全 文 :园 艺 学 报 2012,39(4):647–654 http: // www. ahs. ac. cn
Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com
收稿日期:2011–12–22;修回日期:2012–03–26
基金项目:中央高校基本业务费项目(BLYX200924,JD-03);林业公益性行业专项(201004017)
* 通信作者 Author for correspondence(E-mail:xmpang@bjfu.edu.cn)
36 份枣品种 SSR 指纹图谱的构建
麻丽颖 1,孔德仓 2,刘华波 1,王斯琪 1,李颖岳 1,庞晓明 1,*
(1 北京林业大学计算生物学中心,林木育种国家工程实验室,林木、花卉遗传育种教育部重点实验室,北京 100083;
2河北省沧县枣树国家良种基地,河北沧州 061000)
摘 要:利用 12 对 SSR 引物对 36 个枣品种进行分析,采用荧光 M13 毛细管电泳技术进行多态检测,
共检测到 99 个多态位点,每对引物的多态位点数达到 8.25,PIC 值变幅为 0.62 ~ 0.85,平均为 0.75。依
据 12 对 SSR 引物在 36 个品种中扩增的特异带型组合,采用引物—带型组合法构建了 36 个枣品种的指纹
图谱,并对这 36 份枣品种做聚类分析,遗传相似系数在 0.6667 ~ 0.9444 之间。研究结果为枣树分类、种
质鉴定和分子育种提供了重要的工具。
关键词:枣;SSR;指纹图谱;毛细管电泳;遗传相似性
中图分类号:S 665.1 文献标识码:A 文章编号:0513-353X(2012)04-0647-08
Construction of SSR Fingerprint on 36 Chinese Jujube Cultivars
MA Li-ying1,KONG De-cang2,LIU Hua-bo1,WANG Si-qi1,LI Ying-yue1,and PANG Xiao-ming1,*
(1Center for Computational Biology,National Engineering Laboratory for Tree Breeding,Key Laboratory of Genetics and
Breeding in Forest Trees and Ornamental Plants,Ministry of Education,Beijing Forestry University,Beijing 100083,
China;2National Improved Cultivar Station of Jujube,Cangzhou,Hebei 061000,China)
Abstract:In this study,36 Chinese jujube cultivars were analyzed by capillary electrophoresis using
fluorescent M13 multi-state detection method with 12 pairs of newly developed SSR primers. Totally,99
polymorphic alleles were revealed,with an average of 8.25 for each primer pairs. Polymorphism
information content values for the primer pairs ranged from 0.62–0.85,with an average of 0.75. A strategy
of combining primer pair with distinct alleles for fingerprint construction was developed and applied to the
36 cultivars. The genetic similarities among cultivars range from 0.6667 to 0.9444,on which a phenetic
tree showing the relationship among the cultivars was constructed. The present results provide valuable
tools for the cultivar classification,germplasm identification and molecular breeding of Chinese jujube.
Key words:jujube;SSR;fingerprint;capillary electrophoresis;genetic similarity
枣(Ziziphus jujuba Mill.)原产于中国,至今已经发现和记载的枣树品种和优良类型达 880 多种
(刘孟军和汪民,2009)。但枣树品种或类型命名比较混乱,同名异物和同物异名的情况较严重,如
“冬枣”就有多个不同地方命名的品种,因此亟需准确的种质和品种鉴定方法。传统形态鉴别法不
仅鉴定周期长、可利用标记少和易受环境因素的影响,而且对一些性状差异小的品种鉴定困难。RAPD、
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AFLP、SRAP 和 ISSR 等分子标记也被用于枣的指纹图谱构建和亲缘关系分析(彭建营 等,2002;
赵锦和刘孟军,2003;刘平 等,2005;马庆华和续九如,2006;王永康 等,2007;李莉 等,2009;
乔勇 等,2009),但由于各自的局限都未被广泛应用。SSR 和 SNP 在国际植物新品种权保护联盟
(UPOV)的 BMT 分子测试指南中被确定为构建 DNA 指纹数据库的标准标记方法,由于 SSR 标记
技术比较成熟,成为当前各个作物建库的首选标记(UPOV,2007)。
SSR 是指基因组中存在的 1 ~ 6 个碱基的简单串联重复序列,又称为微卫星 DNA,广泛分布于
真核生物基因组的编码区和非编码区,具有丰富的多态性(Wu & Huang,2007)。SSR 标记为共显
性标记,稳定性好且适合于自动化分析。这些优点使其成为一种理想的分子标记而广泛应用于种质
资源保存、遗传多样性分析、基因定位、DNA 指纹和分子标记辅助育种等方面的研究(Li et al.,
2002)。现已构建了玉米(王凤格 等,2003)、水稻(庄杰云 等,2006)、小麦(Róder et al.,2002)、
柑橘(雷天刚 等,2009)、番茄(Bredemeijer et al.,2002)等主要作物的基于 SSR 标记的指纹图谱。
近期 Ma 等(2011)开发了一批枣树 SSR 引物,但至今尚未见枣树 SSR 指纹图谱构建的报道。作者
利用本实验室新开发的高多态性 SSR 引物分析了 36 个枣树品种,并开发了一种指纹图谱构建的方
法,以期为枣树品种鉴定和亲缘关系分析等提供工具。
1 材料与方法
1.1 材料
36 个枣品种(表 1)保存在北京林业大学枣树育种和栽培实践基地(河北沧州)。2011 年 5 月,
取春季刚长出的新鲜叶片,用保鲜袋封存后置于冰盒带回北京林业大学林木育种国家工程实验室/
林木、花卉遗传育种教育部重点实验室,液氮冷冻后放置于–70 ℃冰箱中保存待用。
表 1 供试材料
Table 1 List of materials used in the study
编号 样品材料 原产地 用途 形态特征
Code Sample name Origin Usage Main characteristics
S01 绵枣 Mianzao 河北 Hebei 鲜食 Fresh 果实圆柱形,果皮红色 Fruit cylindrical,peel red
S02 三变丑 Sanbianchou 河南 Henan 制干 Dry 果实长椭圆形或长卵形,果皮中厚偏薄
Fruit long ellipsoid or long ovate,peel medium thick,partial thin
S03 酥枣 Suzao 河南 Henan 鲜食 Fresh 果实卵圆形,果皮紫红 Fruit ovoid,peel purple
S04 美蜜枣 Meimizao 山西 Shanxi 鲜食 Fresh 果实圆柱形,果皮红色 Fruit cylindrical,peel red
S05 广洋大枣
Guangyang Dazao
河南 Henan 制干 Dry 果实近圆形,果皮薄,深红色
Fruit nearly round,peel thin and dark red
S06 灵宝大枣 Lingbao Dazao 河南 Henan 制干 Dry 果实多为短圆筒形,果皮深红 Fruit short cylindrical,peel dark red
S07 紫枣 Zizao 河北 Hebei 兼用 More usages 果实近圆形,果皮紫红色,有紫黑色点
Fruit nearly round,peel purple with purple black spots
S08 满城屯屯 Manchengtuntun 河北 Hebei 制干 Dry 果实短而宽,果皮浅红色 Fruit of short and wide,peel light red
S09 辣椒枣 Lajiaozao 河北 Hebei 鲜食 Fresh 果实长锥形或长椭圆形,果皮薄,紫红色
Fruit long-tapered or long ellipsoid,peel thin and purple
S10 官滩枣 Guantanzao 山西 Shanxi 制干 Dry 果实长圆形,果皮厚,深红色 Fruit oblong,peel thick and dark red
S11 早脆王 Zaocuiwang 河北 Hebei 鲜食 Fresh 果实卵圆形,果皮鲜红 Fruit ovoid,peel bright red
S12 冷白玉 Lengbaiyu 山西 Shanxi 鲜食 Fresh 果实倒卵圆形,果皮薄 Fruit ovoid pour,peel thin
S13 冬枣 6 号
Dongzao 6
河北 Hebei 鲜食 Fresh 果实近圆形;果皮脆薄,赭红色
Fruit nearly round,peel thin and red ochre
S14 八升湖 Bashenghu 陕西 Shaanxi 兼用 More usages 果实近圆形,果皮鲜红 Fruit nearly round,peel bright red
S15 上海白葡
Shanghai Baipu
上海 Shanghai 鲜食 Fresh 果实长鸡心形,果皮薄,赭红色
Fruit long chicken heart-shaped,peel thin and red ochre
S16 灰枣 3 号 Huizao 3 河南 He’nan 兼用 More usages 果实长卵形,果皮橙红色 Fruit long-ovoid,peel salmon pink
S17 长木枣 Changmuzao 山东 Shandong 制干 Dry 果实长圆形,果皮浅红色 Fruit oblong,peel light red
4 期 麻丽颖等:36 份枣品种 SSR 指纹图谱的构建 649
续表 1
编号 样品材料 原产地 用途 形态特征
Code Sample name Origin Usage Main characteristics
S18 义乌枣 Yiwu Zao 浙江 Zhejiang 蜜枣
Sugar treatment
果实圆柱形,果皮较薄,赭红色
Fruit cylindrical,peel thin and red ochre
S19 连县木枣
Lianxian Muzao
广东 Guangdong 蜜枣
Sugar treatment
果实中等大,圆锥形,果皮中厚,红
Fruit medium to large and conical,peel medium thick and red
S20 板枣 50 号 Banzao 50 山西 Shanxi 兼用 More usages 果实扁倒卵形,果皮中厚,紫红色
Fruit ovoid pourd and flat,peel medium thick and purple
S21 软核枣 Ruanhezao 不详 Unknown 制干 Dry 果实长圆形,果皮赭红色 Fruit oblong,peel red ochre
S22 婆枣 52 号 Pozao 52 河北 Hebei 制干 Dry 果实长圆形,果皮薄,棕红色 Fruit oblong,peel thin and palm red
S23 宣城圆枣
Xuancheng Yuanzao
安徽 Anhui 蜜枣
Sugar treatment
果实大,近圆形,果皮薄,赭红色
Fruit large and nearly round,peel thin and red ochre
S24 短果长红
Duanguo Changhong
山东 Shandong 制干 Dry 果实短柱形,果皮赭红色
Fruit short cylindrical,peel red ochre
S25 金丝硕星 Jinsi Shuoxing 河北 Hebei 兼用 More usages 果色鲜红,果点小 Peel bright red with smaller fruit dots
S26 金丝小枣
Jinsixiaozao
河北 Hebei 兼用 More usages 果实小,果形多样,果皮薄,鲜红色
Fruit small and shape varied,peel thin and bright red
S27 金丝 4 号 Jinsi 4 山东 Shandong 兼用 More usages 果实长圆形,果皮薄,浅红棕色
Fruit oblong,peel thin and light palm red
S28 蜂蜜罐 Fengmiguan 陕西 Shaanxi 鲜食 Fresh 果实近圆形,果皮薄,鲜红色 Fruit nearly round,peel thin and bright red
S29 怀柔大脆枣
Huairou Dacuizao
北京 Beijing 鲜食 Fresh 果实卵圆形或长椭圆形,果皮褐色
Fruit ovoid or long ellipsoid,peel brownish
S30 小木枣 Xiaomuzao 河北 Hebei 兼用 More usages 果实卵圆或长圆形,果皮紫红色 Fruit ovoid or oblong,peel purple
S31 磨塞子枣 Mosai Zizao 山东 Shandong 制干 Dry 果实卵圆形,果皮赭红色 Fruit ovoid,peel red ochre
S32 蚂蚁枣 Mayizao 宁夏 Ningxia 鲜食 Fresh 果实短柱形,果皮深红色 Fruit short cylindrical,peel dark red
S33 黎城小枣 Licheng Xiaozao 山西 Shanxi 兼用 More usages 果实卵圆形,果皮红色 Fruit ovoid,peel red
S34 无核 76 Wuhe 76 河北 Hebei 制干 Dry 果实扁圆柱形,果皮薄,鲜红色
Fruit cylindrical and flat,peel thin and bright red
S35 鲁枣 10 号 Luzao 10 山东 Shandong 鲜食 Fresh 果实呈短圆形 Fruit short round
S36 鲁枣 8 号 Luzao 8 山东 Shandong 兼用 More usages 果实呈椭圆形 Fruit oval
1.2 枣叶片 DNA 提取和 SSR-PCR 扩增
取 1 片新鲜叶片,用改良 CTAB 方法提取基因组 DNA。在研磨叶片时加入适量 PVP,65 ℃水
浴 60 min 后用等体积酚︰氯仿(1︰1)抽提后再用等体积氯仿抽提,用等体积冰冻的异丙醇沉淀 DNA,
用 2%琼脂糖凝胶电泳检测含量后保存于–20 ℃冰箱待用。
SSR 引物(表 2)由金唯智(北京)生物科技有限公司合成,利用三引物法 PCR(即在 5′端加
有 M13 尾巴序列的特异正向引物、特异反向引物及带有荧光标记的通用型 M13 引物,利用毛细管
表 2 SSR 引物信息表
Table 2 SSR primers used in this study
引物名称
Primer name
重复基序
Repeat motifs
正向引物(5′–3′)
Forward primer
反向引物(5′–3′)
Reverse primer
目标片段长度/bp
Expected length
BFU0277 (GA)11 GCACTACCCTGTGGAACTCAA AGTGTTGACCTGGCAAGAAGA 236
BFU0083 (CT)13 TTTTCCAACCCTCCCTCCA CCTCATAACTGCGACGGCTT 181
BFU0574 (CA)7 GAAGGTTGAAGATGCTCTCTCT CCTGACATCCATTTGAAGGAA 114
BFU1205 (CA)8 TGTTGCTGGTTCAATTCCAG CTTATGGCTTTTTCATTTTGTGA 151
BFU0528 (TC)8 TTTGTGAGGTATAATGGCTTTCA GCCTCTGTTGAAGCAAGGAA 244
BFU1157 (GA)9 TCCCTAAATTACCCTTCCCAAT AAAGCGACAGCGAAAACTGT 234
BFU0581 (CA)7 TGAGAAGGTTGAAGATGCTCTC CCTGACATCCATTTGAAGGAA 117
BFU1248 (ATTA)4 TCCCACCACTTTCCTCTCAT TTTTTCAAGACCTCCACGATG 163
BFU0377 (CT)10 CCAGCTGGTATCCAATTGCT ACGACGATGCCATGAAAGAT 283
BFU0561 (CT)7 CCAGATGTGTCTCGATGCTT TGCTCCATGCTTCTGGTATG 235
BFU1383 (ATTA)3 TGTTGCTGGTTCAATTCCAG CTTATGGCTTTTTCATTTTGTGA 151
BFU0308 (TC)11 TTTCCACCCCAAAATACCAA AGACGCTGGATGAGGATGAT 176
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电泳技术可以同时检测不同荧光染料标记的多个 SSR 位点)扩增 SSR 位点。
SSR-PCR 反应体系为 10 μL,包括成分为:10 ~ 15 ng 基因组 DNA,5 μL 2 × Taq PCR mix(博
迈德生物科技有限公司),反向引物和带荧光标记的 M13 正向引物各 3.2 pmol,0.8 pmol 正向引物。
PCR 程序如下:94 ℃ 5 min 预变性;94 ℃ 30 s 、55 ℃ 40 s、72 ℃ 45 s,30 个循环;94 ℃ 30
s、53 ℃ 40 s、72 ℃ 45 s,8 个循环;72 ℃ 10 min(Schuelke,2000)。
1.3 毛细管电泳检测
PCR 产物送金唯智(北京)生物科技有限公司进行毛细管电泳检测,用 Gene-Marker 软件(Soft
Genetics LLC,USA)进行数据分析。
1.4 数据分析
对 Gene-Marker 软件获得原始数据经 Flexibin(Amos et al.,2007)程序修正后转化成 0,1 格
式,建立原始矩阵后用 NTSYS-pc 2.10e 软件(Rohlf,1994)进行后续分析。计算多态性位点百分
率 P(%)=(k/n)× 100,其中 k 是多态位点数,n 为所测位点总数。SSR 位点的多态性信息量(poly-
morphism information content,PIC)按如下计算公式进行计算:PIC = 1–ΣPi2,式中 Pi 表示第 i 个
等位位点出现的频率(Botstein et al.,1980)。利用 NTSYS 中的 Qualitative date 模块计算任意两个
品种间的相似系数(GS)。其计算公式为 GS = 2Nij /(Ni + Nj),其中 Ni j 为材料 i 和 j 共有的扩增片
段总数,Ni为材料 i中出现的扩增片段数,Nj为材料 j中出现的扩增片段数。以 clustering程序中 SHAN
进行 UPGMA(非加权组平均法)聚类分析,绘制亲缘关系树状图。
1.5 指纹图谱构建
以所分析的 SSR 引物名称为前缀,该标记在某样品上扩增带的分子量为后缀,得到每个品种在
某个标记的带型编号。按照固定的引物排序综合不同引物分析结果,串联各带型编号,形成该品种
的 SSR 指纹图谱。
2 结果与分析
2.1 毛细管电泳结果
从本实验室开发的冬枣 SSR 引物中筛选出 12 对引物,对 36 份样品进行分析。12 对引物在 36
个品种中共扩增出 99条带且都是多态条带,多态位点百分率达 100%;各引物多态条带数量为 3 ~ 16,
平均每对引物能扩增到 8.25 个多态性片段。各引物的 PIC 值变幅为 0.62 ~ 0.85,平均为 0.75(表 3)。
表 3 12 对 SSR 引物的多态检测
Table 3 Twelve pairs of SSR primers detected polymorphism
引物名称
Primer name
多态位点数
Polymorphic loci
number
多态信息含量
PIC
引物名称
Primer name
多态位点数
Polymorphic loci
number
多态信息含量
PIC
BFU0277 6 0.62 BFU0581 10 0.74
BFU0083 7 0.76 BFU1248 5 0.78
BFU0574 10 0.73 BFU0377 10 0.77
BFU1205 6 0.77 BFU0561 9 0.70
BFU0528 8 0.81 BFU1383 3 0.62
BFU1157 9 0.80 BFU0308 16 0.85
总计 Total 99
平均 Mean 8.25 0.75
4 期 麻丽颖等:36 份枣品种 SSR 指纹图谱的构建 651
图 1 为部分枣品种用引物 BFU1205 扩增检测图示例,以其中的单峰图为例,表示在 172.6 bp
处为单一扩增片段,扩增 DNA 产物的相对数量为 10 000。
图 1 两个枣品种在 BFU1205 号引物中的毛细管电泳检测图
Fig. 1 Two sample images of capillary electrophoresis detection results for jujube cultivars with BFU1205 primer
2.2 指纹图谱
根据 12 对核心引物扩增结果的峰图,准确读出条带的大小,经 Flexibin(Amos et al.,2007)
修正,可以将所有品种区分开,最少只用 4 对引物组合(BFU0574、BFU0581、BFU0377 和 BFU0308)
就可以将 36 份品种完全区分(表 4)。其中引物 BFU0308 的多态位点数达 16 个,可以区分绵枣、
广阳大枣、三变丑等 19 个品种。
表 4 36 个枣品种的 SSR 指纹图谱
Table 4 Fingerprint of 36 jujube cultivars based on SSR markers
品种编号 Cultivar code 指纹图谱 Fingerprint
S01 BFU0574,107,141/BFU0581,109,143/BFU0377,299,303/BFU0308,192,194
S02 BFU0574,107,107/BFU0581,109,109/BFU0377,295,303/BFU0308,190,192
S03 BFU0574,107,107/BFU0581,109,109/BFU0377,295,299/BFU0308,172,194
S04 BFU0574,107,137/BFU0581,109,139/BFU0377,295,303/BFU0308,190,192
S05 BFU0574,107,137/BFU0581,109,139/BFU0377,295,301/BFU0308,170,198
S06 BFU0574,107,115/BFU0581,109,117/BFU0377,295,295/BFU0308,170,194
S07 BFU0574,107,129/BFU0581,109,131/BFU0377,295,303/BFU0308,172,194
S08 BFU0574,129,137/BFU0581,131,139/BFU0377,295,295/BFU0308,158,172
S09 BFU0574,113,137/BFU0581,115,139/BFU0377,295,297/BFU0308,170,192
S10 BFU0574,107,113/BFU0581,109,115/BFU0377,295,301/BFU0308,158,172
S11 BFU0574,107,137/BFU0581,115,139/BFU0377,295,303/BFU0308,170,172
S12 BFU0574,113,137/BFU0581,115,139/BFU0377,295,303/BFU0308,170,172
S13 BFU0574,107,137/BFU0581,139,141/BFU0377,295,301/BFU0308,194,196
S14 BFU0574,107,119/BFU0581,109,121/BFU0377,295,301/BFU0308,178,192
S15 BFU0574,107,107/BFU0581,109,109/BFU0377,289,295/BFU0308,170,192
S16 BFU0574,129,141/BFU0581,131,143/BFU0377,295,303/BFU0308,172,192
S17 BFU0574,107,115/BFU0581,109,117/BFU0377,301,303/BFU0308,192,198
S18 BFU0574,107,113/BFU0581,109,115/BFU0377,295,299/BFU0308,172,196
S19 BFU0574,113,121/BFU0581,115,123/BFU0377,295,301/BFU0308,172,194
S20 BFU0574,113,121/BFU0581,115,123/BFU0377,301,303/BFU0308,174,196
S21 BFU0574,113,121/BFU0581,115,123/BFU0377,295,303/BFU0308,172,180
S22 BFU0574,119,121/BFU0581,121,123/BFU0377,291,295/BFU0308,178,178
S23 BFU0574,107,113/BFU0581,109,115/BFU0377,299,301/BFU0308,170,196
S24 BFU0574,121,123/BFU0581,123,125/BFU0377,281,301/BFU0308,164,172
S25 BFU0574,107,139/BFU0581,109,141/BFU0377,301,303/BFU0308,170,192
S26 BFU0574,107,139/BFU0581,109,141/BFU0377,301,303/BFU0308,172,178
S27 BFU0574,107,113/BFU0581,109,115/BFU0377,295,295/BFU0308,172,192
S28 BFU0574,107,107/BFU0581,109,109/BFU0377,299,303/BFU0308,192,198
S29 BFU0574,121,137/BFU0581,123,139/BFU0377,299,303/BFU0308,186,192
S30 BFU0574,107,107/BFU0581,109,109/BFU0377,297,301/BFU0308,168,170
652 园 艺 学 报 39 卷
续表 4
品种编号 Cultivar code 指纹图谱 Fingerprint
S31 BFU0574,107,107/BFU0581,109,109/BFU0377,295,303/BFU0308,176,194
S32 BFU0574,107,121/BFU0581,109,123/BFU0377,295,301/BFU0308,158,170
S33 BFU0574,107,141/BFU0581,109,141/BFU0377,295,305/BFU0308,170,174
S34 BFU0574,107,139/BFU0581,109,139/BFU0377,295,295/BFU0308,170,192
S35 BFU0574,107,115/BFU0581,109,117/BFU0377,279,279/BFU0308,156,170
S36 BFU0574,107,139/BFU0581,109,139/BFU0377,295,295/BFU0308,158,194
注:品种详见表 1。
Note:Cultivar see Table 1.
2.3 聚类分析
以各品种 12 对引物的扩增带型为基础,以 0,1 格式表示,其中数据缺失记为 2,用 NTSYS
软件进行 UPGMA 法聚类分析得出 36 个品种的聚类图(图 2)。各品种间遗传相似系数范围为
0.6667 ~ 0.9444,平均相似系数为 0.82,其中绵枣(S01)与早脆王(S11),金丝硕星(S25)与无
核 76(S34)相似系数最大,说明亲缘关系很近;冬枣 6 号(S13)与短果长红(S24)之间的遗传
相似系数为 0.6667,说明这两个品种之间的亲缘关系较远;金丝硕星(S25)、无核 76(S34)、长木
枣(S17)和小木枣(S30)都与金丝小枣(S26)有较近的亲缘关系,聚成了一个小类群。本研究
结果把鲁枣 10 号(S35)和黎城小枣(S33)也聚在了这一小类群内,鲁枣 10 号是金丝小枣的实生
后代,所以与金丝小枣的亲缘关系比较近,而黎城小枣(S33)与鲁枣 8 号(S36)遗传相似系数达
到 0.9286,说明黎城小枣(S33)也与此类群有较近的亲缘关系;婆枣 52(S22)与其它 35 个品种
的遗传相似系数都比较低,在 0.7 左右,说明与其它品种的亲缘关系较远。
图 2 36 个枣品种的 SSR 聚类分析图
品种详见表 1。
Fig. 2 Dendrogram of 36 jujube cultivars based on SSR markers
Cultivar see Table 1.
4 期 麻丽颖等:36 份枣品种 SSR 指纹图谱的构建 653
3 讨论
本研究中揭示的枣的多态等位位点(allele)比率为 100%,而白瑞霞(2008)用 AFLP 和 SRAP
标记的结果分别为 64.30%和 54.87%。一方面可能是由于本研究所用 SSR 引物是从 1 489 条引物中
经过两次筛选得到的多态性引物,具有很高的区分能力,多态位点比率达 100%;另一方面可能是
所分析的材料中有较多的亲缘关系很近的品种,会使多态位点比率偏低。本研究分析的枣品种之间
平均相似系数为 0.82,相比核桃(0.70)等树种更高,表明枣栽培品种的遗传多样性相对比较小。
在聚类图中,不同采集地的枣品种并没有聚在一起,反映了枣品种复杂的亲缘关系,可能是由
于各地之间品种交流频繁所导致。无核 76、长木枣和小木枣都与金丝小枣有较近的亲缘关系,聚成
了一个小类群,这与用 AFLP 和 SRAP 的聚类分析(白瑞霞,2008)和 RAPD 分析(赵锦和刘孟军,
2003)的结果一致。金丝硕丰是由在河北省沧县发现的一个变异类型选育而成,与无核 76 有较近的
亲缘关系,其来源尚待进一步的研究。金丝 4 号为金丝小枣的实生后代,但并没有与金丝小枣聚成
一类,而与连县木枣聚在一起,可能其父本与连县木枣有较近的亲缘关系。
指纹图谱在植物品种鉴定、亲子分析、品种注册、分辨真假杂种以及知识产权保护等方面具有
重要作用。本研究采用毛细管电泳检测技术,建立了一个枣种质 SSR 标记分析系统,并采用以片段
分子量为基础的核心引物组合法来构建枣品种的指纹图谱。与聚丙烯酰胺凝胶电泳法相比,尤其是
在分析大量材料时,毛细管电泳技术具有突出的优点,既节约大量贵重试剂,降低成本,又可减少
排废污染(易红梅 等,2006)。但毛细管电泳检测技术较灵敏,容易检测出 PCR 的非目标扩增产物,
稳定的标记应通过聚丙烯酰胺凝胶或扩增产物序列测定等方法验证。本研究中采用的核心引物组合
法构建指纹图谱,直观、清晰、简单,具有较好的扩展性。今后可能需要更多的多态引物去构建枣
种质资源的指纹库,引物—带型组合法可以很方便地增加新引物。
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