⁄对供试幼胚诱导愈伤组织的影
响很小 ∀ …„为 s1ux °ª#pt时 owx §玉露桃幼胚出
愈率最高 o达到 zu1s h o但出愈率与 …„为 s °ª#pt
时无差异 ∀xx §玉露桃幼胚出愈率对 …„浓度变化
不敏感 o平均值均在 ys h 左右 ∀ …„ 为 s1x °ª#pt
时 oxx §湖景蜜露桃幼胚出愈率最好 o达 xt1| h ~
s1zx °ª#pt时最差 o仅为 uw1| h ∀这说明 …„ 对湖
景蜜露桃幼胚出愈率影响较大 ∀ ‘„„ 对 wx §玉露
桃幼胚出愈率受浓度的影响较大 o‘„„ t1s °ª#pt
时出愈率达到 zy1z h o而 t1x °ª#pt时反而下降 ∀
‘„„对 xx §玉露桃幼胚出愈率以 s1x °ª#pt时最
高 o但总体规律不明显 ~‘„„为 t1s °ª#pt时 xx §湖
景蜜露桃幼胚出愈率最低 o为 uz h ∀由此可见 o激素
对不同品种不同发育时期桃幼胚愈伤组织诱导效果
不同 o‘„„ t1s °ª#pt对 wx §!s1x °ª#pt对 xx §玉露桃 os1x °ª#pt …„对 xx §湖景蜜露桃效果较好 o在试
验浓度范围内 u ow p ⁄对 u个品种幼胚出愈率均无明显效果 ∀
u1t1u 愈伤组织再分化 将盛花后 wx §玉露桃幼胚愈伤组织接入分化培养基 o愈伤组织将会陆续分化 ∀由
表 v可看出 o愈伤组织分化成芽最好的培养基为 x号 o分化率为 ws1s h o其次为 v号和 y号 o分化率分别为
vy1z h和 vz1u h k图版 ´ p v ∗ xl ∀
212 幼胚子叶不定芽发生
u1u1t 激素配比对幼胚子叶不定梢k芽l发生的影响 结果如表 w所示 o×⁄是苯脲类细胞分裂素 o浓度升
高至 v1s °ª#pt时不定芽再生率最好 o高浓度 ×⁄上不定芽易发生玻璃化k图版 ´ p y ∗ zl ∀
zw 第 x期 吴延军等 }桃幼胚及幼胚子叶再生的研究
表 2 玉露 !湖景蜜露桃幼胚愈伤组织诱导 ≠
Ταβ .2 Χαλλυσ προδυχτιον φροµ ιµ µατυρε εµ βρψο οφ −Ψυλυ. ανδ −Ηυϕινµιλυ. πεαχη
培养基类型
 §¨¬∏°
玉露桃
−≠∏¯∏. ³¨ ¤¦«
湖景蜜露桃
−‹∏­¬±ª°¬¯∏. ³¨ ¤¦«
盛花后 wx §
wx §¤¼¶¤©·¨µ³µ²©∏¶¨ ©¯²º µ¨¬±ª
盛花后 xx §
xx §¤¼¶¤©·¨µ³µ²©∏¶¨ ©¯²º µ¨¬±ª
盛花后 xx §
xx §¤¼¶¤©·¨µ³µ²©∏¶¨ ©¯²º µ¨¬±ª
Ν¨ Ν¦ 愈伤组织诱导率•¤·¨ ²©¦¤¯ ∏¯¶Πh Ν¨ Ν¦
愈伤组织诱导率
•¤·¨ ²©¦¤¯ ∏¯¶Πh Ν¨ Ν¦
愈伤组织诱导率
•¤·¨ ²©¦¤¯ ∏¯¶Πh
×t ys vs xs1s¦? v1u ys ww zv1v¥ ? t1x yw tu t{1z© ? v1u
×u yv tw uu1u¨ ? u1z yt ux wt1s§ ? w1u xw tx uz1{§¨ ? u1t
×v xy uw wu1|¦§ ? v1y ys uz wx1s§ ? u1x xz tx uy1v§¨ ? w1u
×w x{ uu vz1|§ ? w1t xu uy xs1s§ ? u1| xz tu ut1t¨ ? t1y
• t x| xz |y1y¤ ? t1u yv ws yv1x¦? v1t x| t| vu1u§ ? u1x
• u yx xs zy1|¥ ? x1u xw vw yv1s¦? v1{ yw vu xs1s¦? u1y
• v ys xw zx1s¥ ? t1| xv vs xy1y¦§ ? w1u ys t{ vs1s§ ? w1y
• w xy wu zx1s¥ ? x1v xy u{ xs1s§ ? u1x yt u{ wx1|¦§ ? x1u
t ys vy ys1s¥¦? v1z wz yt zz1t¤¥ ? y1v yv xw {x1z¤ ? w1z
u ys xw |s1s¤ ? u1y yw w{ zx1s¤¥ ? t1| ys us us1s¨ ? v1x
v ys xu {y1z¤¥ ? w1u ys w{ {s1s¤ ? x1v yt vz ys1z¥ ? v1{
w yv xy {{1|¤ ? t1| ys w| {t1z¤ ? w1u yv vv xu1v¥¦? t1z
≥t yw vy xy1v¦? u1y yw vy xy1v¦§ ? u1{ yv tw u{1y§¨ ? u1{
≥u yu vt xs1s¦? u1{ xz v| y{1w¦? u1x ys vs xs1s¦? u1t
≥v ys v{ yv1v¥¦? w1v x{ vv xy1|¦§ ? u1| yt vt xs1{¦? u1x
≥w yt wx zv1{¥ ? u1{ yw ty ux1s¨ ? v1w yt t{ u|1x§ ? u1|
≠ Ν¨ }外植体数 ‘∏°¥¨µ²© ¬¨³¯¤±·¶~ Ν¦}愈伤组织数 ‘∏°¥¨µ²©¦¤¯ ∏¯¶q同一列相同字母表示在 Π s1sx时差异不显著 ∀  ¤¨±¶º¬·«¬± ¤¦²¯∏°±
©²¯ ²¯º §¨¥¼·«¨ ¶¤°¨¯¨ ·¨µ¶¤µ¨ ±²·¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ §¬©©¨µ¨±·¤·Π s1sx ¤¦¦²µ§¬±ª·² ≥„≥ ¤±¤¯¼¶¬¶q下同 ∀׫¨ ¶¤°¨¥¨ ²¯º1
表 3 激素种类和浓度对盛花后 45 δ 玉露桃幼胚愈伤组织分化的影响 ≠
Ταβ .3 Εφφεχτ οφ µεδια ωιτη διφφερεντ κινδσ ανδ
χονχεντρατιονσ οφ ηορµ ονε ον τηε σηοοτ ρεγενερατιον φροµ χαλλυσ οφ −Ψυλυ. πεαχη
培养基类型
 §¨¬∏°
激素 ‹²µ°²±¨
‘„„Πk°ª#ptl …„Πk°ª#ptl
外植体数
‘∏°¥¨µ²©
¬¨³¯¤±·¶
再生芽数
‘∏°¥¨µ²©
¶«²²·¶
再生芽比例
°¨ µ¦¨±·²©
¶«²²·¶Πh
≤Ž s s x{ s s
t s1sx s1x yt tx¥ uw1y¥
u s1ts s1x x| t{¤¥ vs1x¤¥
v s1tx s1x ys uu¤ vy1z¤
w s1us s1x ys {¦ tv1v¦
t s1sx s1x yt tx¥ uw1y¥
x s1sx t1s ys uw¤ ws1s¤
y s1sx t1x x| uu¤ vz1u¤
z s1sx u1s x{ {¦ tv1{¦
≠ 基本培养基为 ≥ o³‹为 x1{ ∀…¤¶¤¯ °¨ §¬∏°¬¶≥ o³‹ € x1{ q
表 4 不同浓度配比的激素对桃幼胚子叶再生影响 ≠
Ταβ .4 Τηε γροωτη οφ εξπλαντσιν ΜΣ ωιτη διφφερεντ κινδσ ανδ χονχεντρατιονσ οφ ηορµ ονε
培养基
 §¨¬∏°
激素
Šµ²º·«µ¨ª∏¯¤·²µ¶Πk°ª#ptl
‘„„ …„ ×⁄
接种外植
体数
Ν¨
再生芽
比例 
Π¶Πh
单个外植体
再生的不定
芽数 
Ν¶
单个外植体
最多再生的
不定芽数
Ν¶°
≤Ž s s ys s s s
tt s1sx u1s ys x|1u¦ t1uy¥ v
tu s1sx v1s ys {{1v¤ w1us¤ ts
tv s1sx w1s ys {x1s¤¥ v1us¤¥ z
tw s1sx x1s ys {s1u¥ t1y{¥ ty
≠基本培养基为 ≥ o³‹为 x1{ ∀…¤¶¤¯ ° §¨¬∏°¬¶≥ o³‹ € x1{ q Ν¨ }‘∏°¥¨µ²© ¬¨³¯¤±·¶~ Π¶}°¨ µ¦¨±·
²© ¬¨³¯¤±·¶º¬·«¶«²²·¶~ Ν¶} ¤¨± ±∏°¥¨µ²©¶«²²·¶³¨µ ¬¨³¯¤±·~ Ν¶° } ²¶·±∏°¥¨µ²©¶«²²·¶³¨µ ¬¨³¯¤±·¶1 基
数为产生不定芽的子叶数 ∀ ƒµ²° ¦²·¼¯ §¨²±¶·«¤·³µ²§∏¦¨§¶«²²·¶q
u1u1u 幼胚子叶损伤方式对不
定芽发生的影响 受伤的组织 !
器官或细胞可以感染农杆菌 o为
了提高基因的遗传转化率 o应最
大限度地使外植体受伤 ∀为此
试验中将幼胚子叶作损伤处理
后培养在 { 号培养基k ≥ n
ts1s °ª#pt …„ n s1xs °ª#pt
‘„„l上 o结果表明损伤方式对
子叶不定梢发生有较大影响k表
xl o子叶带胚芽刻伤培养效果最
好 o不定芽诱导率达 {s h以上 o
子叶带胚芽和不带胚芽间的再
生率有明显差异 ~子叶沿中心纵
切再生率中等 o刻伤与否无显著
差异 ~幼胚子叶横切 v等份 o不
论是否横向刻伤 o不定芽发生率
都很低 o尤其是不刻伤的近胚芽
端和刻伤处理的远胚芽端无任
何再生 ~子叶横切成薄片 !纵切
成薄片再生率虽低 o但是单个外
植体再生的不定芽或不定梢却
很多 o横切者有 vu个外植体变
{w 林 业 科 学 wt卷
褐死亡k图版 ´ p { ∗ txl ∀
表 5 损伤方式对子叶不定梢(芽)发生的影响
Ταβ .5 Εφφεχτ οφ ωουνδινγ ανδ χυττινγ ον σηοοτσ προλιφερατιον ιν πεαχη ιµ µ ατυρε χοτψλεδονσ
损伤方式 ≠
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外植体数
‘∏°¥¨µ²© ¬¨³¯¤±·¶
再生外植体数
‘∏°¥¨µ²©
µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²±
再生不定芽数
‘∏°¥¨µ²©
¤§√¨ ±·¬·¬²∏¶¶«²²·¶
不定芽生活力
≤²±§¬·¬²± ²©¤§√¨ ±·¬·¬²∏¶¶«²²·¶
绿色
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黄色
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褐色
…µ²º±
单个外植体再生的
不定芽数 
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再生率
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前部 „§2ª¨µ° us s s s s s s1ss¨ s1s©
x 中部 ¬§§¯¨ us u z z s s v1xs¦ ts1s¨
后部 „¥2ª¨µ° us u w u t v u1ss§ ts1s¨
前部 „§2ª¨µ° us x uv tz v s w1ys¥ ts1s¨
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后部 „¥2ª¨µ° us s s s s s s1ss¨ s1s©
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≠ t q带胚芽单瓣子叶纵向刻伤 ≤²·¼¯ §¨²±¶ º¬·« °¨¥µ¼²±¬¦¤¬¬¶¤±§ º²∏±§¨§¬± ·«¨ ¶∏µ©¤¦¨ ~u q去胚芽单瓣子叶纵向刻伤 ≤²·¼¯ §¨²±¶ º¬·«²∏·
°¨¥µ¼²±¬¦¤¬¬¶¤±§º²∏±§¨§¬±·«¨ ¶∏µ©¤¦¨ ~v q沿子叶中心纵切 o成 u等份 ≤²·¼¯ §¨²±¶¦∏·¬±·«¨ °¬§§¯¨¤¯²±ª·«¨ ªµ¤¬±~w q沿子叶中心纵切成 u等份并纵向
刻伤 ≤²·¼¯ §¨²±¶¦∏·¬±·«¨ °¬§§¯¨¤¯²±ª·«¨ ªµ¤¬± ¤±§º²∏±§¨§¬±·«¨ ¶∏µ©¤¦¨ ~x q子叶横切分 v段 ≤²·¼¯ §¨²±¶¦∏··²·«µ¨¨³¤µ·¶¤¯²±ª·«¨ ¤¯±§¶¦¤³¨ ²µ¬¨±·¤·¬²±~
y q子叶横切 o分 v段并纵向刻伤 ≤²·¼¯ §¨²±¶¦∏··²·«µ¨¨³¤µ·¶¤¯²±ª·«¨ ¤¯±§¶¦¤³¨ ²µ¬¨±·¤·¬²± ¤±§º²∏±§¨§¬±·«¨ ¶∏µ©¤¦¨ ~z q子叶横切成薄片 ≤²·¼¯ §¨²±¶¦∏·
·²³¬¨¦¨ ¤¯²±ª·«¨ ¤¯±§¶¦¤³¨ ²µ¬¨±·¤·¬²±~{ q子叶纵切成薄片 ≤²·¼¯ §¨²±¶¦∏··² ³¬¨¦¨ ¤¯²±ª·«¨ ªµ¤¬±q 基数为产生不定芽的子叶数 ∀ƒµ²° ¦²·¼¯ §¨²±¶·«¤·
³µ²§∏¦¨§¶«²²·¶q Ν¶} ¤¨± ±∏°¥¨µ²©¶«²²·¶³¨µ ¬¨³¯¤±·q
u1u1v 再生芽生根 不定梢移入生根培养基 o先在 Œ…„ s1x °ª#pt的 tΠu ≥培养基上培养 tx §k未生根l o
转入 Œ…„ t1s °ª#pt的 tΠu≥培养基上培养 x §后发根 o最终 vs个不定芽有 t|株可以发根 o发根率达
yv1w h o单个不定梢平均发根 u ∗ v条k图版 ´ p zl ∀
v 讨论
桃经分化途径再生一直是组培上的难题 o目前仅有少量研究报告 ∀胚发育时间影响愈伤组织诱导率 o幼
胚组织比成熟胚易于诱导愈伤组织k‹¤°°¨ µ¶¦«¯¤ª ετ αλqot|{x ~张永庆等 ousstl ∀花后 xy §幼胚比完全成熟
的胚易于诱导愈伤组织k‹¤°°¨ µ¶¦«¯¤ª ετ αλqot|{xl ∀经预试验发现发育 xx §后k含 xx §l的幼胚愈伤组织诱
导能力随幼胚发育时间延长诱导率下降 o此结果与前人相似 ∀为了提高诱导率将幼胚的发育时间继续缩短 o
但若发育时间很短则不易操作 o同时也有可能会降低诱导率 o因之选择盛花后 wx §和 xx §的幼胚为试材 ∀
品种影响诱导率 o品种 ≥∏±«¬ª«花后 xy §幼胚能诱导出 tv h 的疏松愈伤组织 o这些愈伤组织可诱导出 wx h
的结球愈伤组织 o≥∏±¦µ¨¶·品种的比例分别为 t{ h和 vv h k ‹¤°°¨ µ¶¦«¯¤ª ετ αλqot|{xl ∀ −京艳. 和−大久保.
比−绿化 |号.和−晚蜜.诱导愈伤组织的能力强k闫国华等 oussul ∀本试验说明玉露盛花后 xx §幼胚比同期
湖景蜜露出愈率高 ∀这表明桃幼胚诱导愈伤组织的能力品种间有一定差异 ∀桃愈伤组织的诱导可能是其再
生困难的因子之一 ∀本试验采用正交设计 o试验大大简化 o能方便快速地得到大量愈伤组织 o最高诱导率达
|y1y h o且 |s h以上都是淡黄色 !质地疏松并可诱导结球状愈伤组织 o这为获得高频再生提供了前提条件 ∀
基本培养基类型是影响幼胚诱导愈伤组织最主要的因素 o≥适合供试材料培养 o这可能与培养基的成
分有关 ∀ ≥培养基中 ‘’v p离子的含量远远高于 • ° !≥‹和 טŽ的 o维生素含量低于 ≥‹和 טŽ∀各培养
基在 Ž和 ≤∏等元素上也存在差异 ∀究竟是哪种成分造成出愈率差异还有待进一步研究 ∀激素的种类和浓
度 o对不同植物幼胚的继续发育有重要作用 ∀在桃幼胚愈伤组织诱导中使用过多种激素k吴延军等 oussul ∀
本试验证明在供试范围内不同浓度 u ow p ⁄对幼胚出愈率作用不大 o‘„„和 …„浓度因试材有差异 ∀
目前报告愈伤组织最高分化率为 zv1{ h k张永庆等 ousstl o本试验分化率最高仅达 ws h o仍然较低 ∀这
可能与供试品种不同有关 o也有可能与幼胚诱导愈伤组织的培养时间及发育程度有关 ∀愈伤组织移入分化
培养基 z §后 o就有个别愈伤组织分化产生芽 o这说明虽是接种的同一批愈伤组织 o培养时间相同但发育程
|w 第 x期 吴延军等 }桃幼胚及幼胚子叶再生的研究
度并不同步 ∀此外 o可能存在愈伤组织移入分化培养基时已错过最佳的分化时期 o表现出分化率低或培养基
不适合 ∀这可能也是影响再分化的因素之一 ∀愈伤组织的发育程度有可能成为除培养基类型外影响再生的
另一关键 ∀发育到何种程度的愈伤组织 !愈伤组织培养多长时间是移接到分化培养基的最佳时期 o如何诱导
发育阶段同步 !整齐的愈伤组织等问题成为下一步研究的重点之一 ∀
桃经愈伤组织诱导和体细胞胚胎发生完成植株再生的研究报告一直集中于幼胚这一幼嫩有性材料 ∀幼
胚作为外植体 o分化率稍好 o但取材受季节限制 o采样极为集中 o这给研究造成许多不便 o增加培养难度 ∀成
熟胚或成熟子叶取材虽易 o但分化率极低 o不是良好的外植体类型 ∀与幼胚相比幼胚子叶取材容易 o取材时
间适当延长 o分化不定芽所需时间周期短 o步骤少 o且多以直接再生出芽为主 o减少了培养变异发生 o是较好
的外植体类型 ∀
经前期预试验证明 wx §幼胚子叶比 xx §的易于再生 o玉露桃比湖景蜜露桃易于再生 o…„与 ‘„„的组
合并不能显著提高幼胚子叶的再生率k吴延军等 oussvl ∀在本文中选择盛花后 wx §玉露桃 o扩大 …„和 ‘„„
的组合增加 ×⁄并提高操作技能 o进一步开展试验 ∀本试验在诱导幼胚子叶不定芽形成时使用 ‘„„和 …„
组合 o分化率比前次均有提高 o增加的 …„tu1x和 tx1s °ª#ptk‘„„均为 s1x °ª#ptl o分化率分别达 zs1s h
和 yx1y h o…„为 ts1s °ª#pt时分化率达 {v1v h o分化效果较好 ∀ ×⁄和 ‘„„组合 o最高分化率达 {{1v h o
再生率高 ∀
农杆菌可以感染受伤的组织 !器官或细胞 o应最大限度地使外植体受伤以期获得较高遗传转化率 ∀因之
需经试验选择再生率较高的损伤方式 ∀幼胚子叶损伤方式对再生能力影响的试验表明损伤方式不同再生能
力有差异 o损伤方式处理的最高再生率为 {t1w h o与未做处理的 {v1v h相近 o农杆菌感染时可以选择此损伤
方式 ∀子叶切成薄片再生率不到 us h o但单个外植体再生芽较多 o尤其是横切薄片平均可达 y1{t个 o这可能
是横切薄片较易再生 o试验中却被置于不适合的分化培养基 o表现分化率较低 ∀因此需进一步试验 o有望得
到适宜幼胚子叶培养的另一程序 o进一步提高再生率 ∀
参 考 文 献
李春喜 o王文林 qt||z q生物统计学 q北京 }科学出版社 ot{y p usy
吴延军 o徐昌杰 o张上隆 qussu q桃组织培养和遗传转化研究现状及展望 q果树学报 ot|kul }tuv p tuz
吴延军 o张上隆 o张岚岚 o等 qussv q桃幼胚子叶不定芽发生的初步研究 q浙江大学学报 ou|kul }|v p |y
闫国华 o周 宇 qussu q桃幼胚下胚轴高频植株离体再生 q果树学报 ot|kwl }uvt p uvw
张永庆 o陈大明 o张上隆 o等 qusst q桃离体组织培养分化再生植株的研究 q园艺学报 ou{kwl }vwu p vww
…¼µ±¨ ⁄ ‹ qussu q°¨ ¤¦«¥µ¨ §¨¬±ª·µ¨±§¶}¤ º²µ¯§º¬§¨ ³¨µ¶³¨¦·¬√¨q„¦·¤ ‹²µ·ox|u }w| p x{
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