虫害是杨树造林生产中所面临的一大难题。通过农杆菌介导,将经过人工改造的苏云金杆菌杀虫结晶蛋白(Bt)基因转化杨树,得到杨树再生植株,然后,再将蛋白酶抑制剂基因(PI)导入已含Bt基因的转基因杨树,经PCR检测和Southern杂交分析证明,最终获得既含有Bt基因又含有蛋白酶抑制剂基因的转基因杨树植株。利用这种杨树叶片饲喂舞毒蛾幼虫的杀虫试验结果表明,转基因杨树具有明显的杀虫活性,同时表明含有Bt基因和蛋白酶抑制剂基因双基因的植株其抗虫能力明显高于仅含单一Bt基因的植株。为探索培育高抗虫性杨树开辟了一条新途径。
Poplars was seriously attacked by insects usually in many areas and insect resistant poplars are expected in forest production. In the experiment, the modified Bacillus thuringiensis (Bt) δ-endotoxin gene and proteinase inhibitor(PI)gene were contransformed to the explants of Populus nigra mediated by Agrobacterium tumefaciens. The integration of Bacillus thuringiensis gene and proteinase inhibitor(PI)gene were confirmed by PCR analysis and Southern hybridization. The results of bioassay showed that the transgenic plants had toxicity to the larvae of Lymantria dispar L., and that the transgenic plants containing Bt gene and PI gene had enhanced toxicity to larvae by comparison with plants containing only Bt gene.
全 文 ： 第 vy卷 第 u期u s s s年 v 月
林 业 科 学
≥≤∞× ≥∂ ∞ ≥≤ ∞
∂ ²¯1vy o ²1u
¤µqou s s s
转
·基因和蛋白酶抑制剂基因杨树抗虫性的研究
李明亮 张 辉 胡建军 韩一凡
k中国林业科学研究院林业研究所 北京 tsss|tl
田颖川
k中国科学院微生物研究所 北京 tsss{sl
摘 要 }虫害是杨树造林生产中所面临的一大难题 ∀通过农杆菌介导 o将经过人工改造的苏云金杆菌杀虫
结晶蛋白k
·l基因转化杨树 o得到杨树再生植株 o然后 o再将蛋白酶抑制剂基因k°l导入已含
·基因的转基
因杨树 o经 °≤ 检测和 ≥²∏·«¨µ±杂交分析证明 o最终获得既含有
·基因又含有蛋白酶抑制剂基因的转基因
杨树植株 ∀利用这种杨树叶片饲喂舞毒蛾幼虫的杀虫试验结果表明 o转基因杨树具有明显的杀虫活性 o同时
表明含有
·基因和蛋白酶抑制剂基因双基因的植株其抗虫能力明显高于仅含单一
·基因的植株 ∀为探索
培育高抗虫性杨树开辟了一条新途径 ∀
关键词 }欧洲黑杨 o
·基因 o蛋白酶抑制剂基因 o抗虫性
收稿日期 }t|||2sx2sw ∀
ΣΤΥ∆Ψ ΟΝ ΙΝΣΕΧΤ2ΡΕΣΙΣΤΑΝΤ ΤΡΑΝΣΓΕΝΙΧ ΠΟΠΛΑΡ ΠΛΑΝΤΣ
ΧΟΝΤΑΙΝΙΝΓ ΒΟΤΗ ΒΤ ΑΝ∆ ΠΙ ΓΕΝΕ
¬¬±ª¯¬¤±ª «¤±ª ∏¬ ∏¬¤±∏± ¤± ≠¬©¤±
( Τηε Ρεσεαρχη Ινστιτυτε οφ Φορεστψ, ΧΑΦ Βειϕινγ tsss|t)
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(Ινστιτυτε οφ Μιχροβιολογψ, Χηινεσε Αχαδε µψοφ Σχιενχεσ Βειϕινγ tsss{s)
Αβστραχτ : °²³¯¤µ¶º¤¶¶¨µ¬²∏¶¯¼ ¤··¤¦®¨ §¥¼¬±¶¨¦·¶∏¶∏¤¯ ¼¯¬± °¤±¼ ¤µ¨¤¶¤±§¬±¶¨¦·2µ¨¶¬¶·¤±·³²³¯¤µ¶¤µ¨ ¬¨³¨¦·¨§
¬±©²µ¨¶·³µ²§∏¦·¬²±q±·«¨ ¬¨³¨µ¬° ±¨·o·«¨ °²§¬©¬¨§ Βαχιλλυστηυρινγιενσισ k
·l ∆2 ±¨§²·²¬¬± ª¨ ±¨ ¤±§³µ²·¨¬±¤¶¨
¬±«¬¥¬·²µk°lª¨ ±¨ º µ¨¨ ¦²±·µ¤±¶©²µ° §¨·²·«¨ ¬¨³¯¤±·¶²© Ποπυλυσ νιγρα ° §¨¬¤·¨§¥¼ Αγροβαχτεριυ µ τυ µεφαχιενσ.
׫¨ ¬±·¨ªµ¤·¬²± ²© Βαχιλλυσ τηυρινγιενσισ ª¨ ±¨ ¤±§³µ²·¨¬±¤¶¨ ¬±«¬¥¬·²µk°lª¨ ±¨ º µ¨¨ ¦²±©¬µ° §¨¥¼ °≤ ¤±¤¯¼¶¬¶
¤±§≥²∏·«¨µ± «¼¥µ¬§¬½¤·¬²±q׫¨ µ¨¶∏¯·¶²©¥¬²¤¶¶¤¼ ¶«²º §¨·«¤··«¨ ·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³¯¤±·¶«¤§·²¬¬¦¬·¼·²·«¨ ¤¯µ√¤¨ ²©
Λψµ αντρια δισπαρ qo¤±§·«¤··«¨ ·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³¯¤±·¶¦²±·¤¬±¬±ª
·ª¨ ±¨ ¤±§° ª¨ ±¨ «¤§ ±¨«¤±¦¨§·²¬¬¦¬·¼·² ¤¯µ2
√¤¨ ¥¼ ¦²°³¤µ¬¶²± º¬·«³¯¤±·¶¦²±·¤¬±¬±ª²±¯ ¼
·ª¨ ±¨ q
Κεψ ωορδσ: Ποπυλυσ νιγραo
·ª¨ ±¨ o°µ²·¨¬±¤¶¨ ¬±«¬¥¬·²µª¨ ±¨ o±¶¨¦·2µ¨¶¬¶·¤±¦¨
植物抗虫基因工程是现代生物技术领域的重要成果之一 o近几年来在这方面研究进展迅速 o即使
在以研究难度较大的木本植物为实验材料的林木基因工程研究中 o也取得了重大进展 ∀自从 t|{z年
ƒ¬¯¯¤··¬等人kt|{zl首次利用农杆菌对银白杨 ≅大齿杨进行转化 o获得第一株林木转基因植株以来 o此
方面的研究不断取得突破 o如 ¦≤²º±等 okt||tl获得了抗舞毒蛾和天幕毛虫的银白杨 ≅ 大齿杨的转
基植株 ∀自 t|{|年起 o本实验室与中国科学院微生物研究所合作 o成功地将
·杀虫蛋白基因转入欧
洲黑杨 o筛选出抗鳞翅目食叶害虫舞毒蛾和杨尺蠖的杨树品种 o杀虫率高达 zy h以上 ∀t||t年又开展
了
·基因对欧美杨的转化研究k田颖川等 ot||v ~王学聘等 ot||zl ∀从以往的研究结果看出 o
·基因无
疑是目前应用最为广泛和最有潜力的抗虫基因之一k≤«² ετ αλ. ot||u ~≥ ²¨±ª ¼∏¯ ετ αλ. ot||u q~ «¬°
ετ αλ. ot||sl ∀但是
·基因在应用中也存在一些问题 }
·杀虫结晶蛋白抗虫谱较窄 ~害虫易对杀虫结
晶蛋白产生耐受性 ∀
·杀虫剂是一种复合杀虫剂 o而在以往的研究中往往只向受体植物转入单一的抗
虫基因 o致使转基因植株的抗虫能力不强 !抗虫性不持久 ∀解决这一问题的理想方法就是将 u个或 u
个以上不同类型的抗虫基因同时导入细胞 o这样能在很大程度上延缓昆虫抗性的发生 ∀因为同时导入
不同类型的抗虫基因 o不仅使害虫产生耐受性的机率大大降低 o而且也增强了杀虫活力 ∀蛋白酶抑制
剂k³µ²·¨¬±¤¶¨ ¬±«¬¥¬·²µo°l是自然界含量最为丰富的蛋白种类之一 o能与昆虫消化道内的蛋白酶相互
作用 o削弱或阻断蛋白酶对食物中蛋白质的消化 ∀蛋白酶抑制剂和蛋白酶形成的复合体能使昆虫产生
厌食反应 o最终导致昆虫的非正常发育 o甚至死亡k王志斌等 ot||{l ∀目前已有多种蛋白酶抑制剂基因
被克隆并先后分别被导入植物 o表现出良好的抗虫效果 ∀以木本植物为材料的研究中 o也有成功的报
道 ∀例如 o²º¤大学的研究者利用马铃薯中的蛋白酶抑制剂基因与 °×基因构成嵌合基因 o以根癌
农杆菌 ׬质粒为载体 o对杨树进行转化 o获得了转基因植株k¯²³©¨ ±·¨¬± ετ αλ. ot||tl ∀与苏云金杆菌
杀虫结晶蛋白相比 o蛋白酶抑制剂具有抗虫谱广 o对人畜无副作用及昆虫不易产生耐受性等特点 o但存
在转基因植株中表达量低等弱点 ∀本研究 o在以往研究的基础上 o通过农杆菌的 ׬质粒的双元载体将
这 u个抗虫机制不同的基因同时导入杨树k欧洲黑杨l o通过这 u个杀虫基因不同杀虫机理的协同作
用 o提高受体植物的抗虫能力和增大抗虫的广谱性 o延缓或避免害虫对外源抗虫基因产生耐受性 o从而
获得抗虫能力强且稳定的转基因杨树 ∀同时为今后多元复合基因导入受体植株奠定研究基础 ∀
t 材料和方法
1 q1 材料
t qt qt 菌种和质粒 含
·杀虫结晶蛋白基因的植物表达载体 ³
¬±wvz !含蛋白酶抑制剂基因的植物
表达载体 ³
¬±wvz o由中国科学院微生物研究所构建并提供 ∀
t qt qu 受试昆虫 舞毒蛾k Λψµ αντρια δισπαρ ql幼虫由中国林业科学研究院林业研究所分子遗传室
提供 ∀
t qt qv 植物材料 欧洲黑杨k Ποπυλυσ νιγρα)组培苗 o由中国林业科学研究院林业研究所分子遗传室
提供 ∀
1 q2 方法
t qu qt 中间载体的构建 具体方法和步骤见有关文献k田颖川等 ot||vl ∀
t qu qu 杨树外植体的转化 转化方法为农杆菌介导的叶盘法 ∀不定芽诱导培养基为 ≥ n
os1u
°ªrn s1su °ªro生根培养基为 tru ≥ n s1su °ªr∀
t qu qv 再生植株的分子生物学检测 ktl用 °≤ 分析 }杨树 ⁄的制备采用 ≤ ×
法k ²ª¨µετ αλ. o
t|{{l ∀杨树叶片 ⁄ us ∗ vs ±ª在 us Λ反应体积 o§×° s1u °°²¯roפ´ ⁄聚合酶 s1u o
·基
因或蛋白酶抑制剂基因特异引物各 ts ³°²¯ q°≤ 反应条件为 }|w ε 变性 vs ¶oxx ε 退火 t °¬±ozu ε 延
伸 t °¬±o重复 vs个循环 ∀反应结束后扩增产物在 t h琼脂糖凝胶上电泳检查 ∀kul≥²∏·«¨µ±杂交分
析 }ts Λª杨树叶片 ⁄经 ¬±§完全酶切后在 s1{ h琼脂糖凝胶上电泳分离 o用 ¼¥¤±§公司的真
空转膜装置将 ⁄转到 ·¨¤2³µ²¥¨ 膜上 o然后与 Α2vu°2§≤ ×°标记
·基因或 °基因探针杂交过夜kyx
ε l !膜经漂洗后在 ÷2光胶片上进行放射性自显影 ∀
t qu qw 植株抗虫活性的测试 每瓶放入 vs头 t龄的舞毒蛾幼虫 o于 us ε 的人工气候箱饲养 o每 u §
更换叶片 t次 o同时观察和记录幼虫的取食 !生长与存活状况 ots §后统计幼虫的死亡率 ∀
u 结果与分析
2 q1 转基因杨树植株的分子生物学检测
以杨树植株叶片 ⁄为模板 !分别用
·基因和蛋白酶抑制剂基因的特异引物 o在 us Λ反应体系
中进行 °≤ 扩增 o°≤ 产物的电泳结果表明 x株转基因植株出现 u条 ⁄ 片段 o其中 t条与阳性对
照 ⁄片段的大小一致 o而非转基因对照植株未扩增出任何 ⁄ 片段 ∀初步证明外源
·基因和蛋
白酶抑制剂基因已整合到这些杨树的基因组 ⁄中k图 tl ∀
w| 林 业 科 学 vy卷
图 t 部分转抗虫基因杨树再生植株 °≤ 检测电泳图谱
ƒ¬ªqt ¨¯ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶²©°≤ ³µ²§∏¦·¶²©µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¨§³²³¯¤µ¶
t ∗ x q°基因引物的 °≤ 扩增产物 }t ou ow }转 °基因植株的
°≤ 产物 ~v q非转基因植株的 °≤ 产物 ~x q °基因的阳性对照 ~
y qt®¥ ⁄ qz ∗ tv q
·基因引物的 °≤ 扩增产物 }z ∗ tt q转
·
基因植株的 °≤ 产物 ~tu q非转基因植株的 °≤ 产物 ~tv q
·基因
的阳性对照 ∀
¤±¨ t ou ow } ƒµ²° ·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µ¶¦²±·¤¬±¬±ª
·¤±§ ° ª¨ ±¨ ¶~
¤±¨ v } °≤ ³µ²§∏¦·©µ²° ±²±2·µ¤±¶©²µ° §¨ ³²³¯¤µ~ ¤±¨ x } ƒµ²°
³¯¤¶°¬§¦²±·¤¬±¬±ª ° ª¨ ±¨ ¤¶¤ ³²¶¬·¬√¨¦²±·µ²¯ ~ ¤±¨ y }t®¥ ⁄
¤¯§§¨µ~¤±¨ z ∗ tt }ƒµ²° §¬©©¨ µ¨±··µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µ¶¦²±·¤¬±¬±ª
q·
ª¨ ±¨ ~¤±¨ tu }ƒµ²° ±²±2·µ¤±¶©²µ° §¨³²³¯¤µ~¤±¨ tv } ƒµ²° ³¯¤¶2
°¬§¦²±·¤¬±¬±ª
·ª¨ ±¨ ¤¶¤³²¶¬·¬√¨¦²±·µ²¯ q¤±¨ t ¤±§z }ƒµ²° ·«¨
¶¤°¨⁄ ²© ¤·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µk²qtl ~ ¤±¨ u ¤±§{ } ƒµ²° ·«¨
¶¤°¨⁄ ²© ¤·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µk²qul ~ ¤±¨ v ¤±§| } ƒµ²° ·«¨
¶¤°¨ ⁄ ²©¤·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µk²qvl ~¤±¨ w ¤±§ts } ƒµ²° ·«¨
¶¤°¨ ⁄ ²©¤·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µk²qwl q
为了进一步证实外源基因在染色体内的整合 o对部分 °≤ 阳性植株进行了 ≥²∏·«¨µ±杂交分析以
进一步分别检测
·基因和 °基因在杨树基因组中的整合状况 ∀
≥²∏·«¨µ±杂交分析结果表明 o转
·基因和 °基因杨树植株 ⁄的 ¬±§酶切产物与 °基因
探针杂交可产生大约 y1x ®¥和 v1x ®¥的 u条杂交带 o而非转基因植株不产生任何杂交带k图 u ql ∀
说明 °基因已整合到杨树基因组 ⁄中 o并初步表明也有两个拷贝的整合 ∀转
·基因和 °基因杨
树植株 ⁄的 ¬±§酶切产物与
·基因探针杂交可产生大约 z1s ®¥和 v1s ®¥的 u条杂交带 o而
非转基因植株不产生任何杂交带 ∀表明这 u条杂交带为插入的外源基因片段k图 u q
l ∀这一结果说明
·基因已整合到杨树基因组 ⁄中 o并初步表明有两个拷贝的整合 ∀
图 u 转蛋白酶抑制剂基因kl和
·基因k
l杨树的 ≥²∏·«¨µ±杂交分析
ƒ¬ªqu ≥²∏·«¨µ± ¥¯²·¤±¤¯¼¶¬¶²©ª¨ ±²°¬¦⁄ ©µ²° ³²³¯¤µ³¯¤±··µ¤±¶©²µ° §¨ º¬·« ° ª¨ ±¨ kl ¤±§
·ª¨ ±¨ k
l
kl }t ou q转 °基因植株 ⁄ ~v q转
·基因植株 ⁄ ~w q阳性对照 ~x q非转基因植株 ⁄ ~y qt®¥⁄ ∀上述 ⁄用 ¬±§完全酶
解并用vu°标记的 °基因 ¦⁄ 作为探针进行杂交 ∀ k
l }z q非转基因植株 ⁄ ~{ ∗ ts q转
·基因植株 ⁄ ~tt qt®¥ ⁄ ∀上述
⁄用 ¬±§完全酶解并用vu°标记的
·基因 ¦⁄作为探针进行杂交 ∀t和 { }为同一转双基因植株k²qtl ~u和 | }为同一转双基
因植株k²qul ~v和 ts }为同一转
·基因植株 ∀
kl } ¤¯±¨ t ou } ⁄ ©µ²° ·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µ¶¦²±·¤¬±¬±ª ° ª¨ ±¨ ~¤±¨ v }⁄ ©µ²° ·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µ¶¦²±·¤¬±¬±ª
·ª¨ ±¨ ~¤±¨ w }°²¶¬·¬√¨
¦²±·µ²¯ ⁄ ~¤±¨ x }ƒµ²° ±²±2·µ¤±¶©²µ° §¨³²³¯¤µ~¤±¨ y }t®¥ ⁄ ¤¯§§¨µqk
l }¤±¨ z } ƒµ²° ±²±2·µ¤±¶©²µ° §¨³²³¯¤µ~¤±¨ { ∗ ts }
⁄ ©µ²° ·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µ¶¦²±·¤¬±¬±ª
·ª¨ ±¨ ~¤±¨ tt qt®¥⁄ q׫¨ ⁄¶²©³²³¯¤µ¶¤¥²√¨§¬ª¨¶·¨§ º¬·« ¬±§¤±§«¼¥µ¬§¬½¨ § º¬·«
vu° ¤¯¥¨ ¯¯ §¨
·ª¨ ±¨ ²µ° ª¨ ±¨ ¤¶³µ²¥¨ q¤±¨ t ¤±§ ¤¯±¨ { }⁄ ©µ²° ¤¶¤°¨·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µk²qtl ~¤±¨ u ¤±§ ¤¯±¨ | }⁄ ©µ²° ¤¶¤°¨
·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µk²qul ~¤±¨ v ¤±§ ¤¯±¨ ts }⁄ ©µ²° ¤¶¤°¨·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µ¦²±·¤¬±¬±ª
·ª¨ ±¨ k²qvl q
x| u期 李明亮等 }转
·基因和蛋白酶抑制剂基因杨树抗虫性的研究
2 q2 转基因植株的杀虫效应
用大田中转基因杨树的幼嫩叶片喂养舞毒蛾幼虫 o虫试结果表明 o转
·基因植株的幼虫死亡率为
wsh以上 ~转双基因植株的幼虫死亡率为 tss h ~而对照植株的幼虫死亡率仅为 sh ∗ tsh k表 t和图 vl∀
此外 o在实验过程中还观察到 o在这 ts §期间 o
取食双基因植株的幼虫死亡前 o出现麻痹 o活动
能力低下 o停止进食等症状 ∀即使取食转基因
叶片的幼虫可能幸存下来 o也出现其生长发育
受到明显抑制的现象 ∀
表 1 转抗虫基因杨树对舞毒蛾幼虫死亡率的影响
Ταβ .1 Ινφλυενχε οφ τρανσγενιχ ποπλαρσ ον τηε µορταλιτψ
οφ τηελαρϖαε οφ Λψµαντρια δισπαρ
植株编号 ≠
≤²§¨
接虫数
¤µ√¤¨
±∏°¥¨µ
k«¨ ¤§l
成活头数
k第 ts§l
¬√¬±ª±∏°¥¨µ
kts·«§l
k«¨ ¤§l
死亡头数
⁄¨ ¤§
±∏°¥¨µ
k«¨ ¤§l
死亡率
²µ·¤¯¬·¼
k h l
t vs uz v ts
u vs vs s s
v vs uz v ts
w vs t{ tu ws
x vs { uu {s
y vs s vs tss
z vs s vs tss
{ vs s vs tss
≠ ²qt !u !v }非转基因杨树 ~²qw !x }转
·基因杨树 ~
²qy !z !{ }转
·和 °双基因杨树 ∀
²qt ou ov }²±2·µ¤±¶©²µ° §¨ ³²³¯¤µ¶o ²qw ox } ×µ¤±¶ª¨ ±¬¦
³²³¯¤µ¶¦²±·¤¬±¬±ª
·ª¨ ±¨ o ²qy oz o{ } ×µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µ¶¦²±2
·¤¬±¬±ª
·¤±§° ª¨ ±¨ ¶q
图 v 转不同抗虫基因杨树对舞毒蛾幼虫生长的影响
ƒ¬ªqv ±©¯∏¨ ±¦¨ ²©§¬©©¨ µ¨±··µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µ¶²±·«¨ ¤¯µ√¤¨ ²© Λψµ αν2
τρια δισπαρ
t q非转基因杨树叶片 ~u q转
·基因杨树叶片 ~v q转
·和 °双基因杨
树叶片 ∀
°¯ ¤·¨ t }²±2·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µo °¯ ¤·¨ u } ×µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µ¦²±·¤¬±¬±ª
·
ª¨ ±¨ ~ °¯ ¤·¨ v } ×µ¤±¶ª¨ ±¬¦³²³¯¤µ¦²±·¤¬±¬±ª
·ª¨ ±¨ ¤±§° ª¨ ±¨ q
v 结论与讨论
根据 °≤ 分析及 ≥²∏·«¨µ±杂交分析的实验结果 o证明
·基因已整合到杨树植株k²qt !²qu和
²qvl基因组 ⁄中 ∀同时也证明蛋白酶抑制剂基因也已整合到杨树植株k²qt和 ²qul基因组
⁄中 o说明转基因杨树植株k²qt和 ²qul为转双抗虫基因杨树植株 o并初步表明各有两个拷贝的
·基因和蛋白酶抑制剂基因的整合 ∀
用转基因杨树的幼嫩叶片喂养舞毒蛾幼虫的虫试结果表明 o转单一
·基因杨树和转双基因杨树
对舞毒蛾幼虫均有毒性 o而且转双基因杨树对幼虫的毒性明显大于转单一
·基因杨树 ∀说明这 u个
基因在细胞内均能够有效地表达 o其表达产物对舞毒蛾幼虫具有较强的毒性 ∀同时还说明这 u种杀虫
基因不同杀虫机理对幼虫具有协同毒害作用 o从而提高了转双基因杨树植株的抗虫作用 ∀这说明转双
抗虫基因植株的培育具有广阔的应用前景 ∀
参 考 文 献
田颖川 o李太元 o莽克强 o韩一凡等 q欧洲黑杨抗虫转基因的研究 q生物工程学报 ot||v o|kwl }u|t ∗ u|z
王志斌 o李学勇 o郭三堆 q植物凝集素与抗虫基因工程 q生物技术通报 ot||{ ou }x ∗ ts
王学聘 o韩一凡 o戴莲韵 o李 玲 o田颖川 q抗虫基因欧美杨的培育 q林业科学 ot||z ovvktl }y| ∗ zw
ƒ¬¯¯¤·¬ ετ αλ. ªµ²¥¤·¨µ¬∏° ° §¨¬¤·¨§·µ¤±¶©²µ°¤·¬²± ¤±§µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²± ²©³²³¯¤µq ²¯ q ±¨ q ±¨¨ ·qot|{z ousy }t|u ∗ t||
≤«² ¬° ≥o «¬° ≥ ετ αλ. ×µ¤±¶ª¨ ±¬¦×²°¤·² °¯ ¤±·¶∞¬³µ¨¶¶¬±ª±¶¨¦·¬¦¬§¨ ¦·¬√¬·¼ ¤ª¤¬±¶·≤²¯ ³¨·¨µ¤± ¤µ√¤¨ q ²¯ q ≤¨¯ ¶¯ot||u ou }
y| 林 业 科 学 vy卷
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¤¦¦¨¯¨ µ¤·¬²±q °¯ ¤±·≤¨¯¯ ³¨²µ·¶ot||t o|ktsl }x|s ∗ x|w
«¬° ≥o¤«± o≥¦«±¨ ··¨µ • ετ αλ. ·¨¨µ²¯²ª²∏¶ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©¤ °∏·¤·¨§·²¬¬± ª¨ ±¨ ©µ²° Β . τηυρινγιενσισ¶∏¥¶³qτενεβριονισ. ƒ∞ ≥ ¬2
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≥ ²¨±ª¼∏¯ ¤±§²²± ≤«∏¯ q ∞¬³µ¨¶¶¬²± ²©±¶¨¦·¬§¤¯2∞±§²·²¬¬± ±¨¨ ©µ²° Βαχιλλυσ τηυρινγιενσισ¶∏¥¶³q τενεβριονισ¬± ×²¥¤¦¦²
°¯ ¤±·¶q²µ¨¤± q °¯ ¤±·×¬¶¶∏¨ ≤∏¯·∏µ¨ ot||u ot|kul }tst ∗ tsy
z| u期 李明亮等 }转
·基因和蛋白酶抑制剂基因杨树抗虫性的研究