全 文 ：第２０卷 第１期
Ｖｏｌ．２０ Ｎｏ．１
草 地 学 报
ＡＣＴＡ ＡＧＲＥＳＴＩＡ ＳＩＮＩＣＡ
２０１２年 １月
Ｊａｎ． ２０１２
导入ＡＰＸ基因提高了普那菊苣植株的抗逆性
张丽君１，２，程林梅１，杜建中１，王亦学１，郝耀山１，李贵全２＊，孙 毅１，２＊
（１．山西省农业科学院生物技术研究中心，山西 太原 ０３００３１；２．山西农业大学，山西 太谷 ０３００８１）
摘要：采用农杆菌介导的方法，把ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动的来自棉花（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍｓｐｐ．）的抗坏血酸过氧化物酶
（ａｓｃｏｒｂａｔｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＡＰＸ）基因导入普那菊苣（Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ ｉｎｔｙｂｕｓ Ｌ．ｃｖ．Ｐｕｎａ）。结果表明：经过卡那霉素（Ｋｍ）筛
选和对抗性植株的ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，证明ＡＰＸ基因成功地整合到普那菊苣基因组中。转ＡＰＸ基因普
那菊苣植株对ＮａＣｌ和甘露醇胁迫表现出一定的抗性，在ＮａＣｌ浓度为５００ｍｍｏｌ·Ｌ－１、甘露醇浓度为３０ｇ·Ｌ－１的
条件下，转ＡＰＸ基因不定芽能够正常生根和生长，转基因植物叶片外植体能够形成愈伤组织和再生植株，而野生
型植株不定芽不能正常生根、已生根幼苗不能正常成长，野生型植株叶片不能形成愈伤组织。
关键词：普那菊苣；农杆菌介导；遗传转化；抗逆性
中图分类号：Ｑ９４３．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００７－０４３５（２０１２）０１－０１５２－０７
Ｃｏｔｔｏｎ ＡＰＸＧｅｎｅ Ｅｎｈａｎｃｅｓ Ｓｔｒｅｓｓ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ ｉｎｔｙｂｕｓ
ＺＨＡＮＧ Ｌｉ－ｊｕｎ１，２，ＣＨＥＮＧ Ｌｉｎ－ｍｅｉ １，ＤＵ Ｊｉａｎ－ｚｈｏｎｇ１，ＷＡＮＧ Ｙｉ－ｘｕｅ１，
ＨＡＯ Ｙａｏ－ｓｈａｎ１，ＬＩ Ｇｕｉ－ｑｕａｎ２＊，ＳＵＮ Ｙｉ １，２＊
（１．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓｈａｎｘｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｔａｉｙｕａｎ，Ｓｈａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ０３００３１，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｓｈａｎｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｇｕ，Ｓｈａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ０３００８１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｃｏｔｔｏｎ ＡＰＸｇｅｎｅ ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ｉｎｔｏ Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ ｉｎｔｙｂｕｓ Ｌ．ｃｖ．Ｐｕｎａ ｂｙ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ－
ｍｅｄｉａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｃｈｉｃｏｒｙ ｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｆｉｒｓｔ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｂｙ Ｋａｎａｍｙｃｉｎ ｔｈｅｎ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｂｏｔｈ ＰＣＲ ａｎｄ
Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｂｏｔｈ ｓｏｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ａｎｄ ｍａｎｎｉｔｏｌ ｏｎ ｃｈｉｃｏｒｙ ｃａｌｉ ａｎｄ ｓｅｅｄｌｉｎｇ
ｇｒｏｗｔｈ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｐｕｎａ ｃｈｉｃｏｒｙ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｃｏｕｌｄ ｆｏｒｍｅｄ ｃａｌｉ ａｎｄ ｇｒｅｗ
ｉｎｔｏ ｎｏｒｍａｌ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ５００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ ａｎｄ ３０ｇ·Ｌ－１ ｍａｎｎｉｔｏｌ，ｗｈｉｌｅ ｎｏｎ－
ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｃｏｕｌｄ ｎｏｔ ｆｏｒｍ ｃａｌｕｓ ｏｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｍｅｄｉｕｍ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ ｉｎｔｙｂｕｓ Ｌ．ｃｖ．Ｐｕｎａ；Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ－ｍｅｄｉａｔｅｄ；Ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ；Ｓｔｒｅｓｓ
ｔｏｌｅｒａｎｃｅ
土地盐碱化是限制农业生产的一个重要因素。
中国盐碱地分布于２３个省、市、自治区，总面积达
２．７×１０７ ｈｍ２。随着工业化进程的加快，灌溉水质
量不断下降，土地盐碱化、沙漠化速度仍在加
快［１～３］。传统农业采用一些耕作方法试图改变耕地
的盐碱环境，这种治理技术耗费了大量的资金和水
资源，且收效甚微［４，５］。对农作物品种进行改良，使
之能够耐受土壤中一定量的盐碱，并获得较好的产
量是人类应对土壤盐碱化的另一种手段，但鉴于种
质资源匮乏，育种工作进展缓慢。近３０年来兴起的
生物技术为农作物耐盐碱育种提供了新的途径，通
过导入功能基因获得耐盐转基因作物品种的研究已
取得了一定的进展［６］。近年来，抗逆基因工程的研
究重点逐步转向与逆境胁迫相关的调控基因［７］。转
录因子大多与生物和非生物胁迫下抗逆基因的表达
调控相关，已成为逆境胁迫信号调控网络研究的重
点之一［８］。Ｔａｎｇ等［９］将麻疯树（Ｊａｔｒｏｐｈａ ｃｕｒｃａｓ
Ｌ．）的ＪｃＥＲＦ（Ｊａｔｒｏｐｈａ ｃｕｒｃａｓ ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｒｅｓｐｏｓｉｖｅ
ｆａｃｔｏｒ）基因在拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ Ｌ．）中
过量表达，提高了拟南芥的抗盐性和抗冻性。近期
有 研 究 表 明，马 铃 薯 （Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ ）
ＳｔＥＲＥＢＰ１（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ ｅｔｈｙｌｅｎｅ－ｒｅｓｐｏｎ－
ｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）基因的过量表达可
诱导下游抗性基因表达，并提高转基因马铃薯对高
收稿日期：２０１１－０４－１１；修回日期：２０１１－０７－２１
基金项目：国家转基因生物新品种培育重大专项（２００９ＺＸ０８００３－０１７Ｂ）；山西省农科院攻关项目（Ｙｇｇ０９１２）资助
作者简介：张丽君（１９８１－），女，河北行唐人，博士研究生，研究方向为植物遗传育种，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｊｕｎ．ｚｈａｎｇ９１１＠１６３．ｃｏｍ；＊通信作者 Ａｕｔｈｏｒ
ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉ－ｇｕｉ－ｑｕａｎ＠１２６．ｃｏｍ；ｓｕｎｙｉ６９２００３＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
第１期 张丽君等：导入ＡＰＸ基因提高了普那菊苣植株的抗逆性
盐和低温胁迫的耐受力［１０］。
抗坏血酸过氧化物酶（ａｓｃｏｒｂａｔｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，
ＡＰＸ）是利用抗坏血酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ，ＡｓＡ）为电子
供体的 Ｈ２Ｏ２ 的清除剂。ＡＰＸ 基因的表达与逆境
密切相关，可以清除逆境产生的自由基，因而向植物
中转人ＡＰＸ 基因，有可能提高植物的抗逆性。提
高植物体内 ＡＰＸ蛋白活性，可以减轻活性氧对光
合结构的破坏［１１］。目前，对 ＡＰＸ蛋白的分子生物
学研究进展非常迅速，已经有人从多种植物材料克
隆ＡＰＸ 基因并得到其核酸和氨基酸序列信息。
Ｋｏｒｎｙｅｙｅｖ等［１２］获得了转叶绿体ＡＰＸ 基因的棉花
（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍｓｐｐ．）植株，ＡＰＸ 在植物体内过量表
达，其叶片中ＡＰＸ活性比野生型的提高５倍。王庆
斌等［１３］获得了转ＡＰＸ 基因的水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ
Ｌ．）植株并研究其功能，发现转ＡＰＸ 基因植株中可
能表达ＡＰＸ的相关蛋白，可以抵抗甲基紫精的氧
化胁迫，有效保护膜系统。Ｗａｎｇ等［１４］获得的转
ｔＡＰＸ烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ Ｌ．）植株，其 ＡＰＸ
活性明显提高，抗低温的能力也增强。Ｃｈａｒｌｅｓ
等［１５］在研究大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ（Ｌ．）Ｍｅｒｒ．）ｃＡＰＸｓ
中观察到，ＡＰＸ的转录、翻译和翻译后调控可能增
强农作物抵抗环境胁迫的能力。
普那菊苣（Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ ｉｎｔｙｂｕｓ Ｌ．ｃｖ．Ｐｕｎａ）属菊
科菊苣属多年生草本植物，是一种营养丰富的牧草，
同时具有药用和食用价值。目前我国对于普那菊苣
的研究多集中在其栽培技术，生理生化和药用价值
方面［１６］，有关普那菊苣基因转化和抗逆性方面的研
究报道较少［１７，１８］。本试验通过对普那菊苣的遗传
转化，试图通过增强来自棉花植株体内抗坏血酸过
氧化物酶基因ＡＰＸ 在转化体内的表达水平，以提
高转化体植株的抗逆性。这对深入了解 ＡＰＸ的功
能和利用基因工程手段提高植物对氧化胁迫抗性的
研究具有一定的意义。
１ 材料与方法
１．１ 材料和方法
供试植物材料为普那菊苣（２ｎ＝２ｘ＝１８），由山
西农科院畜牧兽医研究所提供。ＡＰＸ 基因载体由
中国科学院微生物所田颖川课题组提供，质粒名称
为ｐＢｉｎ４３８－ＡＰＸ；启动子：ＣａＭＶ３５Ｓ，终止子：Ｎｏｓ。
农杆菌菌株是ＬＢＡ４４０４，筛选标记基因为卡那霉素
（Ｋｍ）和利福平（ｒｉｆ）。ＰＣＲ扩增检测所用引物序
列：正 向 引 物 １：５′－ｇｇａｔｃｃｇｃｃａｃｃａｔｇｇｇａａｃｃａａｇｔｇｔ－
ｔａｃｃｃａａｃｔｇ－３′，反 向 引 物 ２：５′－ｇｔｃｇａｃｔｔａｔｇｃａｔｃａｇ－
ｃａａａｔｃｃ－３′，产物片段长度为７５０ｂｐ。
分化培养基 ＭＳ１：ＭＳ＋ＩＡＡ ２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１
＋ ＫＴ ５．０μｍｏｌ·Ｌ
－１＋ＣＨ １００ｍｇ·Ｌ－１＋３％蔗
糖＋０．７％琼脂；
共培养培养基 ＭＳ２：ＭＳ＋ＩＡＡ ２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１
＋ＫＴ ５．０μｍｏｌ·Ｌ
－１＋ＣＨ １００ｍｇ·Ｌ－１＋３％蔗
糖＋０．７％琼脂；
筛选培养基 ＭＳ３：ＭＳ１＋Ｋｍ ６０ｍｇ·Ｌ－１＋
ｃｅｆ １０００ｍｇ·Ｌ－１＋３％蔗糖＋０．７％琼脂；
筛选培养基 ＭＳ４：ＭＳ１＋Ｋｍ ４０ｍｇ·Ｌ－１＋
ｃｅｆ １０００ｍｇ·Ｌ－１＋３％蔗糖＋０．７％琼脂；
生根培养基 ＭＳ５：ＭＳ＋ＩＢＡ ０．２ｍｇ·Ｌ－１＋
Ｋｍ ８０ｍｇ·Ｌ－１＋ｃｅｆ １０００ｍｇ·Ｌ－１＋３％蔗糖＋
０．６％琼脂；
ＬＢ培养基：胰蛋白胨１０ｇ·Ｌ－１＋酵母提取物
５ｇ·Ｌ－１＋ＮａＣｌ １０ｇ·Ｌ－１＋琼脂１５ｇ·Ｌ－１，ｐＨ
７．０。
外植体培养在２５～２８℃条件下，光照强度为
１３００～１５００ｌｘ，光照时间为每天１６ｈ。每培养皿２０
个外植体，重复５次。
１．２ 农杆菌介导转化方法
取培养３～４周的无菌苗叶片（１ｃｍ×１ｃｍ）为
外植体，在分化培养基 ＭＳ１上预培养２～３ｄ。在含
有５０ｍｇ·Ｌ－１ Ｋｍ和２０ｍｇ·Ｌ－１ ｒｉｆ的ＬＢ平板
挑取含ＡＰＸ基因的农杆菌单菌落，接种于１０ｍＬ
含有５０ｍｇ·Ｌ－１ Ｋｍ和２０ｍｇ·Ｌ－１ ｒｉｆ的ＬＢ中，
于２８℃，１８０ｒ·ｍｉｎ－１过夜培养至对数中期（ＯＤ６００
约为０．４～０．６）。将预培养２～３ｄ的外植体在上述
菌液中浸泡８～１０ｍｉｎ后，置于无菌滤纸上吸干多
余菌液，然后在共培养培养基 ＭＳ２上共培养２～３
ｄ，保持温度２８℃。共培养后的材料转入添加头孢
霉素（ｃｅｆ）的筛选培养基 ＭＳ３中培养２周，再转入
筛选培养基 ＭＳ４中培养４周左右。最后将Ｋｍ抗
性再生苗在生根培养基 ＭＳ５中进行生根培养，并将
生根植株移栽花盆中［１９，２０］。
１．３ Ｋｍ抗性植株的ＰＣＲ分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交
分析
取培养３～４周的植株叶片，用ＣＴＡＢ法［２１］提
取植物ＤＮＡ，以野生型植株为阴性对照，进行ＰＣＲ
扩增检测。将ＰＣＲ扩增结果为阳性的转基因普那
菊苣植株的基因组ＤＮＡ用ＨｉｎｄⅢ酶切消化并进
３５１
草 地 学 报 第２０卷
行琼脂糖凝胶电泳、转膜和杂交，分子探针为用Ｄｉｇ
－ｄＮＴＰ标记的ＡＰＸ基因片段。
１．４ 转基因植株的抗逆性
１．４．１ 抗盐性模拟试验 普那菊苣盐胁迫处理方
法：选取未转化苗和已鉴定含有ＡＰＸ 基因的５个
Ｔ０ 代转基因株系，分别做以下处理：
①诱导得到其愈伤组织（愈伤组织编号与其外
植体转基因株系编号相同）每组处理２０块，设５组
重复；②取１ｃｍ左右的芽尖组织（芽尖组织编号与
其外植体转基因株系编号相同）分别在正常 ＭＳ和
含不同浓度ＮａＣｌ的 ＭＳ固体培养基上光照培养３０
ｄ，观察叶片和根的生长情况每组处理５个，设５组
重复；③已生根２０ｄ的植株（与其外植体转基因株
系编号相同）分别在正常 ＭＳ和含不同浓度 ＮａＣｌ
的 ＭＳ固体培养基上光照培养３０ｄ，观察叶片和根
的生长情况，每组处理５个，分别在含有１００，３００，
５００，７００，９００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ的 ＭＳ固体培养基
上光照培养（２５℃，１２ｈ光照，１２ｈ黑暗），每处理５
组重复。
选取在实验室抗性试验中表现较好的Ｔ０ 代转
ＡＰＸ基因５个阳性株系的植株幼苗扩繁，将在 ＭＳ
培养基中生长２０ｄ的幼苗移栽至直径１０ｃｍ、高１０
ｃｍ的塑料营养钵中，蛭石作基质，培养３０ｄ左右，
然后移栽至花盆当中，２周后进行盐胁迫处理。试
验设５个处理，ＮａＣｌ浓度为１００，３００，５００，７００，９００
ｍｍｏｌ·Ｌ－１，以蒸馏水为对照。将不同浓度的ＮａＣｌ
溶液浇灌在蛭石上，每５ｄ浇一次，每次浇灌５Ｌ
水。每组处理２０株，设３组重复，光照培养３０ｄ，观
察植株的生长情况。
１．４．２ 抗旱性模拟试验 普那菊苣旱胁迫处理方
法与盐胁迫处理方法一致：选取已鉴定有ＡＰＸ 基
因的５个Ｔ０ 代转基因株系，分别做以下处理：
①诱导得到其愈伤组织（愈伤组织编号与其外植
体转基因株系编号相同）每组处理２０块，设５组重
复；②取１ｃｍ左右的芽尖组织（芽尖组织编号与其外
植体转基因株系编号相同）每组处理５个，设５组重
复；③已生根２０ｄ的植株（与其外植体转基因株系编
号相同）每组处理５个，分别在含有１０，２０，３０，４０，５０
ｇ·Ｌ－１甘露醇的 ＭＳ固体培养基上光照培养（２５℃，
１２ｈ光照，１２ｈ黑暗），每处理５组重复。
选取在实验室抗性试验中表现较好的Ｔ０ 代转
ＡＰＸ 基因５个阳性株系的幼苗扩繁，将在 ＭＳ培养
基中生长２０ｄ的幼苗移栽在直径１０ｃｍ、高１０ｃｍ
的塑料营养钵中，蛭石作基质，培养３０ｄ，移栽至花
盆中，２周后进行旱胁迫处理。试验设５个处理，甘
露醇浓度为１０，２０，３０，４０，５０ｇ·Ｌ－１，以蒸馏水为
对照。将不同浓度的甘露醇溶液浇灌在蛭石上，每
５ｄ浇１次，每次浇灌５Ｌ水。每组处理２０株，设３
组重复，光照培养３０ｄ，观察植株生长情况。
１．５ 生理指标的测定
转基因植株与野生型植株选取同一苗龄的组培
苗，用５００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ和３０ｇ·Ｌ－１甘露醇浸
泡处理２４ｈ后，观察其抗性表现，并对其ＳＯＤ，ＰＯＤ
活性以及 ＭＤＡ含量进行测定［２２］。
１．６ 数据分析
采用ＤＰＳ ７．０５软件进行方差分析，显著水平
为０．０１。
２ 结果与分析
２．１ 转ＡＰＸ基因植株的获得和鉴定
经转化处理的外植体在筛选培养基上培养约１
个月后，有许多无法再生，或产生的再生芽在随后的
培养中白化死亡。将经６０ｍｇ·Ｌ－１ Ｋｍ筛选而再
生成的抗性芽接种在含有８０ｍｇ·Ｌ－１ Ｋｍ的生根
培养基上培养，１周后即可观察到白苗的产生。
用标记基因ＡＰＸ的特异引物对Ｋｍ阳性的普
那菊苣植株ＤＮＡ进行ＰＣＲ检测，共有１５株扩增
出预期大小（７５０ｂｐ）的片段，野生型植株没有扩增
出该片段，初步证明ＡＰＸ 基因已成功地转入普那
菊苣。为明确外源ＡＰＸ基因在普那菊苣基因组中
的整合拷贝数，对部分 ＰＣＲ 鉴定阳性植株的总
ＤＮＡ，酶切后产物进行电泳转膜，以标记的ＡＰＸ 基
因探针与其进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交。结果发现１株有２
条杂交带，４株各有１条杂交带，１株有３条杂交带，
野生型植株无杂交信号，这表明外源基因已整合到
普那菊苣基因组中，且外源基因多以单拷贝形式插
入（图１）。
２．２ 转基因植株的抗性
２．２．１ 普那菊苣在ＮａＣｌ胁迫下的生长 ＮａＣｌ胁
迫下外植体的表现如图２所示，野生型植株和转基
４５１
第１期 张丽君等：导入ＡＰＸ基因提高了普那菊苣植株的抗逆性
图１ 转基因植株的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定
Ｆｉｇ．１Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔｓ
注：ＣＫ＋：阳性对照；ＣＫ－：阴性对照；１～６：转基因植株
Ｎｏｔｅ：ＣＫ＋：Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ；ＣＫ－：Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ；
１～６：Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔｓ
因植株在正常 ＭＳ培养基上的生长状态基本相似，
转基因苗的叶片颜色更为浓绿，根、茎也更加粗壮一
些。转基因外植体在ＮａＣｌ胁迫下的出愈率和分化
芽数明显高于野生型（表１）。野生型外植体在含有
１００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ的 ＭＳ固体培养基上可以形
成愈伤组织，并形成芽点，但出芽率明显低于对照
ＭＳ培养基上的；ＮａＣｌ浓度增加到５００ｍｍｏｌ·Ｌ－１
时，野生型外植体不能形成愈伤组织并且叶片呈现
淡黄色，随着ＮａＣｌ浓度的继续增加，野生型外植体
变黄并死亡，转基因外植体可以继续形成愈伤组织。
当ＮａＣｌ浓度增加到９００ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，转基因外
植体仍然可以形成愈伤组织，但是已经不能形成芽
点。普那菊苣未生根幼苗在 ＮａＣｌ胁迫下，野生型
幼苗叶片随着ＮａＣｌ浓度的增加不仅从颜色上由墨
绿色渐变为黄色，叶片也由原来的平展伸直变为卷
曲变形以致幼叶不能正常生长；５００ｍｍｏｌ·Ｌ－１的
ＮａＣｌ是野生型幼苗可以承受的最大浓度，在此浓度
下野生型幼苗叶子呈现黄绿色、卷曲、变形，不能正
常生根。转基因普那菊苣植株的叶片面积在盐胁迫
下虽然也有一定程度的缩小，但是仍然能够较为正
常地生长，叶片也依然浓绿，且能够正常生根。根据
统计分析结果可以看出，转基因外植体的耐盐性显
著高于野生型外植体（Ｐ＜０．０１）。在对５个转基因
普那菊苣株系幼苗的观察中发现，它们对 ＮａＣｌ浓
度的耐受力也存在着一些微小的差异，可能与外源
基因的拷贝数和插入位点有一定的关系。
将含有ＡＰＸ 基因的普那菊苣Ｔ０ 代转基因阳
性植株进行盆栽，并作ＮａＣｌ处理，结果与实验室结
果一致。当 ＮａＣｌ浓度为５００ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，转基
因的２０株幼苗全部可以存活，胁迫解除后可正常生
长；野生型植株则大部分死亡。
２．２．２ 普那菊苣在甘露醇胁迫下的生长 甘露醇
胁迫下对普那菊苣外植体的影响结果与ＮａＣｌ下胁
迫下的结果类似：普那菊苣已生根幼苗在含有甘露
醇的培养基上，随着甘露醇浓度的增加，野生型幼苗
叶片卷曲变形，严重失绿，幼叶完全不能够正常伸
展，根部基本褐化坏死。在同样胁迫条件下，转基因
普那菊苣的叶片变得窄而细，但是仍然能够正常生
长，叶片也依然浓绿，能够生成较为发达的根系。转
基因普那菊苣根长在１．５６～４．３１ｃｍ范围内，平均
２．８９ｃｍ；根重在２．４７～６．９１ｇ范围内，平均４．１４
ｇ；鲜重在１５．９６～１８．２１ｇ范围内，平均１６．３７ｇ；而
野生型平均根长０．２ｃｍ，平均根重０．０７ｇ，平均鲜
重５．９８ｇ。转基因普那菊苣各株系的根长、根重，地
上部分的净增鲜重明显高于野生型。甘露醇浓度为
３０ｇ·Ｌ－１是野生型幼苗可以承受的最大浓度。不
同株系的转基因普那菊苣幼苗对甘露醇浓度的耐受
力也存在着一些微小的差异，这可能与外源基因的
拷贝数和插入位点有一定的关系。
将普那菊苣含有ＡＰＸ 基因的Ｔ０ 代转基因株
系进行盆栽，并用甘露醇处理，结果与实验室结果一
致。当甘露醇浓度为３０ｇ·Ｌ－１时，转基因的２０株
幼苗全部可以存活，但叶片呈萎蔫状，胁迫解除后可
正常生长；野生型植株则大部分叶片枯黄死亡。
２．３ ＮａＣｌ、甘露醇对普那菊苣组培苗ＳＯＤ，ＰＯＤ活
性和 ＭＤＡ含量的影响
ＭＳ培养基中添加３００ｍｍｏｌ·Ｌ－１的 ＮａＣｌ对
１５株转基因植株和１５株野生型植株进行胁迫生长
１５ｄ。选取叶片表现为深绿色、植株生长正常、根长
在３～４ｃｍ的转基因植株５株和野生型植株１株，
进行生理指标测试。试验结果显示，在受到一定浓
度的ＮａＣｌ、甘露醇的胁迫下，ＳＯＤ和ＰＯＤ的活性
增强，说明ＮａＣｌ、甘露醇胁迫诱导了这些酶活性的
增强，从而抵御逆境胁迫下氧自由基的伤害，转基因
株系的这２个酶活性明显高于野生型的，而 ＭＤＡ
含量明显低于野生型的（表２），其原因可能是由于
转基因株系中ＡＰＸ 基因能力提高，从而提高了逆
境胁迫下的生长适应能力，这也说明 ＡＰＸ在转基
因株系中得到了表达，转基因株系可以延缓株系的
衰老。
５５１
草 地 学 报 第２０卷
图２ 普那菊苣在ＮａＣｌ胁迫下的转基因与非转基因外植体的表现
Ｆｉｇ．２ Ｐｕｎａ ｃｈｉｃｏｒｙ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｅｘｐｌａｎｔｓ ａｎｄ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ＮａＣｌ ｓｔｒｅｓｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｎｏｎ－ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｏｎｅｓ
注：Ａ：转基因植株叶片在３００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ培养基上；Ｂ：野生型植株叶片在３００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ培养基上；Ｃ：转基因幼苗在３００
ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ培养基上；Ｄ：野生型植株幼苗在３００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ培养基上；Ｅ：转基因幼苗在３００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ培养基上；Ｆ：野生
型植株幼苗在３００ｍｍｏｌ Ｌ－１ ＮａＣｌ培养基上；Ｇ：５００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ胁迫下转基因幼苗的生长状况；Ｈ：５００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ胁迫下野生型
植株幼苗的生长状况
Ｎｏｔｅ：Ａ：Ｌｅａｆ ｓｅｇｍｅｎｔｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｕｎｄｅｒ ３００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ ｓｔｒｅｓｓ；Ｂ：Ｌｅａｆ ｓｅｇｍｅｎｔｓ ｏｆ ｗｉｄｅ ｔｙｐｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｕｎｄｅｒ ３００ｍｍｏｌ
·Ｌ－１ ＮａＣｌ ｓｔｒｅｓｓ；Ｃ：Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｇｒｏｗｉｎｇ ｕｎｄｅｒ ３００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ ｓｔｒｅｓｓ；Ｄ：Ｗｉｄｅ ｔｙｐｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｇｒｏｗｉｎｇ ｕｎｄｅｒ ３００ｍｍｏｌ·Ｌ－１
ＮａＣｌ ｓｔｒｅｓｓ；Ｅ：Ｒｏｏｔｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｕｎｄｅｒ ３００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ ｓｔｒｅｓｓ；Ｆ：Ｒｏｏｔｓ ｏｆ ｗｉｄｅ ｔｙｐｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｕｎｄｅｒ ３００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ
ｓｔｒｅｓｓ；Ｇ：Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｕｎｄｅｒ ５００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ ｓｔｒｅｓｓ；Ｈ：Ｗｉｄｅ ｔｙｐｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｕｎｄｅｒ ５００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ ｓｔｒｅｓｓ
表１ 不同ＮａＣｌ浓度组合对种子出芽数、愈伤诱导和芽分化的影响
Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＮａＣｌ ｏｎ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｕｄｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ＮａＣｌ浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ／ｍｍｏｌ·Ｌ－１
种子出芽数 Ｎｏ．ｏｆ ｂｕｄｓ 愈伤组织数 Ｎｏ．ｏｆ ｃａｌｕｓ 分化芽数 Ｎｏ．ｏｆ ｓｅｅｄｌｉｎｇ
均值±标准差 Ｍｅａｎ±ＳＤ 均值±标准差 Ｍｅａｎ±ＳＤ 均值±标准差 Ｍｅａｎ±ＳＤ
１００ ２６．５２±１．６６Ｂ １４．５２±１．９７Ａ ２１．７１±２．５２Ｂ
３００ ３．０９±２．２１Ｃ ７．５７±１．６７Ｂ １３．９７±１．１３Ｃ
野生型
Ｗｉｄｅ ｔｙｐｅ
５００ ０±０Ｄ １．７３±０．９８Ｄ ２．０６±０．７４ＤＥ
７００ ０±０Ｄ ０±０Ｄ ０±０Ｅ
９００ ０±０Ｄ ０±０Ｄ ０±０Ｅ
１００ ２９．２７±２．２９Ａ １６．８３±１．５３Ａ ２６．５７±４．４７Ａ
３００ １１．１４±３．８９Ｂ １５．２２±１．６２Ａ １９．６１±３．７７Ｂ
转基因
Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ
５００ ６．１２±１．２１Ｃ ５．３２±１．６６ＢＣ ９．６０±１．８０ＣＤ
７００ ０±０Ｄ ２．１６±１．０２ＣＤ ４．７５±２．４９ＤＥ
９００ ０±０Ｄ １．３１±０．４６Ｄ ２．４８±１．１４Ｅ
注：不同大写字母之间表示差异极显著（Ｐ＜０．０１），下同
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃａｐｉｔａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｍｅａｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ ｔｈｅ ０．０１ｌｅｖｅｌ，ｔｈｅ ｓａｍｅ ａｓ ｂｅｌｏｗ
３ 讨论与结论
对于农作物而言，土壤中溶解过量的盐会妨碍
矿质营养及水分的吸收，产生渗透胁迫，作物被迫吸
收盐离子，由于盐离子的毒害作用，造成活性氧等自
由基产生和修复系统的动态平衡被破坏，启动了膜
脂过氧化或膜蛋白过氧化作用，造成膜脂或膜蛋白
损伤，从而破坏膜结构，使质膜透性增加，此时植物
活性氧清除酶系统的基因在胁迫下会受到激活，
其中ＡＰＸ基因能力会提高，从而提高了盐胁迫下
６５１
第１期 张丽君等：导入ＡＰＸ基因提高了普那菊苣植株的抗逆性
图３ 甘露醇胁迫下非转基因和转基因幼苗生长状况
Ｆｉｇ．３ Ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｎｏｎ－ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｕｎｄｅｒ ｍａｎｎｉｔｏｌ ｓｔｒｅｓｓ
注：Ａ：野生型植株幼苗在３０ｇ·Ｌ－１甘露醇胁迫下的生长；Ｂ：转基因幼苗在３０ｇ·Ｌ－１甘露醇胁迫下的生长；Ｃ：３０ｇ·Ｌ－１甘露醇胁迫下
野生型植株幼苗根的生长情况；Ｄ：３０ｇ·Ｌ－１甘露醇胁迫下转基因幼苗根的生长情况；Ｅ：以３０ｇ·Ｌ－１甘露醇处理的转基因植株；Ｆ：以３０
ｇ·Ｌ－１甘露醇处理的野生型植株
Ｎｏｔｅ：Ａ：Ｗｉｄｅ ｔｙｐｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｕｎｄｅｒ ３０ｇ·Ｌ－１ ｍａｎｎｉｔｏｌ ｓｔｒｅｓｓ；Ｂ：Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｕｎｄｅｒ ３０ｇ·Ｌ－１ ｍａｎｎｉｔｏｌ ｓｔｒｅｓｓ；Ｃ：Ｒｏｏｔｓ ｏｆ ｗｉｄｅ
ｔｙｐｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｕｎｄｅｒ ３０ｇ·Ｌ－１ ｍａｎｎｉｔｏｌ ｓｔｒｅｓｓ；Ｄ：Ｒｏｏｔｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｕｎｄｅｒ ３０ｇ·Ｌ－１ ｍａｎｎｉｔｏｌ ｓｔｒｅｓｓ；Ｅ：Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔｓ ｗｉｔｈ
ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ３０ｇ·Ｌ－１ ｍａｎｎｉｔｏｌ；Ｆ：Ｗｉｄｅ ｔｙｐｅ ｗｉｔｈ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ３０ｇ·Ｌ－１ ｍａｎｎｉｔｏｌ
表２ 盐胁迫对普那菊苣ＳＯＤ，ＰＯＤ酶活性和 ＭＤＡ的影响
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＮａＣｌ ｓｔｒｅｓｓ ｏｎ ｔｈｅ ＳＯＤ，ＰＯＤ ａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄ ＭＤＡ ｏｆ ｌｅａｖｅｓ ｉｎ ｃｈｉｃｏｒｙ ｐｌａｎｔｓ
株系
Ｌｉｎｅ
ＳＯＤ／Ｕ·ｇ－１ＦＷ ＰＯＤ／Ｕ·ｇ－１ＦＷ ＭＤＡ／μｍｏｌ·ｇ－１ＦＷ
均值±标准差 Ｍｅａｎ±ＳＤ 均值±标准差 Ｍｅａｎ±ＳＤ 均值±标准差 Ｍｅａｎ±ＳＤ
ＣＫ １５．８５±６．９５Ｄ ３０．５３±４．０９Ｄ ２７．２１±０．８９Ａ
１１ ３６．７１±３．０７ＣＤ ３７．６２±１．９４Ｄ １４．２５±０．５８Ｂ
１３ ６８．３１±４．９６Ｂ ７５．６１±７．２５Ｂ ７．１８±０．６８Ｄ
２３ １０３．８３±１２．７６Ａ ９９．９９±２．８１Ａ ４．２３±１．０８Ｄ
１０３ ４５．６３±３．７６ＢＣ ５７．４４±２．９１Ｃ １１．５４±０．８８Ｃ
５０１ ４５．８９±３．７２ＢＣ ８６．９３±３．７７Ａ ９．５６±０．３６Ｃ
生长适应能力。研究表明，盐分对植物生长的抑制
机理是一个复杂的问题，涉及到渗透胁迫、离子胁迫
等方面，但植物也可通过积累可溶性物质进行渗透
调节，以及提高各种抗氧化酶的活性等适应机制来
提高植株抗盐性［２３～２５］。普那菊苣是多年生草本植
物，易于生长和转化。本研究利用农杆菌介导法，导
入ＡＰＸ基因，在以普那菊苣为受体的转化体系中，
抗性芽主要从叶片当中产生，在以茎段为受体的转
化体系中，茎段组织容易发生褐化现象，不易获得转
化植株。表明叶片是普那菊苣遗传转化的理想外植
体。对抗性植株的总 ＤＮＡ 进行ＰＣＲ检测，有１５
株为阳性。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果证实，外源基因多以
单拷贝整合到普那菊苣的基因组中。转ＡＰＸ 基因
植株的获得将有望得到高耐盐普那菊苣新品种。
较高的选择压能很好的防止假阳性的产生，但
也会极大地影响芽的分化和小苗的生长，并且得到
的小苗不容易成活，这样即使得到转化苗，也很难使
其成活。适中浓度的选择压虽然可能得到一些假阳
性苗，但对转化苗的生长影响不大，所得到的转化苗
容易成活［２６］。即用 Ｋｍ作为普那菊苣遗传转化的
选择压时，应在生芽培养基中加入６０ｍｇ·Ｌ－１的
Ｋｍ进行筛选，在以后的继代培养基中依次加５０
ｍｇ·Ｌ－１，４０ｍｇ·Ｌ－１的Ｋｍ，并一直维持４０ｍｇ·Ｌ－１
Ｋｍ的水平，在生根培养基中加入８０ｍｇ·Ｌ－１ Ｋｍ
进行选择，以使Ｋｍ维持在较适应浓度进行选择，既
能在一定程度上对转化植株进行选择，又尽可能少
７５１
草 地 学 报 第２０卷
的对转化植株造成伤害。菊苣外植体生根的Ｋｍ极
限浓度为１００ｍｇ·Ｌ－１以上，但初期不能直接加入
１００ｍｇ·Ｌ－１ Ｋｍ，如果初期外植体用高浓度Ｋｍ筛
选，外植体不但不能产生愈伤组织组织及不定芽，而
且会很快变白死亡。
对转ＡＰＸ基因普那菊苣植株在组织培养和盆
栽条件下进行胁迫试验显示，ＮａＣｌ、甘露醇胁迫下
不但可以降低普那菊苣愈伤组织的出愈率和出芽
率，而且对普纳菊苣幼苗的生长发育以及根长等都
产生影响。在盐、旱胁迫下，普那菊苣的上述指标都
产生了变化，不同指标变化趋势不同，且不同株系间
存在着一些微小的差异。本试验表明，在逆境胁迫
和非逆境胁迫下转基因植株的生长状态均优于野生
型植株；在逆境胁迫下转基因普那菊苣的出愈率、出
芽率、叶片和根茎都优于野生型，且植株死亡率小；
野生型普那菊苣的叶片和根部褐化都较为严重。其
中，死亡率、叶片和根长都与ＮａＣｌ、甘露醇浓度呈现
一定的变化关系，即与ＮａＣｌ、甘露醇浓度相关，这说
明盐、旱胁迫对其影响显著。在对不同转基因普那
菊苣株系胁迫试验的观察中发现，不同株系间存在
着一定的差异。添加 ＮａＣｌ浓度５００ｍｍｏｌ·Ｌ－１、
甘露醇浓度３０ｇ·Ｌ－１对ＳＯＤ，ＰＯＤ活性和 ＭＤＡ
含量的变化研究表明，增加渗透压处理后的试管苗
ＳＯＤ，ＰＯＤ活性较野生型高，ＭＤＡ 含量较野生型
低，说明在盐、旱胁迫下，转基因植株能发生生理代
谢的协调变化以降低逆境对普那菊苣植株细胞膜系
统的伤害，增强保护酶的活性，从而增强植株对环境
的抗逆性。在自然界植物很少遭受单一的环境胁
迫，而更多的是同时或相继经受多种环境胁迫，因
而研究植物对于不同逆境的生理响应尤为重要。
本研究首次将来自棉花植株体内抗坏血酸过氧
化物酶基因－ＡＰＸ 基因导入普那菊苣植物体内，获
得了转ＡＰＸ基因的普那菊苣植株。转基因普那菊
苣植株叶片中ＳＯＤ和ＰＯＤ活性明显提高，ＭＤＡ
含量降低，抵抗盐、旱能力明显增强，从而能够增强
普那菊苣抵抗逆境胁迫的能力。
参考文献
［１］ 张新春，庄炳昌，李自超．植物耐盐性研究进展［Ｊ］．玉米科学，
２００２，１０（１）：５０－５６
［２］ 吴勇辉．五种木本植物演化结构研究［Ｄ］．哈尔滨：东北师范大
学，２００４：１
［３］ 史湘华，殷鸣放，赵辉，等．盐碱地与耐盐碱树种的选育［Ｊ］．中
国林副特产，２００５（２）：６０－６２
［４］ 任崴，艾合买提·那尤甫，罗廷彬．在盐碱地上种植耐盐冬小麦
的综合效益研究［Ｊ］．干旱区研究，１９９９，１６（１）：５３－５６
［５］ 朱力平．开发土壤资源改善生态改造盐碱地至关重要［Ｎ］．经
济日报，２００１－０１－０６（４）
［６］ Ｗａｎｇ Ｗ，Ｖｉｎｏｃｕｒ Ｂ，Ａｌｔｍａｎ Ａ．Ｐｌａｎｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｄｒｏｕｇｈｔ，
ｓａｌｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｅｘｔｒｅｍｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ：ｔｏｗａｒｄｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
ｆｏｒ ｓｔｒｅｓｓ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔａ，２００３，２１８（１）：１－１４
［７］ Ｚｈｕ Ｊ Ｋ．Ｓａｌｔ ａｎｄ ｄｒｏｕｇｈｔ ｓｔｒｅｓｓ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ
［Ｊ］．Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００２，５３：２４７－２７３
［８］ Ｃｈｅｎ Ｗ Ｊ，Ｚｈｕ Ｔ．Ｎｅｔｗｏｒｋｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ｒｏｌｅｓ
ｉｎ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，
２００４，１２（９）：５９１－５９７
［９］ Ｔａｎｇ Ｍ Ｊ，Ｓｕｎ Ｊ Ｗ，Ｌｉｕ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｈａｒ－
ａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＪｃＥＲＦ ｇｅｎｅ，ａｐｕｔａｔｉｖｅ ＡＰ２／ＥＲＥＢＰ ｄｏ－
ｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ，ｉｎ ｔｈｅ ｗｏｏｄｙ ｏｉｌ ｐｌａｎｔ
Ｊａｔｒｏｐｈａ ｃｕｒｃａｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００７，６３（３）：
４１９－４２８
［１０］Ｌｅｅ Ｈ Ｅ，Ｓｈｉｎ Ｄ，Ｐａｒｋ Ｓ Ｒ，ｅｔ ａｌ．Ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ
ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ １（ＳｔＥＲＥＢＰ１）ｆｒｏｍ Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍｉｎ－
ｃｒｅａｓｅｓ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ ａｂｉｏｔｉｃ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｏｔａｔｏ ｐｌａｎｔｓ
［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，
２００７，３５３（４）：８６３－８６８
［１１］Ｔａｎａｋａ Ｋ，Ｍａｓｕｄａ Ｒ，Ｓｕｇｉｍｏｔｏ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｗａｔｅｒ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ－ｉｎ－
ｄｕｃｅｄ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｄｅｆｅｎｓｉｖｅ ｓｕｂａｎｃｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ａｃ－
ｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｉｎ ｓｐｉｎａｃｈ ｌｅａｖｅｓ［Ｊ］．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９０，５４（１０）：２６２９－２６３４
［１２］Ｋｏｒｎｙｅｙｅｖ Ｄ，Ｄｍｙｔｒｏ Ｋ，Ｂａｒｒｙ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｅｎｈａｎｃｅｄ ｐｈｏｔｏ－ｃｈｅｍ－
ｉｃａｌ ｌｉｇｈｔ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｈｉｌｉｎｇ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｂｏｔｏｉｎｈｉｂｉ－
ｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｏｔｏｓｙｓｔｅｍⅡｉｎ ｃｏｔｔｏｎ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｇｅｎｅｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ
ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｅｎｚｙｍｅｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉａ Ｐｌａｎ－
ｔａｒｕｍ，２００１，１３３：３２３－３３１
［１３］王庆斌，王方正，薛庆中，等．ＡＰＸ基因转化水稻及其功能的研
究［Ｃ］／／中国植物生理学会全国学术年会暨成立４０周年庆祝
大会学术论文摘要汇编，２００３：３１８
［１４］王伟青，李滨，孟庆伟，等．番茄类囊体膜抗坏血酸过氧化物酶
基因ＴｔＡＰＸ序列［Ｊ］．植物生理与分子生物学学报，２００２，２８
（６）：４９１－４９２
［１５］Ｃａｌｄｗｅｌ Ｃ Ｒ，Ｔｕｒａｎｏ Ｆ Ｊ，ＭｃＭａｈｏｎ Ｍ Ｂ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ
ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ａｓｃｏｒｂａｔｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｃＤＮＡｓ ｆｒｏｍ ｓｏｙｂｅａｎ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｂｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ
Ｅ．ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔａ，１９９８，２０４（１）：１２０－１２６
［１６］罗燕，白史且，彭燕，等．菊苣种质资源研究进展［Ｊ］．草业科
学，２０１０，２７（７）：１２３－１３２
［１７］程林梅，曹秋芬，黄静，等．菊苣高效遗传转化体系的建立［Ｊ］．
草业学报，２００４，１３（６）：１１２－１１６
［１８］宋书锋，曹凤，杨培志，等．普那菊苣高效再生体系建立和遗传
转化研究［Ｊ］．分子植物育种，２００６，４（４）：５６５－５７０
［１９］赵红娟，张博，李培英，等．农杆菌介导犁苞滨藜ＮＨＸ 基因转
化苜蓿的影响因素［Ｊ］．草地学报，２００７，１５（５）：４１８－４２２
［２０］韩斌，马晖玲，李云霞．Ｌｙｚ－ＧＦＰ双元基因在苜蓿愈伤组织中
的转化［Ｊ］．草地学报，２０１０，１８（３）：３５２－３５７
［２１］王关林，方宏筠．植物基因工程［Ｍ］．２版．北京：科学出版社，
２００２：７４２－７４４
［２２］乔富廉．植物生理学实验分析测定技术［Ｍ］．北京：中国农业科
技出版社，２００２：１０１－１０２，１６８－１７０
［２３］梁超，王超，杨秀风，等．德抗９６１小麦耐盐生理特性研究［Ｊ］．
西北植物学报，２００６，２６（１０）：２０７５－２０８２
［２４］朱新广，张其德．ＮａＣｌ对光合作用影响的研究进展［Ｊ］．植物学
通报，１９９９，１６（４）：３３２－３３８
［２５］Ｉｎｚｅ Ｄ，Ｖａｎ Ｍｏｎｔａｇｕｅ Ｍ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｃｕｒ－
ｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９５，６：１５３－１５８
［２６］Ｈｎｓｈｉ Ｙ，Ｋｏｎｄｏ Ｍ，Ｍｏｒｉ Ｓ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｌｉｌｙ
ｐｌａｎｔｓ ｂｙ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ－ｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌ
Ｒｅｐｏｒｔｓ，２００４，２２（６）：３５９－３６４
（责任编辑 李美娟）
８５１