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茄子高效遗传转化体系的研究



全 文 :园 艺 学 报 2011,38(增刊):2556 http: // www. ahs. ac. cn
Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com

收稿日期:2011–09–01
基金项目:国家自然科学基金项目(30800755);国家高技术研究发展计划(863)项目(2009AA10Z104)
* 通信作者(E-mail:zbye@mail.hzau.edu.cn;Tel:027-87286867)
茄子高效遗传转化体系的研究
刘 芳,张俊红,王涛涛,李汉霞,叶志彪*
(华中农业大学园艺林学学院,武汉 430070)
茄子是一种重要的蔬菜,营养价值丰富,也可用作药物,在全世界广泛栽培,利用基因工程创
造抗逆、优质的茄子新种质具有重要意义。目前茄子的转化效率明显偏低,普遍低于同科同属的番
茄以及十字花科植物;另外,有效的茄子遗传转化平台也是鉴定茄子重要功能基因的基础。因此,
发展和完善茄子高效、稳定的遗传转化体系具有重要意义。
试材为茄子品种‘丝竹茄’,农杆菌菌株 GV3101,包含 DR5::GUS区域的植物遗传转化载体
等。取茄子种子用蒸馏水浸泡 30 min,75%酒精消毒 30 s,50% 84消毒液消毒 10 min,无菌水冲洗
3次以上,接种于 1/2MS固体培养基中,光下培养 8 ~ 9 d。将无菌苗取出,将下胚轴去除,子叶切
成 1 ~ 2 cm的叶块,在预培养基上培养 1 d,农杆菌在MS0中侵染 4 min,然后转移到筛选培养基上,
继代两次,约 30 d后将伸长的茄子苗转移到生根培养基上,20 d后,当根长到 5 cm左右,将其移
植到蛭石上,炼苗半个月,即可以移栽到温室。
试验结果表明,茄子木质化程度比较高,组织培养较为困难。本试验中主要通过调节不同激素
及其不同浓度配比来寻找茄子的高效遗传转化体系,用以上方法,茄子子叶外植体在 MS + Zt 0.2
mg · L-1的培养基中的再生频率达到 80%以上,显著高于采用 6-BA和 IAA的培养基。卡那霉素(Kan)
及头孢霉素(Cef)浓度的筛选实验表明,浓度为 300 mg · L-1的 Cef为可有效地抑制农杆菌的生长,
而浓度为 150 mg · L-1的 Kan卡那霉素具有很好的筛选效果。由此,确定茄子的筛选培养基为MS + Zt
2 mg · L-1 + Kan 150 mg · L-1 + Cef 300 mg · L-1。在生根的过程中,通过对 IAA浓度的调节确定生根
培养基为MS + IAA 0.2 mg · L-1 + Kan 150 mg · L-1 + Cef 300 mg · L-1。
通过农杆菌介导的方法得到 30 株 PCR 阳性转基因茄子植株,GUS 染色结果显示 DR5 启动子
能在转基因茄子植株的幼嫩叶片中表达,表明转入基因已经整合到植物基因组中,并能稳定表达。

关键词:茄子;遗传转化;GUS染色
中图分类号:S 641.1 文献标识码:A 文章编号:0513-353X(2011)S-2556-01