全 文 ：福建柏总 ⁄‘„的快速简便提取和鉴定
李晓青 叶冰莹 陈由强 朱锦懋
k福建师范大学生物工程学院 福州 vxssszl
安 平
(福建省林业科学研究院 福州 vxsstu)
摘 要 } 本文介绍了福建柏 Φοκιενια ηοδγινσιι k⁄∏±±l ‹ ±¨µ¼ ·¨×«²°¤¶总 ⁄‘„的提取介质组成分 o建立了
一个快速 !简便且高效提取和鉴定福建柏鲜叶 !干叶 !种子总 ⁄‘„的方法 ∀该方法所提 ⁄‘„的产率分别为 }
txs ∗ uxsΛªrª鲜叶 otss ∗ txsΛªrª干叶和 tws ∗ tysΛªrª种子 ~绝大多数粗提总 ⁄‘„’⁄uysr’⁄u{s € t q{s ?
s qsu ~提取的鲜叶 !种子和单种子胚乳总 ⁄‘„ 皆为 w{ ®¥o而干叶总 ⁄‘„ 为 xs Ž¥o都适于限制性酶切和
• „°⁄反应 ~一般实验时间为 w«∀该方法既不需氯化铯梯度离心和柱层析纯化 o也不需氯仿 }异戊醇抽提 o粗
提的总 ⁄‘„样品不经 • ‘¤¶¨ 消化即可用于 • „°⁄反应或经 • ‘¤¶¨ 消化用于限制性酶切 o因此 o具有高产率 !
高纯度 !高质量和快速简便等优点 ∀尤其是它所提取的干叶 ⁄‘„ o适于限制性酶切和 °≤ • 反应 o解决了取材
上的不便 ∀实验中还发现 }ktl提取 ⁄‘„之前去除叶绿素与否 o对提取福建柏总 ⁄‘„无明显影响 ∀kul只有
去除 • ‘„的福建柏总 ⁄‘„样品 o才能被限制性内切酶完全切开 ∀kvl• „°⁄模板中含 • ‘„ 及一定量的蛋
白质 o均不影响扩增效果 ∀kwl同一个体的鲜叶 !干叶 !种子总 ⁄‘„样品 o皆可得到完全一致的扩增产物 ∀
关键词 } 福建柏 o总 ⁄‘„提取 o提取介质 o限制性内切酶消化 o • „°⁄
收稿日期 }t||{2sz2ty ∀
基金项目 }福建省自然科学基金资助项目k≤|{tsstvl o福建省教委资助项目k„|zswvl ∀
ΦΑΣΤ ΑΝ∆ ΧΟΝς ΕΝΙΕΝΤ ΙΣΟΛΑΤΙΟΝ ΑΝ∆ ΧΗΑΡΑΧΤΕΡΙΖΑΤΙΟΝ ΟΦ
ΤΟΤΑΛ ∆ΝΑ ΙΝ ΦΟΚΙΕΝΙΑ ΗΟ∆ΓΙΝΣΙΙ (∆ΥΝΝ) ΗΕΝΡΨ ΕΤ ΤΗΟΜΑΣ .
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( Βιο2ενγινεερινγ Χολλεγε , Φυϕιαν Τεαχηερσ. Υνιϖερσιτψ Φυζηουvxsssz)
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( Φυϕιαν Αχαδε µ ψ οφ Φορεστρψ Φυζηουvxsstu)
Αβστραχτ : ׫¨ µ¨¦¨±·¶·∏§¬¨¶²© Φοκιενια ηοδγινσιι k⁄∏±±l ‹ ±¨µ¼ ·¨×«²°¤¶oº«¬¦«¬¶¤µ¤µ¨ ¤±§ ±¨§¤±2
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第 vx卷 第 x期t | | |年 | 月
林 业 科 学
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Κεψ ωορδσ: Φοκιενιαηοδγινσιι oŒ¶²¯¤·¬²± ²©·²·¤¯ ⁄‘„ o∞¬·µ¤¦·¬²± ° §¨¬∏° o⁄¬ª¨¶·¬²± º¬·«µ¨¶·µ¬¦·¬²± ±¨2
½¼°¨o • „°⁄
福建柏 Φοκιενια ηοδϕινσιι k⁄∏±±l‹ ±¨µ¼ ·¨×«²°¤¶是柏科 ≤∏³µ¨¶¶¤¦¨¤¨ 福建柏属的唯一种 o为我国
特有的 o第一批珍稀濒危二级保护植物k傅立国等 ot||tl o也作为二级保护植物列入 t||z年国家林业
部拟定的/重点野生植物保护名录0的初稿中 ∀近年来研究发现 o它在林地可持续发展方面有广泛的应
用前景k盛炜彤等 ot||ul o已被国家林业部列为重要造林树种 ∀有关其人工林生长量 !良种选育及培育
技术等方面的研究课题也被列为国家/九五0攻关项目 o其细胞水平的研究已对一些变异类型的核型进
行分析k李兆丰等 ot||xl o但其分子生物学方面的研究尚未涉及 ∀所以 o进行福建柏的遗传多样性研
究 o以选择稳定优良的天然群体就显得日益重要 ∀
随着 • „°⁄!• ƒ°及 „ƒ°等分子标记技术的发展 o树木遗传变异和遗传多样性的研究得到很大
的进展k∂¬ª±¬µετ αλ. ,t||x ~≤¤µ¯¶²±ot||t ~ • ¨¯¶« ετ αλ. ,t||s ~• ¬¯¯¬¤°¶ ετ αλ. , t||t ~ ‹ µ¨°¤± ετ αλ. ,
t||x ~∂²¶ ετ αλ. ,t||xl ∀ ⁄‘„的提取纯化是进行基因多样度等分析的基础 ∀在一些重要经济作物中 o
这方面的工作已有许多成熟的方案k⁄²¼¯ ¨ ετ αλ. ,t||s ~≥¦²··ετ αλ. ,t||{ ~• ²ª¨µ¶ ετ αλ. ,t|{x ~⁄²¼¯ ¨ ετ
αλ. ,t|{zl o如小麦 !水稻 !大豆等 ∀但一些珍稀濒危植物总 ⁄‘„ 的提取仍需不断摸索 o尤其是含酚类
物质较高的木本针叶类 ∀由于各种类型的次生物质易与核酸形成复合物 o使 ⁄‘„ 埋在这种粘稠的胶
状物中而难以溶解或产生不同程度的褐变 ∀而这种质量的 ⁄‘„ 既不适于做限制性酶切 o也不能用于
°≤ • 反应 ∀解决这些问题的理想方法有 }氯化铯梯度离心纯化k⁄¨ ¯¯¤³²µ·¤ ετ αλ. ,t|{vl和 ≤ × „…法
k≥¦²··ετ αλ. ,t|{{l o但前者昂贵 !费时 o且需大量植物材料 o后者对一些裸子植物已有报道是失败的
k°¬¨µµ¨ ετ αλ. ,t||ul ∀目前国内较为成熟而简便的方法有邹喻苹等的高盐低 ³‹ 法kt||wl o它是在
°¬¨µµ¨和 ‹¤∏µ¤±¦¨kt||ul基础上的改进 o已在一些植物的 ⁄‘„提取方面取得成功 o并多次被国内学者
采用 ∀我们在这个方法的基础上 o进行摸索和适当改进 o成功地建立了一个福建柏鲜叶 !干叶和种子
⁄‘„提取的有效方法 ∀它不需氯化铯梯度离心和柱层析纯化 o既简便迅速 o又经济可靠 o且所提的
⁄‘„产率较高k比邹喻苹等方法提取的高出 t倍左右l ∀尤为重要的是 o这种方法所提的 ⁄‘„ 纯度较
高 o不需经氯仿Β异戊醇抽提 o即可用于限制性酶切和 °≤ • 扩增 o减少了酚处理的毒性和繁琐 ∀同时 o
我们也建立了福建柏单粒种子胚乳 ⁄‘„的提取方法 o还对 ⁄‘„提取 !检测的步骤进行了适当的简化 ∀
t 材料和方法
111 材料
供实验的福建柏采自福州市森林公园后山 o以同一株树的鲜叶 !干叶kts倍于鲜叶重的变色硅胶保
存l !种子 !单粒种子胚乳 o分别提取总 ⁄‘„ ∀
112 提取介质
经实验摸索出提取介质最佳基本组成分为 }tss °°²¯r醋酸钠 !xs °°²¯r∞⁄× „ !xss °°²¯r
‘¤≤¯!u h °∂ ° !t h ≥⁄≥ o³‹x qx ∀
为有效防止氧化褐变和去除次生物质 o采用两组实验方案对比 }Œ组提取介质中加入 vs ∗ ys °°²¯r
抗坏血酸钠 ~ŒŒ组提取介质中加入 s1x h ∗ u1x h Β2巯基乙醇 ∀
ux 林 业 科 学 vx卷
113 丙酮抽提去除叶绿素对总 ∆ΝΑ提取的影响
¶组材料液 ‘u研磨后经 p us ε 预冷丙酮抽提 t次 o再用于 ⁄‘„提取 ~·组材料液 ‘u研磨后不经
冷丙酮抽提 o直接用于 ⁄‘„提取 ∀
114 提取方法
t1w1t 鲜叶 !干叶 !种子总 ⁄‘„提取 vª新鲜叶片k或由 vª鲜叶变色硅胶保存后的 t1uª干叶 o或 vª
带种翅的种子l o剪碎后置冰箱冷冻层稍冻 o在液 ‘u中迅速研磨 o加入 vs °yx ε 提取介质 o于 yx ε 水
浴中保温 t«q…¤¦®°¤±高速冷冻离心机kŠ≥ p tx• ≥wt{sl上离心 us °¬±o在上清液中加入 urv体积 u1x
°²¯r³‹w q{的 Ž„≤ 溶液 o冰浴 vs °¬±∀再 w ε 离心 us °¬±o两层纱布过滤取上清 ∀上清均分 v份 o分
别按以下 v种方法提取 }
基本按邹喻苹等kt||wl的方法 o简称 „方法 }s1y倍体积的 p us ε 预冷异丙醇温和混匀后 p us ε
放置 vs °¬±o离心 us °¬±o收集沉淀 o使溶入 s1v °消毒无离子水 o移入 t1x °的 ∞°³²§²µ©管中高速
冷冻离心机k…¤¦®°¤± Š≥ p tx• ƒuwswl离心 ts °¬±o去掉少许不溶物 o上清中再次加入 s1y体积 p us ε
的预冷异丙醇 o置 p us ε 冰箱中冷冻过夜 o离心 ts °¬±后将所得沉淀用 zs h乙醇洗 u次 ∀自然风干后
溶于 uxsˏ×∞中 op us ε 存贮 ∀
大致同 „处理方法 o仅将/上清中再次加入 s1y体积 p us ε 的预冷异丙醇0 o改成/加入 trts体积 v
°²¯r‘¤„¦k³‹x qul及 u1x体积的无水乙醇 o其余步骤不变 ∀简称 …方法 ∀
上清液中加入等体积的氯仿Β异戊醇kuwΒtl o离心 us °¬±o上清用酚Β氯仿Β异戊醇kuxΒuwΒtl抽提 u次
后 o上清液中加入 trts体积的 v °²¯r‘¤„¦k³‹x qul及 u1x体积的无水乙醇0 o置 p us ε 冰箱中冷冻过夜 o
离心所得沉淀用 zs h乙醇洗 u次 o自然风干后溶于 uxsˏ×∞中 op us ε 存贮 ∀简称 ≤方法 ∀
t1w1u 单粒种子胚乳总 ⁄‘„提取 分别用单位种子胚乳按 „ !… !≤ 方法处理 o提取总 ⁄‘„ ∀提取时
不需液 ‘u o只要把胚乳组织直接放入 t1x °的 ∞°³²§²µ©管中 o加入 tssˏyx ε 提取介质 o用尖头玻棒
研磨 o再用 xsˏ提取介质冲洗即可 ~每个方法提取的总 ⁄‘„沉淀风干后皆溶于 tssˏ×∞中 ∀
以上各材料各方法提到的粗提 ⁄‘„ o在紫外分光光度计k°«¤µ°¤¦¬¤公司生产l上 o测定波长 uys
±°及 u{s±°处光吸收值 o根据 ’⁄uysr’⁄u{s比值判断粗提 ⁄‘„ 样品的大致纯度k卢圣栋等 ot||v ~王
慧等 ot||zl ∀用 s1y h琼脂糖凝胶电泳 o以 Κ⁄‘„为标准 o溴化乙锭染色 o通过凝胶成像系统k…¬²p • ¤§
Š¨¯ ⁄²¦tsss型l计算机上 o检查所得 ⁄‘„大致分子量 o并拍照 ∀各粗提的 ⁄‘„样品 o分别加入 • ‘¤¶¨
„ktssΛªr°lvz ε 水浴中保温 t1x«o去除 • ‘„后测定波长 uys±°及 u{s±°处光吸收值 o根据 ’⁄uys
值计算 ⁄‘„产率 ∀
115 总 ∆ΝΑ限制性酶切反应
粗提的未经 • ‘¤¶¨ „ 消化的 ⁄‘„ 样品 o与经 • ‘¤¶¨ „ 消化的 ⁄‘„ 样品 o分别用限制性内切酶
‹¬±§ ¶和 ∞¦²• ´ kt Λª ⁄‘„ 用 t∏l ovz ε 水浴中温育 t «∀以 ∞⁄× „kts °°²¯rl终止酶切反应 ∀
s1y h琼脂糖凝胶电泳酶切样品 o溴化乙锭染色后检测 ∀
116 Ρ ΑΠ∆反应
以鲜叶 !干叶 !种子提取的未经纯化的粗提 ⁄‘„为模板 o用 ts个碱基核苷酸片断的单引物 ≥ p uxv
kŠŠ≤ × ŠŠ× × ≤≤l o在 °≤ • 热循环仪k…¬²p • §¨公司生产l上作 • „°⁄o扩增的反应体积为 tsˏo内含 }
xs °°²¯rŽ≤¯ots °°²¯r×µ¬¶q‹≤ k¯³‹| qsl os qt h ×µ¬·²± ÷ p tss ou °ªr°…≥„ ot qx °°²¯rª≤ u¯ o
s qx单位 פ´ 聚合酶 oussΛ°²¯r§‘×° ovs ∗ {s±ª模板 ⁄‘„ ous±ª引物 ∀扩增程序为 }|w ε ouss¶~vz
ε ot °¬±~zu ε ou °¬±~u次循环 o接着 |w ε ot °¬±~vz ε ot °¬±~zu ε ou °¬±~v{次循环 o然后 zu ε 维持 x
°¬±∀t1x h琼脂糖凝胶电泳检测所得 ⁄‘„随机扩增效果 o电压为 u1v∂ r¦° ∀
实验所用的引物 ≥ p uxv !§‘×°¶!פ´ ⁄‘„ 聚合酶 !ts ≅ °≤ • …∏©©¨µ! ª≤ u¯ oΚ⁄‘„ !• ‘¤¶¨ „ 均购
自上海生物工程公司 o‹¬±§¶ !∞¦²• ´ !°≤ • °¤µ®¨ µ购自华美生物工程公司 ∀
u 结果与结论
211 材料
vx x期 李晓青等 }福建柏总 ⁄‘„的快速简便提取和鉴定
经实验证明 }鲜叶 !干叶 !种子和单种子胚乳皆可用于提取 ⁄‘„ o且产率不低k详见 u1v部分l o它们
也都适于限制性酶切和 • „°⁄反应 ∀这在实验材料上突破了仅能用鲜叶提取 ⁄‘„的局限 ∀尤其值得
注意的是 }福建柏干叶所提 ⁄‘„的产率和质量皆较高 o适于限制性酶切和扩增 o而且 p us ε 存贮半年
仍可进行扩增和酶切 ∀这方面的实验结果与邹喻苹等对银杉 !矮牡丹 !泡沙参干叶 ⁄‘„的研究kt||wl
是一致的 o它在很大程度上解决了材料运输上的困难和取样的不便 ∀此外 o福建柏单种子胚乳 ⁄‘„的
提取和鉴定 o也将为其分子标记连锁图谱的构建和分析打下基础 ∀
212 提取介质
两组方案提取的总 ⁄‘„ o用 s1y h琼脂糖凝胶电泳检测 o´组没有总 ⁄‘„ 条带 oµ组有 ⁄‘„ 条
带 ∀说明抗坏血酸钠在福建柏总 ⁄‘„提取中不能起到有益的作用 o⁄‘„提取效果不佳 ~而 Βp巯基乙
醇较抗坏血酸钠 o能更有效地去除福建柏次生物质在提取中的影响 o并防止氧化褐变 ∀从提取过程可
发现 o不同浓度 Βp巯基乙醇对所提 ⁄‘„ 的纯度有一定影响 ∀在实验范围内 o浓度越低 o提取的 ⁄‘„
样品颜色越深 o⁄‘„纯度越差 o越难溶解 ∀以加入 u h或 u1x h Βp巯基乙醇的提取介质 o所提 ⁄‘„ 的
絮状沉淀颜色最白 o最易溶解 ∀因而实际操作中加入 u h Βp巯基乙醇即可 ∀
213 叶绿素去除与否对总 ∆ΝΑ提取的影响
实验证明 }经丙酮抽提的 ¶组和不经丙酮抽提的 ·组材料 o所提的 ⁄‘„絮状沉淀在颜色上没有差
别 o产率也大致相等 o在琼脂糖凝胶电泳时也未见明显差异 ∀所以我们认为 }福建柏叶片叶绿素去除与
否 o对 ⁄‘„提取无明显影响 ~且未去叶绿素材料所提的 ⁄‘„同样适于限制性酶切消化和 °≤ • 扩增反
应 ∀这一结论与施苏华等kt||yl提出的 o/加提取介质前用冷丙酮抽提效果更好0的看法不一致 o它是
否也适用于其他所有植物尚需实验证明 o但至少福建柏鲜叶 ⁄‘„提取过程中可删去这一步骤 ∀
214 提取方法
经 us次重复实验及 ⁄‘„产率对比k见表 tl o可知 }鲜叶 !干叶的 ⁄‘„提取以方法 …产率最大 o而
种子 !单种子胚乳的 ⁄‘„提取以方法 ≤ 产率最大 o这可能与种子中含蛋白质 !脂肪等较多 o经酚Β氯仿Β
异戊醇抽提能更有效去除这些次生物质有关 ∀尤其是胚乳组织 o富含更多的次生物质 o用方法 „ 和 …
皆难以提取到总 ⁄‘„ o只有方法 ≤ 才可以获得 ⁄‘„ ∀而种子 ⁄‘„提取中 o方法 …的产率虽然略低于
方法 ≤ 的 o但 …方法避免使用具有一定毒性的氯仿 !酚等 o所以我们认为种子总 ⁄‘„ 提取中 …方法仍
然是最佳的方法 ∀因此可以确定 }福建柏鲜叶 !干叶 !种子 ⁄‘„ 提取的最佳方法是 …方法 ∀从表中可
见 o它们所提的 ⁄‘„产率约为 „方法提取的 u倍左右 ∀该方法粗提的未去除 • ‘„的 ⁄‘„样品 o经紫
外分光光度计测定 o’⁄uysr’⁄u{s比值皆在 t1z| ∗ t1{u左右 o为 t1{s ? s1suk仅干叶的 u个样品比值为
t1|sl o说明该方法粗提的 ⁄‘„样品纯度较高k卢圣栋等 ot||v ~王 慧等 ot||zl ∀
表 1 福建柏 4 种材料 3 种提取方法所得总 ∆ΝΑ产率对比
Ταβ .1 Χοµ παρατιον ον τηε προδυχτιον ρατεσ οφ τοταλ ∆ΝΑ ιν φουρ µατεριαλσ οφ Φοκιενια ηοδγινσιι λισολατεδ βψτηρεε µετηοδσ
材料
¤·¨µ¬¤¯
方法
 ·¨«²§
总 ⁄‘„产率
°µ²§∏¦·¬²± µ¤·¨ ²©·²·¤¯ ⁄‘„ kΛªrª¯¨ ¤√ ¶¨²µΛªr²±¨ ±¨§²¶³¨µ°l
鲜叶
ƒµ¨¶«¯¨ ¤√ ¶¨
„
…
≤
xs ∗ tus
txs ∗ uxs
vs ∗ zs
干叶
⁄µ¼ ¯¨ ¤√ ¶¨
„
…
≤
xs ∗ {s
tss ∗ txs
vs ∗ ys
种子
≥¨¨ §¶
„
…
≤
zs ∗ |s
tws ∗ tys
txs ∗ t{s
单种子胚乳
’±¨ 2¶¨ §¨. ¶
±¨§²¶³¨µ°
„
…
≤
s
s
w ∗ w qx
把每一材料最佳方法提取的粗提总 ⁄‘„与Κ⁄‘„kw{®¥l o在 s1y h琼脂糖凝胶上对比k见图 tl o除
干叶的粗提 ⁄‘„条带前有一些 • ‘„团块外 o其余 v者皆无明显的 • ‘„团块 o这与 ’⁄uysr’⁄u{s比值
wx 林 业 科 学 vx卷
结果一致 ∀以 Κ⁄‘„为标准 o则除干叶的总 ⁄‘„ 为 xs®¥左右外 o其余 v 个材料的 ⁄‘„ 都大约为
w{®¥o适于做限制性酶切反应和 °≤ • 扩增 ∀
由此 o我们建立了一个适于福建柏鲜叶 !干叶和种子 ⁄‘„提取的简便 !快速 !高效的方法k方法 …l
和适于福建柏单种子胚乳 ⁄‘„提取的方法k方法 ≤l ∀方法 …不需使用常规核酸提取中使用较多的毒
性较大的试剂 o如 ≤ × „…或酚等 o而且避免了氯化铯梯度离心和反相柱层析等既贵且繁的纯化步骤 ∀
若对 ⁄‘„产率要求不是很高 o则不需/ p us ε 冰箱过夜沉淀 ⁄‘„0 o改成/ p us ε 冰箱中沉淀 vs °¬±0
即可 o则一般条件下 o该方法每次实验仅需 w«左右 ∀既方便省时 o又便宜安全 o且 ⁄‘„ 产率和纯度都
较高 ∀
215 总 ∆ΝΑ限制性酶切反应
从琼脂糖凝胶电泳图上k见图 ul可见 }未去除 • ‘„的福建柏 ⁄‘„ 样品 o酶切效果很差 o基本上未
切开 o只有去除 • ‘„的 ⁄‘„样品才能被限制性内切酶 ∞¦²• ´和 ‹¬±§¶完全切开 ∀这个结论对其他
植物是否适用尚需实验证明 ∀
图 t 福建柏鲜叶 !干叶 !种子和单
粒种子胚乳的粗提总 ⁄‘„
ƒ¬ªqt • ²∏ª« ·²·¤¯ ⁄‘„ ©µ²° ©µ¨¶«
¯¨ ¤√ ¶¨o §µ¼ ¯¨ ¤√ ¶¨o ¶¨ §¨¶¤±§ ²±¨ 2¶¨ §¨. ¶
±¨§²¶³¨µ° ²© Φοκιενιν ηοδγινσιι
t1 单粒种子胚乳总 ⁄‘„ ײ·¤¯ ⁄‘„ ²©
²±¨ 2¶¨ §¨. ¶ ±¨§²¶³¨µ° o u q鲜叶总 ⁄‘„
ײ·¤¯ ⁄‘„ ²© ©µ¨¶« ¯¨ ¤√ ¶¨o v q干叶总
⁄‘„ ײ·¤¯ ⁄‘„ ²©§µ¼ ¯¨ ¤√ ¶¨ow q种子总
⁄‘„ ײ·¤¯ ⁄‘„ ²©¶¨ §¨¶o  qΚ⁄‘„ q
图 u 经 • ‘¤¶¨ „ 处理和不经 • ‘¤¶¨ „
处理的福建柏粗提总 ⁄‘„ 限制性酶切
分析
ƒ¬ªqu „±¤¯¼¶¬¶²© §¬ª¨¶·¨§µ²∏ª«·²·¤¯ ⁄‘„ ²©
Φοκιενια ηοδγινσιι º«¬¦«·µ¨¤·¨§ º¬·« • ‘¤¶¨ „
²µ±²··µ¨¤·¨§ º¬·« • ‘¤¶¨ „
t1 经 • ‘¤¶¨ „处理的总 ⁄‘„ ‹¬±§¶酶切 ײ2
·¤¯ ⁄‘„ ·µ¨¤·¨§ º¬·« • ‘¤¶¨ „ §¬ª¨¶·¨§ º¬·«
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图 v 引物 ≥ p uxv 对福建柏同一个
体鲜叶 !干叶和种子粗提总 ⁄‘„的扩
增结果
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干叶总 ⁄‘„ 扩增结果 • „°⁄ ³µ²§∏¦·²©
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子总 ⁄‘„扩增结果 • „°⁄ ³µ²§∏¦·²©·¨°2
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216 Ρ ΑΠ∆反应
从琼脂糖凝胶电泳图上k见图 vl可见 }同一株树的鲜叶 !干叶 !种子的粗提 ⁄‘„ o经引物 ≥ p uxv扩
增 o产生同一条带 o产物是分子量约为 xss¥³的片段 ∀汪小全等kt||yl认为 }同一个体的鲜叶 !干叶 o其
⁄‘„样品的 • „°⁄扩增产物是一致的 ∀我们从实验结果可知 }同一个体 o不仅鲜叶 !干叶 o甚至种子的
xx x期 李晓青等 }福建柏总 ⁄‘„的快速简便提取和鉴定
总 ⁄‘„样品 o皆可得到完全一致的扩增产物 ∀实验中用于 • „°⁄反应的 ⁄‘„ 模板 o皆为方法 …粗提
的 ⁄‘„样品 o不论是 ’⁄uysr’⁄u{s比值为 t1{s左右的鲜叶还是比值为 t1|s的干叶 ⁄‘„ o实验中我们
皆未去除 • ‘„或经氯仿Β异戊醇纯化 o直接用于 • „°⁄反应 o而实验结果表明扩增效果不错 ∀从各样
品的 ’⁄uysr’⁄u{s比值来看 o为 t1{s ? s1su o仅 u 个干叶 ⁄‘„ 样品的比值为 t1|s ∀参照卢圣栋等
kt||vl的观点 o样品中含有 • ‘„和少量的蛋白质 ∀它说明 }°≤ • 模板中含 • ‘„ 及一定量的蛋白质 o
均不影响扩增效果 ∀这一结论与汪小全等的研究结果是一致的 ∀
⁄‘„的提取纯化以获得一定数量的 !质量足够好的 ⁄‘„ 样品 o是进行限制性酶切 !分子杂交及
°≤ • 扩增的首要步骤 o也是进行植物基因多样性等k汪小全等 ot||yl研究的必要前提 o本文的研究工作
为进一步开展福建柏的遗传多样性等研究打下坚实的基础 o也必将对这一珍稀树种的经营 !保护和改
良发挥重要作用 ∀同时也为其他植物提供一种可供参考的快速 !简便 !高效的 ⁄‘„提取鉴定方法 ∀
参 考 文 献
傅立国等 1 中国植物红皮书 ) ) ) 稀有和濒危植物k第一卷l1 北京 }科学出版社 ot||t
李兆丰 o周东雄 o安 平 1 福建柏变异类型的核型研究 1 林业科学 ot||x ovtkvl }utx ∗ ut|
卢圣栋主编 1 现代分子生物学实验技术 1 北京 }高等教育出版社 ot||v
盛炜彤 o薛秀康 1 福建柏 !杉木及其混交林生长与生态效应研究 1 林业科学 ot||u ou{kxl }v|z ∗ wsw
施苏华 o章 群 o陈月琴等 1 一种简易的植物核酸提取方法 1 中山大学学报k自然科学版l ot||y ovxkul }tsv ∗ tsx
王 慧 o曾勇庆 o岳永生等 1 从鸡血中提取高质量 ⁄‘„的研究 1 中国家禽 ot||z okul }x ∗ y
汪小全 o邹喻苹 o张大明等 1 • „°⁄应用于遗传多样性和系统学研究中的问题 1 植物学报 ot||y ov{ktul }|xw ∗ |yu
邹喻苹 o汪小全 o雷一丁等 1 几种濒危植物及其近缘类群总 ⁄‘„的提取和鉴定 1 植物学报 ot||w ovykzl }xu{ ∗ xvv
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