全 文 ：园 　艺 　学 　报 　2008, 35 (11) : 1573 - 1580
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2008 - 07 - 01; 修回日期 : 2008 - 09 - 01
基金项目 : 新世纪人才支持计划项目 (NCET20620108 ) ; 北京市教育委员会都市农业学科群建设项目 ( XK100190553 ) ; 国家
‘十一五’支撑计划项目 (2007BAD36B02)3 通讯作者 Author for correspondence ( E2mail: lth123430@ sohu1com)
桃成花基因 PpL F Y的克隆与表达及多克隆抗体制
备
安丽君 , 李天红 3
(中国农业大学农学与生物技术学院 , 北京市果树逆境生理与分子生物学重点实验室 , 北京 100193)
摘 　要 : 以 ‘八月脆 ’桃成花诱导期腋芽为试材 , 克隆得到一个 FLOR ICAULA /LEA FY同源基因 , 命名
为 PpLEA FY ( PpLFY) , GenBank登录号为 EF175869。该基因 cDNA全长 1 314 bp, 开放阅读框为 1 248 bp,
编码一个含 416个氨基酸残基的蛋白 , 与其他物种中的 LEAFY蛋白的同源性较高 ( 74122% ～84169% )。
组织及时期特异性表达分析表明 , PpLFY主要在叶片、花瓣及成花诱导期及花芽形态分化初期表达。构建
了 pGEX24T21 /PpLFY原核表达系统 , 获得了可溶性融合蛋白 rPpLFY, 分子量约为 36 kD。利用该蛋白免疫
新西兰大白兔 , 获得了抗 rPpLFY的多克隆抗体 , EL ISA效价为 1∶10 000。
关键词 : 桃 ; 成花基因 ; 克隆 ; 表达 ; 多克隆抗体
中图分类号 : S 66211　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2008) 1121573208
C lon ing , Expression and Production of Polyclona l Antibod ies of Peach PpL F Y
AN L i2jun and L I Tian2hong3
( College of A gronom y and B iotechnology, China A gricu ltura l U niversity, L aboratory of S tress Physiology and M olecu larB iology for
Tree Fru its, A Key L abora tory of B eijing M unicipa lity, B eijing 100193, China)
Abstract: A FLO /L FY homologous gene named PpL EA FY ( PpL FY ) was cloned from ‘Bayuecui’
peach [ P runus persica (L. ) Batsch. ] axillary bud samp led in the flower induction period. GenBank acces2
sion No. EF175869. The sequence of comp lete PpL FY cDNA gene was 1 314 bp, with an ORF 1 248 bp en2
coding 416 am ino acids, which shared highly homology between 74122% and 84169% with other FLO /LFY
p rotein from other species in the database. RT2PCR analysis showed that PpL FY gene exp ressed mainly in the
flower induction time and early period of morphology differentiation and also the leaf and petal of peach. The
p rokaryotic exp ression system s was constructed and induced. The recombinant p rotein was purified to immu2
nize the rabbit. SDS2PAGE analysis showed that the rPpLFY molecularweightwas about 36 kD , E ILSA analy2
sis showed that the titer of polyclonal antibody was about 1∶10 000.
Key words: peach; flowering gene; cloning; exp ression; polyclonal antibody
在对拟南芥和金鱼草等模式植物花分生组织和花器官形成的遗传学及分子机制的研究中发现 , 成
花诱导及随后的花发育过程是由一批基因通过不同的时空表达调控的 (B lázquez et al. , 2003; Boss et
al. , 2004; Jack, 2004; Komeda, 2004; B lázquez, 2005; Corbesier & Coup land, 2005)。在这些基因
中 , 金鱼草 FLOR ICAULA ( FLO ) ( Coen et al. , 1990) 基因和拟南芥中与其同源的 L EA FY (L FY )
(W eigel et al. , 1992) 基因在从营养生长向生殖生长的转变过程中起着关键作用 , 是成花转变的标记
基因。拟南芥中 L FY基因主要作用是维持花分生组织分化 , 防止花分生组织逆转 , 最弱位点的 lfy突
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变即可使植株底部的花转变为二级枝。原位杂交表明 , L FY在早期花原基中高量表达 , 而在花序分生
组织中未检测到。因此认为野生型中 L FY基因表达是花序分生组织转变为花分生组织的必要条件
(B lázquez et al. , 1997)。与此一致的是 , 35S: : LFY欧洲山杨转化植株 , 花期能从野生型的 8～12
年提前到 7个月 (W eigel & N ilsson, 1995)。在柑橘中对 35S: : L FY进行组成型表达 , 使柑橘的花期
提前了近 5年 , 并且转化植株所获得的性状可以稳定遗传 ( Pena et al. , 2001)。
近年来人们开始在果树中克隆 L FY的同源基因 (陈大明 等 , 2001; Carmona et al. , 2002; W ada
et al. , 2002; 胡桂兵 等 , 2004; 郑丽霞 等 , 2004; 刘月学 等 , 2005; 曾黎辉 等 , 2006; 何新华
等 , 2007) , 研究其功能在物种之间的普遍性 , 期望通过植物基因工程手段人为调控果树开花时间 ,
缩短童期 , 并加速果树成花机理的研究进程。作者拟利用 RT2PCR及 RACE方法从桃成花诱导期腋芽
中克隆得到 FLO /L FY同源基因 PpL FY的 cDNA及 DNA全长序列 , 并对 PpL FY的组织和时期特异性表
达进行研究 ; 通过建立 pGEX24T21 /PpLFY原核表达系统 , 对 PpLFY蛋白进行体外表达 , 并利用获得
的可溶性融合蛋白进行抗 rPpLFY的多克隆抗体的制备 , 为进一步研究 PpL FY基因的功能及其在桃成
花转变中的作用奠定基础 , 为揭示桃花芽分化分子机理的研究提供依据。
1　材料与方法
111　菌株与试剂
原核表达载体 pGEX24T21由农业与生物技术国家重点实验室植物分子遗传实验室馈赠。E1coli
TOP10和 E1coli BL21感受态细胞购自天根生化生物公司。试验中所用限制性内切酶、Taq DNA聚合
酶、T4 DNA连接酶及克隆载体 pMD182T均购自宝生物工程有限公司。 Superscrip t Ⅲ反转录酶、
Generacer kit为 Invitrogen公司产品。M 2MLV反转录酶为 Promega公司产品。DNA回收试剂盒购自汇
天东方。弗氏佐剂为 Sigma公司产品。新西兰大白兔由中国农业大学实验动物中心提供。GSTrap亲
和柱为 Amersham公司产品。
112　PpL F Y基因的克隆
材料采自北京总政基地农场。‘八月脆 ’桃 [ P runus persica (L. ) Batsch. ‘Bayuecui’] 中果枝复
花芽排列模式 (主要为同一节间三芽并生 , 双侧为花芽 , 中间为叶芽 )。2004年 5月 30日 —7月 10
日每 5 d、7月 20日 —10月 10日每 10 d取中果枝第 4～7节位两侧芽 ; 2005年盛花期 (4月 16日 )
分别采取叶片、萼片、花瓣、雄蕊和雌蕊 , 液氮速冻后 , - 80 ℃冰箱保存。根据拟南芥、金鱼草、
杨树、松树和苹果中 FLO /LFY蛋白的保守区 HPF IVTEP和 W YVPTKLRQ设计简并引物 LF: 5′2CAYC2
CNTTYATHGTRACDGAGCL23′, LR: 5′2TGNCGGAGCTTGGTNGGNACRTAC23′。CTAB法提取桃成花诱
导期芽 (6月 30日所采样品 ) RNA作为模板 , Superscrip t Ⅲ反转录酶合成 cDNA第一链后进行 PCR
扩增 , 获得中间片段。3′2RACE和 5′2RACE参照 Generacer kit操作说明进行 , 引物序列分别为 GSP1:
5′2ATCAACAAGCCCAAGATGCGA23′; GSP2: 5′2AGAGGCGAAAATGTGGGGGC23′; GSPA1: 5′2CG2
CATCTTGGGCTTGTTGATGTA23′; GSPA2: 5′2TTGTCGTAGAGATGGAAGAGGTAAT23′; 接 头 引 物 由
Generacer kit提供。PCR程序基本为 94 ℃ 5 m in; 94 ℃ 45 s, 55 ℃ 50 s, 72 ℃ 1 m in, 35个循环 ;
72 ℃ 10 m in, 退火温度因引物而有所不同。PCR产物回收后连接到克隆载体 pMD182T中进行序列测
定。引物合成及序列测定由上海生工生物工程技术服务有限公司完成。
113　PpL F Y基因的表达分析
CTAB法分别提取桃叶片、萼片、花瓣、雄蕊、雌蕊及成花不同时期花芽总 RNA, 将总 RNA定
量后 M 2MLV反转录酶合成 cDNA第一链 , PCR检测桃 PpL FY的表达量 , 以桃 18S rRNA为内参照。
引物分别为 LFYF: 5′2GGTGGGATTTGCTTGTGGGTGA23′; LFYR: 5′2AGCTAGAGGCGGTGGCATTGTT2
3′; 18SF: 5′2GCCTGAGAAACGGCTACCAC23′; 18SR: 5′2AACCAGACAAATCGCTCCAC23′; 由上海生物
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　11期 安丽君等 : 桃成花基因 PpLFY的克隆与表达及多克隆抗体制备 　
工程公司合成。PCR程序为 94 ℃ 5 m in; 94 ℃ 45 s, 54 ℃ 40 s, 72 ℃ 50 s, 30个循环 ; 72 ℃ 10 m in。
114　PpL F Y原核表达载体构建
对 PpL FY基因进行序列分析 , 选取长度为 235 bp (420～655 bp) 的片段进行 PCR扩增 , 连接到
克隆载体 pMD182T中 , 作为抗体制备的目的片段。引物序列分别为 LF3: 5′2GAATTCACCACCAC2
CAATGCCCTAGATGC23′, LR3: 5′2GCGGCCGCAAGTCCCCGTTGTCCACACC23′, 分别含有 EcoRⅠ和
N otⅠ酶切位点 , 由上海生工生物工程技术服务公司合成。以 EcoRⅠ和 N otⅠ分别双酶切表达载体
pGEX24T21和连接有该长度为 235 bp的 PpL FY基因片段的载体 pMD182T, 回收酶切产物后以 T4 DNA
连接酶进行连接获得重组质粒 , 将阳性重组质粒转化 E1coli BL21感受态细胞后进行双酶切鉴定 , 上
海生工生物工程技术服务有限公司测序。
115　PpL F Y的表达、纯化及 SD S2PAGE分析
挑取转化有重组质粒的 E1coli BL21单菌落接种于含 100μg·mL - 1氨苄青霉素 (Amp ) 的 LB培
养基 , 37 ℃、200 r·m in - 1培养至对数生长期 , 加 IPTG至终浓度 1 mmol·L - 1 , 37 ℃诱导表达 , 分
别在诱导后 1、3、5、7 h取样 , 离心收集菌体 , SDS2PAGE分析蛋白表达情况 , 同时设未诱导菌组和
pGEX24T21空质粒对照组。为获得可溶性蛋白 , 进行 16 ℃诱导表达。取 16 ℃诱导 24 h的菌液 1 L,
离心收集菌体 , 超声波破碎细胞后分别取上清液和沉淀进行 SDS2PAGE分析 , 之后用 GST亲和柱纯
化融合蛋白。将纯化后蛋白再次进行 SDS2PAGE, 4 ℃ 250 mmol·L - 1 KCl染色 12 h后切胶回收 , 以
1 ×PBS缓冲液透析 2次 , 每次 12 h。之后进行蛋白浓缩、SDS2PAGE电泳和蛋白浓度测定。
116　PpL F Y多克隆抗体的制备
以纯化的 rPpLFY融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔。初次免疫用弗氏不完全佐剂 , 抗原量为每只
250μg, 皮内结合肌肉注射。1周后隔日耳缘静脉注射免疫 , 每只免疫剂量为 300μg·L - 1 , 共免疫
4次 ,最后 1次免疫后 10 d, 取血测定效价。用 rPpLFY纯化蛋白包被 96孔板 (每孔 015μg, 溶于
100μL包被液 ) , 4 ℃过夜 , PBST ( PBS中含 011% Tween220) 冲洗 3次 , 加封闭液 ( PBS中含 5%牛
血清白蛋白 ) 于 37 ℃封闭 2 h, PBST冲洗 3次 , 加入不同稀释度的待检免疫血清 , 以免疫前的正常兔
血清作对照 , 37 ℃孵育 1 h, PBST冲洗 3次 , 加碱性磷酸酶 (AP) 标记的羊抗兔 IgG (1∶1 000稀释 ) ,
37 ℃孵育 1 h, PBST冲洗 3次 , 加显色底物 5 -溴 - 4 - 氯 - 3 - 吲哚盐 /硝基四唑氮蓝 (BC IP /NBT) ,
37 ℃避光显色 15 m in, 以 2 mol·L - 1 H2 SO4终止反应 , 测 490 nm的吸收值 , P /N ≥ 211者判为阳性。
2　结果与分析
211　桃成花基因 PpL F Y的克隆及序列分析
以 ‘八月脆 ’桃成花诱导期腋芽为材料 ,
RT2PCR扩增得到一个 420 bp的中间片段 (图 1,
A) , 经 B lastN ( http: ∥www1ncbi1nlm1gov) 分析
表明 , 该片段与多个物种中的 LFY及其同源基因
具有较高的同源性 , 含有 LFY基因 3′末端保守序
列 , 表明该片段为期望的目的片段。利用该中间片
段通过 RACE法获得了 3′末端和 5′末端 , 分别为
573 bp和 825 bp (图 1, B、C)。根据 RACE获得
的 cDNA拼接序列设计引物 , PCR 扩增获得了
1 314 bp的全长 cDNA 序列 (图 1, D ) , 命名为
PpLEAFY (PpLFY) , GenBank登录号为 EF175869。
图 1　桃 PpL F Y基因 RT2PCR及 PCR扩增结果
F ig. 1　RT2PCR and PCR am plif ica tion of PpL F Y gene of peach
A: Amp lification of the m iddle fragment of PpLFY (420 bp) ;
B: 3′RACE of PpLFY (573 bp) ; C: 5′RACE of PpLFY
(825 bp) ; D: Amp lification of cDNA full length of PpLFY
(1 314 bp) ; E: Amp lification of DNA full length of PpLFY
(2 489 bp) ; M: 1 000 bp DNA ladder.
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以桃基因组 DNA为模板 , PCR扩增 PpL FY基因得到长度为 2 489 bp的 DNA序列 (图 1, E) , 表明
该基因中有内含子存在。
比较 PpL FY基因 DNA和 cDNA全长序列 , 表明该基因序列含有 2个内含子和 3个外显子 (图
2) , 内含子长度分别为 270 bp和 901 bp, 外显子 —内含子交接点处序列符合 GT2AG规律 , 是典型的
剪接体识别序列。
用 DNAMAN软件对 PpLFY基因序列进行分析 , 该基因包含翻译起始密码子 ATG和终止密码子
TGA, 开放阅读框 (open reading frame, ORF) 为 1 248 bp, 编码一个含有 416个氨基酸残基的蛋白 (图
2) , 分子量为 46 kD, 等电点 719, 是一个中性蛋白。PpLFY蛋白具有完整的植物 LFY蛋白的结构 , C
端保守性很高 , N端富含丙氨酸 , 中间为酸性区域 , 推测这些区域可能是调节转录的活性区域 (图 2)。
图 2　桃 PpL F Y基因核苷酸序列及推测的氨基酸序列
下划线部分表示丙氨酸富集区 , 阴影部分为酸性区域 , 倒三角分别表示两个内含子位置 ,
箭头所示为扩增所用引物所在位置。
F ig. 2　The full length cD NA nucleotide ac id sequence and deduced am ino ac id sequence of PpL F Y gene of peach
The alanine2rich domain of the p rotein was underlined, the acidic domain in the m iddle was shaded,
and the two large arrowheads above the sequence indicated the two introns of 270 and 901 bp,
respectively, arrows showed the position and orientation of
p rimers for PCR amp lification of PpLFY.
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212　PpL F Y基因的同源性比对
用 DNAMAN软件对其氨基酸序列进行了同源性比较 , PpLFY蛋白与数据库中其他物种 LFY蛋白
具有较高的同源性 , 特别是在 C端 , 保守性极高 , 在 N端和中间区域各有一个特定氨基酸富集区域
(图 2)。通过构建系统树表明 , PpL FY基因和砂梨、苹果、山核桃、葡萄的 L FY同源基因聚为一类 ;
其中与砂梨的 PpL FY21基因的亲缘关系最近 , 同源性达到 84169% , 与其他几个基因的蛋白同源性大
小依次是 83170%、76187%和 74122%。
213　PpL F Y基因的时空表达分析
用 CTAB法提取桃叶片、花各器官及成花不同时期花芽总 RNA (图 3)。
图 3　用于半定量 RT2PCR分析的部分样品总 RNA
1、2: 叶片 ; 3、4: 萼片 ; 5: 花瓣 ; 6、7: 雄蕊 ; 8、9: 雌蕊。
F ig. 3　Tota l RNA of partia l sam ples used in sem i2quan tiza tion RT2PCR ana lysis
1, 2: Leaf; 3, 4: Sepal; 5: Petal; 6, 7: Stamen; 8, 9: Pistil.
用半定量 RT2PCR法对 PpL FY表达量进行了研究 , 结果表明 PpL FY仅在叶片和花瓣中表达 , 在
其他花器官中不表达 (图 4)。
图 4　桃 PpL F Y基因组织特异性表达分析
1: 萼片 ; 2: 花瓣 ; 3: 雄蕊 ; 4: 雌蕊 ; 5: 叶片 ; M: 1 000 bp DNA ladder。
F ig. 4　Ana lysis of the expression of PpL F Y in d ifferen t tissues of peach
1: Sepal; 2: Petal; 3: Stamen; 4: Pistil; 5: Leaf. M: 1 000 bp DNA ladder.
在桃花芽分化过程中 , PpL FY主要在成花诱导期及花芽分化初期表达 , 7月 20日表达量最高 ,
之后表达量降低 (图 5)。
214　PpL F Y的原核表达、纯化与 SD S2PAGE分析
将构建好的重组质粒 pGEX24T21 /PpLFY转化 E1coli BL21后建立了 BL21 ( pGEX24T21 /PpLFY)
原核表达系统。37 ℃条件下 IPTG诱导 BL21 (pGEX24T21 /PpLFY) 表达 , 10% SDS2PAGE显示在 36 kD
处有 1条特异蛋白带 , 并且随诱导时间的延长表达量增加 (图 6, A )。为了获得可溶性蛋白 , 将
BL21 (pGEX24T21 /PpLFY) 进行低温诱导表达。16 ℃条件下诱导 24 h后 , 12% SDS2PAGE显示在 36
kD处有特异蛋白带 , 与 37 ℃条件下的诱导表达结果相同 (图 6, B ) , 并且这条蛋白带能被 GST亲
和柱纯化。将亲和纯化后的蛋白进一步切胶回收、透析 , 最后进行蛋白浓缩。经紫外分光仪检测 , 浓
缩后的融合蛋白浓度为 215 mg·mL - 1。
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215　抗融合蛋白 rPpL FY多克隆抗体的制备
兔子经免疫 4次后的第 10天取血测定效价。以 rPpLFY纯化蛋白包被 96孔板 , 用 EL ISA方法检
测制备的多克隆抗体滴度。结果显示抗 rPpLFY抗体的最终效价为 1∶10 000。
3　讨论
果树的成花诱导是一个高度复杂的生理生化和形态发生过程 , 探讨其分子机理对果树的育种研究
及其遗传学研究都具有重要意义。一方面 , 缩短童期可以加速果树的遗传改良 , 推动以这些树种为试
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材的试验研究进程 ; 另一方面 , 可以实现果树早实丰产。拟南芥 L FY基因在成花中的关键调节作用
自 W eigel实验室首次鉴定以来 (W eigel et al. , 1992) , 国内外学者对该基因的表达调控及生物学功能
进行了深入研究 , 在 L FY同源基因编码区结构与功能方面取得巨大进展 , 为利用基因工程进行植物的
花期调控提供了重要理论依据 (B lázquez et al. , 1997; B lázquez & W eigel, 2000; Eriksson et al. ,
2006 ; Saddic et al. , 2006; 兰树斌和李建国 , 2007) , 但 L FY基因结构、功能、表达模式及拷贝数存
在差异 , 其调控机理尚不清楚 , 而有关这些问题的研究将在阐明 L FY同源基因控制植物发育方面发
挥重要作用 , 但上述研究大都集中在模式植物上。
目前果树中 L FY基因的研究仅限于同源基因的克隆 (陈大明 等 , 2001; 胡桂兵 等 , 2004; 郑
丽霞 等 , 2004; 刘月学 等 , 2005; 何新华 等 , 2007) , 对其功能还缺乏深入研究。在众多木本果树
中 , 桃基因组最小 , 结构简单 (2n = 16) , 已成为鉴定和分离核果类果树重要农艺性状相关基因的模
式植物 (Baid et al. , 1996) , 但目前对桃成花关键基因的研究报道较少。本研究从 ‘八月脆 ’桃成
花诱导期腋芽中克隆到成花关键基因 FLO /L FY的同源基因 PpL FY片段 , 进一步获得了其 cDNA和
DNA全长序列。序列分析表明 PpL FY分别在靠近 5′端和 3′端的位置存在两个内含子 , 与金鱼草 FLO
和拟南芥 L FY基因的结构相似。推测的氨基酸序列显示 PpL FY具有完整的植物 FLO /LFY蛋白的结
构 , 中间酸性区域富含谷氨酸和天冬氨酸 , N端与大多数木本植物一样有一个丙氨酸富集区 (Rott2
mann et al. , 2000; Carmona et al. , 2002; W ada et al. , 2002; Dornelas et al. , 2004)。而大多数草本
植物在此位置为脯氨酸富集区 (Coen et al. , 1990; W eigel et al. , 1992; Kelly et al. , 1995) , 推测这
些区域可能是转录激活的调控区域 ; 通过对其表达模式的研究发现 , PpL FY的表达具有时期性 , 与拟
南芥中 L FY基因的表达模式一致 (B lázquez et al. , 1997) , 主要在桃成花诱导期及花芽形态分化初期
表达 , 这些结果暗示 PpL FY基因可能具有与拟南芥 L FY基因一样的功能 , 在桃成花转变中起着重要
作用。
本研究完成了 PpL FY基因的克隆及其时空表达的初步分析 , 制备了抗融合蛋白 rPpLFY的多克隆
抗体 , 为今后进行 PpL FY基因启动子的克隆及其功能研究和深入分析 PpLFY蛋白在桃顶端分生组织
中的原位分布与成花诱导期其他蛋白的互作关系等奠定了基础。
References
BaidW V, Ballard R E, Rajapkse S, Abbott A G. 1996. Progess in Prunus mapp ing and app lication of molecular markers to germp lasm imp rove2
ment. HortScience, 31: 1099 - 1106.
B lázquezM A, Ahn J H, W eigel D. 2003. A thermosensory pathway controlling flowering time in A rabidopsis tha liana. Nature Genetic, 33:
168 - 171.
B lázquezM A, Soowal L N, Lee I, W eigel D. 1997. LEA FY exp ression and flower initiation in A rabidopsis. Developmen, 124: 3835 - 3844.
B lázquezM A, W eigel D. 2000. Integration of floral inductive signals in A rabidopsis. Nature, 404: 889 - 891.
B lázquezM A. 2005. The right time and p lace for making flowers. Science, 309: 1024 - 1025.
Boss P K, Bastow R M, Mylne J S, Dean C. 2004. Multip le pathways in the decision to flower: Enabling, p romoting, and resetting. Plant Cell,
16: 18 - 31.
Carmona M J, Cubas P, Martinez2Zapater J M. 2002. VFL, the grapevine FLOR ICAULA /LEAFY orthologue, is exp ressed in meristematic region
independently of their fate. Plant Physiology, 130: 68 - 77.
Chen Da2m ing, J in Yong2feng, Zhang Shang2long. 2001. Cloning and characterization of the LEAFY homolog in citrus. Acta Horticulturae Sinica,
28 (4) : 295 - 300. ( in Chinese)
陈大明 , 金勇丰 , 张上隆. 2001. 柑橘 LEA FY同源基因片段分离及特性研究. 园艺学报 , 28 (4) : 295 - 300.
Coen E S, Romero J M, Doyle S, Elliott R, Murphy G, Carpenter R. 1990. Floricaula: A homeotic gene required for flower development in A ntir2
rhinum m ajus. Cell, 63: 1311 - 1322.
Corbesier L, Coup land G. 2005. Photoperiodic flowering of arabidop sis: Integrating genetic and physiological app roaches to characterization of flo2
9751
园 　　艺 　　学 　　报 35卷
ral stimulus. Plant Cell Environment, 28: 54 - 66.
DornelasM C, Neves do AmaralW A, Rodriguez A P M. 2004. EgLFY, the Eucalyptus grandis homolog of the A rabidopsis gene LEA FY is ex2
p ressed in rep roductive and vegetative tissues. B raz Journal of Plant Physiology, 16 (2) : 105 - 114.
Eriksson S, B hlenius H, Moritz T, N ilsson O. 2006. GA4 is the active gibberellin in the regulation of LEAFY transcrip tion and A rabidopsis floral
initiation. Plant Cell, 18: 2172 - 2181.
He Xin2hua, Guo Yong2ze, Zhang L i, L i Yang2rui. 2007. Cloning and sequence analysis of LEAFY homologous gene from kumquat ( Fortunella
crassifolia Swingle) . Journal of Guangxi Agriculture and B ioscience, 26 (4) : 273 - 276. ( in Chinese)
何新华 , 郭永泽 , 张　利 , 李杨瑞. 2007. 金柑 LEAFY同源基因克隆与全序列分析. 广西农业生物科学 , 26 (4) : 273 - 276.
Hu Gui2bing, L in Shun2quan, Ye Zi2xing, Xu Chang2jie, Zhang Shang2long. 2004. Isolation and sequence analysis of LEAFY homologous gene
from mango. Subtrop ical Plant Science, 33 (2) : 1 - 4. ( in Chinese)
胡桂兵 , 林顺权 , 叶自行 , 徐昌杰 , 张上隆. 2004. 　果 LEAFY同源基因的分离及序列分析. 亚热带植物科学 , 33 (2) : 1 - 4.
Jack T. 2004. Molecular and genetic mechanism s of floral control. Plant Cell, 16: 1 - 17.
Kelly A J, BonnlanderM B, Meeks2W agner R. 1995. N FL , the tobacco homolog of FLOR ICAULA and LEA FY, is transcrip tionally exp ressed in
both vegetative and floral meristem s. Plant Cell, 7 (2) : 225 - 234.
Komeda Y. 2004. Genetic regulation of time to flower in A rabidopsis tha liana. Annual Review of Plant B iology, 55: 521 - 535.
Lan Shu2bin, L i J ian2guo. 2007. Advance of studies on LFY gene in p lants. Journal Guangxi Agricultural B iology Science, 126 ( Supp lement) :
132 - 137. ( in Chinese)
兰树斌 , 李建国. 2007. 植物 LFY基因的研究进展. 广西农业生物科学 , 126 (增刊 ) : 132 - 137.
L iu Yue2xue, Hu Gui2bing, L in Shun2quan, L iu Zong2li, Chen Hou2bin. 2005. Cloning and sequence analysis of LEAFY homologous gene from
loquat. Journal South China Agricultural University, 26 (2) : 66 - 68. ( in Chinese)
刘月学 , 胡桂兵 , 林顺权 , 刘宗莉 , 陈厚彬. 2005. 枇杷 LEA FY同源基因的克隆及序列分析. 华南农业大学学报 , 26 ( 2 ) :
66 - 68.
Pena L, Martn2Trillo M, Jurez J, Pina J A, Nararro L, Martnez2Zapater J M. 2001. Constitutive exp ression of A rabidopsis LEAFY or A PEATA1
genes in citrus reduces their generation time. Nature B iotechnology, 19 (3) : 263 - 267.
RottmannW H, Meilan R, Sheppard L A, B runner A M, Skinner J S, Ma C P, Cheng S P, Jouanin L, Pilateand G, Strauss S H. 2000. D iverse
effects of overexp ression of LEAFY and PTLF , a pop lar ( Populus) homolog of LEAFY / FLOR ICAULA , in transgenic pop lar and A rabidopsis.
Plant Journal, 22 (3) : 235 - 245.
Saddic L A, Huvermann B, Bezhani S, Su Y H, W inter C M, Kwon C S, Collum R P, W agner D. 2006. The LEA FY target LM 1 is a meristem
identity regulator and acts together with LEA FY to regulate exp ression of CAUL IFLOW ER. Development, 133: 1673 - 1682.
W ada M, Cao Q F, Kotoda N, Soejima J, Masuda T. 2002. App le has two orthologues of FLOR ICAULA /LEAFY involved in flowering. PlantMo2
lecular B iology, 49: 567 - 577.
W eigel D , A lvarez J, Smyth D R, YanoskyM F, Meyerowitz E M. 1992. LEAFY controls floral meristem identity in A rabidopsis. Cell, 69: 843 -
859.
W eigel D, N ilsson O. 1995. A developmental switch sufficient for flower initiation in diverse p lants. Nature, 377: 495 - 500.
Zeng L i2hui, W ang Q ing2lian, Hong Zi2tong, W u Shao2hua. 2006. Isolation and exp ression analysis of a LEAFY homolog gene in Longan. Chinese
Journal of Trop ical Crop s, 27 (4) : 69 - 73. ( in Chinese)
曾黎辉 , 王庆莲 , 洪自同 , 吴少华. 2006. 龙眼 LEAFY同源基因片段的克隆和表达. 热带作物学报 , 27 (4) : 69 - 73.
Zheng L i2xia, L in Xiao2dong, Zhu Fang2de, Xiao J ie2ning, Fu Tong2hao, ZhongW ei, Huang Shang2zhi. 2004. Cloning of LFY / FLO homologous
gene cDNA fragment in Longan (D im ocarpus longan Lour. ) . Journal of Sun yat2sen Univeristy: Natural Science Edition, 43: 60 - 64. ( in
Chinese)
郑丽霞 , 林晓东 , 朱芳德 , 肖洁凝 , 符同浩 , 钟　伟 , 黄上志. 2004. 龙眼 FLO /LFY同源基因 cDNA片段的克隆. 中山大学学
报 : 自然科学版 , 43: 60 - 64.
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