全 文 ：武汉植物学研究 2006，24(6)：493—497
Journal of Wuhan Botanical Research
鱼腥藻 PCC7120藻红蓝蛋白 13[亚基体 内重组研究
滕 吟，周 明 ，陈 芳，赵开弘
(华中科技大学环境科学与工程学院，武汉 430074)
摘 要：为了研究藻红蓝蛋白 o【亚基的生物合成途径，通过构建相容的4种重组质粒 pETDuet-pecA、pCOLADuet-
pecE、pCDFDuet-pecF和 pACYCDuet-hol-pcyA，将裂合酶基因pecE和pecF、血红素氧化酶基因 hol、藻蓝胆素合成酶
基因pcyA和脱辅基藻红蓝蛋白 亚基基因pecA共同转入大肠杆菌 BL21(DE3)，通过色素蛋 白锌电泳和光谱检测
表明产生了生物活性的PecA．PCB。结果表明生成的色素藻胆蛋白具有藻红蓝蛋白 -亚基所特有的光谱性质和可
逆光致变色性质。而在裂合酶基因pecE和pecF不转入大肠杆菌的情况下，大肠杆菌内只有 0．1％的 PecA-PCB产
生。以上研究对藻胆蛋白生物构建具有重要意义。
关键词 ：藻红蓝蛋白：PecA；pecE；pecF；体内重组
中图分类号 ：Q784 文献标识码：A 文章编号：1000-470x(2006)06．0493-05
Biosynthesis of a Fluorescent Cyanobacterial Phycoerythrocyanin
Holo-仅Subunit in Escherichia coil
TENG Yin，ZHOU Ming’，CHEN Fang，ZHAO Kai—Hong
(Colege ofEnvironmental Science andEngineering，Huazhong UniversityofScience and Technology，Wuhan 430074，China)
Abstract：The entire pathway for the synthesis of a fluorescent holophycobiliprotein subunit from a photo-
synthetic cyanobacterium (Anabaena sp．PCC7120)was reconstituted in Escherichia coli．Cyanobactefial
genes for enzymes hol and pc were expressed from a plasmid pACYCDuet—ho1-pcyA．Genes for the apo—
protein(Phycoerythrocyanin Ot subunit；pecA)were expressed on a second plasmid pETDuet-pecA．Genes
for the heterodimefic lyase(pe and pecF)that catalyzes chromophore atachment were expressed on a
third plasmid pCOLADuet-pecE an d a fourth plasmid pCDFDuet-pecF．Upon induction，recombinant E．coli
used the cellular pool of heine to produce holo-PecA with spectroscopic properties quMitatively an d quan-．
fitafively similar to those of the same protein produced endogenously in cyanobacteria．However。unlike the
other biliproteins，isolated PEC shows a pronounced reversible photoehemistry。which has been related to
the —subunit(Ot—PEC)．About 0．1％ of the apo．PecA was converted to holo．PecA PCB in a similarly
engineered E．coli strain that lacks pecE an d pecF．
Key words：Phycoerythrocyanin；PecA；pecE；pecF；Reconstitution in vivo
藻胆体(phycobilisome)是存在于蓝藻和红藻中
的一类捕光蛋白复合物，它由藻胆蛋白和连接蛋白
组成。而藻胆蛋白是由藻胆色素(phycobilin)与相
应的脱辅基蛋白中保守性半胱氨酸的巯基以硫醚键
共价结合而成。根据藻胆蛋白的吸收光谱，可分为
藻蓝蛋白(phycocyanin，简称 CPC)、藻红蛋白(phy．
coerythrin，简称 PE)、别藻蓝蛋 白(alophycocyanin，
简称 APC)和藻红蓝蛋白(phycoerythrocyanin，简称
PEC)¨ 。每种藻胆蛋白通常由各 自的(亚基和 B
亚基构成，每个亚基连接着 1—4个辅基色素 ]。
藻胆色素来源于血红素Ⅸ，血红素Ⅸ被氧化而
共轭环断裂形成胆绿素Ⅳ，这一过程是由相应的血
红素氧化酶hol催化 。胆绿素Ⅳ被藻蓝胆素合成
酶pcyA还原和异构化形成特定的藻胆色素 ]。
Landgrafa等通过构建含 hol、pcyA的重组质粒，
在大肠杆菌内实现了藻蓝胆素(简称 PCB)的生物
合成 。最近 Zhao等 发现层理鞭枝藻(Mastigo．
cladus laminosus，也 叫 Fisckre sp．PCC 7603)中
PEC操纵子所编码的裂合异构酶 PecE、PecF催化
PEC Ot一亚基(简称 Ot—PEC)脱辅基蛋白与 PCB的连
接过程，在该酶催化下 PCB异构化为 PVB，并且
PVB与 Ot—PEC脱辅基蛋白PecA偶联，形成具有天
收稿 13期：2006-06-02，修回13期：2006-07．17。
基金项目：国家自然科学基金资助项 目(30540070)。
作者简介：滕吟(1982一)，女，汉族，湖北武汉人，硕士，现在华中科技大学环境学院从事生物技术研究。
· 通讯作者。
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494 武 汉 植 物 学 研 究 第 24卷
然活性的 一PEC[6 】。通常 PEC被认为在活藻体
内(in vivo)只起到吸收和传递光能的作用 ，分离提
纯的 仅一PEC则具有独特的高效可逆光致变色性质，
这种特性表现在其吸收光谱在受到特定波长的光照
射之后发生可逆互变。
本实验室通过构建质粒 pACYCDuet—ho1-pcyA，
实现了在大肠杆菌内生成 PCB。本实验通过分子克
隆技术构建了质粒 pETDuet-pecA、pCOLADuet-pecE、
pCDFDuet-pecF，然后将鱼腥藻 PCC7120中裂合酶基
因pecE和pecF、血红素氧化酶基因hol、藻蓝胆素合
成酶基因pcyA和脱辅基藻蓝蛋白 亚基基因pecA
共同转入大肠杆菌，通过体内重组实验得到具有天
然活性的 一PEC，从而为进一步研究其可逆光致变
色机制，并根据胆素蛋白结构与功能的关系开发出
具有实用性的胆素蛋白分子信息功能材料打下基
础 。
1 材料与方法
1．1 材料与试剂
大肠杆菌菌株1G1、BL21(DE3)由本实验室保存。
表达载体pACYCDuet一1、pCOLADuet-1、pETDuet一1、
pCDFDuet一1购 自Novagen公司。克隆载体 pBlue—
script SK(+)为 Stratagene公司产品质粒。pACYC-
Duet—ho1-pcyA、pBlu-pecA、pBlu-pecE、pBlu-pecF为本
实验室构建。DNA回收试剂盒、T4 DNA连接酶和
限制性内切酶 BamHI、Nco I、Sma I、Pst I、Xho I、
NdeI为 MBI公司产品，Taq酶为 Biostar公司产品，
Im 为 SABC产品，亲和层析介质购 自 Amersham
Pharmaeia公司。引物合成及测序由北京奥科生物
技术有限责任公司完成。
1．2 基因片段的PCR扩增与分子克隆
设计了 6条 PCR引物 Pl、P2、P3、P4、P5、P6，具
体如下。
弓I物 P，：5’一TAC GGA TCC TAT GAA AAC
ACC A，兀’GAC CGA AG-3’；引物 P2：5’一CGG CTG
CAG GAT，兀’A ACT TAA AGC GTI"TAT TGC-3’；引
物 P ：5’一AGG ACC ATG GCT GAA CCT A，兀’CTr
TCT CC一3’；引物 P4：5’一CCG CTG CAG GCA，兀’A
GAG TI"G AATTAA CAA-3’；引物 P ：5’一A，兀’CCC
GGG ATA CAT ATG AAT CAA GCG TCA-3’；弓I物
P6：5’一AAT CTC GAG GCT CTC TGT TCC CTA ACT
CAA -3 ’。
按文献[9]进行操作。PCR使用的模板为本实
验室已经构建好的，并已经过测序和酶活性检测完
整的pBlu-pecA和 pBlu-pecE以及 pBlu-pecF的质粒。
实验中使用的PCR反应体系均为：灭菌水 16．7 、
带 Mg2 的 10×Taq bufer 2．5 L、Mg2 1．0 I．LL、
dNTP 1．0 I．L、上下游引物和膜板各 1．0 I．LL、Taq
DNA聚合酶 0．8；xL。总体积为25 L。
以P 、P 为上、下游引物，pBlu-pecA为模板，经
PCR扩增得到的DNA片段经过 BamHI、P I酶切
后，与同样双酶切的载体 pETDuet-1连接，转化大肠
杆菌 BL21(DE3)，用含氨苄青霉素的平板进行筛
选。根据 PCR、酶切、蛋白质电泳检验后，测序鉴定
阳性克隆，得到重组质粒 pETDuet-pecA。
以P P 为上、下游引物，pBlu-pecE为模板，经
PCR扩增得到的 DNA片段经过 Nco I、 t I酶切
后，与同样双酶切的载体 pCOLADuet一1连接，转化
大肠杆菌 BL21(DE3)，用含卡那霉素的平板进行筛
选。根据 PCR、酶切、蛋白质电泳检验后，测序鉴定
阳性克隆，得到重组质粒 pCOLADuet-pecE。
以P P 为上、下游引物，pBlu-pecF为模板，经
PCR扩增得到的 DNA片段经过 Sma I、Xho I酶切
后，与同样双酶切的载体 pBlueseript SK(+)连接，
然后转化至大肠杆菌 TG1。通过 PCR扩增和双酶
切进行检验，初步鉴定正确后进一步通过基因测序
检验。然后导人表达载体 pCDFDuet．1，转化至大肠
杆菌 BL21(DE3)，用链霉素平板进行筛选，得到重
组质粒 pCDFDuet-pecF。
1．3 转化与蛋白质表达
将质粒 pETDuet-pecA、pCOLADuet-pecE、pCDF．
Duet-pecF和 pACYCDuet-ho1-pcyA共同转化大肠杆
菌 BL21(DE3)，用含氨苄青霉素、卡那霉素、链霉素
和氯霉素的平板筛选。
将质 粒 pETDuet-pecA 和 pACYCDuet．ho1-pcyA
共同转化大肠杆菌 BL21(DE3)，用含氨苄青霉素和
氯霉素平板筛选。
将含各种表达质粒的 BL21(DE3)分别在 37~C
培养至 OD锄约为0．5，20~C水浴中放置 1 h，加入
IPTG至终浓度为 1 mmol／L，20~C低温诱导 12 h后
离心收集细胞，二次蒸馏水洗2次，一20~C保存。
1．4 重组蛋白的超声破碎、提纯和透析
表达载体pETDuet一1中rI7启动子下游有6个组氨
酸的密码子，因此构建的重组质粒 pETDuet-pecA在
大肠杆菌中诱导表达得到的外源融合蛋白 N端带
有 6个组氨酸，故可采用亲和层析法提纯。将冻存
的细胞重悬于0．5 mol／L NaCI、20 mmol／L磷酸钾缓
冲液(pH 7．2)中，超声 7 min，离心得到上清，重组
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第 6期 滕 Ⅱ争等：鱼腥藻 PCC7120藻红蓝蛋白O-亚基体内重组研究 495
蛋白上清液采用镍螫合层析柱纯化。柱平衡洗脱液
为0．5 moL／L NaCI、20 mmol／L磷酸钾缓冲液(pH
7，2)，洗脱杂虽白采用50 mm0 L眯唑、0．5 mol／L
NaCI、50 mmol／L磷酸钾缓冲液(pH 7．2) 收集色素
蛋 白采 用 500 n砷0L／L 眯唑、0．5 mo1／L NaCI、
50 mmol／L磷酸钾缓冲液(pH 7．2)。经过过柱提纯
的蛋白采用0．5 mol／LNaCI、50mmol／L磷酸钾缓冲
液(pH 7．2)透析4 h，以除去小分子杂质
1．5 SDS—PAGE检测与色素蛋白锌电泳
蛋自制样后进行SDS—PAGE分析以及色素蛋白
锌电泳 方法见文献[9，10
1．6 光谱测定
吸收光谱用 Perkin Elmer Lambda 25型紫外可
见光谱仪，紫外可见光谱扫描范围 300～800 Bm，扫
描速度960 nm／min，狭缝宽度 1．0 nm。荧光光谱用
Perkin Elmer I．$45型荧光光谱仪，荧光光谱扫描速
度 1 200 nnr／min．狭缝宽度 5．0 nm。
1．7 色素聋白变性实验
为进一步确定重组产物中色素的种类和性质
采用酸性脲(8 molfL，pH=2)使其变性，紫外可见
光谱检测变性后的色素蛋白质 这时蛋白质与色素
间的作用很弱，色素基本呈游离时的结构状态，色素
蛋白质的吸收光谱与游离色素的吸收光谱很相似，
因此从吸收峰最大值可以判断色素的种类和眭质
2 结果
2．1 基因的克隆与蛋白质的表达
由引物P 和P1扩增出大小为489 bp的基因片
段．扩增片段经琼脂糖凝胶电泳、试剂盒回收后，用
BamHI、 I双酶切，与 同样双酶切的表达载体
pETDuet一1连接 重组质粒 pETDuet-pecA以酶切和
PCR检测。电泳结果与预期符合(图 1)
由引物P，和P 扩增出大小为762 bp的基因片
段，扩增片段经琼脂糖凝胶电泳、试剂盒回收后，用
Neo I、 f I双酶切，与同样双酶切的表达载体 pCO．
L~Duet一1连接。重组质粒 pCOL／kDuet-pecE以酶切
和PCR检测。电泳结果与预期符合(图1)。
由引物P 和P 扩增出大小为522 bp的基因片
段，扩增片段经琼脂糖凝胶电泳、试剂盒回收后，用
SmaI、Xho I双酶切，与同样双酶切的克窿载体
pBluescfipt SK(+)连接 重组质粒 pBlu-pecF以酶
切和PCR检测。用 NdeI、XhoI双酶切重组质粒
pBlu-pecF，酶切片段经琼脂糖凝胶电泳、试剂盒回收
后，与同样双酶切的表达载体 pCDFDuet一1连接。重
冈
1：DNA标准分子艟：2：pE。r1)uet-gea4 Pc刚鸯测 3：p啪’Duet-pecA
晦蜘；4：pCOl_~．Duet-peeE PCR桅测；5：pCOLA1)uet-pecE酶啊；
6：pBlu-?ecF PCR检剽；7：pCDFDuet-gecF~切产物
1：DNA ladder；2：PCR of pEr1)uet-pe~．1；3：pEn ^dighted
by Bamtil and Pst；4：FCR of Ec0『lADuet-petE；5：pCOLkDuet—
pecE digested by№ 1 and PstI；6：Pcl{of pBlu-b,~：／"；7：pCDF—
Du*t-peeF digested by,aidel and I
围 1 peeA、pecE,peeF的琼脂糖凝肢 电泳
Fig．1 AgIt~o$e gel eleetropboresis of pet4，petE and pecF
组质粒 pCDFDuet-pecF通过 Nde I、Xho I双酶切梭
测 电泳结果与预期符合(图 I)
测序结果表明．通过分子克隆得到的片段序列
与实际序列完全一致。
pETDuet-ped 、pCOLtDuet-pecE、pCDFDuet-pecF
均以大肠杆菌 BL21(DE3)为宿主菌进行表达 菌
种在20 、1 mmol／L IPTG的诱导条件下，振荡培
养6 h。菌体通过 SDS—PAGE电泳，考马斯亮蓝 R．
250染色，检测到了目的蛋白的表达(见圈2) 结
果表 明：pETDuet-pecApCOL,kDuet-petE、pCDFDuet—
pecF转化菌经IPTG诱导后出现了十分明显的外源
kD J 2
誓
： — — ◆
二 一 ．
⋯
．事．I
● · ●_ ● I 4
1：pETDtJet-pea4未诱导表逃产物；2：pETDtJet-pecA诱导裘达产
物；3：pCOLADuet-pecE未诱导表达产物；4：pCOLa．Duel-p~E诱
导表达产物；5：ElcDFDuet-pecF未诱导表达产物；6：pCDFDuet一
，诱导表达产物；7：蛋白质标准分子量
I：pETDuet-tu fa not ind~ed with jP1G：2：pETDuet-pet：4 induced
"*dth IPTG；3：pCOLADuet-pecE not induced tlI IPTG；4：pCOL~一
Duet-petE induced Ⅵ 【h IPI。C：5，pCDFDuel-pecF not induced vHlh
I-~G ；6：pCDFDuet-~ F induced with 1P1_c ：7：Protein molecular
eisht standard marker
圈 2 pETDuet-pecA、pCOLADuet-pecE、
pCDFDuet-pecF表达产物的SDS·PAGE谱圈
Fig．2 SDS·PAGE of p盯 D ．pcOLADuet—pecE
and pCDFDuet-pecF
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496 武 汉 植 物 学 研 究 第 24卷
蛋白质表达带，pETDuet-pecA、pCOLADuet-pecE、pC—
DFDuet-pecF蛋 白质 分 子 量 大 小分 别 为 20 kD、
28 kD、19 kD，与预测分子量吻合。其中pCDFDuet—
pecF表达量很小(图2)。
2．2 光谱分析
重组体 系I：将pETDuet-pecA、pCOLADuet-pecE、
pCDFDuet-pecF和 pACYCDuet—hol-pcyA共同转化大
肠杆菌 BL21(DE3)。表达菌诱导培养，离心收集细
胞后按照 1．4的方法对重组蛋白进行超声破碎、提
纯和透析。对透析后的产物做吸收光谱检测，经过
500 nln单色光照射5 min，得到的色素蛋白质最大
吸收光谱为570 nln，称为P570。当用570 nm单色
光照射 5 min，得到最大吸收光谱为500 nm，称为
P=5oo(图3：b)。可逆光致变色性质与层理鞭枝藻
(Mastigocladus laminosus PCC 7603)藻红蓝 亚基
相同，表明所得可逆光致变色现象是由鱼腥藻(Ana—
baena PCC 7120)藻红蓝 亚基所致。荧光光谱检
测产物为单一吸收峰，其荧光在 580 nln左右(图3：
a)，荧光与层理鞭枝藻藻红蓝 亚基相似。由光谱
可知 —PEC的吸收峰在 5004-+570 nm间发生位移，
活性高达 80％以上。总之，根据层理鞭枝藻藻红蓝
亚基光谱性质与鱼腥藻藻红蓝 亚基相似可知，
所表达的PecA、PecE／F为鱼腥藻藻红蓝蛋白 亚
基 PecA、裂合异构酶PecE／F。尿素变性后，P570和
P=5oo分别在 594 nln处和538 nm处出现最高吸收
峰，可以判断连接上两种分子构型不同的 PVB，
即前者为顺式构型，后者为反式构型的 PVB(图 3：
C，d)。
重组体 系 Ⅱ：将 pETDuet-pecA和 pACYCDuet—
h,1-pcyA共同转化大肠杆菌 BL21(DE3)。对提纯
后的重组蛋白分别进行荧光光谱和吸收光谱检测，
发现很微弱的荧光光谱发射峰在 580 nm左右，吸收
光谱未见明显的500+-+570 nm可逆光致变色性质。
说明在没有裂合异构酶的催化下，此色素蛋白质中
PCB色素与脱辅基蛋白相互作用很弱。
天然的层理鞭枝藻藻红蓝蛋白的荧光量子产率
为0．27，以此为相对标准计算体内重组产物 PecA．
PCB的荧光量子产率为0．21(-I0．01)。
根据色素蛋白在酸性尿素(pH 2．0，8 mol／L尿
素)中的色素PCB的摩尔消光系数 8鲫 =35500 L·
cm／mol以及公式A=8·L·C计算摩尔消光系数，算
得体内重组产物 PecA—PCB在 P570构型的摩尔消
光系数为 570=0．9174(±0．O1)×10 L·cm／mol，在
构型 P5oo的摩尔消光系数 850o=1．035(±0．01)×
150
3
蠹100
2
宝 5O
o
0．6
兰
0．4
g
∞
蛊0．2
O O
550 600 650 700 300 4O0 500 600 700 800
Wavelength(nm) Wavelength(舢 )
0·5
3 0·4
重0．3
0．2
最0
． 1
0．5
0．4
0_3
0．2
0．1
300 400 500 600 700 800 300 40 0 500 600 700 800
Wavelength(nm) Wavelength(nm)
a：荧光光谱；b：500 nm光照(实线)。570 nln光照(虚线)的吸收
光谱(500—570 nm)和差减光谱(点线)；c：500光照变性前(实
线)后(虚线)吸收光谱；d：570光照变性前(实线)后(虚线)吸
收光谱
a：Fluol~scenee emission spectrum of reconstituted product(exeita·
tion wavelength 550 nln)；b：Absorption spectra after irradiation with
500 nnl light(solid lne)，after subsequent irradiation with 570 nm
light(dash line)and diference absorption of 500 nm iradiation mi．
nU8 570 nln iradiation(dot line)；C：Before denaturation(solid line)
and after denaturation(dashline)with 500 nlnlight；d：Before dena—
turafion(solid lne)and after denaturation(dash line)with 570 nm
light
图 3 脱辅基蛋白 PecA在裂合异构酶 PeeE／PecF的
催化下体内重组生成产物的吸收光谱
Fig．3 Absorption spectra of reconstituted products
of PecA with PecE／PecF
10 L ·cm／mol。
通过比较重组体系 I和重组体系 I，发现在大
肠杆菌内鱼腥藻藻红蓝蛋 白 亚基有一定的自催
化能力，通过荧光激发光谱计算其 自催化 比例为
0．1％ 。
2．3 色素蛋白锌电泳
由于色素可与zn 形成螯合物，该螯合物在一
定波长光激发下发射荧光。将重组体系 I的细胞、
超声上清、提纯蛋白分别制样后进行 SDS．PAGE电
泳和色素蛋白锌电泳，发现在蛋白 PecA相对应的
位置有桔色荧光。这证明在体内脱辅基蛋白与色素
共价连接成功，得到色素蛋白PecA PCB(图4)。
3 讨论
在以前的工作中我们已经通过体外合成出了鱼
腥藻藻红蓝蛋白 亚基脱辅基蛋白和裂合异构酶
PecE／F，并重组得到具有天然活性的藻红蓝蛋白
亚基。根据不断深入的研究我们知道藻红蓝蛋白
亚基脱辅基蛋白是在裂合异构酶PecE／F的催化下
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第6期 滕 畸等：鱼腥藻PCC7120藻红蓝蛋白Ⅱ亚基体内重组研究 497
i 1 l
l 1
． 鳓 郴 确
A B
A：重组产物考马斯亮蓝染色电泳圈 1：蛋 白质标准分子量；
2：重组维胞 3：重组上清；4：重组提纯 5：pETDuet-pecA污导表
达产物 B：重组产物的锌荧光。6：pEqDuet-pea4诱导表述产物；
7：重组细胞；8：重组上将；9：重组提纯
A：PCB-PecA C~ sJe—atained 1：Mad~er p~tleins；2：Cel；3：sc卜
Iudon；4：Purified；5：pETDuet-peeA induced with IfrfG． B：Zn ’
一 induc flu~ ence 0f PCB-PecA．6：pErDuel—刚 indueed th
IP1’C：7：Cel1：8：Solufi~ ：9：Pu
围 4 重组体 系 I的 SDS·PAGE 电泳 cA)和
色素蛋白锌电诛cB)
Fig 4 PCB—PeeA t2oonlfl6$ie—staltmd(A)and
Zn“ ．induced fluorescence of PCB．PecA (B)
通过第 84位半胱氨酸与色素 PCB连接并使其异构
成PVB，重组蛋白的可逆光致现象也是由于 PVB第
15，16位发生顺反异构的结果。为了进一步验证这
一 性质在蓝藻中的普遍性，我们选取了同样具有藻
红蓝蛋白的鱼腥藻．通过体内重组对比可知鱼腥藻
藻红蓝蛋白d亚基脱辅基蛋白和裂合异构酶PecE／
F也表现了同样的性质，进一步映证了藻红蓝蛋白
的可逆光致变色性质 本研究表明体内重组制备的
一PEC具有更高纯度和更好的光谱性质。
本实验为了完成 一PEC的生物合成，首先要在
大肠杆菌内实现藻蓝胆素(简称 PCB)的生物合成，
即构建含 Iml、pcy；4的重组质粒；其次为构建含裂合
酶基因pecE和pecF的重组质粒；最后就是构建含
pecA的重组质粒。
因为质粒 pETDuet一1、pCOL~．Duet_J、pCDFDuet一
1、pACYCDuet一1含有不同的复制子，所以它们具有
相容性 ，我们将相应的质粒组合 pETDuet-pecA、
pCOLS~Duet-pecE、pCDFDuet-pecF 和 pACYCDuet—
J-peyA共同转化大肠杆菌 BL21(DE3)，体 内产生
的PCB在 PecE和PecF蛋白的催化下共价连接到
PecA第84位半胱氨酸的巯基上
在缺少 pCOLADuet-pecE、pCDFDuet-pecF的大
肠杆菌内也检测到很少量的有生物话性的 PecA—
PCB，所以在生物体内 PecA与 PCB能进行一定程
度的自催化连接反应并形成天然产物，通过荧光光
谱计算其白催化比例为0．1％
通过本实验实现了在大肠杆菌体内合成具有生
物活性的藻红蓝蛋白 亚基，从而提高了对藻胆体
组装过程的认识 。
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