全 文 ：作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2012, 38(9): 1592−1606 http://www.chinacrops.org/zwxb/
ISSN 0496-3490; CODEN TSHPA9 E-mail: xbzw@chinajournal.net.cn

本研究由国家航天育种工程(发改高技[2003]138号), 国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2012AA100402), 农业部农业公益性行
业科研专项(201103007)和国际原子能机构项目(CRP14195, RAS5056)资助。
* 通讯作者(Corresponding authors): 刘录祥, E-mail: luxiang@263.net.cn, Tel: 010-62122719; 赵宝存, E-mail: baocunzh@126.com
第一作者联系方式: E-mail: sujie1020@126.com, Tel: 010-82108591 **同等贡献(Contributed equally to this work)
Received(收稿日期): 2012-04-01; Accepted(接受日期): 2012-06-06; Published online(网络出版日期): 2012-07-03.
URL: http://www.cnki.net/kcms/detail/11.1809.S.20120703.0858.201209.0_005.html
DOI: 10.3724/SP.J.1006.2012.01592
小麦叶绿素缺失突变体Mt6172及其野生型叶片蛋白质组学双向差异
凝胶电泳分析
宋素洁 1,2,** 古佳玉 2,** 郭会君 2 赵林姝 2 赵世荣 2 李军辉 2
赵宝存 1,* 刘录祥 2,*
1 河北师范大学生命科学学院, 河北石家庄 050024; 2 中国农业科学院作物科学研究所 / 国家农作物航天诱变技术改良中心 / 农作
物基因资源与基因改良国家重大科学工程, 北京 100081
摘 要: 以空间环境诱变获得的小麦叶绿素缺失突变体 Mt6172 的白化苗及其野生型邯 6172 的叶片为材料, 进行双
向差异凝胶电泳(2D-DIGE)蛋白质组学分析。在 1 645个蛋白点中, 发现 100个差异 1.5倍以上的蛋白点, 对在分析胶
中得到的 85个点进行质谱鉴定, 最终鉴定出 29种差异蛋白的 62个差异点, 其中 50个表达下调, 12个表达上调, 可
分为 10个功能群。表达下调的蛋白主要定位于叶绿体中, 包括光系统 I、光系统 II、NAD(P)H脱氢酶复合体和 ATP
合酶的部分亚基, 以及参与卡尔文-本森循环、糖代谢和应激反应的蛋白。非叶绿体蛋白中的大部分表达上调, 主要
参与抗氧化反应、转录激活和蛋白质折叠等途径。初步推断, 光合作用主要蛋白复合体的缺失、叶绿体抗氧化能力
的下降和叶绿体 RNA转录后编辑途径受阻等可能是 Mt6172白化致死的重要原因。
关键词: 小麦(Triticum aestivum L.); 叶绿素缺失突变体; 空间诱变; 双向差异凝胶电泳技术(2D-DIGE); 蛋白质组学
Proteomic Analysis of Leaves of the Chlorophyll-Deficient Wheat Mutant
Mt6172 and Its Wild-Type through 2D-Difference Gel Electrophoresis
SONG Su-Jie1,2,**, GU Jia-Yu2,**, GUO Hui-Jun2, ZHAO Lin-Shu2, ZHAO Shi-Rong2, LI Jun-Hui2, ZHAO
Bao-Cun1,*, and LIU Lu-Xiang2,*
1 College of Life Science, Hebei Normal University, Shijiazhuang 050024, China; 2 Institute of Crop Sciences, Chinese Academy of Agricultural
Sciences / National Center of Space Mutagenesis for Crop Improvement / National Key Facility for Crop Gene Resources and Genetic Improvement,
Beijing 100081, China
Abstract: Two-dimensional difference gel electrophoresis (2D-DIGE) proteomic approach was used to identify differentially
expressed proteins in the leaves of chlorophyll-deficient wheat mutant Mt6172 derived from space environment mutagenesis. A
total of 1 654 protein spots were detected, of which 100 spots showed 1.5-fold or higher volume ratio in the leaves of Mt6172 or
its wide-type H6172. Eighty-five spots subject to mass spectrometry and 62 spots representing 29 distinct proteins were identified
and classified into 10 functional groups. Among these differential proteins, 50 were down-regulated and 12 were up-regulated.
Most of the down-regulated proteins were located in the subcellular system of chloroplast, including the subunits of PSI, PSII,
NAD(P)H dehydrogenase complex and ATP synthase, and the proteins involved in Calvin-Benson cycle, glucose metabolic proc-
ess and stress responses. Compared to the proteins in chloroplast, the identified non-chloroplast proteins were mainly up-regulated,
including the proteins involved in response to oxidative stress, transcriptional activation, and protein folding process. The results
suggested that the early death of the albino phenotype of Mt6172 might result from the deficiency of main photosynthesis protein
complexes, the decrease of chloroplast antioxidant capacity, and the obstacle of post-transcriptional modification process for
chloroplast RNAs.
Keywords: Wheat (Triticum aestivum L.); Chlorophyll-deficient mutant; Space mutagenesis; Two-dimensional difference gel
electrophoresis (2D-DIGE); Proteomics
第 9期 宋素洁等: 小麦叶绿素缺失突变体 Mt6172及其野生型叶片蛋白质组学双向差异凝胶电泳分析 1593


叶绿素缺失突变是植物中常见的一种突变类
型。已发现白化 [1]、黄化 [2]、条纹 [3]、黄绿 [4]、浅
绿[5]、亮绿[6]、灰绿[7]等多种叶绿素缺失突变体。自
然突变和人工诱发突变均可能导致植物叶绿素缺失
突变。尽管突变机制不尽相同, 但最终都会导致植
物叶绿素代谢过程中的某个或多个酶活性变化, 使
植物叶绿素合成或叶绿体发育异常, 叶色变异。原
质体分化过程[8]、叶绿素生物合成过程[9]、光合作用
膜蛋白复合体结构[10]、脂肪酸合成过程[7]等异常都
可能引起植物叶绿素缺失突变。叶绿素缺失突变可
以作为种质资源筛选标记[11]、优良种质资源[12]、植
物光合作用 [13]和叶绿素生物合成 [14]等研究的理想
材料。因此, 发掘植物叶绿素缺失突变体, 并研究其
突变机制具有重要意义。
目前已在水稻[2]、大麦[5]、小麦[15]、玉米[4]等多
种作物中发现叶绿素缺失突变体。小麦是异源六倍
体植物, 其突变机制较为复杂, 需要从基因组学、蛋
白质组学等多方面入手研究。基因的功能是通过蛋
白质的表达实现的, 对植物蛋白质组学的研究将有
助于阐明植物的突变机制[16], 但小麦基因组测序尚
未完成, 直接从基因组学研究小麦突变机制较为复
杂。
2D-DIGE 技术是利用 cy2、cy3、cy5 等不同荧
光染料标记多个蛋白样品, 然后将标记的蛋白样品
混合, 在同一张胶上电泳, 最后根据不同的荧光信
号得到每个样品的电泳图谱, 克服了不同蛋白图谱
间的差异问题。另外, 2D-DIGE 技术将所有蛋白样
品等量混合后作为内标, 根据内标矫正蛋白点的表
达丰度, 保证了每个蛋白点的真实性。与传统的双
向电泳相比 , 差异凝胶电泳(2D-DIGE)技术 [17]具有
灵敏度高和动力学范围广的优点。Gao 等 [18]利用
2D-DIGE技术, 对 2个面包小麦 Jing 411和 Sunstate
的非醇溶蛋白的表达情况进行分析, 共鉴定出 36个
可能与小麦品质相关的蛋白。另外, 2D-DIGE 技术
还被利用在小麦盐胁迫应答分子机制的研究中[19]。
目前, 对小麦叶绿素缺失突变体叶片总蛋白的
研究报道较多。Hou等[15]利用双向电泳(2-DE)技术,
对天然突变的冬小麦返白系 FA85 叶绿体蛋白进行
了蛋白质组学分析。但利用 2D-DIGE技术的研究却
鲜有报道。本研究以小麦叶绿素缺失突变体 Mt6172
的白化苗及其野生型邯 6172的幼苗叶片为材料, 利
用 2D-DIGE技术和质谱鉴定技术, 对两者的叶片蛋
白进行表达差异分析, 为揭示该突变体的突变机制
提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 植物材料
Mt6172 是经实践八号育种卫星普通舱[20]空间
搭载小麦品种邯 6172 (H6172)后, 从其后代中筛选
得到的叶绿素缺失突变体。其叶片表现白化、条纹
和绿色 3种类型, 其中白化株出苗 15~20 d即陆续死
亡[21]。取田间生长 2 周的 Mt6172 白化苗和野生型邯
6172的幼苗叶片, 立即液氮冷冻, 存于–80℃备用。
1.2 蛋白样品制备
采用三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法, 提取叶片总
蛋白。分别取 1 g左右的邯 6172和 Mt6172白化苗
叶片材料, 用液氮充分研磨成粉末, 按 1∶10 (W/V)
的比例加入–20℃冰浴的 TCA/丙酮(10% TCA, 使用
前加入 0.07% β-巯基乙醇 )溶液 , 充分振荡混匀 ,
–20℃沉淀过夜; 于 4 , ℃ 21 000×g 条件下离心 1 h,
沉淀悬浮于等体积–20℃冰浴的 90%丙酮溶液(使用
前加入 0.07% β-巯基乙醇)中, –20℃放置 1 h, 期间
反复振荡多次; 于 4 , ℃ 21 000×g条件下离心 1 h, 再
重复清洗沉淀一次 ; 离心后干燥沉淀成粉末 , 按
1∶30的比例加入裂解液[7 mol L–1尿素, 2 mol L–1
硫脲, 4% 3-(胆酰胺丙基)-二乙胺-丙磺酸, 2% IPG
buffer (pH 3~10), 40 mmol L–1二硫苏糖醇], 室温振
荡 4 h左右, 使粉末充分溶解; 于 4 , ℃ 21 000×g条件
下离心 30 min, 吸取上清液至新的离心管中, 然后
用 2D Clean-up kit (美国 GE 公司)纯化蛋白, 并以
Bradford法定量测定蛋白样品, –80℃保存备用。
1.3 蛋白样品的荧光标记
使用 DIGE 荧光染料试剂盒 (5 nmol CyDye
DIGE Fluor mimimal Dye labeling kit, 美国GE公司)
对蛋白进行荧光标记。首先用 50 mmol L–1 NaOH溶
液将各蛋白样品 pH值调至 8~9; 然后将染料干粉从
–20℃取出, 恢复室温(至少 5 min), 稍离心, 用二甲
基甲酰胺稀释染料至 400 pmol μL–1的工作液; 在含
50 μg蛋白的样品溶液中加入 1 μL染料工作液, 振
荡 , 稍离心 , 在冰上避光放置 30 min; 然后加 10
mmol L–1赖氨酸 1 μL, 冰上放置 15 min终止反应。
标记好的蛋白样品可在–70℃保存 3个月。
1.4 2D-DIGE操作及凝胶图像扫描
对每个蛋白样品进行 3 次生物学重复实验, 因
此分析胶的 2D-DIGE操作需要 3张凝胶。将分别用
Cy3或 Cy5标记后的邯 6172和 Mt6172白化苗叶片
1594 作 物 学 报 第 38卷

总蛋白样品各 50 μg及用 Cy2标记后的 50 μg内标
混合(内标为所有样品的等量混合物)。在水化盘中
将各组 150 μg混合蛋白样品水化上样至 24 cm, pH
3~10 NL的 IPG干胶条(美国 GE公司)中, 室温水化
16 h。制备胶的 2-DE 操作所用蛋白样品为邯 6172
叶片总蛋白, 在水化盘中将 800 μg 样品上样至 24
cm, pH 3~10 NL的 IPG干胶条(美国 GE公司)中, 室
温水化 16 h。

表 1 2D-DIGE试验设计
Table 1 Design of 2D-DIGE experiments
胶编号
Gel code
内标/Cy2 (蓝色)
Internal standard/Cy2 (blue)
样品 1/Cy3 (绿色)
Sample 1/Cy3 (green)
样品 2/Cy5 (红色)
Sample 2/Cy5 (red)
1 内标 50 μg
Internal standard 50 μg
Mt6172叶片蛋白 50 μg
Mt6172 leaf protein 50 μg
H6172叶片总蛋白 50 μg
H6172 leaf protein 50 μg
2 内标 50 μg
Internal standard 50 μg
H6172叶片蛋白 50 μg
H6172 leaf protein 50 μg
Mt6172叶片总蛋白 50 μg
Mt6172 leaf protein 50 μg
3 内标 50 μg
Internal standard 50 μg
Mt6172叶片蛋白 50 μg
Mt6172 leaf protein 50 μg
H6172叶片总蛋白 50 μg
H6172 leaf protein 50 μg

用 Ettan IPGphor II等电聚焦仪(美国 GE公司)
进行第 1向等电聚焦(IEF), 程序为快速, 100 V, 1 h;
快速, 300 V, 1 h; 快速, 500 V, 1 h; 快速, 1 000 V, 2 h;
线性, 8 000 V, 3 h; 快速, 8 000 V, 10 V h。使用 Ettan
DALTsix 垂直电泳系统(美国 GE 公司), 在 12.5%
SDS-PAGE 凝胶中进行第二向电泳。电泳程序是每
胶条 1 W, 1 h; 每胶条 1.5 W至溴酚蓝指示剂达到底
部边缘时停止电泳。
第 2向电泳结束后, 直接将装配在玻璃板中的
分析胶凝胶置 Typhoon 9400扫描仪(美国 GE公司),
设定通道 1、2 和 3 的发射滤片分别为 520 BP 40
Cy2、580 BP 30 Cy3 和 670 BP 30 Cy5, 其对应的
激光波长分别为 488、532 和 633 nm。通过调节
PMT 电压 , 将成像的最大像素控制在 50 000~
80 000。依次对 3 张电泳凝胶进行扫描成像, 获得
3 组分别包含 Cy2、Cy3 和 Cy5 三个通道图像的凝
胶图。对制备胶采用考马斯亮蓝染色方法染色, 通
过 Image-Scanner III扫描仪(美国 GE公司)进行图像
扫描。
1.5 凝胶图像分析
将 3 组凝胶图导入 DeCyder 2D 6.5 软件(美国
GE 公司)中。首先采用凝胶内差异分析(differential
in-gel analysis, DIA)模块检测和定量分析同一组凝
胶图中, Cy2、Cy3和Cy5三个通道图像的蛋白点, 进
行本底扣除、凝胶内标准化和杂质点过滤等处理。
然后选择蛋白点分布最合理、数量最理想的一组凝
胶图为主凝胶 (Master 胶 ), 采用生物学误差分析
(biological variation analysis, BVA)模块匹配其他凝
胶图, 统计分析不同样品组间的蛋白点丰度变化。
选择差异表达值 1.5 倍以上, 经过 t 检验(P≤0.05)
具差异的蛋白点进行质谱鉴定分析。
1.6 胶内酶切及质谱鉴定
制备胶用考马斯亮蓝染色, 扫描成像后将凝胶
图像导入DeCyder 2D 6.5软件(美国GE公司)中与分
析胶匹配, 找出差异蛋白点。将所选择的差异蛋白
点用 1.5 mm切胶笔切下, 置 96孔板中, 加 50 μL 超
纯水振荡清洗 2 次, 每次 10 min; 再加入 50 mmol
L–1的 NH4HCO3:乙腈(1∶1, V/V) 50 μL, 37℃振荡脱
色 20 min, 至蓝色褪去; 吸干多余液体, 加 50 μL乙
腈脱水至胶粒完全变白 , 真空抽干 5 min, 加 10
mmol L–1二硫苏糖醇(由 1 mol L–1二硫苏糖醇 10 μL
和 25 mmol L–1 NH4HCO3 990 μL配制而成) 20 μL,
56℃水浴 1 h (不振荡), 冷却到室温后, 吸干液体,
快速加 55 mmol L–1的碘乙酰胺(由 1 mol L–1碘乙酰
胺 55 μL和 25 mmol L–1 NH4HCO3 945 μL配制而成)
20 μL, 置暗室 45 min; 然后依次用 25 mmol L–1
NH4HCO3、50%乙腈水溶液和乙腈清洗胶粒 2次, 乙
腈脱水到胶粒完全变白为止, 真空抽干 5 min; 将
0.1 μg μL–1的酶储液用 25 mmol L–1的 NH4HCO3稀
释 10倍, 每管加 2 μL, 稍离心, 让酶液充分与胶粒
接触, 4℃或冰上放置 30 min; 待溶液被胶块完全吸
收, 吸去多余的酶液, 加 25 mmol L–1 NH4HCO3溶
液 10~15 μL置 37 , ℃ 消化过夜(不用振荡); 最后加
入 2%三氟乙酸水溶液, 使三氟乙酸终浓度为 0.1%,
振荡混匀, 离心得到蛋白点的酶解产物。
蛋白点的酶解产物由北京华大蛋白质研发中心
有限公司进行 MALDI-TOF-TOF MS 质谱鉴定。通
过 MATRIX SCIENCE网站(http://www.matrixscience.
com/)中的 Mascot搜索引擎, 在 NCBInr数据库中对
质谱结果进行检索。并通过拟南芥的 Tair 数据库
(http://www.arabidopsis.org/)对差异蛋白的蛋白功
能、编码基因以及亚细胞定位等信息进行检索。
第 9期 宋素洁等: 小麦叶绿素缺失突变体 Mt6172及其野生型叶片蛋白质组学双向差异凝胶电泳分析 1595


2 结果与分析
2.1 叶片总蛋白 2D-DIGE
2 个叶片总蛋白样品的 3 次生物学重复实验的
双向差异凝胶图像(图 1)经 DIA分析检测, 在 Gel1、
Gel2和 Gel3中分别检测到 2 550、2 497和 2 706个
蛋白点。以点数最多的 Gel3为 Master胶, 分别与其
他胶块进行 BVA操作。Gel1和 Gel3相匹配的点数
为 1 795个, Gel2和 Gel 3相匹配的点数为 1 645个。
对 3张胶完全匹配的 1 645个蛋白点进行 BVA自动
分析, 最终挑选出 100个差异点。

图 1 叶片总蛋白 2D-DIGE凝胶图
Fig. 1 2D-DIGE gel images of leaf total proteins
a, b, c: 野生型邯 6172叶片总蛋白 3次重复实验的凝胶图; d, e, f: 突变体 Mt6172叶片总蛋白 3次重复实验的凝胶图。红色凝胶图为
荧光染料 Cy5染色, 绿色凝胶图为荧光染料 Cy3染色。
a, b, c: the three replicated experiments of wild-type H6172 leaf proteins; d, e, f: the three replication experiments of mutant Mt6172 leaf
proteins. The red gel images were labeled with fluorescent dye Cy5, and the green gel images were labeled with fluorescent dye Cy3.

2.2 差异蛋白质谱鉴定
在叶片总蛋白制备胶考染图与分析胶凝胶图匹
配后, 由于考染胶图信号相对荧光信号较弱, 所以
只挖取 100个差异蛋白点中的 85个进行质谱鉴定。
通过Mascot搜索引擎在 NCBInr数据库中检索到 62
个差异蛋白点(表 2)。因蛋白结果显示存在相同蛋白
质, 所以 62个差异蛋白点共对应 29种蛋白质, 其中
50个表达下调, 12个表达上调(图 2)。
2.3 差异蛋白的分析
生物信息学分析表明, 62个差异蛋白点可划分
为 10个功能群, 其中 54个(占总数的 87.1%)定位于
叶绿体, 其余 8个定位于叶绿体外的线粒体、内膜
系统、细胞核和细胞质等(表 3)。定位于叶绿体的差
异蛋白质中, 40个(占总数的 64.5%)参与光合作用, 9
个参与糖代谢途径, 2 个参与叶绿体 mRNA 编辑修
饰, 3个参与应激反应。
40个参与光合作用的差异蛋白中有 36个(占光合
作用相关蛋白的 90.0%)表达下调, 4个上调, 其中以光
反应途径中的相关蛋白下调最为显著。光系统 I 反应
中心的 N 亚基 PSI-N (photosystem I reaction center
subunit N)下调 4.25 倍(图 2); 集光色素蛋白 LHCA1
(light-harvesting complex I 21 kD subunit)下调 3.73倍
(图 2); 光系统 II 的放氧增强蛋白复合体的 3 个亚基
PsbO1 (chloroplast oxygen-evolving enhancer protein 1),
PsbP (chloroplast oxygen-evolving enhancer protein 2)和
PsbQ (chloroplast oxygen-evolving enhancer protein 3)
对应的 5个蛋白点都下调 2倍以上(图 2)。
参与光合作用暗反应的核酮糖二磷酸羧化酶的
小亚基 RBCS (Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/
oxygenase small subunit)对应的 4 个蛋白点中 ,

表 2 差异蛋白的质谱鉴定
Table 2 Differentially expressed proteins identified by mass spectrometry
蛋白编号
Spot code
丰度差异
Av. ratio
蛋白名称
Protein name
物种
Species
NCBI编号
Accession code
理论等电点/
分子量
Theoretical pI/
Mw (kD)
实际等电点
分子量
Actual pI/
Mw (kD)
覆盖率
Total ion
C.I. (%)
得分
Total ion
score
蛋白序列
覆盖率
Protein score
C.I. (%)
165 2.11 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase activase isoform 1, RCA Hordeum vulgare gi|167096 8.62/47.341 6.00/87.000 9 196 39
1057 –1.91 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase activase isoform 1, RCA Unknown gi|100614 5.64/47.496 4.90/44.000 8 159 45
1181 –2.11 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase activase isoform 1, RCA Triticum aestivum gi|7960277 6.92/48.012 5.25/42.000 7 130 16
593 2.50 Manganese superoxide dismutase, MSD1 Triticum aestivum gi|1621627 7.9/25.259 4.60/56.000 9 92 54
2069 2.67 Manganese superoxide dismutase, MSD1 Triticum aestivum gi|1621627 7.9/25.259 5.70/29.000 53 110 53
821 –2.74 ATP synthase CF1 beta subunit, ATPB Triticum aestivum gi|14017579 5.06/53.881 4.80/53.000 7 188 71
833 –3.15 ATP synthase CF1 beta subunit, ATPB Triticum aestivum gi|3023320 4.94/31.011 4.65/51.000 15 233 77
1686 1.67 ATP synthase CF1 beta subunit, ATPB Picocystis salinarum gi|307931036 5.06/31.971 4.15/34.000 10 46 42
831 –2.11 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Triticum aestivum gi|12344 6.6/47.600 5.70/53.000 3 24 8
841 –2.17 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Hordeum vulgare gi|11587 6.32/47.517 5.14/50.000 7 221 53
845 –2.71 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Unknown gi|131974 6.23/52.139 5.05/51.000 4 46 49
850 –2.19 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Hordeum vulgare gi|11587 6.32/47.517 5.46/50.000 5 121 21
852 –2.10 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Unknown gi|131974 6.23/52.139 5.00/50.000 7 142 58
853 –2.23 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Unknown gi|3334480 6.13/53.470 4.80/50.000 5 139 55
862 –2.86 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Hordeum vulgare gi|11587 6.32/47.517 4.76/50.000 5 80 55
865 –2.49 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Hordeum vulgare gi|11587 6.32/47.517 4.13/50.000 7 250 55
866 –2.98 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Zingiber gramineum gi|552986 6.79/50.048 4.18/50.000 7 225 56
895 –2.70 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Lemna gibba gi|17232970 6.32/50.122 5.70/50.000 7 129 57
1132 –2.11 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Triticum aestivum gi|12344 6.32/47.517 4.30/44.000 3 72 25
1182 –1.50 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Hordeum vulgare gi|11587 6.32/47.517 5.24/42.000 5 100 30
1623 –1.82 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Callistephus chinensis gi|264160443 6.08/46.111 5.06/35.000 23 109 23
1681 1.97 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Hordeum vulgare gi|11587 6.32/47.517 5.70/35.000 10 215 31
1844 –2.09 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Triticum aestivum gi|12344 6.6/47.600 5.61/31.000 3 24 26
1865 –2.37 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Elymus sibiricus gi|54401456 6.22/53.356 4.15/31.000 22 94 30
2003 –2.23 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Hordeum vulgare gi|11587 6.32/47.517 5.61/29.000 3 55 31
2106 –2.16 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Coix lacryma-jobi gi|260677427 6.13/53.378 5.31/28.000 30 140 30
2307 –2.33 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL Dasypyrum villosum gi|61378621 6.04/53.299 4.13/24.000 22 101 22
1085 –1.98 Glutamine synthetase, GS2 Unknown gi|121340 5.11/47.406 4.18/44.000 6 130 34
1086 –2.25 Glutamine synthetase, GS2 Unknown gi|121340 5.11/47.406 4.65/44.000 3 105 51
1127 –2.25 Phosphoglycerate kinase, F14G9.19 Unknown gi|129915 6.58/49.980 5.06/42.000 11 174 56
(续表 2)
蛋白编号
Spot code
丰度差异
Av. ratio
蛋白名称
Protein name
物种
Species
NCBI编号
Accession code
理论等电点/
分子量
Theoretical pI/
Mw (kD)
实际等电点
分子量
Actual pI/
Mw (kD)
覆盖率
Total ion
C.I. (%)
得分
Total ion
score
蛋白序列
覆盖率
Protein score
C.I. (%)
1191 –1.90 Glyceraldehyde phosphate dehydrogenase subunit A, GAPA-2 Unknown gi|120659 6.11/25.315 5.42/42.000 6 71 60
1241 –2.24 Sedoheptulose bisphosphatase, SBPase Unknown gi|1173347 6.04/42.547 4.82/41.000 7 162 46
1297 2.46 Glyceraldehyde phosphate dehydrogenase subunit C, GAPC2 Unknown gi|120680 6.67/36.605 6.03/42.000 12 195 52
1458 –2.10 Fructose-bisphosphate aldolase, FBA2 Triticum aestivum gi|223018643 5.94/42.217 5.06/38.000 10 204 41
1465 –1.91 Fructose-bisphosphate aldolase, FBA2 Triticum aestivum gi|223018643 5.94/42.217 5.20/38.000 10 192 47
1476 –2.29 Fructose-bisphosphate aldolase, FBA2 Oryza sativa (japonica group) gi|218155 7.6/42.350 5.02/38.000 2 42 8
1717 2.98 Fructose-bisphosphate aldolase, FBA2 Triticum aestivum gi|223018643 5.94/42.217 5.31/33.000 7 53 27
1750 1.93 Fructose-bisphosphate aldolase, FBA2 Triticum aestivum gi|223018643 5.94/42.217 4.85/33.000 28 76 28
1463 –1.79 Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase, GAPA Oryza sativa (japonica group) gi|115458768 7.62/43.031 5.75/39.000 12 173 35
1477 –1.65 Ferredoxin-NADP reductase, RFNR1 Unknown gi|729477 8.54/41.322 5.66/38.000 5 46 36
1505 2.60 Origin recognition complex 1, ORC1A Oryza sativa (japonica group) gi|115466830 8.87/43.022 5.80/38.000 25 68 25
1659 –3.28 Chloroplast oxygen-evolving enhancer protein 1, PsbO1 Leymus chinensis gi|147945622 6.08/34.719 4.23/34.000 14 177 64
1666 –2.65 Chloroplast oxygen-evolving enhancer protein 1, PsbO1 Leymus chinensis gi|147945622 6.08/34.719 4.72/34.000 15 232 70
1668 –1.98 Chloroplast oxygen-evolving enhancer protein 1, PsbO1 Leymus chinensis gi|147945622 6.08/34.719 4.80/34.000 14 128 46
1661 –1.90 Phosphoribulokinase, PRK Triticum aestivum gi|21839 5.84/45.406 5.22/34.000 3 48 6
1775 –1.72 Chloroplast RNA-binding proteins, CP31 Triticum aestivum gi|2443390 4.55/31.829 4.87/33.000 19 104 52
1803 –1.75 Predicted protein, T1P17.130 Arabidopsis lyrata gi|297813795 5.16/51.858 5.20/32.000 38 80 38
1870 –2.39 Chlorophyll a-b binding protein type I, LHCB2 Unknown gi|115775 5.31/28.754 4.20/31.000 3 32 28
1915 2.63 Ascorbate peroxidase 1, APX1 Hordeum vulgare gi|3688398 5.85/27.532 5.12/30.000 15 185 42
1979 –2.07 Chloroplast oxygen-evolving enhancer protein 2, PsbP Unknown gi|131394 8.84/27.424 5.31/29.000 8 126 68
2048 –2.02 Putative Bci-5 protein, F4F15.260 Hordeum vulgare gi|6900310 8.23/8.310 4.82/29.000 21 82 33
2116 –3.73 Light-harvesting complex I 21 kDa protein, LHCA1 Unknown gi|75265661 5.84/26.732 4.72/27.000 13 94 13
2280 –1.66 tRNA synthetase, F7O18.7 Micromonas sp. RCC299 gi|255081786 5.67/54.473 4.91/24.000 28 79 28
2340 2.55 Peptidyl-prolylcis-trans isomerase, PPIase Unknown gi|118104 8.91/18.565 6.70/24.000 8 47 27
2447 –4.13 Chloroplast oxygen-evolving enhancer protein 3, PsbQ Triticum aestivum gi|134290407 9.72/21.126 6.14/22.000 56 158 56
2497 –3.30 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase small subunit, RBCS Unknown gi|132107 5.84/13.275 5.51/21.000 18 65 81
2499 –3.41 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase small subunit, RBCS Unknown gi|132087 8.99/19.690 5.49/21.000 18 100 64
2512 –2.92 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase small subunit, RBCS Secale cereale gi|207080698 9.42/7.895 5.22/21.000 31 149 78
2665 1.55 Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase small subunit, RBCS Unknown gi|3914588 8.98/19.693 4.86/19.000 29 267 51
2505 –2.23 Nucleoside diphosphate kinase I, NDPK1 Unknown gi|400404 6.42/16.279 5.81/21.000 10 67 19
2531 –3.05 Single-stranded nucleic acid binding protein, CCR1 Triticum aestivum gi|974605 5.18/16.302 4.71/21.000 69 140 69
2648 –4.25 Photosystem I reaction center subunit N, PSI-N Unknown gi|400879 9.54/15.718 6.70/18.000 40 93 40

表 3 差异蛋白分类汇总
Table 3 Classified summary of differentially expressed proteins
功能群
Functional
group
蛋白功能
Protein function
蛋白名称
Protein name
编码基因组
Coding genome
亚细胞定位
Subcellular localization
光合作用/光系统 I
Photosynthesis/photosystem I
Photosystem I reaction center subunit N, PSI-N; Light-harvesting complex I 21 kDa protein, LHCA1 叶绿体基因组
Chloroplast genome
类囊体膜
Thylakoid membrane
光合作用/光系统 II
Photosynthesis/photosystem II
Chloroplast oxygen-evolving enhancer protein 3, PsbQ; Chloroplast oxygen-evolving enhancer protein 1,
PsbO1; Chloroplast oxygen-evolving enhancer protein 1, PsbP; Chlorophyll a-b binding protein type I,
LHCB2
核基因组
Nuclear genome
类囊体膜
Thylakoid membrane
光合作用/NADPH氧化还原酶
Photosynthesis/NADPH oxidoreductase
Ferredoxin--NADP reductase, RFNR1 核基因组
Nuclear genome
类囊体膜
Thylakoid membrane
光合作用/ATP合酶
Photosynthesis/ATP synthase
ATP synthase CF1 beta subunit, ATPB 叶绿体基因组
Chloroplast genome
类囊体膜
Thylakoid membrane
光合作用/卡尔文-本森循环
Photosynthesis/Calvin-Benson cycle
Phosphoribulokinase, PRK 核基因组
Nuclear genome
类囊体膜
Thylakoid membrane
光合作用/卡尔文-本森循环
Photosynthesis/Calvin-Benson cycle
Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit, RBCL 叶绿体基因组
Chloroplast genome
叶绿体
Chloroplast
I
光合作用/卡尔文-本森循环
Photosynthesis/Calvin-Benson cycle
Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase small subunit, RBCS; Ribulose-1,5-bisphosphate car-
boxylase activase isoform 1, RCA; Sedoheptulose bisphosphatase, SBPASE
核基因组
Nuclear genome
叶绿体
Chloroplast
II 叶绿体 mRNA编辑修饰
Chloroplast mRNA editing modification
Putative Bci-5 protein, F4F15.260; Chloroplast RNA-binding proteins, CP31 核基因组
Nuclear genome
类囊体膜
Thylakoid membrane
糖代谢/糖酵解、磷酸戊糖途径
Glucose metabolism/glycolysis & pentose
phosphate pathway
Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase, GAPA 核基因组
Nuclear genome
叶绿体
Chloroplast
糖代谢/糖酵解、碳固定
Glucose metabolism/glycolysis & carbon fixed
Phosphoglycerate kinase, F14G9.19; Glyceraldehyde phosphate dehydrogenase subunit A, GAPA-2;
Glyceraldehyde phosphate dehydrogenase subunit C, GAPC2
核基因组
Nuclear genome
叶绿体
Chloroplast
III
糖代谢/糖酵解、磷酸戊糖途径、碳固定
Glucose metabolism/glycolysis & pentose
phosphate pathway & carbon fixed
Fructose-bisphosphate aldolase, FBA2 核基因组
Nuclear genome
叶绿体
Chloroplast
IV 应激反应
Stress response
Glutamine synthetase, GS2; Nucleoside diphosphate kinase I, NDPK1 核基因组
Nuclear genome
叶绿体
Chloroplast
抗氧化/去除超氧化物自由基
Antioxidant/removal of superoxide radical
Manganese superoxide dismutase, MSD1 核基因组
Nuclear genome
线粒体
Mitochondria
V
抗氧化/过氧化氢分解代谢酶
Antioxidant/hydrogen peroxide catabolic enzyme
Ascorbate peroxidase 1, APX1 核基因组
Nuclear genome
内膜系统
Endomembrane system
VI 转录激活因子
Activator of transcription
Origin recognition complex 1, ORC1A 核基因组
Nuclear genome
细胞核
Nucleus
VII 蛋白质折叠
Protein folding
Peptidyl-prolylcis-trans isomerase, PPIase 核基因组
Nuclear genome
细胞质膜
Cell Plasma membrane
VIII 氨酰 tRNA连接酶
Aminoacyl-tRNA ligase
tRNA synthetase, F7O18.7 核基因组
Nuclear genome
细胞质
Cytoplasm
IX RNA结合
RNA binding
Single-stranded nucleic acid binding protein, CCR1 核基因组
Nuclear genome
细胞质
Cytoplasm
X 未知
Unknown
Predicted protein, T1P17.130 核基因组
Nuclear genome
未知
Unknown

第 9期 宋素洁等: 小麦叶绿素缺失突变体 Mt6172及其野生型叶片蛋白质组学双向差异凝胶电泳分析 1599


3个下调, 1个上调(图 2); 而其大亚基 RBCL (Ribu-
lose-1, 5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large
subunit)对应的 19个蛋白点中, 18个下调, 1个上调
(图 2)。

图 2 差异蛋白表达图谱及部分差异蛋白三维图
Fig. 2 Expression profiles of differentially expressed proteins and three-dimensional expression maps of partial differentially
expressed protein spots
在突变体中上调和下调表达的蛋白分别以红色和蓝色箭头指示; 图谱中数字为 62个差异蛋白点的 Master胶编号; 每组三维图中左侧
为野生型邯 6172, 右侧为突变体 Mt6172。
The 62 differentially expressed protein spots were marked with red or blue arrows along with the Master gel code, indicating up- or
down-regulation in mutant Mt6172. The three-dimensional expression maps of partial differentially expressed protein spots were displayed
around the gel image to compare expression levels between the wild-type H6172 (left) and the mutant Mt6172 (right).

8 个定位于叶绿体外的蛋白表达以上调为主,
主要参与抗氧化、转录激活和蛋白质折叠等途径 ,
其中参与抗氧化的锰超氧化物歧化酶 MSD1 (man-
ganese superoxide dismutase 1)和抗坏血酸过氧化物
酶 APX1 (ascorbate peroxidase 1)的 3个蛋白均上调
2.5倍以上(图 2)。
3 讨论
叶绿素缺失突变体 Mt6172 自交后代植株叶色
表现为白化、条纹和绿色 3 种类型, 白化株出苗即
为完全白化表型, 约 15~20 d陆续死亡; 条纹株整个
生育期均为绿白相间的条纹, 不同单株间的条纹宽
度均匀一致, 能正常结实; 绿株整个生育期都表现
为正常绿色, 能正常结实[21]。由田间正反交实验初
步判断, Mt6172属于隐性核基因遗传突变[21]。本研
究在蛋白质组水平上, 对 Mt6172 的白化株和野生
型邯 6172的差异分析发现, 该突变主要影响白化株
的叶绿体光合作用、抗氧化能力和 mRNA编辑途径,
同时白化突变体叶片细胞的能量代谢途径也有所改
变。
3.1 Mt6172光合膜蛋白复合体严重缺失
光合作用是植物生长发育必需的生化过程。光
合作用中光能的吸收、传递、转化以及 ATP合成等
过程均在光合膜蛋白复合体上进行。该复合体主要
1600 作 物 学 报 第 38卷

分布在叶绿体类囊体膜上, 包括光系统 I、光系统 II、
ATP 合 酶 (ATPase) 和 细 胞 色 素 b6/f 复 合 体
(Cytb6/f)[22]。本研究结果显示, Mt6172 白化株中光
合膜蛋白复合体的亚基几乎都下调。目前已有关于
类囊体膜蛋白复合体缺失导致的植物叶色突变的研
究报道。如 Monde等[23]通过敲除突变, 得到烟草黄
绿叶色突变体, 该突变体的 Cyb6/f复合体结构缺失,
并且叶绿素荧光值极高。ATPase的 γ亚基是由核基
因 AtpC1 编码的, 在拟南芥苗期白化致死的突变体
dpa1中, 可检测到整个 ATPase的 γ亚基的缺失[10]。
推测突变体 Mt6172 光合膜蛋白复合体的缺失可能
是导致光合作用受阻的重要原因。
另外, 差异蛋白中与光合作用暗反应相关的蛋
白有 28个, 其中有 25个表达下调。暗反应途径中
的基因缺失也可能引起叶色突变, 欧立军[24]从水稻
温敏核不育系“810S”中筛选得到一个自然突变的
淡黄绿叶色突变体“标 810”, 通过双向电泳分析,
发现与光合作用相关的差异蛋白点有 13 个, 其中
RBCL 为 4 个缺失蛋白之一。所以说暗反应途径的
基因缺失也可能是导致 Mt6172 光合作用受阻的原
因。另外, 差异蛋白中表达上调的基本都与光合作
用无关, 也能反应出光合作用受阻是 Mt6172 叶色
突变的重要原因。
3.2 Mt6172叶绿体的抗氧化能力下降
植物光呼吸、光合作用、脂肪酸氧化和衰老等
许多代谢过程都可能产生活性氧 (reactive oxygen
species, ROS)[25]。ROS包括单线态氧(1O2)、过氧化
氢(H2O2)、超氧阴离子自由基( O−2& )和羟自由基(·OH)
等, 过量的 ROS会导致各类生物大分子遭到氧化破
坏[26]。核酮糖二磷酸羧化酶含量占 C3植物成熟叶片
可溶性蛋白的 25%~32%, 占叶绿体基质可溶性蛋白
的 50% [27-28]。本研究差异蛋白点中有 19 个差异蛋
白点被鉴定为 RBCL或其碎片, 4个点为 RBCS。而
这 23个差异蛋白点中共有 21个表达下调。研究表
明, ROS可以造成核酮糖二磷酸羧化酶亚基的降解,
从而破坏光合作用, 如在光照条件下叶绿体裂解液
中的 RBCL 可直接被 ·OH 所降解 [29]。由此推测
Mt6172 白化株的突变可能导致了叶绿体抗氧化能
力的下降, 使叶绿体中 ROS 的相对含量上升, 造成
RBCL和 RBCS降解, 从而影响光合作用。
3.3 Mt6172叶绿体 RNA转录后编辑途径受阻
植物叶绿体基因组所编码的基因在转录后, 需
要由 RNA 结合蛋白(chloroplast RNA-binding pro-
teins, RNBP)进行一系列复杂的转录后编辑, 才能成
为成熟的叶绿体 mRNA。水稻 OsPPR1 基因编码一
个叶绿体定位的 RNBP 蛋白, 它的反义转化导致水
稻出现白化和苗期致死的表型[30]。从大麦(Hordeum
vulgare L.)品种 Haisa 中得到一个由核基因诱导的
与 Mt6172类似的原质体系 albostrians, 其后代的表
型也有绿株、条纹株和白化株 3种[31]。研究表明, 3
个编码叶绿体 RNBP 蛋白的基因 (Cp31AHv、
Cp31BHv和 Cp33Hv)在 albostrians突变体中的表达
量均下调[32]。说明 RNBP蛋白在叶绿体发育过程中
发挥重要作用。在本研究中, 差异蛋白中的 2 个与
叶绿体 RNA 转录后编辑相关的蛋白点表达量均下
调, 而且由叶绿体基因组编码的 4种蛋白(光系统 I反
应中心的 N亚基 PSI-N、集光色素蛋白 LHCA1、核酮
糖二磷酸羧化酶的大亚基 RBCL 和 ATP 合酶 β 亚基
ATPB)共有 22个蛋白点, 其中的 20个表达量下调。由
此可见, 叶绿体 RNA 转录后编辑相关蛋白的缺失可
能也是引起Mt6172发生叶色突变的一个原因。
3.4 Mt6172的能量代谢途径受到突变的影响
苗期叶绿体超微结构观察发现, Mt6172白化株
大部分叶肉细胞完全失去内部结构, 仅在少数细胞
中存在发育不正常的叶绿体, 并且叶绿体失去膜结
构, 体积膨大, 基粒片层结构排列混乱[21]。本研究
中与呼吸链和能量代谢相关的差异蛋白表现上调 ,
这可能是由于突变体叶绿体结构的缺陷, 导致叶绿
体功能有所丧失, 使细胞总的能量缺失, 而线粒体
等为了补偿这种能量缺失所以功能增强, 以产生更
多 ATP供机体所需。然而, 线粒体等在制造 ATP的
同时, 也会产生有害物质 ROS [33], 所以必须通过一
些防御机制来抵御 ROS对自身带来的伤害。本研究
差异蛋白中定位在线粒体上, 并与抗氧化相关的蛋
白 MSD1 表达上调, 定位在内膜系统与抗氧化相关
的差异蛋白 APX1 (抗坏血酸过氧化物酶)的表达量
也上调。说明由于突变体叶绿体结构的缺陷, 造成
细胞总能量缺失, 而植物细胞的其他部件通过增强
能量的合成功能, 来补充机体总能量的缺失, 同时
产生了过量的 ROS, 所以机体叶绿体外其他部件的
抗氧化能力也随着增强, 导致这些部件的抗氧化相
关蛋白表达上调。
4 结论
分析叶片差异表达蛋白谱 , 在检测到的 1 645
个蛋白点中发现 100个差异蛋白点, 对其中的 85个
第 9期 宋素洁等: 小麦叶绿素缺失突变体 Mt6172及其野生型叶片蛋白质组学双向差异凝胶电泳分析 1601


点进行质谱鉴定, 最终得到 62个差异蛋白点, 共对
应 29 种蛋白质 , 可分为 10 个功能群。初步推断
Mt6172 叶绿素缺失突变的重要原因是光合作用蛋
白复合体的缺失、叶绿体抗氧化能力的下降和叶绿
体 RNA转录后编辑途径受阻。
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lish abstract)























附表 差异蛋白点质谱鉴定肽段序列信息汇总
Appendix Summary of peptide sequence information of differentially expressed proteins identified by mass spectrometry
蛋白编号
Spot code
匹配肽段数
No. of matched
pepeides
起止氨基酸残基
Start–end
实测分子量
Mw (obs.)
预期分子量
Mw (expt.)
单一同位素分子量
Mw (calc)
肽质量容忍度
Peptide mass
tolerance (×10–6)
错误剪切数
Missed
cleavages
氨基酸残基序列
Sequence
63–77 1709.8884 1708.8811 1708.7904 53 0 K.GLAYDISDDQQDITR.G
293–302 1326.6765 1325.6692 1325.6153 41 1 K.FYWAPTRDDR.I
165 3
323–339 1883.0680 1882.0607 1881.9625 52 0 K.IVDTFPGQSIDFFGALR.A
255–261 940.5123 939.5050 939.4603 48 0 K.FYWAPTR.D
255–264 1326.6873 1325.6800 1325.6153 49 1 K.FYWAPTRDDR.I
285–301 1883.0939 1882.0866 1881.9625 66 0 K.IVDTFPGQSIDFFGALR.A
1057 4
304–311 1023.5605 1022.5533 1022.5033 49 1 R.VYDDEVRK.W
67–81 1709.8423 1708.8350 1708.7904 26 0 K.GLAYDISDDQQDITR.G 1181 2
327–343 1883.0316 1882.0243 1881.9625 33 0 R.LVDTFPGQSIDFFGALR.A
59–69 1317.6520 1316.6447 1316.6262 14 0 K.HHATYVANYNK.A 593 2
204–215 1518.8388 1517.8315 1517.7990 21 0 K.NVRPDYLTNIWK.V
2069 1 204–215 1518.8039 1517.7967 1517.7990 –2 0 K.NVRPDYLTNIWK.V
192–205 1328.6893 1327.6821 1327.6633 14 0 K.AHGGVSVFGGVGER.T
249–261 1487.7984 1486.7911 1486.7490 28 0 R.VGLTALTMAEYFR.D
821 3
379–390 1416.7021 1415.6948 1415.6793 11 0 R.IVGNEHYETAQR.V
61–73 1471.7739 1470.7666 1470.7541 9 0 R.VGLTALTMAEYFR.D
74–89 1949.0739 1948.0667 1948.0418 13 1 R.DVNKQDVLLFIDNIFR.F
833 3
90–103 1433.7941 1432.7868 1432.7674 14 0 R.FVQAGSEVSALLGR.M
46–59 1328.6364 1327.6291 1327.6633 –26 0 K.AHGGVSVFGGVGER.T 1686 2
116–131 1948.9971 1947.9899 1948.0054 –8 0 R.DINNQDVLLFIDNIFR.F
831 1 92–104 1465.7416 1464.7343 1464.7474 –9 0 K.TFQGPPHGIQVER.D
33–41 1021.5068 1020.4995 1020.5240 –24 0 K.DTDILAAFR.V
147–159 1465.7309 1464.7236 1464.7474 –16 0 K.TFQGPPHGIQVER.D
841 3
286–295 1187.6301 1186.6228 1186.6571 –29 0 R.DNGLLLHIHR.A
155–167 1502.7899 1501.7826 1501.8439 –41 0 K.YGRPLLGCTIKPK.L 845 2
412–421 1116.5380 1115.5308 1115.6121 –73 1 R.VALEACVKAR.N
33–41 1021.4781 1020.4708 1020.5240 –52 0 K.DTDILAAFR.V 850 2
147–159 1465.6786 1464.6713 1464.7474 –52 0 K.TFQGPPHGIQVER.D
155–167 1502.8514 1501.8441 1501.8439 0 0 K.YGRPLLGCTIKPK.L
276–285 1187.6463 1186.6391 1186.6571 –15 0 R.DNGLLLHIHR.A
852 3
412–421 1116.5635 1115.5563 1115.6121 –50 1 R.VALEACVKAR.N
33–41 1021.5044 1020.4971 1020.5240 –26 0 K.DTDILAAFR.V
188–194 971.3790 970.3717 970.4001 –29 0 R.ACYECLR.G
853 3
422–431 1116.5571 1115.5498 1115.6121 –56 1 R.VALEACVKAR.N
(续附表)
蛋白编号
Spot code
匹配肽段数
No. of matched
pepeides
起止氨基酸残基
Start–end
实测分子量
Mw (obs.)
预期分子量
Mw (expt.)
单一同位素分子量
Mw (calc)
肽质量容忍度
Peptide mass
tolerance (×10–6)
错误剪切数
Missed
cleavages
氨基酸残基序列
Sequence
33–41 1021.5044 1020.4971 1020.5240 –26 0 K.DTDILAAFR.V
188–194 971.3790 970.3717 970.4001 –29 0 R.ACYECLR.G
862 3
422–431 1116.5571 1115.5498 1115.6121 –56 1 R.VALEACVKAR.N
33–41 1021.5044 1020.4971 1020.5240 –26 0 K.DTDILAAFR.V
188–194 971.3790 970.3717 970.4001 –29 0 R.ACYECLR.G
865 3
422–431 1116.5571 1115.5498 1115.6121 –56 1 R.VALEACVKAR.N
23–31 1021.5827 1020.5754 1020.5240 50 0 K.DTDILAAFR.V
137–149 1465.8727 1464.8654 1464.7474 81 0 K.TFQGPPHGIQVER.D
866 3
276–285 1170.6912 1169.6839 1169.6669 15 0 R.DPGLLLHIHR.A
156–168 1502.9569 1501.9496 1501.8439 70 0 K.YGRPLLGCTIKPK.L
331–341 1309.7510 1308.7437 1308.6748 53 0 R.EMTLGFVDLLR.D
895 3
413–422 1116.6345 1115.6272 1115.6121 14 1 R.VALEACVKAR.N
1132 1 92–104 1465.7452 1464.7379 1464.7474 –6 0 K.TFQGPPHGIQVER.D
33–41 1021.5110 1020.5037 1020.5240 –20 0 K.DTDILAAFR.V 1182 2
147–159 1465.7318 1464.7246 1464.7474 –16 0 K.TFQGPPHGIQVER.D
168–186 2185.9882 2184.9809 2184.9746 3 1 R.GGLDFTKDDENVNSQPFMR.W
277–285 1170.6045 1169.5973 1169.5512 39 1 R.QKNHGMHFR.V
1623 3
279–285 914.4018 913.3946 913.3977 –3 0 K.NHGMHFR.V
22–32 1407.6309 1406.6236 1406.6605 –26 0 K.LTYYTPEYETK.D
33–41 1021.5097 1020.5025 1020.5240 –21 0 K.DTDILAAFR.V
147–159 1465.7357 1464.7284 1464.7474 –13 0 K.TFQGPPHGIQVER.D
1681 4
218–227 1247.5756 1246.5683 1246.6056 –30 0 R.FVFCAEAIYK.S
1844 1 92–104 1465.7049 1464.6976 1464.7474 –34 0 K.TFQGPPHGIQVER.D
1865 1 286–295 1187.5581 1186.5508 1186.6571 –90 0 R.DNGLLLHIHR.A
2003 1 147–159 1465.7405 1464.7332 1464.7474 –10 0 K.TFQGPPHGIQVER.D
2106 1 147–159 1465.7099 1464.7026 1464.7474 –31 0 K.TFQGPPHGIQVER.D
2307 1 147–159 1465.7838 1464.7765 1464.7474 20 0 K.TFQGPPHGIQVER.D
81–96 1762.0161 1761.0088 1760.9461 36 0 K.IIAEYIWVGGSGIDLR.S 1085 2
339–352 1581.8004 1580.7931 1580.7331 38 0 R.HDLHIAAYGEGNER.R
1086 1 339–352 1581.8124 1580.8051 1580.7331 46 0 R.HDLHIAAYGEGNER.R
209–226 1918.0193 1917.0120 1916.9745 20 0 K.LASLADLFVNDAFGTAHR.A
237–249 1447.8624 1446.8552 1446.8599 –3 0 K.FLKPSVAGFLLQK.E
263–273 1102.6426 1101.6353 1101.6295 5 0 K.RPFAAIVGGSK.V
1127 4
462–476 1601.8301 1600.8228 1600.8131 6 0 K.ELPGVVALDEGVMTR.S
1191 1 169–184 1833.8691 1832.8618 1832.8979 –20 0 K.GILDVCDEPLVSVDFR.C
(续附表)
蛋白编号
Spot code
匹配肽段数
No. of matched
pepeides
起止氨基酸残基
Start–end
实测分子量
Mw (obs.)
预期分子量
Mw (expt.)
单一同位素分子量
Mw (calc)
肽质量容忍度
Peptide mass
tolerance (×10–6)
错误剪切数
Missed
cleavages
氨基酸残基序列
Sequence
202–221 1933.9231 1932.9159 1932.9728 –29 0 K.LTGVTGGDQVAAAMGIYGPR.T 1241 2
373–382 1188.4996 1187.4924 1187.5459 –45 0 R.FEETLYGSSR.L
68–82 1662.9963 1661.9890 1661.9505 23 0 K.TLLFGEKPVTVFGVR.N
237–250 1498.8795 1497.8722 1497.8403 21 0 R.VPTVDVSVVDLTVR.T
1297 3
312–325 1788.8363 1787.8290 1787.7903 22 0 K.LVSWYDNEWGYSNR.V
73–85 1387.6748 1386.6675 1386.7103 –31 0 R.LASIGLENTEANR.Q
163–172 1156.5075 1155.5003 1155.5309 –26 0 R.EAAYYQQGAR.F
1458 3
338–356 2052.0599 2051.0526 2051.0912 –19 0 K.TWGGRPENVAAAQEALLLR.A
73–85 1387.6666 1386.6593 1386.7103 –37 0 R.LASIGLENTEANR.Q
163–172 1156.5022 1155.4949 1155.5309 –31 0 R.EAAYYQQGAR.F
1465 3
338–356 2052.0603 2051.0530 2051.0912 –19 0 K.TWGGRPENVAAAQEALLLR.A
1476 1 163–172 1156.5354 1155.5281 1155.5309 –2 0 R.EAAYYQQGAR.F
163–172 1156.5244 1155.5171 1155.5309 –12 0 R.EAAYYQQGAR.F 1717 2
338–356 2052.0659 2051.0586 2051.0912 –16 0 K.TWGGRPENVAAAQEALLLR.A
1750 1 163–172 1156.5015 1155.4942 1155.5309 –32 0 R.EAAYYQQGAR.F
114–138 2596.2289 2595.2216 2595.2704 –19 0 K.YDSTLGIFDADVKPVGDNAISVDGK.V
319–329 1277.6121 1276.6048 1276.6411 –28 0 K.TLAEEVNQAFR.D
1463 3
376–389 1786.7710 1785.7638 1785.8111 –26 0 K.VIAWYDNEWGYSQR.V
1477 1 211–229 1975.0080 1974.0007 1974.0244 –12 0 K.DPNATIIMLATGTGIAPFR.S
1505 1 259–276 2151.0545 2150.0472 2150.1021 –26 1 R.WYIIPEETAAGRQPHNLR.R
85–94 1236.6372 1235.6299 1235.6510 –17 1 K.RLTFDEIQSK.T
186–202 1760.8570 1759.8497 1759.8741 –14 0 K.DGIDYAAVTVQLPGGER.V
1659 3
211–231 2280.1959 2279.1886 2279.1950 –3 0 K.QLVATGKPESFSGPFLVPSYR.G
141–154 1556.7941 1555.7869 1555.7994 –8 1 K.AEGIQKNEPPAFQK.T
186–202 1760.8871 1759.8798 1759.8741 3 0 K.DGIDYAAVTVQLPGGER.V
1666 3
211–231 2280.2173 2279.2100 2279.1950 7 0 K.QLVATGKPESFSGPFLVPSYR.G
85–94 1236.6458 1235.6385 1235.6510 –10 1 K.RLTFDEIQSK.T
186–202 1760.8628 1759.8555 1759.8741 –11 0 K.DGIDYAAVTVQLPGGER.V
1668 3
211–231 2263.1433 2262.1360 2262.1685 –14 0 K.QLVATGKPESFSGPFLVPSYR.G
1661 1 190–205 1897.9179 1896.9106 1896.9720 –32 0 R.ELLDFSIYLDISNEVK.F
117–130 1625.7405 1624.7332 1624.7733 –25 0 K.VYVGNLPYDVDSER.L
131–150 2264.1114 2263.1041 2263.1848 –36 0 R.LAQLFEQAGVVEVSEVIYNR.E
240–248 1080.5206 1079.5134 1079.5360 –21 1 R.VVYDRDTGR.S
1775 4
279–291 1506.8071 1505.7998 1505.8426 –28 1 R.ALRVNVAEERPPR.R
1803 1 93–107 1764.7621 1763.7549 1763.8287 –42 0 R.LEEAMSDFQLLPEDK.E
(续附表)
蛋白编号
Spot code
匹配肽段数
No. of matched
pepeides
起止氨基酸残基
Start–end
实测分子量
Mw (obs.)
预期分子量
Mw (expt.)
单一同位素分子量
Mw (calc)
肽质量容忍度
Peptide mass
tolerance (×10–6)
错误剪切数
Missed
cleavages
氨基酸残基序列
Sequence
95–104 1325.6453 1324.6380 1324.6670 –22 1 K.NRELEVIHCR.W
97–104 1055.5066 1054.4993 1054.5229 –22 0 R.ELEVIHCR.W
1870 3
126–133 983.4833 982.4760 982.4913 –16 0 K.FGEAVWFK.A
62–79 1831.9617 1830.9544 1830.9700 –9 0 K.KPAEQAHAANAGLDIAVR.M
173–181 1036.4747 1035.4674 1035.4774 –10 0 R.SGFEGPWTR.N
1915 3
230–241 1525.7193 1524.7121 1524.7361 –16 1 K.AFFEDYKEAHLR.L
88–100 1434.6313 1433.6240 1433.6463 –16 0 K.NTDFVAYSGEGFK.L 1979 2
198–207 1243.6461 1242.6389 1242.6608 –18 0 K.QYYSITVLTR.T
2048 1 18–33 1770.8421 1769.8348 1769.8948 –34 1 K.NFFSEKGEVLSATVSR.I
2116 1 83–92 1368.6419 1367.6346 1367.6292 4 1 R.FKESEIYHCR.W
2280 1 256–272 1813.9467 1812.9394 1812.9846 –25 1 R.DAAPRIGGYKPALIESR.F
2340 1 6–19 1440.7032 1439.6959 1439.6868 6 0 R.VFFDMTVGGAPAGR.I
134–143 1321.6236 1320.6163 1320.6285 –9 0 K.QWPYVMNDLR.L
134–143 1337.6414 1336.6341 1336.6234 8 0 K.QWPYVMNDLR.L
2447 3
176–188 1371.7246 1370.7173 1370.7194 –2 0 K.LFATLDGLDHAAK.I
23–31 1165.5741 1164.5668 1164.5638 3 0 K.WVPCLEFSK.V 2497 2
38–49 1365.5697 1364.5624 1364.5745 –9 0 R.EHNASPGYYDGR.Y
99–110 1381.5919 1380.5846 1380.5694 11 0 R.EHNSSPGYYDGR.Y 2499 2
154–173 2296.1025 2295.0952 2295.0776 8 0 R.QVQCVSFIAFRPPGCEESGK.A
31–39 1165.5545 1164.5472 1164.5638 –14 0 K.WVPCLEFSK.V
46–57 1363.5479 1362.5407 1362.6316 –67 0 R.EHNASPGYYIGR.Y
2512 3
46–57 1365.5771 1364.5698 1364.5745 –3 0 R.EHNASPGYYDGR.Y
57–74 2050.0572 2049.0499 2049.1398 –44 1 K.KFETLSYLPPLSTEALLK.Q
58–74 1921.9430 1920.9358 1921.0448 –57 0 K.FETLSYLPPLSTEALLK.Q
99–110 1365.5213 1364.5141 1364.5745 –44 0 R.EHNASPGYYDGR.Y
2665 4
117–137 2408.1402 2407.1329 2407.1763 –18 1 K.LPMFGCTDATQVLNEVEEVKK.E
2505 1 87–102 1609.8749 1608.8677 1608.8835 –10 0 K.LIGATNPLASEPGTIR.G
2531 1 48–61 1566.7305 1565.7232 1565.6821 26 0 R.GFGFVTFGSEESMR.Q
2648 1 102–114 1560.7255 1559.7182 1559.7079 7 0 K.FPYNFTGCQDLAK.Q