全 文 ：第 3 卷 第 4 期
V o l
.
3 N o
.
4
草 地 学 报
A C T A A G R E S T IA S IN ICA
1 9 9 5 年
1 9 9 5
卵抱白僵菌感染草地脐槽的研究
屠敏仪 邓芳席
(湖南农业大学 , 长沙 4 1 0 1 28 )
刘太勇
(湖南省南山牧场 , 城步县 4 22 5 1 2 )
摘要 : 从湖南南山牧场草地上 自然摧病的挤蜡虫体上分离出一株卵抱白僵菌 。 在室内和野
外人工草地进行挤蜡活虫感染试验 , 结果表明 , 在室内用卵抱白僵菌抱子液感染蟒蜡活虫 , 30 天
内挤婚感染率达 64 . 6一 92 · 1% ; 野外草地试验 , 用卵抱白僵菌制成菌剂拌少量细土撒于地表 , 20
天内 , 挤蜻感染率为 70 %以上 。
美性词 : 卵抱白僵菌 ; 牧草 ; 挤蜻 ; 感染
1 前言
湖南省山区的黑麦草(乙汉山 m 户er en ne L . )和白三叶 (T 犷确亡iu m re Pe ns L . )混播人工草地
受蟒蜡的危害严重 , 致使牧草大片枯黄 。 蟒蜡营地下生活取食牧草根系 , 对其使用化学农药
的防治效果不佳 , 不但持久性差 , 害虫容易产生抗药性 , 而且污染环境 。 蟒蜡是金龟子科
(S ca ra b )幼虫 。 在城步县南山草地及新宁县黄金草地捕捉的大量成虫 , 经鉴定该山区草地的
金龟子 优势种有鲜黄鳃金 龟 (M et a 八只us tu m 心汀汤巧 Fal r m ai rs ) , 斜矛丽 金龟 (C以z说et h us
Pl a g iic of lo Fal r m at ir s )等 。 在虫情调查中发现草地土壤内有 自然感病死亡的蟒蜡 , 感染率
5 %左右 。 我们在南山牧场人工草地采集自然感染死亡的蟒蜡 , 并从虫体上分离出一株卵抱
白僵菌 (召‘“uv ~ ten el la )
, 在室内和野外人工草地对蟒蜡优势种鲜黄鳃金龟进行感染试验 。
2 材料与方法
2
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1 菌种来源
卵抱白僵菌 : 从南山牧场草地上 自然催病的鲜黄鳃金龟幼虫体上分离纯化所得 。
顶抱头抱霉 (Ce Ph以0 5加r l’u m ac
~
翻m ) :分离来源同上 。
球抱 白僵菌 (B ea uv ~ bas s ia na )
: 湖南农业大学微生物教研室保存的菌种 。
2
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2 培养基和培养方法
2
.
2
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1 平板分离培养基和分离方法 采用马丁琼脂培养基 (M a r tin m e d ia )(张纪忠 , 1 9 9 0 ) ,
从 自然感染死亡的蟒蜡虫体上用无菌接种针挑取少量抱子点种在平板分离培养基上 , 置于
25 ℃下培养 , 定时观察 。选取生长速度快的单个菌落 , 挑取抱子继续在平板上点种培养 , 以获
得较纯的培养物 。然后用稀释平板分离 , 从生长良好的单个菌落上挑取抱子移接到斜面上培
养 , 并得到纯种 。
湖南农业大学农学系遗传育种研究室程尧楚副研究员帮助显微摄影 ;设备科方熙选老师为试验摄影 ;夏白华硕士帮
助鉴定挤熠种类 , 在此一并致谢 。
2 84 草 地 学 报 1 9 9 5 年
2
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2
.
2 试管斜面培养基和菌的培养 采用马铃薯葡萄糖琼脂 (P D A功目0 . 2%蛋白陈 。 将供
试菌种分别接种到试管斜面上 , 在 28 ℃下培养 7 天后待用 。
2
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2
.
3 菌剂培养基和培养方法 采用鼓皮 16 9 , 豆饼粉 2 9 , 葡萄糖 29 , 水 2 3m l , 搅拌均匀 ,
0
.
IMp a 灭菌 30 分钟 。接种斜面抱子二环 , 于 28 ℃下培养 7 天制成菌剂待用 。 同时测得卵抱
白僵菌剂抱子含量为 20 . 2 亿 / g (湿重 ) , 球抱白僵菌剂抱子含量为 21 . 5 亿 / g (湿重 )o
2
.
3 供试害虫和收草草种
2
.
3
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1 供试害虫 鲜黄鳃金龟越冬前的三龄挤蜻 (第二次试管法 )和越冬后的三龄蟒婚 (第
一次试管法 , 瓶栽牧草法及野外草地感染 )均采自南山牧场人工草地 。
2
.
3
.
2 牧草草种 瓶栽牧草为混播的黑麦草和白三叶 ,取自人工草地的土壤和草皮 。 野外
草地为黑麦草和白三叶混播人工草地 , 草层高 10 ~ 15 厘米 。 土壤为山地酸性黄壤 , pH S . 8 ,
4 月份土壤含水量 30 一35 % 。
2
.
4 虫体感染试验
2
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4
.
1 试管法 抱子悬液制备 取培养 7 天后的试管斜面菌种 , 用无菌生理盐水洗下抱
子 , 制成 20 毫升抱子悬液备用 。第一次试管法未测抱子数 , 第二次试管法用血球计数板测定
抱子数 , 卵抱白僵菌液含抱子数 3 . s x lo , / m l, 顶抱头抱霉菌液含抱子数 3 . 7 只 1 0 , / m l。
试管法虫体感染 第一次取挤蜡活虫 1 20 条 , 随机分为三组 , 每组 40 条 。分别用卵抱白
僵菌 、顶抱头抱霉抱子液和无菌生理盐水 (对照 )浸泡 1 分钟 , 然后将试虫分装于无菌试管中
(18 x 180 毫米 ) , 每管 1 条 , 未加饲料 。 操作时严格隔离 ,避免交叉感染 。 处理后将试管置于
常温下 (试验期间平均气温 16 . 5 ℃ , 空气相对湿度 93 % ) , 每 3 天观察一次 ,记录蟒蜡感染情
况 。 第二次 90 条试虫 , 随机分三组 , 每组 30 条 ,感染方法和观察记录与第一次相同 。 试管置
于 16 ℃恒温箱内 。
2
.
4
.
2 瓶栽牧草法 用消毒玻璃罐头瓶 12 个 , 装入混播人工草地的土壤和草皮作为瓶栽
牧草 。 取蟒蜡活虫 120 条 , 每瓶放 10 条 , 将瓶栽牧草随机分三组 , 每组四瓶 。 分别将 Zo m l卵
抱白僵菌 、顶抱头抱霉抱子悬液 (制备方法与试管法相同 , 抱子数未测)及无菌生理盐水浇于
牧草根部 。操作时严格隔离 ,避免交叉感染 。 置于常温下 (试验期间平均气温 16 . 5 ℃ , 空气相
对湿度 93 % ) , 一个月后一次性取出观察记录 。
2
.
4
.
3 野外草地感染试验 小区设置 在混播人工草地划定 15 个小区 , 每小区 lm , , 先将
lm
, 面积的草皮铲起放置一旁 , 然后将 0 . sm 深土壤挖出 , 再往坑内放入与其体积相同的敞
口木盒 , 将已清除虫子的土壤放入木盒 , 再放入 20 0 条活虫 , 最后将 lm 2 草皮复盖在木盒上 。
巧 个小区共用试虫 3 0 0 0 条 , 待活虫入土两天后进行感染试验 。
感染试验 根据试管法 、瓶栽牧草法试验结果 ,选用毒效较强的卵抱白僵菌制成菌剂进
行野外草地感染试验 , 用球抱 白僵菌菌剂作对比 , 以细土为对照 , 共设五项处理 , 随机排列 ,
重复三次 。 每处理菌剂用量及抱子数见表 3 。 将菌剂拌入少量细土 (便于撒匀 )分别撒于各处
理小区地表 , 对照只撤细土 。 泡子随雨淋渗入土壤 (4 一 5 月多雨 ) 。 20 天后逐个将木盒 内的
土壤全部挖出进行一次性观察记录 。 试验期间平均气温 16 . 1 ℃ , 空气相对湿度 89 写。
2
.
5 菌株形态及培养特性观察
个体形态观察用插片法 (冯清平等 , 1 98 4 ) 。 采用马铃薯葡萄琼脂培养基在 25 ℃下培养 7
天后取出制片 , 用棉兰染色液染色 , 置 4 0 倍显微镜下观察菌丝及分生抱子形态 。
第 4 期 屠敏仪等 : 卵抱白任菌感染草地挤蜡的研究 28 5
培养特性观察用无菌接种针挑取少量抱子点种在马铃薯葡萄糖琼脂平板培养基上 , 在
25 ℃下培养 7 天后观察菌落形态 。
3 试验结果
3
.
1 试管法毒效浏定
室内二次试管法感染试验见表 1 。 由表 1 可知 , 卵抱白僵菌和顶抱头抱霉对蟒蜡都有毒
效作用 , 以卵抱白僵菌毒效较强 , 在试验期的 30 天内 , 挤蜡感染率 (长出白色菌丝 )为 64 . 6
~ 9 2
.
1%
。 极显著高于顶抱头抱霉和对照 (P < 0 . 0 1 ) 。 卵抱白僵菌和顶抱头抱霉抱子悬液抱
子数有差异 , 是否影响二者毒效的差异则有待研究 。凡感病之虫在死亡数天后虫体长出白色
菌丝 , 据此可判断它是感染致死的 。
衰 1 试管法毒效测定结果
Ta ble 1 R es ul
t o f t o x .c ity by tes t tu be m
e thod
第一次
Fir st
第二次
灰c o n d
卵抱白僵菌 顶抱头抱霉 cK 卵抱白僵菌 顶抱头抱霉 cK
B
.
te ne lld C
. 口‘r 洲 . 口”川爪 B . 忿淞左口 C . 口‘r 曰的窃公“m
抱子浓度 (x 10 7 / m l) 一 一 一 3 . 8 3 . 7 一
Spo
r e s o f su sPe n sio n
供试虫数 4 0 4 0 4 0 3 0 3 0 3 0
G ru bs fo
r te s tin g
长菌丝虫数 3 7 1 8 2 2 0 6 2
G ru bs of g r o w in g m ye eli a
感染率(% ) 92 . 5 4 5 . 0 5 . 0 67 . 0 2 0 . 0 6 . 7
In fe etio n ra te
校正感染率 (% ) 9 2 . 1 4 2 . 1 一 6 4 . 6 1 4 . 3 一
R e e tifie a tio n in fe e tion ra t
e
开始死亡天数 4 7 1 9 7 7 1 7
Da y
s o f eom i雌 in to d e a th
开始长菌丝天数 7 1 3 2 8 11 11 2 2
Da y
s of e o而n g in to
g r o w in g m ye e lia
第一次测验 : 地点在南山牧场草场站 , 时间 : 1” 1 . 4 . 15 ~ 5 . 15 , 试管置于常温下 , 试验期间平均气温
1 6
.
5 ℃ , 空气相对湿度 93 % 。
第二次测验 :地点在湖南农业大学微生物实验室 , 时间 : 1 992 . n . 24 ~ 12 . 30 , 试管置于 16 ℃恒温箱内 。
Flrs t te st : Pa
stu re St atio n o f N a n sh a n S ta te Fa rm
.
1 5
,
A p r一 1 5 . M a y , 1 9 9 1 . A v e ra g e a ir te m p er at u r e
1 6
.
5 ℃ . A ir hu m id ity 9 3 % .
段 c o nd tes t : Mier o r g a n ism L a bo r a t o ry o f H u n a m A g rieu lt u r a lU n iv e r sity . 2 4 , N o v一 3 0 , L随e . , 1 9 9 2 .
C冶n st a n t te m pe ra tu r e 1 6 ℃ in o v e n .
3
.
2 瓶栽枚草法毒效浏定
瓶栽牧草法感染试验见表 2 。表 2 结果显示 : 卵抱白僵菌对挤蜡毒效较强 , 1 个月内感染
率 60 % , 极显著高于顶抱头抱霉和对照 (P < 0 . 01 ) 。
3
.
3 野外草地毒效浏定
表 3 的结果显示卵抱白僵菌和球抱白僵菌的不同处理对蟒蜡都有较强的毒效作用 , 都
2 8 6 草 地 学 报 1 9 9 5 年
表 2 瓶栽牧草法毒效测定结果
T a b le 2 R es u lt o f t o x ie ity b y t he m e thod of pl
a n tin g fo r a g e w ith in Pot s
卵抱白僵菌 顶抱头抱霉
C
. 口‘r曰竹。刀iu m
CK
供试虫数
G r u bs fo r te stin g
长菌丝虫数
G r u bs o f g r o w in g m ye elia
感染率 (环 )
In fe e tio n r a te
校正感染率 (% )
R e e tifie a tio n in fe e tio n r a te
B
.
t洲以勿
4 0
1 7
.
5 2
。
5
1 5
.
4
地点 :南山牧场草场站 , 时间 : 19 1 , 4 , 16 一 5 , 1 6 , 置于常温下 , 试验期间平均气温 16 . 5 ℃ , 空气相对湿
度 9 3 % 。
P a stu r e S t a tio n o f N a n s ha n S t a te F ar m
.
1 6
,
A Pr一 1 6 , M a y , 1 9 9 1 . a v e r a g e a ir te m p e r a t u r e 1 6 . 5 ℃ .
a ir h u m id ity 9 5 %
.
极显著高于对照 (P < 0 . 01 ) 。 其中卵泡白僵菌的三种菌剂用量毒效作用均极显著高于球抱
白僵菌 (P < 0 . 0 1 ) , 20 天 内螃嘈感染率达 70 . 9 %以上 。 卵抱白僵菌的三项处理之间差异不
显著 (P > 0 . 0 5 ) 。
表 3 野外草地毒效测定结果
T a b le 3 R e s u lt o f t o x ie ity in Pa stu re fie ld
卵袍白僵菌 球泡白僵菌
B
. 占山“口”“
CK
B
.
t翻 ella
5泞012512!26860(35..
菌剂用量(克 / m , )
Fu n g i囚w d e r o f u s in g
抱子数量(X l o g / m Z )
S p o re s o f u s in g
供试虫数
G r u b s fo r t es tin g
长菌丝虫数
G r u bs o f g r o w in g m ye e lia
感染率 (% )
In fee tio n r a te
校正感染率(% )
R ec tifie a tio n in fee tio n r a te
2 5 0
6 0 0
5巧03col12f2560(4:73.
1 2 7 2 5 0 5 0
6 0 0 6 0 0
4 3 2 4 3 0
7 2
.
0 7 1
.
7 2
.
7
7 1
.
2 7 0
.
9
地点 : 南山牧场草场站 , 时间 : 1 9 9 3 . 4 . 21 ~ 5 . 1。 , 试验期平均气温 1 6 . 1 ℃ , 空气相对湿度 89 % 。
Pa st u r e S t a tio n o f N a n s ha n S t a te F a rm
·
2 1
,
A Pr
,
~ 1 0
,
M
a y
.
1 9 9 3
.
a v e r a g e a ir tem P e ra tu r e 1 6
·
1 ℃ 。
a ir h u m id ity 8 9 %
.
3
.
4 菌株鉴定
自然感染死亡的蟒蜡尸体表面呈白色棉絮状 (图 1一 1 ) 。 挤蜡被卵抱白僵菌感染后 ,行动
迟缓 , 在虫体的胸 、腹节 、足基部出现微小黑褐色病斑 。虫体僵死后 , 体表长满棉絮状菌丝层 ,
后期为淡黄色并形成粉层状抱子 (图 1 一2 ) , 与自然感染死亡的蟒蜡形状相同 。 取感病虫体上

2 8 8 草 地 学 报 19 9 5 年
子单细胞 , 9 %为长椭园形抱子 ,大小为 3 ~ 6 x l . 6 ~ 2 . 8拌m (图 1 一4 ) , 与卵抱白僵菌的分生
抱子梗及分生抱子形态大小 (图 l 一5) 基本相同 。 根据菌体形态及菌落特征 ,参照文献 (中科
院微生物研究《常见与常用真菌》, 1 9 7 3 ; 中山大学昆虫考古室 , 1 97 2 ) , 鉴定为卵抱白僵菌的
不同菌株 。
4 结论
4
.
1 卵抱白僵菌对草地蟒嘈优势种类鲜黄鳃金龟有较强的毒效作用 , 是防治草地挤蜡的很
有希望的菌株 。
4
.
2 用卵抱白僵菌制成干粉菌剂撒于草地 ,其抱子随雨淋渗入土壤 , 使螃蜡感病致死 , 走生
物治虫之路 , 既收到治虫效果 , 又不污染环境 , 有利于生产无害绿色畜产品 。
参 考 文 献
中国科学院微生物研究《常见与常用真菌 》编写组 , 1 9 7 3 , 常见与常用真菌 , 北京 , 科学出版社 , P . 203 一
2 0 5
中山大学生物系昆虫学教研室编 (试用教材 ) , 1 9 7 2 , 害虫生物防治 , 广州 , 中山大学出版社 , P 240 ~ 2 4
冯清平 、葛瑞昌编 , 198 4 , 微生物应用技术 , 兰州 , 甘肃人民出版社 , P“
张纪忠主编 , 1 9 9 0 , 微生物分类学 , 上海 , 复旦大学出版社 , P 364
A S tu d y o n th e In fe ctio n o f 石触auv e月远
ten el la to G r u bs o n th e Pa stu r e
T u M in yi De
n g F a n g x i
(H u n a n A g ri eu lt u r a l U n iv er sity
,
C h a n g sh a
,
4 1 0 1 2 8)
Liu T a iy o u g
(H u n a n N a n s ha n S t a te Fa rm
,
C h e n g bu Co u n ty
,
4 22 5 12 )
A bs tr a et : A str a in o f B ea u ver 祖 ten lla w
e re se p a ra te d fr o m th e g ru b
, s b仪lie s w h ie h w e r e n a tu ra lly in -
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