全 文 ：园 艺 学 报 ， （增刊）： 2011 38 2492 http: // www. ahs. ac. cn
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收稿日期：2011–08–01
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山核桃组织培养的初代培养技术研究
俞飞飞*，江 芹，孙其宝，刘 茂
（安徽省农业科学院园艺研究所，合肥 230031）
山核桃（Carya cathayensis）常规扦插难于生根，嫁接成活率低而不稳，另外山核桃成枝能力较
弱，枝条生长缓慢，接穗量远不能满足嫁接繁殖需要。本试验中结合山核桃冬季修剪，选取当年生
健壮枝条为材料，研究其初代培养过程中外植体灭菌和防止褐变的措施，为进一步开展组培研究奠
定基础。
将剥去外叶的休眠芽用清水冲洗后，放入装有洗洁精饱和水溶液的杯中，不停摇晃 10 min 左右，
再用软毛刷反复刷洗，最后用流动的自来水冲洗 30 min。
外植体材料不同灭菌处理：在超净工作台上外植体用 70%酒精处理 30 s后，然后分别采取不同
灭菌处理。A：用 0.1% HgCl2浸泡 10 min，用无菌水冲洗 3 次，再用 0.1% HgCl2浸泡 15 min，无菌
水冲洗 3 ~ 4 次；B：用 0.1% HgCl2浸泡 25 min后，用无菌水冲洗 3 ~ 4 次；C：用 0.1% HgCl2浸泡
10 min，用无菌水冲洗 3 次，除去外面包裹的部分鳞片，再用 0.1% HgCl2浸泡 15 min，然后用无菌
水冲洗 3 ~ 4 次。将灭菌后的休眠芽除去外面包裹的鳞片，切取茎尖生长点接种在初代培养基
（1/2MS + 2 mg · L-1 6-BA + 2 g · L-1 PVP + 0.1 mg · L-1 NAA）上，观察灭菌效果。
灭菌后不同抗氧化剂溶液保存处理：将上述A方法灭菌处理后的外植体材料分别放入无菌 0.2%
Na2O2S3溶液和过滤灭菌的 0.03%维生素C溶液中，以放入干净培养皿中为对照，接种时从溶液中取
出置于初代培养基（1/2 MS + 2 mg · L-16-BA + 2 g · L-1 PVP + 0.1 mg · L-1 NAA）上观察褐变情况。
培养基中不同附加成分对褐变的影响：以 1/2 MS 为基本培养基，分别加入活性炭（AC）、PVP、
维生素 C，以不加附加物的基础培养基为对照，采用上述 A 方法灭菌处理后的外植体材料接种，比
较不同抗氧化剂和吸附剂对外植体材料褐变的影响。
生长调节剂对外植体生长及褐变的影响：将上述A方法灭菌处理后的外植体材料放入无菌 0.2%
Na2O2S3溶液中，随取随用，以 1/2MS + PVP 2 g · L-1 + AC 2 g · L-1 + GA3 2 mg · L-1为基本培养基，
分别加入不同浓度的 6-BA和NAA组合，比较其对初代培养生长及褐变的影响。
培养条件：温度（25 ± 2）℃恒温，光照 1 500 ~ 2 000 lx，pH 5.3 ~ 5.8，糖 30 g · L-1，琼脂 7 g · L-1，
初代培养在黑暗条件下培养 8 d后取出进行光培养，光照时间 12 h · d-1，30 d后观察统计结果。
综合分析上述试验结果，以实生山核桃休眠芽为材料进行初代培养，0.1% HgCl2二次灭菌法明
显优于一次灭菌；灭菌后的材料放入 0.2% Na2O2S3溶液或 0.03%维生素C溶液中浸泡，可以有效减
轻外植体的褐变，基本培养基 1/2MS中加入 3 mg · L-1 6-BA + 1 mg · L-1 NAA + 2 mg · L-1 GA3 + 2
g · L-1 PVP + 2 g · L-1 AC，对初代培养中防止外植体材料褐变，促进生长效果最好。

关键词：山核桃；初代培养；褐变；灭菌
中图分类号：S 664.1 文献标识码：A 文章编号：0513-353X（2011）S-2492-01