全 文 ：武汉植物学研究 2004，22(5)：473~476
Journal of Wuhan Botanical Research
藏药椭圆叶花锚中抗肝炎有效成分的含量测定
纪兰菊 ，吉文鹤 ，陈桂琛 ，代冬海 ，杨艳蓉
(1．中国科学院西北高原生物研究所，西宁 810001，2．青海普兰特藏药研究所，西宁 810007)
摘 要：运用RP—HPLC建立了花锚中青兰苷、去甲氧基花锚苷和花锚苷的含量分析方法，为栽培花锚替代野生花
锚入药提供一定的科学依据。花锚苷、去甲氧基花锚苷和青兰苷分别在 0．68～3．4O g(r一0．999 8)、0．36～
1．80 g(r一0．999 O)和 0．80～4．00 g(r一0．997 9)有良好线性关系，平均回收率分别为 100．39％ (RSD一
2．60％)、99．79 oA (RSD=3．55 oA)和 100．71％ (RSD=2．19 oA)。栽培花锚中花锚苷和去甲氧基花锚苷的含量(抗
肝炎活性成分)和在野生花锚中的含量相比无明显差别，可以初步证明栽培花锚可以替代野生花锚入药。
关键词 ：椭圆叶花锚；花锚苷；去甲氧基花锚苷；青兰苷
中图分类号 ：Q946；R284．2 文献标识码 ：A 文章编号：1000—470X(2004)05—0473—04
Determination Compounds of Antihepatitis—haleniaside
in Tibet Herb of Halenia ellipitica D．Don
JI Lan—Ju ，JI Wen—He ，CHEN Gui—Chen ，DAI Dong—Hai。，YANG Yan—Rong。
(1．Northwest Plateau Institute ofBiology。TheChinese Academyof Sciences，Xining 810001，China’
2．Qinrghai Plateau Instituteof Tibet Herbs，Xining 810007，China)
Abstract：The quantitative analysing method of luteoloside，demethoxyhaleniaside and halenia—
side in H alenia ellipitica D．Don was set up by RP—HPLC，and this can provide scientific basis for
cultivated halenia to replace wild halenia use as medicine． The standard curves of luteoloside．
demethoxyhaleniaside and haleniaside showed good linearity over the range of 0．68—3．40 g(r一
0．999 8)，0．36—1．8O g(r=0．999 0)and 0．8O一4．OO g(r一0．997 9)，respectively．The average
recovery was 100．39 (RSD 一 2．60 )，99．79 (RSD 一 3．55 )and 100．71 (RSD一
2．19 )，respectively．The content of haleniaside and demethoxyhaleniaside(compounds of anti—
hepatitis)has no obvious difference between in wild and in cultivated halenia，and get the prelimi—
nary testimony that cultivated speciecan replace wild specie to use as medicine．
Key words：Halenia ellipitica D．Don；Haleniaside；Demethoxyhaleniaside；Luteoloside
椭圆叶花锚(Halenia elipitica D．Do n)为龙胆
科(Gentianaceae)花锚属植物，为藏医药系统中用
于治疗肝胆系统疾病的常用植物药之一，泛称“藏茵
陈，L¨。花锚的主要化学成分为口山酮(Xanthone)、黄
酮 (Flavone)和三萜(Triterpene)类化合物，已经分
离鉴定了 15种口山酮和黄酮成分[2 ]，其中抗肝炎有
效成分为口山酮苷花锚苷(Haleniaside)和去甲氧基花
锚苷(Demethoxyhaleniaside)[2]，对花锚有效成分含
量的研究也有较多报道[5 ]。本试验通过反相高效液
相色谱法建立了测定野生和栽培椭圆叶花锚中青兰
苷、去甲氧基花锚苷和花锚苷含量的方法，并且为栽
培花锚替代野生花锚入药的可行性提供了初步的科
学依据。
1 仪器、试剂、材料及供试 品与 标 准品的 配制
LC—IOATvp-"：~泵(岛津)；Rheodyne 7725进
收稿日期：2003—09—26，修回日期：2004—06—25。
基金项目：国家中西部重点项目(2001BAg01A47)资助。
作者简介 ：纪兰菊(1952一)，女，北京人，副研究员，主要从事藏药药化研究工作．
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474 武 汉 植 物 学 研 究 第 22卷
样器(美国)；SPD—M10AVP二极管阵列检测器(岛
津)；Class—VP液相色谱工作站(岛津)；2200B超声
波仪；M ：1：Q超纯水装置 ；C18硅胶小柱(1 mL，
Waters)。HPLC级乙腈购自美国Tedia公司；分析
纯 甲醇、磷酸购自上海化学试剂公司。花锚苷(纯度
为 96 0A)、去甲氧基花锚苷 (纯度为 98 )、青兰苷
(纯度为 95 0A)的对照品由中国科学院西北高原生
物研究所孙洪发教授提供。
野生椭圆叶花锚药材(花后期)自行采集(2002—
09)；栽培花锚药材采 自栽培基地——青海省湟中县
群加乡。花锚药材全株剪碎，置超微粉碎机中粉碎 1O
min，精密称取 0．5 g，置 100 mL锥形瓶中，加甲醇
20 mL，置 80~C水浴锅上回流 2 h，放冷至室温，过
滤，滤液于 25 mL容量瓶中，用甲醇定容；摇匀后经
C 。硅胶小柱做脱脂处理，先用 5 mL蒸馏水活化小
柱，即用 5 mL甲醇淋洗，再用 10 mL蒸馏水洗脱后，
E
≤ 暑
l匕 ’；
兰
墨<
将样品提取液直接上柱，弃取初滤液，收集续滤液上
机分析。分别精密称取花锚苷、去甲氧基花锚苷和青
兰甘1．70 mg、0．90 mg和 2．O0 mg用 甲醇定容 至
10 mL容量瓶中，配制成浓度为0．17、0．09 mg／mL
和 0．20 mg／mL的对照品溶液。
2 色谱条件
色谱 柱：VP—ODS c18柱(5／zm，150 mm×
4．6 ram)；流动相：由乙腈一水一磷酸(1‰)组成 流速
1．0 mL／min；梯度洗脱程序为 O～5 min，乙腈的体
积分数(下同)为 12 ；5～15 min，乙腈由12 线性
增加至 15 ；15～4O rain，乙腈由 15 线性增加至
35 ；检测波长 254 rim；柱温：室温。色谱分离图及花
锚苷、去甲氧基花锚苷和青兰苷的紫外光谱图分别见
图1和图 2。
保留时问 (mm1
Retention time
a：对照品；b：野生花锚药材；C：栽
培花锚药材。1：青兰苷 ；2：去甲氧
基花锚苷 ；3：花锚苷
a：Authentic material；b：W ild
specie；C：Culitivated specie．
1：Luteoloside；2：Demethoxy—
haleniaside；3：Haleniaside
图 l 样品及对照品的 HPLC图谱
Fig．1 HPLC chromatogram of
sample and authentic material
200
至_主．。
兰
<
O
保留时间 (mm1
Retention time
：4 ．一 叶八 。 ／＼ ，
0 5
保留时问 (mm)
Retention time
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第 5期 纪兰菊等：藏药椭圆叶花锚中抗肝炎有效成分的含量测定 475
重
运言
《
重
道言
差
3
《
E
j型
波长 (^nm)
Waveletlgth
a．花锚苷I b．去 甲氧基花锚苷 l C．青兰苷
a．Haleniaside；b．Demethoxyhaleniaside；
C．Luteoloside
图 2 紫外光谱图
Fig．2 Figure of UV spectrum
3 方法与结果
线性关系考察 分别精密吸取花锚苷、去甲氧
基花锚苷、青兰苷对照品1、2、3、4 mL置 5 mL量
瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，吸取上述溶液，分别进样
2o L，以进样量为横坐标，各自的峰面积积分值为
纵坐标，进行线性回归，回归方程分别为花锚苷：
一一106 848+2 914 082x，，．一0．999 8；线性范围：
0．68～3．4O tg；去甲氧基花锚苷：Y=9 868．5+
3 561 361．9x，r： 0．999 O；线 性 范 围：0．36～
1．8O P-g；青兰 苷 Y一481 391+4 930 041．5x，，．一
0．997 9；线性范围：0．80"-4．O0 g。
精密度试验 以同一混合对照品溶液进样，每
次 2O L，重 复 5次；花锚 苷 峰面 积 的 RSD 为
1．7 9，6，去甲氧基花锚苷峰面积的 RSD为 4．O ，青
兰苷峰面积的RSD为5．1 。
重现性试验 精密称定同一批样品，按供试品溶
液制备方法分别制备 5份供式品溶液，分别测定，结
果花锚苷含量的RSD为 4．89 ，去甲氧基花锚苷含
量的RSD为4．7O ，青兰苷含量的RSD为2．62 。
回收率试验 取已知含量的药材适量，加入一定
量的花锚苷、去甲氧花锚苷、青兰苷对照品溶液，按样
品制备方法制备，上机分析，测得回收率见表1。
表 1 回收率试验
Table 1 Test of recovery rate
回收率 Recoveries(％)
s
黼
ampl
H 蠹 aleniaside 1 花锚苷 蔫 慧青善苷 pni^idLuteolslde
样品测定 吸取各供式品溶液 2O L，分别平
行进样 4次，测定花锚苷、去甲氧基花锚苷、青兰苷
的峰面积积分值，用外标法计算含量，结果见表2。
表 2 花锚(野生与栽培)药材中花锚苷 、
去甲氧基花锚苷、青兰苷的含量
Table 2 The content of haleniaside，demethoxyhaleniaside
and luteoloside in wild and cultivated
of H alenia ellipitica D．Don
采集地点
C：ollection
place
去甲氧花
类型 花锚苷( )锚苷( )青兰苷(％)
Type haleniaside demethoxy—luteoloside
haleniaside
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476 武 汉 植 物 学 研 究 第 22卷
4 讨论
在紫外图谱中，花锚苷甲醇溶液 为 260 nm，
去甲氧花锚苷甲醇溶液 为250 nm，青兰苷甲醇
溶液 为 255 nm、340 nm。选择 254 nm检测，可
同时兼顾 3种被测物质的最大吸收度，且其它物质
峰形对称，基本达到基线分离，故选择 254 nm为检
测波长。用乙腈一磷酸一水系统为流动相，因乙腈为无
末端吸收，梯度洗脱时与单纯使用甲醇一水系统 比
较，基线较平稳，加入磷酸改善了峰形的拖尾，保证
95 以上的峰达到基线分离，3种含量测定的峰，分
离度均大于 1．0。采用 HPLC法测定花锚药材中主
要水溶性成分中抗肝炎有效成分 口山酮苷类的花锚
苷与去甲氧花锚苷及黄酮类成分青兰苷，同时进行
紫外光谱的鉴定(见图 2)。笔者对色谱分离条件和
测定方法进行了考察，证明该方法简便、准确、稳定，
可以作为藏药花锚品质评价的方法之一。
表 2所示结果表明，在野生花锚中去甲氧基花
锚苷的含量高于花锚苷的含量，并且青兰苷的含量
在野生和栽培花锚中的含量总比花锚苷和去甲氧基
花锚苷低，栽培花锚中花锚苷和去甲氧基花锚苷(抗
肝炎活性成分)的含量与在野生花锚中的含量相比
无明显差别。色谱分离图表明除花锚苷、去甲氧花锚
苷、青兰苷以外的其它水溶性成分的保留时间、峰形
也基本一致。我们的结果可以初步证明栽培植物藏
药花锚可代替野生花锚入药。
参考文献 ：
[1] 江苏新医学院编．中药大辞典(3z册)[M]．上海 ：上
海人民出版社 ，1975．1 060．
[2] 孙洪发 ，胡伯林 ，丁经业 ，樊淑芬．花锚的三种新口山酮
苷[J]．植物学报，1987，29(4)：422—428．
[3] 孙洪发，胡伯林，樊淑芬，丁经业．花锚的三个新咄 酮
[J]．植物学报，1983，25(5)：460—467．
[4] Dhasmana H，Grag H S．Two xanthone glucosides
from Halenia ellepitica D．Don[J]．Photochemistry，
l989，28(10)：2 819—2 821．
[5] 高光跃，李鸣，冯毓秀，谭沛．11种獐牙菜及近缘植物
中有效成分的高效液相色谱测[J]．药学学报，1994，
29(12)：9i0—9l4．
[6] 胡凤祖，宋娅莉，刘梅，师治贤．青藏高原龙胆科植物
药用有效成分的高效液相色谱分析[J]．色谱，2003，
21(1)：63—65．
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