全 文 ：第 3 卷 第 3 期 草 地 学 报
A C T A A G R E S T IA S IN IC A
1 9 9 5
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年
1 9 , 5
两种为害牧草叶虾的酉旨酶
同工酶和过氧化物酶同工酶的比较研究(简报) ’
张茂新 凌 冰
(新疆八一农学院植保系 , 乌鲁木齐 8 3 0 0 5 2)
杨文英 吴小光
(新疆八一农学院生物基础部 , 乌鲁木齐 8 3 0 0 5 2)
脊萤叶 甲仁T h eon e sil Ph耐e s (D a lm a n )」和愈纹萤叶甲 (G 以er u c a re ic h a rd ti Ja e o b s o n )是
新疆荒漠草地的主要食叶性害虫 , 以幼虫期为害最重 。 两种叶卿幼虫的外部形态 、生物学特
性和发生期都很相似 , 在野外调查中 , 从外部形态上很难区分 。 为了探索生物化学上分类的
依据 , 我们采用聚丙烯酞凝胶电泳方法对这两种叶虾幼虫的酷酶同工酶和过氧化物酶同工
酶进行了初步比较研究 , 其结果如下 。
1 材料与方法
叶甲幼虫匀浆的制备 两种叶虾的幼虫均采自塔城地 区荒漠半荒漠草场 。 分别称取叶
甲幼虫 10 m g 加 20 %蔗糖溶液将匀浆液全部洗入离心管 , 离心 (3 5 0 0 r / m in) 20 分钟 , 取上
清液置冰箱中保存备用 。
1
.
1 电泳 采用垂直平板聚丙烯酞胺凝胶电泳法 。 用 D Y 一W Z 型恒流稳压 电泳仪 (北京
产 ) , 于 4 ’C冰箱中进行 。 分离胶浓度为 7 % , 浓缩胶浓度 为 5 % , 电极缓冲液 用 p H 一 8 .3
T ri s—甘氨酸系统 。 每槽加酶样 50 闪, 恒流 30 m A , 电压 30 o V , 以澳酚蓝为指示剂 , 等澳酚蓝接近边缘时停止电泳 。 醋酶电泳约 4 小时 , 过氧化物酶约 3 小时 。
1
.
2 染 色 电泳完毕 , 进仁浏咬染色 。 醋酶同工酶染色液配制方法是称取 a一醋酸茶醋和
日一醋酸茶酷各 SOm g , 用丙酮溶解 , 加入 0 . IM pH 7 . o 磷酸 缓冲液 1 0 m l, 再加入坚牢蓝
so m g
, 待坚牢蓝完全溶解后立即将凝胶置于染液中 , 在 3 7 OC 水浴中染色 20 分钟 。 过氧化物
酶同工酶染色液配制的方法是称取联苯胺 0 . 19 , 溶于少量无水 乙醇中 , 加入 pH 一 5 . 0 醋酸
—醋酸钠缓冲液 1 0 om l, 染色前加入 5 滴 5 %过氧化氢溶液 , 在室温 20 ℃染色 15 分钟 。 身色完毕 , 弃去染色液 , 用 7 %醋酸脱色漂洗固定半小时 , 然后测量 , 用室内透光法拍照 。 制f
胶保存 。
2 结果与讨论
2
.
1 醋酶同工酶 愈纹萤叶 甲一般具有 9 一 10 条带 (图 1 , IA ) , 以 6 、 7 、 8 、 9 带为主带 , 其
Rf 值分别为 0 . 62 、 0 . “ 、 0 . 71 、 0 . 7 3 ;第 5 带与第 6 带的间隔很窄 , 有时看来合并成一条宽
带 ;第 1 带是一条浅带 , 其 R f值为 0 . 1 4 。脊带叶甲具有 7 条带 (图 1 , ZA ) , 以第 1 、 2 、 5 、 6 带为
生带 ,谱带颜色较深 , 其 R f值分别为 0 . 2 、 0 . 40 、。. 60 、 0 . 65 , 以第 1 带最宽 。
. 本项研究系新疆畜牧厅治蝗办资助课题《新疆草原叶虾 防治的研究》的部分内容 。
第 3 期 杨茂新等 : 两种为害牧草叶 .朔】的醋酶同工酶和过氧化物酶同工酶的比较研究 (简报 ) 2 5 5
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图 l 二种叶甲的醋酶和过氧化物酶同工酶谱
F19
.
1 Iso e n z y m e p a t te r a s o f e s te r a s e a n d p er o x id a s e o f tw o s p e e ie s o f lea f b e e tle s
1
. 愈纹萤叶甲 (G a zer u c a r e lc h a r d ti Ja e o bs o n ) 2 . 脊萤叶甲〔T 人e on e s l p人耐e s (G a lm a n )皿
A
. 酷酶同工酶 (Is o e n z ym e p a t te r a s o f e s t e r a s e )
B
. 过氧化物酶同工酶(Is o e n z ym e p a t t e r a s o f)
2
.
2 过氧化物酶同工酶 愈纹萤叶甲共有 4 条带 (图 1 , IB ) , 其 R f 值在 0 . 52 ~ 0 . 8 之间 ,
谱带颜色浅 。 脊萤叶甲共有 s 条带 (图 I , ZB ) , 其 R f值在 0 . 2 6一 0 . 5 5 之间 (表 1 ) , 以第 3 、 4 、
8 为主带 R f值分别为 0 . 3 5 、 0 . 4 0 、 0 . 8 5 。
表 1 两种叶甲的醋酶同工酶和过级化物酶同工酶的 R f 值
T a b
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1 T h e R f v a lu e o f es t e r a s e is o z ym e s a n d p e r o x id a s e iso z ym e s o f tw o sp e e ie s o f le a f b ee tle s
Pe r o x ld a s e 脊萤叶 甲
同工酶 靡烹月豹 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0Is o z y m e s
酷酶 { 愈纹萤叶甲 O; 1 4 0 . 3 5 0 . 3 8 0 . 5 1 0 . 5 8 0 . 6 2 0 . 6 6 0 . 7 1 0 . 7 3 0 . 8 0
E x t e r a s e G
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r e le h a r d t l 0
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2 2 0
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4 0 0
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5 1 0
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5 8 0
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6 0 0
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6 5 0
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7 6
脊萤叶 甲
T
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s llp ho z d e s
0
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2 6 0
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3 0 0
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3 5 0
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4 0 0
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5 6 0
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6 9 0
.
7 3 0
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8 5
T
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s llp ho l d e s
同工酶是表现相同的基质特性而有不同的分子结构的同类酶蛋白质的总称 。 已知同工
酶分子的多态形完全是 由基因决定的 , 其含量和活性均受基因调控 。 因此 , 同工酶表现出明
显的种属 、组织和发育阶段的特异性 。 从电泳结果来看 , 两种叶虾在酷酶同工酶和过氧化物
酶同工酶方面存在着很大的差别 , 不论从酶带数 目 、染色强度和迁移率上均有 明显的不同 。
在所研究的样品中 , 两种叶押幼虫的两种同工酶经过几次重复电泳 , 重现性较好 。 作者认为
可以作为区分叶虾幼虫种类的一个指标 。 另外 , 就两种同工酶谱带 的清晰度和制备 、保存来
看 , 酉旨酶清晰度高 , 不褪色 , 便于长期保存 。过氧化物酶带容易褪色 , 在刚染色时酶带清晰 , 时
间一长即褪色不清 , 还需探索更好的固定保存方法 。