全 文 ：© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
园 　艺 　学 　报 　2009, 36 (12) : 1783 - 1790
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2009 - 06 - 09; 修回日期 : 2009 - 10 - 10
基金项目 : 河南省教育厅自然科学基金项目 (2009B210001)3 E2mail: wzc@henu1edu1cn
离体条件下 5 - 氮杂胞嘧啶核苷对菊花 DNA甲基
化和表型性状的影响
王子成 3 , 聂丽娟 , 何艳霞
(河南大学农业生物技术研究所 , 河南开封 475004)
摘 　要 : 采用离体处理的方法 , 初步研究了 5 - 氮杂胞嘧啶核苷 (52azaC) 对菊花的影响。结果表明 ,
500μmol·L - 1以上时有致死效应 , 100μmol·L - 1以上时能抑制离体材料的生长发育 , 而各浓度对菊花的
丛生芽均具有抑制作用 , 且这种抑制作用具有时间累加效应和剂量累计效应。10μmol·L - 1以下时使菊花
开花时间有不同程度的提早 , 这一效应具有稳定性 , 并可通过营养繁殖进行遗传。MSAP技术分析表明 ,
处理材料基因组 DNA甲基化水平明显降低 , 在去处理后的继代过程中仍有部分位点保持低甲基化状态。
关键词 : 菊花 ; 5 -氮杂胞嘧啶核苷 ; 丛生芽 ; 分化 ; DNA甲基化
中图分类号 : S 68211　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2009) 1221783208
The Effect of 52azacytid ine to the D NA M ethyla tion and M orphogenesis
Character of Chrysan them um D ur ing in V itro Growth
WANG Zi2cheng3 , N IE L i2juan, and HE Yan2xia
( The Institu te of A griculture B iotechnology, Henan U niversity, Ka ifeng, Henan 475004, Ch ina)
Abstract: The effect of DNA methylation inhibitor ( 52azacytidine, 52azaC) to chrysanthemum (D en2
dran them a ×g rand if lorum ) has been studied by the method of in vitro treatment. The results indicated that
500μmol·L - 1 of 52azaC caused death, above 100μmol·L - 1 of 52azaC inhibited the materials’develop2
ment. The multip le buds differentiation of chrysanthemum was inhibited by every concentration of 52azaC and
the inhibiting effect of 52azaC has time and dose additive effect. 52azaC treatment at low concentration induced
the flowering early, this effect were stability and could be inherited through asexual multip lication. The re2
sults ofMSAP (methylation sensitive amp lified polymorphism technique) indicated that, the genom ic of trea2
ted materials DNA methylation decreased distinctly. Part of the sites kep t demethylation status in the succes2
sive transfer culture when 52azaC removed.
Key words: chrysanthemum; D endran them a ×g rand if lorum ; 52azacytidine; multip le bud; differentia2
tion; DNA methylation
在真核生物基因组中 , 甲基化反应是最普遍的 DNA复制后修饰形式。特定的 DNA甲基化类型在
减数分裂或有丝分裂之后能被子细胞遗传 , 这在生物表观遗传中有着极其重要的作用 , 被认为是表观
遗传的主要形式 ( Scarano et al. , 2005)。在植物生长发育以及基因组稳定中 DNA甲基化起着重要的
作用 , 且 DNA 甲基化与表观遗传学的改变有着密切关系 (聂丽娟和王子成 , 2007; 聂丽娟 等 ,
2008)。
5 -氮杂胞嘧啶核苷 (52azacytidine, 52azaC) 是胞嘧啶类似物 , 它能嵌入 DNA并且与甲基酶结合
从而使酶隔离 , 抑制甲基化状态的维持 ( Zakharov & Egolina, 1972; A shok & Bhagwat, 1987)。多数
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的研究表明 52azaC可以部分代替低温促进植株开花 (Burn et al. , 1993; 李梅兰 等 , 2003; 汪炳良
等 , 2005) , 也有众多研究表明 52azaC处理可以影响植物特定性状 (聂丽娟和王子成 , 2007)。目前
52azaC处理对植物产生去甲基化和影响表型变化的有效范围的研究并不全面。
目前 , 已有不少探讨 52azaC对植物生长发育影响的研究 , 但多采用浸泡种子或细胞培养的方法
(Law & Suttle, 2005)。但种子萌发和细胞培养 , 自身易发生复杂的甲基化变化 , 不便全面了解 52azaC
产生的效应。
本研究中以菊花 (D endran them a ×grand iflorum ) 组培苗为试材 , 观察 52azaC处理引起的丛生芽
分化和开花时间变化 , 并运用 MSAP (methylation sensitive amp lified polymorphism technique) 技术检测
分析 52azaC作用下菊花 DNA甲基化状态的变化 , 为进一步探索 DNA甲基化在表观性状变化作用的分
子基础提供理论依据。
1　材料与方法
111　材料
试验于 2005—2008年在河南大学农业生物技术研究所完成。
以 MS为基本培养基 , 对墨菊品种 ‘墨麒麟 ’进行组织培养 , 并继代建立单芽系 , 继代培养基成
分为 MS + 62BA 2 mg·L - 1 +NAA 011 mg·L - 1 , 培养室温度 25 ℃, 光照 12～13 h·d - 1 , 光照强度
1 500 lx (周惠芬 , 2003)。
112　5 -氮杂胞嘧啶核苷 ( 52azaC) 处理
对单芽系材料的茎尖进行 52azaC ( Fluka公司 ) 处理 ( 52azaC进行过滤灭菌 ) : 将浓度为 0 (对
照 )、0101、011、1、10、100、500、1 000μmol·L - 1的 52azaC分别加入继代培养基中 , 3次重复 ,
每次重复 30个单芽系。处理 30 d后的茎尖 , 一部分转入不含 52azaC的继代培养基中连续继代 3次 ,
每代 30 d; 另一部分转入不含 52azaC的生根培养基 (1 /2MS +NAA 011 mg·L - 1 ) , 20 d后移栽 , 常
规培养。
113　丛生芽分化的观察
分别观察记录墨菊材料在培养基中经 52azaC处理后的 20和 30 d以及去 52azaC后的 3次继代时期
的丛生芽分化情况。丛生芽分化数 =丛生芽总数 /处理的个体数。
114　开花时间的观察
移至室外的墨菊幼苗在相同环境中生长。从温室炼苗到第 1个花瓣展开时间定为开花时间 ; 每个
处理定植 15株 , 统计每朵花的开花时间 , 进行分析。
115　D NA甲基化水平分析
DNA提取 : 分别取每个样品中生长 20和 30 d以及连续 3次继代时期的植株叶片 , CTAB法提取
DNA (陈昆松 等 , 2004; 肖军 等 , 2005) , 于 - 70 ℃冰箱中保存备用。
甲基化水平检测 : 将所得样本的 DNA用 MSAP (甲基敏感扩增多态性 ) 方法分析甲基化水平
( Xiong et al. , 1999)。试验流程参照何艳霞等 (2007) 的方法。用 M spⅠ和 HapⅡ分别与 EcoRⅠ结合
对基因组进行酶切、连接、扩增及变性聚丙烯凝胶电泳分析。所用的酶和接头及引物序列等药品均购
自大连宝生物公司 , 接头和预扩增序列见何艳霞等 ( 2007) 的文献。选择性扩增引物有 5个 , 其中
5′2gactgcgtaccaattcaac23′, 5′2gactgcgtaccaattcact23′, 5′2gactgcgtaccaattcagg23′与 EcoRⅠ酶切的接头互补 ,
5′2atcatgagtcctgctgggtcca23′和 5′2atcatgagtcctgctcggtcaa23′与 M spⅠ和 HapⅡ的酶切接头互补 , 两两成组 ,
进行扩增。
试验将 MSAP方法的带型归结为 4类 : Ⅰ型带 ———HapⅡ和 M spⅠ扩增产物中都有的带 ; Ⅱ型
带 ———M spⅠ扩增产物中有而 HapⅡ扩增产物中没有的带 ; Ⅲ型带 ———HapⅡ扩增产物中有而 M spⅠ扩
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增产物中没有的带 ; Ⅳ型带 ———HapⅡ和 M spⅠ扩增产物中都没有的带。在带型统计中 , Ⅱ→Ⅲ, Ⅳ
→Ⅱ, Ⅳ→Ⅰ, Ⅲ→Ⅰ, Ⅱ→Ⅰ, Ⅳ→Ⅲ均表示 DNA甲基化减少 , 与此相反的带型变化则是 DNA甲
基化增加的表现。
2　结果与分析
211　52azaC处理对墨菊丛生芽分化的影响
通过形态观察发现 , 100μmol·L - 1以下浓度 52azaC处理的材料长势与对照相似 , 而 100、500、
1 000μmol·L - 1 3种高浓度处理的材料 , 茎尖长势较弱。500、1 000μmol·L - 1对材料处理 1 w时 ,
部分个体深入培养基部分呈红棕色或暗黄色 , 叶片泛黄。随着处理时间的延长这种现象逐渐加深 , 处
理 20 d时 , 所有个体均无明显生长 , 部分个体叶片干枯死亡 (图 1)。
图 1　不同浓度 52azaC处理 20 d时的生长状况
F ig. 1　 The developm en t sta tus of growth 20 days after trea ted by d ifferen t 52azaC concen tra tion
处理 20 d时 , 各种浓度 52azaC均有抑制丛生芽分化的表现 (图 1)。随着时间的延长 , 这种抑制
作用在各种浓度条件下都有所加强。与对照相比 , 处理 30 d时 , 100μmol·L - 1的抑制效应显著 , 而
500、1 000μmol·L - 1处理几乎没有丛生芽产生 , 其余 4种较低浓度对丛生芽的抑制作用较小 (图
2)。可见 , 52azaC对丛生芽的抑制作用具有时间累加效应和剂量累积效应。
图 2　不同浓度 52azaC处理 20和 30 d时的丛生芽数量
F ig. 2　The num ber of m ultiple bud when growth 20 days and 30 days after shoot tip trea ted by d ifferen t 52azaC concen tra tion
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　　在去除 52azaC后的 3次继代过程中 , 经各种浓度处理的材料丛生芽分化数虽然较处理时期有所
增加但仍低于对照 , 而经 3种较高浓度处理材料的丛生芽分化较之其他仍有明显的受抑制现象。较低
浓度 52azaC处理的材料在 3次继代中丛生芽分化基本一致 , 而较高浓度 52azaC的抑制作用随着继代
次数的增加有所降低。经 3次继代后 , 高浓度的丛生芽产生量与 4种低浓度的分化量相当 (图 3)。
这说明高浓度抑制剂对植物营养生长的影响较大 , 在抑制剂去除后 , 需要较长的时间才能逐渐缓解抑
制状态 ; 但是处理后的丛生芽分化情况仍不能恢复到自然状态。
图 3　不同浓度 52azaC处理对去抑制剂后 3次继代时的丛生芽的影响
F ig. 3　The num ber sta tus of m ultiple bud when shoot tip grow in three tim es of successive
tran sfer culture after 52azaC wa s rem oved
212　52azaC处理对墨菊开花时间的影响
　　由于高浓度处理的材料不易移栽成活 , 因而
只选用低浓度处理材料进行开花状况的研究。结
果表明 , 4种低浓度 52azaC处理过的植株 , 移栽
后的生长表型与对照相比没有明显的差异 , 但开
花时间却明显提前 (图 4) , 经 10和 1μmol·L - 1
处理过的植株比对照开花时间提早 8～9 d, 而
011和 0101μmol·L - 1 52azaC处理过的植株比对
照早开 2～3 d; 花形、花色未见明显差异。翌年 ,
宿根萌发再生后 , 处理过的植株与对照相比 , 花
期仍提前 , 且提前天数一致 , 而其它性状均无可
见变异。这表明 52azaC处理导致墨菊的花期提前
效应具有稳定性 , 并能通过营养繁殖进行遗传。
图 4　低浓度 52azaC对开花时间的影响
F ig. 4　The effect of lower concen tra tion
52azaC to the flower ing tim e
213　 52azaC处理对墨菊 D NA甲基化水平的影响
21311　对基因组 DNA甲基化水平的影响 　
HapⅡ和 M spⅠ均识别并切割 5′2ccgg23′, 但两者对该位点 DNA甲基化的敏感性不同 (图 5)。
MSAP分析结果表明 : 不同浓度 52azaC处理的墨菊在生长 20 d和 30 d时 DNA甲基化有不同程度
的降低 , 且基因组 DNA甲基化水平的降低与抑制剂的浓度成反比。生长 30 d时 , 6对引物的扩增条
带图谱分析结果见表 1。高浓度处理引起墨菊 DNA甲基化大幅度降低 , 1 000μmol·L - 1处理 DNA甲
基化减少了 9116% , 500和 100μmol·L - 1处理也分别使 DNA甲基化减少了 8130%和 8109% , 而低
浓度抑制剂处理则使基因组 DNA甲基化减少的幅度较小 , 如 0101μmol·L - 1浓度处理引起 5131%的
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DNA甲基化减少。有一些位点在不同浓度处理材料中的 DNA 甲基化减少模式一致 , 占基因组的
3121% , 表 1中以 ‘公共带 ’表示这些一致的带型变化 , 从而进一步证明 52azaC处理引起了基因组
的 DNA甲基化减少 ; 且高浓度 52azaC处理引起的 DNA甲基化减少多为 Ⅱ型带 →Ⅰ型带的转变 (表
1)。
图 5　引物对 EcoRⅠ2AGG /HM 2TCCA扩增的带型图谱
图中前后设两组重复 , 1～8分别表示 10、1、011、0101、0 (对照 )、1 000、500和 100μmol·L - 1 52azaC处理的材料 ,
M、H分别表示同裂酶 M spⅠ和 HapⅡ的消化图谱。
F ig. 5　The f ingerpr in ting map when E03 /TCCA prim er com b ina tion wa s used
There are two group s repeat. 1 - 8 rep resented the materials treatment with 10, 1, 011, 0101, 0 ( control) , 1 000,
500 and 100μmol·L - 1 52azaC respectively. M and H rep resent the digested figs of M spⅠand HapⅡ respectively.
表 1　不同浓度 52azaC处理材料 30 d对 D NA甲基化水平的影响
Table 1　The sta tus of the decrea sed D NA m ethyla tion when ma ter ia ls were trea ted by d ifferen t 52azaC concen tra tion 30 days growth
52azaC / (μmol·L - 1 ) 类型变化 /条 Type change
Ⅱ→ⅠⅡ→ⅢⅢ→ⅠⅣ→ⅠⅣ→ⅡⅣ→Ⅲ
少带数
Number of the decreased
总带数
Total bands
减少比例 /%
Proportion of the decreased
1 000 14 0 3 2 1 5 25 173 9116
500 11 0 2 1 2 7 23 277 8130
100 11 0 2 2 2 5 22 272 8109
10 2 0 4 1 4 7 18 243 7141
1 2 1 5 0 5 4 17 245 6194
011 2 0 4 0 4 4 14 245 5176
0101 2 0 3 0 3 5 13 234 5131
公共带 Common band 2 0 2 0 1 4 9 280 3121
21312　DNA甲基化变化在继代培养中的稳定性 　
将 52azaC处理过的菊花茎段进行正常继代 (去除 52azaC后 ) , 对连续 3次继代时材料的 DNA甲
基化情况进行分析。统计结果 (表 2) 表明 : 各种浓度 52azaC处理材料的 DNA甲基化减少水平随正
常继代时间的延长而有所降低 , 高浓度处理材料在正常继代时基因组的甲基化水平低于低浓度处理材
料。如 1 000μmol·L - 1处理材料经 3次继代 , 基因组 DNA 甲基化水平仍降低了 7169% , 而 0101
μmol·L - 1处理则降低了 4133%。同对照相比 , 不同浓度 52azaC处理的材料在进行正常继代后仍有部
分位点保持了低甲基化状态。说明在去处理后 , 因 52azaC处理引起的低水平 DNA甲基化状态在部分
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位点仍能持续维持。
表 2　去抑制剂后继代过程中的 D NA甲基化减少情况
Table 2　The reduced D NA m ethyla tion in the course of successive tran sfer culture after rem oved 52azaC
52azaC /
(μmol·L - 1 )
继代次数
The time
of subculture
类型变化 /条 Type change
Ⅱ→ⅠⅡ→ⅢⅢ→ⅠⅣ→ⅠⅣ→ⅡⅣ→Ⅲ
少带数
Number of the decreased
总带数
Total bands
减少比例 /%
Proportion of the decreased
1 000 1 14 0 2 0 2 7 25 280 8193
2 13 0 3 0 0 7 23 271 8149
3 12 0 0 1 2 6 21 273 7169
500 1 11 1 2 1 2 10 24 299 8103
2 10 0 2 0 1 9 22 290 7159
3 11 0 3 2 1 7 21 290 7124
100 1 12 0 0 1 1 9 23 288 7199
2 11 2 1 0 0 8 22 297 7141
3 10 1 1 4 0 5 21 289 7127
10 1 6 0 0 1 2 7 16 280 5171
2 5 0 1 1 2 6 15 276 5143
3 7 0 1 0 2 5 15 285 5126
1 1 5 2 0 0 4 8 19 282 6173
2 4 1 1 0 3 7 16 281 5169
3 4 1 1 0 2 6 14 279 5102
011 1 5 2 1 0 3 5 16 280 5171
2 4 2 1 1 3 5 16 284 5163
3 4 0 1 0 2 4 11 274 4101
0101 1 4 0 0 0 3 7 14 272 5115
2 5 0 0 0 3 5 13 276 4171
3 4 0 1 0 3 4 12 277 4133
21313　基因组 DNA甲基化变化在田间培养的稳定性 　
分别将 10、1、011和 0101μmol·L - 1 52azaC处理 30 d的材料 , 经室内生根培养后移栽 , 翌年春
天从各处理材料相同部位的幼嫩叶片中提取 DNA , 比较处理 30 d和田间材料的 DNA甲基化水平。结
果表明 , 在变异带中 , 一些特异性条带具有时期特异性 , 表现为离体材料特有或者田间材料特有 , 其
带型多为 Ⅲ型带 (表 3)。这可能是两个阶段的生长环境不同导致的 DNA甲基化变化 , 离体材料由于
在培养基中加入的生长调节因子促使从头合成甲基转移酶发生作用 , 在 CCGG位点形成了半甲基化类
表 3　部分变异带在两个阶段材料中的带型变化情况
Table 3　The pa ttern of part var ia tion bands in the ma ter ia ls of two pha se
52azaC / (μmol·L - 1 ) 带型变化条带数 Type changeⅠ→
Ⅱ3 Ⅰ→Ⅲ3 Ⅰ→Ⅳ3 Ⅱ→Ⅳ3 Ⅲ→Ⅱ3 Ⅲ→Ⅳ3 Ⅱ→Ⅰ Ⅱ→Ⅲ Ⅲ→Ⅰ Ⅳ→Ⅰ Ⅳ→Ⅱ Ⅳ→Ⅲ 甲基化增加的条带数Additivebands 甲基化减少的条带数Reducedbands
10 3 3 1 6 1 19 4 2 0 3 7 10 33 26
1 2 3 2 11 0 20 7 1 2 2 2 19 38 33
011 2 2 3 7 0 20 5 2 1 4 2 16 36 30
0. 01 1 5 2 8 0 20 6 2 0 2 4 24 36 38
共有变异条带数 Common variational bands 0 1 0 1 0 1 1 1 0 1 1 4 3 8
离体材料一致的条带数 0 0 1 2 0 16 0 0 0 0 0 0 19 0
Congruent bands in vitro
离体材料田间生长一致的条带数 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 0 2
Congruent bands in vitro in the field
　　3 表示发生了甲基化增加的条带类型。
　　3 showed the bands pattern of increased DNA methylation.
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型 , 当其在田间的自然环境下生长时 , 这些半甲基化位点在没有生长调节因子条件下便又发生了去甲
基化。但离体材料在田间生长过程中 , 另有两个位点发生了半甲基化 (表 3) , 这一现象的原因尚不
明确。
从两种甲基化敏感酶的限制性消化特点来看 , 扩增产物中 , 4种处理 30 d的材料移至田间后 , 部
分位点发生了 DNA甲基化增加 , 而另有一些位点则发生了 DNA甲基化降低。其中 , 在 4种处理材料
间共 3个位点均发生了甲基化增加 , 且模式一致 (表 3) , 这说明田间生长过程中 , 在自身甲基转移
酶的作用下 , 由于 52azaC处理引起的一些位点的低甲基化状态得以恢复 ; 另有 8个位点发生甲基化
减少 , 且模式一致 , 推测可能因 52azaC使基因组 CCGG位点形成了稳定的去甲基化状态。由于 4种
处理材料较对照均有花期提前的表型变化 , 而花期与 DNA甲基化减少密切相关 , 因而推测此 8个位
点可能是影响花期相关基因的关键位点 , 因其去除药物后 , 发生的去甲基化状态仍然稳定存在 , 从而
影响到花期。而不同处理对花期的影响不同 , 则可能是由于其他一些开花相关基因的作用位点 , 在不
同处理间发生不同程度的甲基化变化 , 从而影响花期。而各个处理的变异带中 Ⅲ型带和 Ⅳ型带之间的
相互转换比例最大 , 这可能是由于墨菊生长过程中体内从头合成甲基转移酶的作用不断受到 52azaC
影响而致。
3　讨论
DNA的甲基化修饰影响蛋白质与 DNA的相互作用 , 因此 DNA甲基化在高等生物的生命活动中
具有维持基因组稳定及调节生长发育等重要功能 (Chan et al. , 2005)。DNA 甲基化是植物生长发育
和分化过程中控制基因表达的一种调控机制 , 如果甲基化不足或者太高 , 都会导致生长发育的不正常
和形态异常 ( Finnegan et al. , 1996)。
研究表明 , 52azaC处理使植物新产生的器官发生一些表观变化 ( Prakash & kumar, 1997) : 在茎
尖诱导过程中的一些关键调节基因在 52azaC处理时发生了去甲基化或失活 , 从而抑制新芽的产生。
本研究表明 , 52azaC对丛生芽的抑制作用具有时间累加效应和剂量累计效应。且这种抑制效应在去处
理后的继代过程中仍能维持 , 在连续继代 3次之后 , 各种处理材料的丛生芽分化率仍不及对照。本试
验中 , 低浓度 52azaC处理材料在田间生长过程中 , 没有发现表型性状变异 , 但处理植株的开花时间
却比对照有所提前。开花提前的时间长短与处理浓度密切相关 , 如 10和 1μmol·L - 1处理能够提前
8～9 d, 而 011和 0101μmol·L - 1则提前 2～3 d, 且这种效应在自然生长过程中能够持续存在 (两年
的观察结果一致 )。前人研究发现 52azaC处理春化植物 , 可以部分代替春化作用使植物提早开花 (汪
炳良 等 , 2005) , 但在无需春化的观赏植物上尚未见应用。这意味着诸多的观赏植物亦有可能通过此
方法改变开花时间 , 从而达到一定的观赏价值和经济效益。
下一步将对 52azaC处理引起早花的关键基因位点进行定位分析 , 以期通过基因克隆应用于更多
的观赏性植物 , 更大程度上达到人工有目的控制花期。而通过 MSAP测定的处理导致稳定的低甲基化
水平位点定位正在进一步的研究中。
References
A shok S, Bhagwat R J. 1987. Roberts genetic analysis of the 52azacytidine sensitivity of Escherich ia coli K212. Journal of Bacteriology, 169
(4) : 1537 - 1546.
Burn J E, Bagnall D J, Metzger J D, Dennis E S, Peacock W J. 1993. DNA methylation, vernalization, and the initiation of flowering. Pro2
ceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 90: 287 - 291.
Chan S W , Henderson I R, Jacobsen S E. 2005. Gardening the genome: DNA methylation in A rabidopsis thaliana. Nature Reviews Genetics,
6 (5) : 351 - 360.
Chen Kun2song, L i Fang, Xu Chang2jie, Zhang Shang2long, Fu Cheng2xin. 2004. An efficient macro2method of genom ic DNA isolation from
9871
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
园 　　艺 　　学 　　报 36卷
Actinid ia chinensis leaves. Hereditas, 26 (4) : 529 - 531. ( in Chinese)
陈昆松 , 李　方 , 徐昌杰 , 张上隆 , 傅承新. 2004. 改良 CTAB法用于多年生植物组织基因组 DNA的大量提取. 遗传 , 26 ( 4) :
529 - 531.
Finnegan E J, Peacock W J, Dennis E S. 1996. Reduced DNA methylation in A rabidopsis tha liana results in abnormal p lant development. Pro2
ceedings of the National Academy of Science of the United States of America, 93: 8449 - 8454.
He Yan2xia, W ang Zi2cheng, Cao Hong2p ing, Zhang Cheng2wan. 2007. Initial study of DNA methylation difference of garlic (A llium sativum
L. ) growing in light and darkness. Plant Physiology Communications, 43 (1) : 85 - 88. ( in Chinese)
何艳霞 , 王子成 , 曹红平 , 张成婉. 2007. 光暗条件下大蒜 DNA甲基化差异的初步研究. 植物生理学通讯 , 43 (1) : 85 - 88.
Law D, Suttle J. 2005. Chromatin remodeling in p lant cell culture: Patterns of DNA methylation and histone H3 and H4 acetylation vary during
growth of asynchronous potato cell suspensions. Plant Physiology and B iochem istry, 43: 527 - 534.
L i Mei2lan, Zeng Guang2wen, Zhu Zhu2jun. 2003. Analysis of effects of 52azacytidine on p romoting flowering in non2heading Chinese cabbage.
Journal of Zhejiang University: Agriculture and L ife Sciences, 29 (3) : 287 - 290. ( in Chinese)
李梅兰 , 曾广文 , 朱祝军. 2003. 5 -氮杂胞苷促进白菜开花的效应分析. 浙江大学学报 : 农业与生命科学版 , 29 (3) : 287 - 290.
N ie L i2juan, W ang Zi2cheng. 2007. The molecular mechanism and app lication of DNA methylation inhibitor in the developmental biology of
p lant. Acta Agriculturae Nucleatae Sinica, 21 (4) : 362 - 365. ( in Chinese)
聂丽娟 , 王子成. 2007. DNA甲基化抑制剂作用机理及其在植物发育生物学研究中的应用. 核农学报 , 21 (4) : 362 - 365.
N ie L i2juan, W ang Zi2cheng, He Yan2xia. 2008. The variation of DNA methylation variation during successive transfer culture of chrysanthe2
mum (D endranthem a ×grandiflorum ) . Acta Horticulturae Sinica, 35 (11) : 1689 - 1694. ( in Chinese)
聂丽娟 , 王子成 , 何艳霞. 2008. 菊花组织培养继代过程中的 DNA甲基化变化. 园艺学报 , 35 (11) : 1689 - 1694.
Prakash A P, Kumar P P. 1997. Inhibition of shoot induction by 52azacytidine and 52aza22′2deoxycytidine in Petunia involves hypomethylation.
Plant Cell Tissue and O rgan Culture, 50: 75 - 82.
Scarano M L, Strazzullo M, Matarzzo M R, D′Esposito M. 2005. DNA methylation 40 years later: Its role in human health and disease. Jour2
nal of Cellular Physiology, 204 (1) : 21 - 35.
W ang B ing2liang, L i Shui2feng, Deng J ian2ying, Zeng Guang2wen. 2005. Effect of 52azacytosine on flowering and DNA methylation level of
stem ap ices in radish (Raphanus sa tivus L. ) . Acta Agriculturae Nucleatae Sinica, 19 (4) : 265 - 268. ( in Chinese)
汪炳良 , 李水凤 , 邓俭英 , 曾广文. 2005. 52azaC对萝卜茎尖 DNA甲基化和开花的影响. 核农学报 , 19 (4) : 265 - 268.
Xiao Jun, Yang L i2guo, Yang Tao, L i Zhou2hua, W ang J in2yan, Ren Zhi2ying. 2005. Comparison on two methods to extract chrysanthemum
total DNA. L iaoning Agricultural Sciences, (1) : 40 - 41. ( in Chinese)
肖　军 , 杨立国 , 杨　涛 , 李舟华 , 王金艳 , 任志颖. 2005. 两种提取菊花总 DNA方法的比较. 辽宁农业科学 , (1) : 40 - 41.
Xiong L Z, Xu C G, Saghai2Maroof M A. 1999. Patterns of cytosine methylation in an elite rice hybrid and its parental lines, detected by a
methylation2sensitive amp lification polymorphism technique. Molecular Genetics and Genom ics, 261 (3) : 439 - 446.
Zakharov A F, Egolina N A. 1972. D ifferential sp iralization along mammalian m itotic chromosomes. I. BUdR2revealed differentiation in Chi2
nese ham ster chromosomes. Chromosoma, 38 (4) : 341 - 365.
Zhou Hui2fen. 2003. Chrysanthemum tissue culture and rap id p ropagation. Anhui Agricultural Science Bulletin, 9 (6) : 75. ( in Chinese)
周惠芬. 2003. 菊花组织培养和快速繁殖. 安徽农学通报 , 9 (6) : 75.
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