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　5期 夏宜平等 : 百合鳞茎形成与发育生理研究进展 　
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收稿日期 : 2005 - 04 - 01; 修回日期 : 2005 - 06 - 15
基金项目 : 国家自然科学基金项目 (30270942) 　　3 通讯作者 Author for correspondence
农杆菌介导的 CB F1基因对松南结缕草的遗传转化
王渭霞 1 　朱廷恒 2 　胡张华 3 　陈锦清 3 　玄松南 13 　 (1 中国水稻研究所 , 杭州 310006; 2 浙江工业
大学生物与环境工程学院 , 杭州 310014; 3 浙江省农业科学院 , 杭州 310021)
Agrobacter ium 2mediated CB F1 Gene Transformation of Songnan Zoysia Grass
W ang W eixia1 , Zhu Tingheng2 , Hu Zhanghua3 , Chen J inqing3 , and Xuan Songnan13 ( 1 China N ationa l R ice
R esearch Institu te, Hangzhou 310006, Ch ina; 2 Zhejiang U niversity of Technology, Hangzhou 310014, Ch ina; 3 Zhejiang A cad2
em y of A gricultural Sciences, Hangzhou 310021, Ch ina)
关键词 : 农杆菌 ; 结缕草转化 ; CB F1基因
中图分类号 : S 68　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2005) 0520953201
CB F1 (C2repeat/dehydration2responsive element binding factors 1) 基因为来源于拟南芥的一类与干旱、高盐及低温
耐性有关的转录因子基因。松南结缕草 ( Zoysia sp. ) 是本实验室育成的形态特征介于日本结缕草与沟叶结缕草之间
的一种中型结缕草 , 在长江以南地区广泛种植。作者将 CB F1基因转入松南结缕草 , 以改良其抗逆性。
取松南结缕草成熟种子经消毒和打破休眠后接种于含 2 mg·L - 1 2042D的 NB ( N6大量、MS微量、B5维生素 )
培养基上诱导愈伤组织 , 经 NBAA (NB培养基附加 AA培养基的氨基酸 ) 培养基继代 , 选择胚性愈伤组织为受体 ,
用含有 CB F1基因表达载体 pMENCBF1的农杆菌 LBA4404侵染 , 筛选标记基因为 N PT II。在筛选培养基 ( 100 mg·
L - 1巴龙霉素 ) 上经两轮筛选 , 获得的转基因植株利用 N PT II基因的特异引物进行 PCR检测 , 阳性植株通过离体叶片
法对巴龙霉素抗性进行检测 (25 mg·L - 1巴龙霉素和 2 mL·L - 1 Tween20)。
结果表明 , 松南结缕草种子经横切后接种才能发芽并高频率诱导愈伤组织。初生愈伤组织大部分表现为松软棉絮
状 (图版 , 1) , 在 NBAA继代培养基上会逐渐长出颗粒状、比较松散、颜色鲜艳的胚性愈伤组织。农杆菌侵染的适宜
浓度为 OD600 = 018, 共培养介质 AAD (AA培养基附加 1 mg·L - 1 2042D ) 优于 YEP培养基。共培养时增加蔗糖和葡
萄糖浓度能够提高转化效率 , 使转化效率达到 1810%。抗性愈伤在分化培养基上分化率达 6510% (图版 , 2、3)。
200株再生植株经 PCR验证后 187株表现为阳性。阳性植株移栽成活后 , 离体叶片抗巴龙霉素检测 (图版 , 4) 表明
187株均表现出抗性。
图版说明 : 1. 非胚性愈伤 ; 2. 抗性愈伤组织 ; 3. 抗性愈伤组织再生出小苗 ; 4. 转基因植株叶片巴龙霉素离体抗性的检测。
Explana tion of pla tes: 1. Non2embryogenic callus; 2. Second select for resistant calli; 3. Regenerated resistant shoots on Fm smedium; 4. Paro2
momycin resisitance analysis of transgenic p lant leaf in vitro.
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