全 文 ：文章编号: 1007-0435( 2006) 03-0287-05
牧草遗传连锁图谱构建研究概述
方 程, 韩建国*
(中国农业大学草地研究所, 农业部草地植被恢复与重建重点开放实验室,北京 100094)
摘要: 高密度分子连锁遗传图谱对分析植物遗传变异、标记目标性状、数量性状定位和分子辅助选择改良性状均具重要
价值。由于大多数牧草的多倍性和高度异质特点,牧草遗传连锁图谱的构建相对复杂。目前, 一定数量牧草的遗传连锁图
谱已经产生。本文简要综述了牧草遗传图谱研究现状和常用策略,提出了构建高质量牧草遗传图谱的建议。
关键词: 牧草; 遗传连锁图谱; 概述
中图分类号: S 812; Q943 文献标识码: A
Qutline to Genetic Linkage Maps Construction of Pastures
FANG Cheng, HAN Jian-guo
( Institute of G rassland Science, China Agr icult ur e Univ ersit y, Key Labo rat or y o f
G rassland Vegetation Restor ation and Reconstr uction M inistr y of Ag riculture , Beijing 100094, China)
Abstract: A high-density molecular l inkage map will be of value for studies designed to assay genet ic v ar iat ion,
ident ify markers associated w ith dissect quant itative trait lo ci, and per form marker -assisted select ion to im-
prove agronom ically important t rait s within plants. By po lyploid natur e and high levels of heterozy gosity of
vast major ity pasture plants, it w as r ather complicated to const ruct linkage maps of them. Naw an ex tensive
list of linkage maps have been dvaf ted. The object ive of this paper is to int roduce the pr esent condit ions of link-
age maps constr uction and available measures as w ell as contributing some suggest ions for scaling quality genet-
ic maps of forag es.
Key words : Pasture; Genet ic linkage maps; Qut line
狭义的牧草是指可供家畜采食的各种栽培和野生
的一年生或多年生草类 [ 1]。我国是世界第二草原大国,
草地面积占世界总面积的12. 4%。牧草品质和产量的
提高对促进畜牧业发展、加速西部开发、改善西部地区
牧民的生活水平、构建和谐社会和维护生态环境安全
都具有十分重要的意义 [ 2]。
和一些主要经济作物相同,牧草的大多数重要经
济性状也是受多基因和环境共同作用、其表型值为正
态分布的数量性状。怎样提高数量性状的改良效率, 加
快良种培育步伐,是植物遗传育种工作者长期关注的
热点之一。虽然很早已得出数量性状是微效多基因和
环境条件共同影响结果的结论,但尚未有切实可行的
研究方法与特定数量性状相关基因的数目、每个基因
对相关性状遗传变异的影响及其在染色体上的具体位
点等作物遗传改良必须了解的问题。1923 年, Sax 在
有色大粒与白色小粒豌豆( Phaseolus v ulgaris)的杂交
研究中,利用控制种重的微效多基因( minor gene)与
控制粒色的主效基因( major gene)连锁关系, 成功地
用粒色作标记对种粒重这一数量性状进行了辅助选择
研究[ 3]。Sax 的工作受到人们的高度关注, 利用遗传标
记成为迄今为止对数量性状遗传分析最有效的方法之
一。目前, 可用于数量性状遗传分析的标记有四大类
型,即形态标记、细胞学标记、生化标记和DNA 分子标
记。作为标记,形态、细胞学和生化标记各自都存在一
些不足之处, 如形态标记易受环境条件影响、细胞学标
记在某些物种中不易获取且标记材料的生产投入巨
大、而生化标记不同程度上存在发育和组织特异性且
局限于编码区的信息表达等, 特别重要的是它们都在
收稿日期: 2006-02-20; 修回日期: 2006-06-30
作者简介:方程( 1958-) ,男,博士,副教授,主要研究方向为牧草生物技术和遗传育种; * 通信作者 Author for corr esp on dence, E-mail: hanjian-
g uo@ cau. edu. cn
第 14 卷 第3 期
Vol. 14 No . 3
草 地 学 报
ACTA AGREST IA SINICA
2006 年 9 月
Sep. 2006
数量上受到限制, 远不能满足数量性状分析的需求, 极
大地制约了它们的应用。1980年,美国人类遗传学家
D. Botstein 等在美国人类遗传学期刊 ( A m J H um
Genet )上发表了《用限制性片断长度多态性构建人的
遗传连锁图》的论文,首次提出了限制性片断长度多态
性 ( Rest rict ion Fragment Length Po lymo rphism ,
RFLP)的概念。RFLP 标记技术的提出标志着以核苷
酸序列差异为基础的DNA 分子标记正式被人们认识
和应用[ 4]。DNA 分子标记完全克服了形态、细胞学和
蛋白质标记的弱点,在生物研究领域有广泛的应用。
分子标记的主要用途之一是构建生物遗传连锁图
谱。遗传连锁图谱( g enet ic linkage map)是指通过遗传
重组分析得到的基因或专一的多态性遗传标记( mar-
ker )在染色体上线性排列顺序图, 其间的距离通常用遗
传重组值来表示。遗传连锁图谱的构建步骤主要包括:
¹ 依据研究对象、目标和现有条件选择所用遗传标记;
º 确定亲本组合, 构建作图群体; » 分析构图群体中植
株的标记基因型; ¼标记间连锁群和标记位点的确定。
遗传图谱已成为植物遗传育种学家的有力工具。遗传图
谱可为植物遗传变异研究提供大量有用信息;能进行图
谱基因克隆生产转基因植物;可在遗传图谱的基础上进
行数量性状基因的定位( QT L)、标记( tagg ing )、为分子
辅助选择( molecular-assisted/ aided select ion, MAS)
提供高效的标记; 而进一步的比较基因组图谱在植物基
因组学和进化研究中具有重要的作用[ 5]。
1 牧草遗传连锁图谱构建研究现状
牧草中较早的遗传连锁图谱是 Brummer 等1993
年以紫花苜蓿(Medicago sativ a)为材料构建[ 6]的, 随
着研究技术的不断提高和时间的推移, 构建的牧草遗
传连锁图谱也渐渐增多。
表1 牧草遗传连锁图谱构建研究简介
Table 1 Intr oduct ion to genetic linkage maps constr uction fo r pasture
牧草名 构图群体种类 子代个数 所用标记种类
构建图谱
标记数 图幅( cM ) 连锁群数 参考文献
紫花苜蓿( Med icag o sat iv a) F2 86 RFLP 108 467. 5 10 Br ummer 等, 1993[ 6]
F1 55 RFLP 75 234 9 Tavolet t i等, 1996[ 7]
BC 87 RFLP, RAPD 86/ 61 553/ 603 10/ 7 Echt 等, 1994[8]
F1 48 AFLP, RAPD, RFLP 67 368. 6 19 Barcaccia 等, 1999[ 9]
F2 137 RFLP, RAPD 等 868 754 8 Kal等, 2000[ 10]
截形苜蓿( M . tr uncatula) F2 93 EST 等 288 513 8 Choi等, 2004[11]
苇状羊茅( Festuca aru ndinacae ) F2 105 RFLP 108 1274 19 Xu等, 1995[ 5]
F1 91 SSR,AFLP 922 1841 17 Saha等, 2005[ 12]
草地羊茅( F. p ratensi s) F1 138 RFLP, AFL P, S SR 等 466 658. 5 7 Alm 等, 2003[ 13]
多年生黑麦草( L ol ium p erenne) F1 89 RFLP, RAPD 等 106 692 7 Hayw ard等, 1998[14]
F1 95 AFLP, EST 等 471 930 7 Bert 等, 1999[15]
F1 183 RFLP, AFL P等 241 811 7 Jones 等, 2002[16]
多花黑麦草( L . mult if . ) F1 82 RFLP, AFLP, TAS 385 1244. 4 7 In ou e等, 2004[ 17]
黑麦草杂种( L . mult .×L . p eren. ) F1 91 AFLP, RAPD, RFLP, S SR 等 451 712/ 537 7 Warnke 等, 2004[18]
百脉根( L otus corniculatus) F2 82 RFLP, RAPD, IS SR, ST S等 217 572. 1 7 Fjell st rom 等, 2003[ 19]
日本百脉根( L . j ap onicus) F2 165 AFLP, RFL P等 605 367 6 Sandal 等, 2002[20]
结缕草( Zop sia spp. ) F2 105 RFLP 115 1506 22 Yaneshita 等, 1999[21]
F2 78 SSR,AFLP 540 1187 30 Cai等, 2005[ 22]
日本结缕草( Z. j ap onica) F2 78 AFLP 364 932. 5 26 Cai等, 2004[ 23]
百喜草( Pasp alum notatum) F1 126/ 65 RFLP, RAPD,AFLP 83 991 10 Or tiz 等, 2001[ 24]
赖草( L eymus spp. ) F1 164/ 170 AFLP, RFL P, STS , SSR 1107/ 1038 2001/ 2066 14 Wu等, 2003[ 25]
1. 1 已构建遗传连锁图的牧草
据不完全统计, 到目前为止人们已构建了二十多
张牧草遗传连锁图,其主要研究结果综合于表1。由表
1可知, 牧草的遗传图谱构建研究对象主要是苜蓿(特
别是紫花苜蓿)、黑麦草( Lolium spp. )、羊茅( Festuca
spp. )、结缕草( Zop sia spp. )和百脉根( Lotus spp. )等
常用草种, 而百喜草 ( Paspalum spp. )、赖草( L eymus
spp. )、高丹草( Sorghum×Sudan grass) [ 26]也有研究
报道。牧草遗传图谱研究较少而研究对象相对集中的
主要原因是: ¹ 人们对牧草重要性的认识不够、在社
会经济中的地位相对较低, 从而对其研究的投入相对
较少; º 大多数牧草是多倍体、自交衰退严重、异质程
度高,使其遗传图谱的构建相对复杂; » 而目前研究较
多的牧草都具有较高的经济价值、较强的适应性和较
大的分布区域, 而且它们有的是二倍体(如羊茅)或有
可能创造二倍体的作图材料(如苜蓿)。
288 草 地 学 报 第 14卷
1. 2 牧草连锁图谱中主用的遗传标记
如表1所示, 已构牧草遗传连锁图谱主用的遗传
标记是DNA 分子标记, 偶有形态、细胞学和生化等标
记参与 [ 28]。而分子标记中用得最多的是 RFLP 和
AFLP 标记。RFLP 标记虽然存在操作复杂耗时费资、
DNA 质量要求高用量大、涉及到同位素污染等不足,
但其重复性好和共显性的特点,在构建牧草核心( core
map)或框架( f ramew ork map)图谱、特别是在比较作
图中具有重要作用。而AFLP 技术耗时少信息量大, 是
高密度分子图谱( high-density mo lecular map)构建中
的常用标记。对牧草进行RFLP 分析时,常用的限制性
内切酶是 BamH Ⅰ, DraⅠ, E coRⅠ、E coRⅤ和 H ind
Ⅲ等。在随机基因组文库的建立中用PstⅠ作为限制性
内切酶可较高效地获得理想探针。
1. 3 常用于牧草连锁图谱构建的作图群体
研究对象确定之后,构图群体亲本的选择和群体
构建是图谱构建能否成功及图谱质量高低的决定因素
之一。依研究目标,最大限度地追求亲本间性状差异与
亲和性的统一是亲本选择的基本原则。一般说来,应在
有一定亲和性的基础上选择有最大性状差异的个体为
构图群体的亲本。在已构成的牧草图谱中, 构图群体多
为来自于种内品系间和属内种间杂交产生的F 1和F 2
群体。牧草自身细胞学特性、遗传研究水平和现有构图
技术要求人们选择采用这些群体进行遗传图谱的构
建。所建图谱的质量与构图群体的大小是密切相关的:
群体越大,包含的基因重组个体和基因组上可标记位
点也就越多, 所构图谱的幅度也就可能全面,所构图谱
就会越饱满; 但群体越大,构图所需的人力物力财力就
越多,研究成本也就越高。因此依研究对象、作图目的
要求、构图群体类型和拟采用标记种类来确定构图群
体大小是必要的[ 27]。表1显示的构图研究中,构图群体
子代个体数从48至183不等,表明在群体子代数超过
100时,所构图谱都有较大的图幅和较小的标记距离,
如在Kal等用含137个子代的群体构建的紫花苜蓿连
锁图的图幅就大于同类的其它图谱, 达到 754 cM [ 10] ;
Sandal 等在日本百脉根( L . j ap onicus)研究中所用的
构图群体有165个子代, 所构图中标记间平均距离已
小到0. 6 cM [ 20]。
2 牧草遗传图谱构建的基本策略
基因组的多倍性和自交子代生活力严重衰退是多
数牧草的特点,它们的存在使牧草遗传图谱构建相对
困难,为此人们在牧草构图时采用了一些基本的对策。
2. 1 创造二倍体亲本
克服多倍体植物构图困难的有效途径是想办法创
造二倍体的构图亲本,使用二倍体材料产生的群体作
图可大大增加标记基因型读出概率, 提高图谱的准确
度。紫花苜蓿是异源四倍体, Echt 等用 CADL( cult i-
vated alfal fa at the diploid lev el )为亲本的回交群体作
图收到了较好效果 [ 8]。
2. 2 采用SDRF信息
在有 RFLP、SSR 等共显性标记存在时, 采用
SDRF( sing le-dose rest rict ion f ragment )信息是目前
克服多倍体构图复杂性的另一较有效办法[ 29～30]。
SDRF 是指在构图群体子代中表现为1: 1(存在: 缺失)
分离的条带。Saha 等读取SSR标记的SDRF 信息构建
了苇状羊茅的遗传连锁图[ 12]。Fjellst rom 等变通此法
构建了四倍体百脉根的连锁图谱 [ 19]。在用此方法构图
时,构图群体亲本选择特别重要,亲本1应有较高的异
质性以保证有高频率的SDRF,而亲本2最好有较高的
同质性以提高检测到多态性的概率。在充分研究物种
细胞学遗传特征的基础上, 采用相应的技术也能较好
地收集条带信息, 提高多倍体物种构图的质量[ 5]。
2. 3 单假测交和双假测交
遗传连锁图谱的理论基础是植物减数分裂时同源
染色体的联会交换而产生的DNA 的重组。依据重组子
占配子总数的比例标记是否连锁及它们间的遗传距
离。如果构图群体子代出现偏分离现象( disto rt ion) ,
即具有某基因型个体的实际值与理论估计值显著不
符,则说明群体样本没有随机性,从根本上动摇了构图
基础,使构图研究难以进行或所构图谱失去真实性。导
致偏分离现象产生的原因有很多,如亲本间基因组结
构和染色体配对的差异、亲本自然选择差异等, 而基因
与不育位点连锁是多数牧草 F2 作图群体出现偏分离
现象的主要因素之一[ 5]。
单假测交( one-w ay pseudo-test cross) [ 31～32]或双
假测交( tw o-w ay pseudo-testcro ss) [ 31, 33, 34]方法是克
服自交不育植物偏分离现象对遗传图谱构建不利影响
的较好途径。这两种方法都要求作图群体是由F 1代全
同胞子代构成,其差异是前者要求亲本之一是纯合子
或近纯合子, 如在Bert等 [ 15]和Jones 等[ 16]的研究中, 父
本都是双单倍体( di or doubled-haploid) ; 而后者适合
两亲本都是杂合子的构图群体。通过单假测交方法可
构建母本和子代遗传连锁图, 而不能构建父本遗传连
锁图。此时是否存在共显性分子标记不是必须,
289第 3期 方 程等:牧草遗传连锁图谱构建研究概述
AFLP、RAPD等标记用得较多[ 16]。但同质亲本的获得
往往比较困难或高成本,用两异质亲本生产双假测交
群体简明方便。双假测交设想最初应用于同工酶上,
Hemmat 等扩展至 RFLP 和 RAPD 技术, 利用苹果
Rome Beauty 与White Angel杂交, 获得 F1 代, 为父、
母本分别作图,获得两张遗传连锁图谱 [ 34]。双假测交
构想中,对于父本表现为杂合而对母本表现为纯合隐
性的标记用于父本作图,对于母本表现为杂合而对父
本表现为纯合隐性的标记用于母本作图。对于父、母本
均表现为杂合的标记可用以确定双亲连锁图中的同源
连锁群,由此途径可得父母本和子代共三个遗传连锁
图。此时共显性标记,如RFLP、SSR 等是必需的,它们
被称为“桥标记”( bridg e mar ker )用于将双亲图谱整
合为子代群体图谱[ 12]。如果某标记表现为1∶1的分
离,则说明亲本之一此位点纯合;若表现为3∶1分离,
则说明两亲本在此位点都是杂合, 3∶1分离率对确定
不同图谱间同源连锁群非常有用 [ 35]。
3 今后牧草连锁图谱构建的思考
植物遗传连锁图谱的发展趋势是高饱和化、实用
化和通用化。高饱和化是增加图谱上标记位点的密度,
一般将标记位点间最大遗传距离不超过5 cM 的遗传
图谱称为高密度图谱。实用化是指遗传连锁图谱可直
接用于植物育种工作中。通用化是说遗传连锁图谱的
信息可在种内仍至种间交流,而不是局限于作图亲本。
在已构牧草遗传连锁图中, 连锁群数与研究对象实际
染色体对数或多或少存在差异, 不同构图群、不同亲本
间的连锁群数有时也不同; 虽然不同构图亲本染色体
联会交换频率的差异和畸变将影响连锁的长度和标记
间距离[ 12] ,但同主要作物构成的连锁图比较, 大多数
已构牧草图谱的图幅偏小,标记间空隙( g ap)较大, 远
远没有达到QTL 分析、基因克隆和分子标记辅助选择
对遗传图谱的要求。因此,加强准确、完整、实用和高密
度牧草遗传连锁图谱构建研究十分必要。
3. 1 加速牧草遗传变异研究
全面深入的遗传变异研究,是准确完整图谱构建
的基础。首先,遗传变异研究是慎重选择作图亲本的依
据。在Alm 等所构建的草地羊茅连锁图中,其2F 连锁
群没有完整绘出, RFLP 分析没有获取母本第二对染
色体联会交换信息。分析认为产生此结果的可能原因
是:母本第二对染色体高度纯合或可能有大的倒位环
存在,此例说明用这样的亲本构图不理想[ 13]。我们认为
在亲本确定前对候选植株先做多态性和聚类分析, 应该
选择不同类的单株作亲本, 而且多态性分析过程也是一
个标记筛选过程,并不会增加成本。其次,物种较全面的
遗传学基础可提高图谱的准确性。如,用特定基因组探针
可比较好地分辩多倍体中的各基因组, 而特定基因组探
针的应用必须充分了解多倍体遗传结构[ 5]。
3. 2 加强牧草构图群体的构建
从目前牧草遗传连锁图谱研究情况来看(表1) , 所
用构图群体大多数是暂时性分离群体,如F 1。这些群体
构建成本低, 能提供大量的信息,但它们难于较长期的
保存利用,无法满足不同研究者对同一材料的合作研
究,研究结果间可比性不强,不利于信息的充分利用。
因此,加强较多子代( 200 以上)永久性构图群体的构
建和保存研究,将提高所构遗传图谱的准确度。
3. 3 遗传标记的选用
从表 1 可知, 目前牧草遗传图谱的是 A FLPs、
SSRs、RAPDs、RFLPs 分子标记, 它们各自有优点和
不足, 特别是在重复性、M I 值(指每个反应的多态性
产物的数量)和应用成本上存在一定差异, 因此为了实
现遗传图谱的高饱和化、实用化和通用化, 在遗传标记
的选用上最好做到: ¹ 在有可能时,尽量选用M I 值大
的标记(如SNP 等)和同时采用多种DNA 分子标记作
图以提高图谱的饱和度; º 充分利用EST 标记作图,
以便更准确地进行QT L 分析; » 利用近缘物种构图研
究成果, 选用多类遗传标记(形态、细胞学、生化和分
子 )和充分锚定标记( anchored marker )联合构图, 以
提高图谱准确性和实用性。
应该相信,随着人们对牧草重要性认识的不断提
高、分子生物学的快速发展和牧草育种的需求, 牧草
(特别是我国牧草)的遗传连锁图谱构建研究在不久的
将来必将迈上一个新的台阶。
参考文献:
[ 1 ] 内蒙古农牧学院主编. 牧草及饲用作物栽培学[ M ] . 北京:农业
出版社, 1981.
[ 2] 洪绂曾. 中国草业可持续发展的战略研究[ J] . 草业科学增刊:草
业科学技术创新, 2004, 3-8
[ 3] Sax K. T he ass ociat ion of size diff erences w ith seed-coat pattern
an d pigmentation in Phaseolus vulgar is [ J ] . Gen et ics , 1923, 8:
552-560
[ 4] Botstein D, Wh ite R L, Sk olnick M, Davis R W. Cons t ruct ion of
a gen et ic link age map in m an usin g rest riction f rag ment length
polymorph isms [ J] . Am J Hum Gen et . 1980, 32: 314-331
[ 5] Xu W W, Sleper D A, Chao S. Genome mapping of polyploid tal l
fescue ( F estuca ar undinacea Schreb. ) w ith RFLP markers [ J ] .
Th eor. Appl. Genet . 1995, 91: 947-955
[ 6] Brummer E C, Bouton J H , Kochert G. Development of an RFLP
290 草 地 学 报 第 14卷
map in diploid alfalfa[ J ] . T hero Appl Genet. , 1993, 86: 329-
332
[ 7] T avolet t i S, Veronesi F, Osborn T C. RFLP link age map of an
al falfa meiot ic mutant based on an F1 populat ion[ J] . J Hered. ,
1996, 87: 167-170
[ 8] Echt C S, Kidw el l K K, Knapp S J , Osborn T C, McCoy T J.
Linkage mapping in diploid alfal fa ( M edicago sati v a ) [ J ] .
Genome, 1994, 37: 61-71
[ 9] Barcaccia G, Albert ini E, Tavolett i S, Falcinel li M , Verones i F.
AFLP f ingerprint ing in Med icag o spp. : It s developm ent and ap-
plicat ion in l inkage m appin g[ J] . Plant Breed. 1999, 118: 335-340
[ 10] Kal, P, Endr e G, Zimnyi L, Csandi G, Kiss G B. Cons t ru-
ct ion of an improved l inkage m ap of diploid alfal fa ( Medicago
sat iv a) [ J] . T heor Appl Genet . , 2000, 100: 641-657
[ 11] Choi H. K. , et al. A s equence-based genetic map of Medicago
tr uncatula and com paris on of m ark er colinear ity w ith M . sat iv a
[ J] . Genetics, 2004, 166: 1463-1502
[ 12] Saha M C, Mian R, Zw onit zer J C, Ch ekh ovskiy K, Hopkins A.
An SSR-and AFLP-based genet ic link age map of tall fescue ( Fes-
tuca ar undinac ea Schreb. ) [ J ] . T heor Appl Genet, 2005, 110:
323-336
[ 13] Alm V, Fang C, Bus so C S , Devos K M, Vol lan K, Grieg Z,
Rognl i O A. ( 2003) A linkage map of meadow fes cue ( F estuca
p ratensis Huds . ) , and compar at ive mapping w ith the Tr iti ceae
species, L ol ium, oat rice maize and sorgh um [ J ] . T heor Appl
Genet , 2003, 108: 25-40
[ 14] Hayward M D, For ster J W , Jon es J G, Dolst ra O, Evans C,
McAdam N J , Hossain K G, Stammers M , W ill J, Hum phreys
M O, E vans G M. Genet ic analysis of L ol ium. I. Ident ificat ion of
link age groups and th e es tabl ishm ent of a genet ic map[ J ] . Plant
Breeding, 1998, 117: 451-455
[ 15] Bert P F, Charmet G, Sourdil le P, Hayw ard M D, Balfourier F.
A h igh-density molecular map for ryegrass ( L ol ium p erenne ) u s-
ing AFL P markers[ J ] . T heor Appl Gen et , 1999, 99: 445-452
[ 16 ] Jones E. S . N atalia L , M ah on ey M D, Hayw ard I P, et al . An
enh anced m olecular marker b as ed genet ic map of perennial ryeg-
ras s( L olium p er enne) reveals comparat ive relationships w ith other
Poaceae genom es [J ] . Genome, 2002, 45: 282-295
[ 17] Inoue M, Gao Z, Hirata M , Fujimori M , Cai H. Cons tru ct ion of
a high-density l inkage map of Italian ryegras s ( L olium mult if lo-
rum Lam. ) us ing r est rict ion f ragment length polymorphism, am-
plif ied f ragm ent length polymorphism, and telomeric repeat as so-
ciated sequ ence marker s[ J] . Genome, 2004, 47: 57-65
[ 18 ] Warnke S E, Barker R E, Jun g G, S im S C, Rouf M ian M A,
Saha M C, Brilm an L A, Dupal M P, Forster J W. Genetic lin k-
age mapping of an annual × p erennial ryegrass populat ion [ J ] .
Th eor Appli Genet , 2004, 109: 294-304
[ 19] Fjel lst rom R G, S teiner J J , Beuselink P R. T et rasomic Lin kage
Mapping of RFLP, PCR, and Isoz yme Loci in L otus cor niculatus
L. [ J] . Crop Sci, 2003, 43: 1006-1020
[ 20] Sandal N, e t al . A genetic lin kage map of the model legume L otus
j ap onicus and st rategies for fas t mapping of new Loci [ J ] . Gen et-
ics , 2002, 161: 1673-1683
[ 21 ] Yaneshi ta M , S . Kaneko S , Sasakuma T . Allotet raploidy of
Zoys ia sp ecies w ith 2n= 40 based on a RFLP genet ic map [ J ] .
Th eor Appl Genet , 1998, 98: 751-756
[ 22] Cai W H, Inoue M, Yuyama N, Takahasha W , Hirata H , Sasaki
T . Isolat ion, char acterizat ion and mapping of simple sequence re-
peat markers in Zoys iagr as s ( Zoy sia spp. ) [ J ] . T heor Appl
Genet , 2005, 112: 158-166
[ 23] Cai W H, Inoue M , Yu yama N, Nakayama S. An AFLP-based
link age map of Zoys iagrass ( Zoy sia j ap onica) [ J ] . Plant Breed,
2004, 123: 543-548
[ 24] Ort iz J A, Pes sino S C, Bh at V, Hayw ard M D, Quarn C L . A
gen et ic link age map of diploid P asp alum notatum [ J ] . Crop S ci.
2001, 41: 823-830
[ 25] Wu X L , Larson S R, Hu Z, Palazzo A J, et al . Molecular ge-
net ic l inkage map s for allotetr aploid L eymus w ildr yes ( Gramine-
ae: T ri tic eae) [ J] . Genome, 2003, 46: 627-646
[ 26] 逮晓萍,云锦凤. 高丹草遗传图谱构建及农艺性状基因定位研究
[ J] . 草地学报, 2005, 13 ( 3) : 3
[ 27] 方宣钧,吴为人,唐纪良. 作物DNA 标记辅助育种[ M ] . 北京: 科
学出版社, 2002.
[ 28] King J, Ar mstead I P, Donnis on I S , T homas H M , Jones R N,
Kearsey M J , Robert s L A, T homas A, Morgan W G, King I P.
Physical and genet ic mapp ing in the Grass es L olium p erenne and
Festu ca p ratensis[ J] . Genet ics, 2002, 161: 315-324
[ 29] Wu K K, Bu rnquist W , Sorrells M E, T ew T L, M oore P H,
Tanks ley S D. T he detect ion and est imat ion of link age in poly-
ploids usin g s ingle-dose res t rict ion f ragm ents [ J ] . T heor Appl
Genet . , 1992, 83: 294-300
[ 30] Sorrells M E. Developmen t and appl ication of RFLP in polyploidy
[ J] . Crop S ci, 1992, 32: 1086-1091
[ 31] Ritter E, Gebhard t C , Salamini F. Es tim at ion of recombinat ion
f requencies in cros ses and cons tru ct ion of RFLP linkage maps in
plants f rom cross es b etw een heterozygous parents[ J ] . Genet ics,
1990, 125: 645-654
[ 32] DeSimone M, Morgante M , Lucchin M , Parrini P, Mar occo A.
A fir st link age map of Cichorium intybus L. usin g a on e w ay pseu-
do-testcr os s an d PCR-derived mar kers [ J] . Mol Breed. , 1997, 3:
415-425
[ 33] Grat tapaglia D, Sederof f R. Genet ic link age map s of E ucalyp tus
urop hy lla usin g a pseudo-testcross mapping s t rategy an d RAPD
marker s[ J] . Genet ics, 1994, 137: 1121-1137
[ 34] Hemmat M , Weeden N F, Man ganaris A G, Law son D M . A
molecular marker lin kage m ap for apple[ J] . J Hered , 1994. , 85:
4-11
[ 35] Maliepaard C, Alston F H, van Arkel G, Brow n L M, Chevreau
E, Dun emann F, Evans K M, Gard iner S , Guilford P, van Heu s-
den A W, Janse J , Laurens F, L yn n J R, Man ganaris A G, den
Nijs A P M, Periam N, Rikk erin k E , Roche P, Ryd er C,
Sansavini S , Schmidt H, Tartarini S , Ver haegh J J , Vriel ink-van
Ginkel M , King G J. Aligning male and fem ale lin kag e maps of
app le ( Malus p umila Mil l. ) us ing m ult i-allelic marker s[ J] . The-
or Appl Genet , 1998, 97: 60-73
(责任编辑 才 杰)
291第 3期 方 程等:牧草遗传连锁图谱构建研究概述