全 文 ：定植于地衣体内的大团囊虫草新谱系∗
姜岱峰１ꎬ 赵　 璐２ꎬ 郭　 虹３ꎬ 王海英１∗∗
(１ 山东师范大学生命科学学院逆境植物实验室ꎬ 济南　 ２５００１４ꎻ ２ 国立顺天大学韩国地衣研究所ꎬ
韩国 全罗南道 顺天市　 ５４０－７４２ꎻ ３ 河北大学生命科学学院ꎬ 石家庄　 ０７１００２)
摘要: 大团囊虫草是一类寄生型真菌ꎬ 绝大多数以大团囊菌为宿主ꎬ 只有 ３个种寄生在甲虫和蝉的幼虫体
内ꎮ 我们从采集自中国五个省份和南极长城站的 ４２ 份地衣标本中分离得到了 ６４ 株大团囊虫草属真菌菌
株ꎬ 系统发育学分析表明ꎬ 这些真菌可能不是相同的种类ꎬ 显示有多个种类的大团囊虫草属真菌广泛定植
于地衣体中ꎮ 与高等植物共生的内生真菌通常对宿主的生长起到促进作用ꎬ 然而ꎬ 由于地衣内生真菌生长
所需营养物质来源于地衣共生真菌或光合共生物ꎬ 因此地衣内生真菌与共生真菌之间很有可能是寄生关系
或竞争关系ꎮ 本研究发现大团囊虫草广泛伴生在地衣体内ꎬ 部分证实了这一假说的正确性ꎮ
关键词: 虫草属ꎻ 地衣内生真菌ꎻ 真菌宿主ꎻ ＩＴＳ序列
中图分类号: Ｑ ９４９􀆰 ３２　 　 　 　 　 文献标志码: Ａ　 　 　 　 　 　 　 文章编号: ２０９５－０８４５(２０１５)０６－７４６－０５
Ｎｅｗ Ｌｉｎｅａｇｅｓ ｏｆ Ｅｌａｐｈｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ Ｈａｒｂｏｒｉｎｇ ｉｎ Ｌｉｃｈｅｎ Ｔｈａｌｌｉ∗
ＪＩＡＮＧ Ｄａｉ￣ｆｅｎｇ１ꎬ ＺＨＡＯ Ｌｕ２ꎬ ＧＵＯ Ｈｏｎｇ３ꎬ ＷＡＮＧ Ｈａｉ￣ｙｉｎｇ１∗∗
(１ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｓｔｒｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈꎬ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｊｉｎａｎ ２５００１４ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ
２ Ｋｏｒｅａｎ Ｌｉｃｈｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅꎬ Ｓｕｎｃｈｏｎ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｓｕｎｃｈｅｏｎ ５４０－７４２ꎬ Ｋｏｒｅａꎻ
３ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ Ｈｅｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ ０７１００２ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ａｌｌ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｅｌａｐｈｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｐａｒａｓｉｔｉｚｅ ｔｈｅ ｆｕｎｇａｌ ｇｅｎｕｓ Ｅｌａｐｈｏｍｙｃｅｓꎬ ｅｘｃｅｐｔ ｆｏｒ ｔｈｒｅｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｇｒｏｗｉｎｇ
ｏｎ ｓｃａｒａｂｉｄ ｂｅｅｔｌｅ ｌａｒｖａｅ ｏｒ ｃｉｃａｄａ ｎｙｍｐｈｓ. Ｄｕｒｉｎｇ ｏｕｒ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒａｂｌｅ ｅｎｄｏｌｉｃｈｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉꎬ ｓｏｍｅ
Ｅｌａｐｈｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｒｅ ｆｏｕｎｄ ｗｉｄｅｌｙ ｈａｒｂｏｒｉｎｇ ｉｎ ｌｉｃｈｅｎ ｔｈａｌｌｉ. Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ６４ ｆｕｎｇａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ ｔｏ Ｅｌａｐｈｏ￣
ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ４２ ｌｉｃｈｅｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ５ ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ ｏｆ Ｃｈｉｎａ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｎｔａｒｃｔｉｃ.
Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＩＴＳ ｎｒＤＮＡ ｓｈｏｗｓ ｔｈａｔ ｔｈｅｓｅ ｅｎｄｏｌｉｃｈｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ａｒｅ ｐｏｓｓｉｂｌｙ ｈｅｔｅｒｏｓｐｅｃｉｆｉｃ. Ｔｈｅ ｅｎｄｏ￣
ｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｏｆｔｅｎ ｐｒｏｖｉｄｅ ｂｅｎｅｆｉｔｓ ｔｏ ｔｈｅｉｒ ｈｏｓｔｓ. Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｔｈｅ ｅｎｄｏｌｉｃｈｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ｍａｙ ｂｅ ｐａｒａｓｉｔｅｓ ｏｒ ｎｕｔｒｉ￣
ｅｎｔ ｃｏｍｐｅｔｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｙｃｏｂｉｏｎｔꎬ ｂｅｃａｕｓｅ ｔｈｅｙ ｈａｖｅ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｆｒｏｍ ｍｙｃｏｂｉｏｎｔｓ ｏｒ ｐｈｏｔｏｂｉｏｎｔｓ.
Ｏｕｒ ｓｔｕｄｙ ｐａｒｔｌｙ ｐｒｏｖｅｓ ｔｈｉｓ ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓꎬ ｓｉｎｃｅ ｍｏｓｔ ｋｎｏｗｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｅｌａｐｈｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ａｒｅ ｐａｒａｓｉｔｅｓ ｏｆ ｆｕｎｇｉ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓꎻ Ｅｎｄｏｌｉｃｈｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉꎻ Ｆｕｎｇａｌ ｈｏｓｔꎻ ＩＴＳ
　 大团囊虫草属 (Ｅｌａｐｈｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ)ꎬ 属于子囊
菌门 (Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ)、 粪壳菌纲 (Ｓｏｒｄａｒｉｏｍｙｃｅｔｅｓ)、
肉座菌目 (Ｈｙｐｏｃｒｅａｌｅｓ)、 蛇形虫草科 (Ｏｐｈｉｏ￣
ｃｏｒｄｙｃｉｐｉｔａｃｅａｅ)ꎮ Ｓｕｎｇ等 (２００７) 依靠分子系统学
的方法将大团囊虫草属从原虫草属 (Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ)
中分离出来ꎮ 大团囊虫草属与两种著名虫草类药
用真菌－冬虫夏草 (Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ) 和蛹
虫草 (Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ) 有着较近的亲缘关系
(Ｓｕｎｇ等ꎬ ２００７)ꎮ 冬虫夏草和蛹虫草均为虫生
真菌ꎬ 而大团囊虫草却是一种专性寄生在地下块
菌－大团囊菌 (Ｅｌａｐｈｏｍｙｃｅｓ) 中的寄生型真菌ꎮ
大团囊虫草属中的 Ｅ􀆰 ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｏｉｄｅｓ 是一味传统
植 物 分 类 与 资 源 学 报　 ２０１５ꎬ ３７ (６): ７４６~７５０
Ｐｌａｎｔ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ＤＯＩ: １０.７６７７ / ｙｎｚｗｙｊ２０１５１５０４５
∗
∗∗
基金项目: 国家自然科学基金 (３１２７００５９) 及山东省高校科研创新团队项目济南市自然科学基金 (２０１２０２０２４) 资助
通讯作者: Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅꎻ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｌｉｃｈｅｎｗｈｙ＠ｓｉｎａ􀆰 ｃｏｍ
收稿日期: ２０１５－０３－１７ꎬ ２０１５－０４－０１接受发表
作者简介: 姜岱峰 (１９８６－) 男ꎬ 博士研究生ꎬ 主要从事地衣生物学研究ꎮ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｌｉｃｈｅｎｊｄｆ＠１２６􀆰 ｃｏｍ
的药材ꎬ 对治疗月经不调和子宫出血有很好的疗
效 (Ｉｋｅｄａ等ꎬ １９９３)ꎬ 而该属中其他一些种类也
被广泛用做中药材ꎮ 不论是大团囊虫草还是它们
的宿主大团囊菌ꎬ 在自然界中都比较罕见ꎬ 至今
尚未有关于大团囊虫草以其他种类真菌为宿主的
报道 (Ｓｕｎｇ等ꎬ ２００７)ꎮ
地衣作为一种世界广泛分布的生物ꎬ 很长一
段时间以来被认为是由共生真菌和光合共生物构
成的二元共生体 (Ｓｃｈｗｅｎｄｅｎｅｒꎬ １８６８)ꎮ 越来越多
的研究表明ꎬ 除了地衣共生真菌ꎬ 还有数量众多
的内生真菌和内生细菌生活在地衣体中ꎮ 这些微生
物与地衣共生真菌和光合共生物一起构成一个和
谐的微型生态系统 (Ｂａｔｅｓ 等ꎬ ２０１２ꎻ Ｇｉｒｌａｎｄａ 等ꎬ
１９９７ꎻ Ｓｕｒｙａｎａｒａｙａｎａｎ 等ꎬ ２００５ꎻ Ｕ’Ｒｅｎ 等ꎬ ２０１０ꎬ
２０１２)ꎮ 地衣内生真菌被认为普遍存在于健康的地
衣体内且有大量的未知种类 (Ａｒｎｏｌｄ等ꎬ ２００９)ꎮ
　 　 在研究地衣内生真菌多样性的过程中ꎬ 我们
发现某些种类的大团囊虫草属真菌广泛定植在分
布在不同地区的地衣体内ꎮ
１　 材料和方法
１􀆰 １　 地衣标本的采集
共计 ４２份地衣标本分别采集自中国的五个省份和
南极中国长城站 (表 １)ꎮ 标本采集之后立即放入无菌塑
料袋中密封保存并编号ꎬ 带回实验室后放入 ４ ℃恒温箱
保存ꎬ 内生真菌的分离工作在标本采集之后的 １ 个月内
完成ꎮ 本研究所用的地衣标本现保存于山东师范大学地
衣标本馆ꎮ
表 １　 地衣材料及大团囊虫草属地衣内生真菌信息
Ｔａｂｌｅ １　 Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｄｏｌｉｃｈｅｎｉｃ Ｅｌａｐｈｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｌｉｃｈｅｎ ｓａｍｐｌｅｓ
Ｈｏｓｔ Ｈｏｓｔ Ｖｏｕｃｈｅｒ Ｓｔｒａｉｎｓ ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ􀆰 ｆｏｒ ＩＴＳ
Ｌｅｐｔｏｇｉｕｍ ｓｐ. ２０１０２５０６ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１０２５０６Ｘ ＨＱ３３９８７９
Ｌｅｐｔｏｇｉｕｍ ｓｐ. ２０１０２５５８ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１０２５５８Ａ ＨＱ３３９８８０
Ｌｅｐｔｏｇｉｕｍ ｓｐ. ２０１０２６６６ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１０２６６６ ＨＱ３３９８８１
Ｌｅｐｔｏｇｉｕｍ ｓｐ. ２０１０２６８０ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１０２６８０Ｂ ＨＱ３３９８８２
Ｐａｒｍｅｌｉａ ｓｐ. ２０１１４５６７ꎬ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１１４５６７ｃ ＫＦ７５３８６０
Ｍｅｌａｎｅｌｉｘｉａ ｇｌａｂｒａ ２０１１４７６１ꎬ Ｓｈａａｎｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１１４７６１Ａ ＫＦ７５３８５９
Ｐａｒｍｅｌｉａ ｓｐ. ２０１１７３２１ꎬ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１１７３２１ａ ＫＦ７５３８６１
２０１１７３２１ｂ ＫＦ７５３８６２
Ｐａｒｍｅｌｉａ ｓｐ. ２０１１７３３２ꎬ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１１７３３２ａ ＫＦ７５３８６３
Ｐａｒｍｅｌｉａ ｓｐ. ２０１１７６０８ꎬ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１１７６０８ａ ＫＦ７５３８６７
２０１１７６０８ｂ ＫＦ７５３８６８
Ｐａｒｍｅｌｉａ ｓｐ. ２０１２４２５６ꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２４２５６ｃ ＫＣ２３７３８１
Ｐａｒｍｅｌｉａ ｓｐ. ２０１２４２５９ꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２４２５９ａ ＫＣ２３７３７８
Ｐａｒｍｅｌｉａ ｓｐ. ２０１２４４３８ꎬ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａꎬ Ｃｈｉｎａ
２０１２４４３８ｃ ＫＦ７５３８６５
２０１２４４３８ｅ ＫＦ７５３８６６
２０１２４４３８ｆ ＫＦ７５３８６９
Ｐｈｙｓｃｉａ ａｔｒｏｓｔｒｉａｔａ ２０１２４５２１ꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２４５２１ｂ ＫＣ２３７３７８
２０１２４５２１ａ ＫＣ２３７３７７
Ｐａｒｍｏｔｒｅｍａ ｃｒｉｎｉｔｕｍ ２０１２４７３０ꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２４７３０ｅ ＫＣ２３７３７９
Ｒｉｍｅｌｉａ ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ ２０１２４７９４ꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２４７９４ｄ ＫＣ２３７３８０
Ｕｍｂｉｌｉｃａｒｉａ ｌｏｂｏｐｅｒｉｐｈｅｒｉｃａ ２０１２８４３４ꎬ Ｊｉｌｉｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２８４３４Ｂ ＫＦ７５３８４８
Ｕ􀆰 ｌｏｂｏｐｅｒｉｐｈｅｒｉｃａ ２０１２８４６１ꎬ Ｊｉｌｉｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２８４６１Ｄ ＫＦ７５３８４９
Ｕ􀆰 ｌｏｂｏｐｅｒｉｐｈｅｒｉｃａ ２０１２８４６２ꎬ Ｊｉｌｉｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２８４６２Ａ ＫＦ７５３８５１
Ｕ􀆰 ｅｓｃｕｌｅｎｔａ ２０１２８５０８ꎬ Ｊｉｌｉｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２８５０８ ＫＦ７５３８４５
Ｕ􀆰 ｅｓｃｕｌｅｎｔａ ２０１２８４９０ꎬ Ｊｉｌｉｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２８４９０Ｄ ＫＦ７５３８４３
２０１２８４９０Ｅ ＫＦ７５３８４４
Ｕ􀆰 ｅｓｃｕｌｅｎｔａ ２０１２８５３７ꎬ Ｊｉｌｉｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２８５３７Ｃ ＫＦ７５３８４６
Ｌｅｐｔｏｇｉｕｍ ｓｐ. ２０１２８９４３ꎬ Ｊｉｌｉｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２８９４３Ｂ ＫＦ７５３８５０
Ｌｏｂａｒｉａ ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９４８２ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９４８２ａ ＫＦ７５３８１７
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９４９４ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９４９４ａ ＫＦ７５３８１８
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９５１１ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９５１１ｄ ＫＦ７５３８１９
７４７６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 姜岱峰等: 定植于地衣体内的大团囊虫草新谱系　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　
续表 １　 Ｔａｂｌｅ １ ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ
Ｈｏｓｔ Ｈｏｓｔ Ｖｏｕｃｈｅｒ Ｓｔｒａｉｎｓ ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ􀆰 ｆｏｒ ＩＴＳ
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９５１５ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９５１５ｂ ＫＦ７５３８５２
２０１２９５１５ｄ ＫＦ７５３８５３
２０１２９５１５ｅ ＫＦ７５３８５４
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９５１７ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９５１５ｃ ＫＦ７５３８５５
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９５１９ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９５１７ｂ ＫＦ７５３８２０
２０１２９５１９ａ ＫＦ７５３８２１
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９５６０ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９５６０ｅ ＫＦ７５３８２２
２０１２９５６０ｃ ＫＦ７５３８５６
２０１２９５６０ｆ ＫＦ７５３８５７
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９５６１ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９５６１ａ ＫＦ７５３８２３
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９５６５ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９５６５ａ ＫＦ７５３８４７
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９５７５ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９５７５ｅ ＫＦ７５３８４０
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９８４６ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９８４６ｂ ＫＦ７５３８５８
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９５８７ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９５８７ａ ＫＦ７５３８２４
２０１２９５８７ｃ ＫＦ７５３８６４
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９５９３ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９５９３ｂ ＫＦ７５３８２５
２０１２９５９３ａ ＫＦ７５３８３６
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９５９６ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９５９６ａ ＫＦ７５３８２６
２０１２９５９６ｂ ＫＦ７５３８２７
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９６０９ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９６０９ｂ ＫＦ７５３８２８
２０１２９６０９ｃ ＫＦ７５３８２９
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９６１３ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９６０９ａ ＫＦ７５３８３７
２０１２９６１３ｆ ＫＦ７５３８３０
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９８６１ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９６１３ｈ ＫＦ７５３８３１
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９８６３ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９６１３ｋ ＫＦ７５３８３２
２０１２９６１３ｉ ＫＦ７５３８３８
Ｌ􀆰 ｒｅｔｉｇｅｒａ ２０１２９８７０ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ ２０１２９６１３ｊ ＫＦ７５３８３９
２０１２９６１３ｌ ＫＦ７５３８４１
２０１２９８６１ｂ ＫＦ７５３８３３
２０１２９８６３ｅ ＫＦ７５３８４２
２０１２９８７０ｂ ＫＦ７５３８３４
２０１２９８７０ｃ ＫＦ７５３８３５
Ｕｓｎｅａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ２００７ＥＮＦꎬ Ｇｒｅａｔ Ｗａｌｌ Ｓｔａｔｉｏｎꎬ Ａｎｔａｒｃｔｉｃ ２００７ＥＮＦ７ ＨＱ３３９８８３
１􀆰 ２　 地衣内生真菌的分离和培养
挑选表面无损伤的健康地衣体ꎬ 首先在流动自来水
下冲洗 ５ ｍｉｎꎻ 之后依次浸入 ７５％的乙醇 １ ｍｉｎꎬ ２％的次
氯酸钠溶液 ３ ｍｉｎꎬ ７５％的乙醇 ３０ ｓ进行表面消毒工作 (Ｌｉ
等ꎬ ２００７)ꎮ 消毒后的地衣体自然晾干ꎬ 在无菌环境中切
成 １􀆰 ５ ｍｍ× １􀆰 ５ ｍｍ大小的碎块并移入装有 ＰＤＡ培养基的
培养皿中ꎬ 在 ２０ ℃条件下培养 １个月ꎮ 培养过程中生长
出的真菌菌株均分别移入装有 ＰＤＡ培养基的试管中保存ꎮ
１􀆰 ３　 内生真菌 ＤＮＡ的提取、 ＰＣＲ扩增和测序
真菌 ＤＮＡ通过改进的 ＣＴＡＢ法进行提取 (Ｒｏｇｅｒｓ 和
Ｂｅｎｄｉｃｈꎬ １９８８)ꎮ 使用引物 ＩＴＳ５ ( Ｉｎｎｉｓ 等ꎬ １９９０)、 ＩＴＳ１Ｆ
(Ｇａｒｄｅｓ和 Ｂｒｕｎｓꎬ １９９３) 和 ＩＴＳ４ ( Ｉｎｎｉｓ 等ꎬ １９９０) 进行
ｎｒＤＮＡ ＩＴＳ序列的扩增ꎬ ＰＣＲ 扩增反应程序如下: ９５ ℃
预变性 ３ ｍｉｎꎬ ９４ ℃变性 ３０ ｓ、 ５８ ℃退火 ３５ ｓ、 ７２ ℃延伸
１ ｍｉｎꎬ 该过程重复 ３５个循环ꎬ ７２ ℃后延伸 ８ ｍｉｎꎮ ＰＣＲ
产物使用琼脂糖凝胶回收试剂盒 (ＳＡＢＣ) 进行纯化ꎮ 纯
化后的 ＰＣＲ产物由上海生工生物工程技术服务有限公司
测序ꎮ 测得序列均已提交至 ＧｅｎＢａｎｋ (表 １)ꎮ
１􀆰 ４　 系统发育学分析
使用软件 ＭＡＦＦＴ ｖｅｒｓｉｏｎ７ (Ｋａｔｏｈ 和 Ｓｔａｎｄｌｅｙꎬ ２０１３)
对 ＩＴＳ 序列进行多重比对ꎬ 比对后的序列使用软件
ＭＥＧＡ ５􀆰 ０人工校正 (Ｔａｍｕｒａ等ꎬ ２０１１)ꎬ 系统发育树同
样用 ＭＥＧＡ ５􀆰 ０ 按最小进化距离法 (Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ
ＭＥ) (Ｒｚｈｅｔｓｋｙ和 Ｎｅｉꎬ １９９２) 进行构建ꎬ 可信度结果经
过 １ ０００次重复的自展检验 (Ｆｅｌｓｅｎｓｔｅｉｎꎬ １９８５)ꎮ 进化距
离使用最大组成似然模型 (Ｍａｘｉｍｕｍ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ Ｌｉｋｅｌｉ￣
ｈｏｏｄ) (Ｔａｍｕｒａ等ꎬ ２００４) 进行计算ꎮ
测序得到的内生真菌 ＩＴＳ 序列与 ＧｅｎＢａｎｋ 中已有的
８ 种大团囊虫草属真菌和 ３ 种蛇形虫草属 ( Ｏｐｈｉｏ￣
ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ) 真菌的 ＩＴＳ序列共同构建发育树 (表 ２)ꎮ 大团
囊虫草属和蛇形虫草属均属于蛇形虫草科 (Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙ￣
ｃｉｐｉｔａｃｅａｅ)ꎮ
８４７　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 植 物 分 类 与 资 源 学 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 第 ３７卷
表 ２　 从ＧｅｎＢａｎｋ中下载的大团囊虫草属和蛇形虫草属真菌序列
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｅｌａｐｈｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ａｎｄ Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｄｏｗｎｌｏａｄｅｄ ｆｒｏｍ ＧｅｎＢａｎｋ
Ｓｐｅｃｉｅｓ ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ􀆰 ｆｏｒ ＩＴＳ
Ｅｌａｐｈｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｃａｐｉｔａｔａ ＡＢ０２７３６４
Ｅ􀆰 ｊａｐｏｎｉｃａ ＥＵ０３９８８２
Ｅ􀆰 ｊｅｚｏｅｎｓｉｓ ＡＢ０２７３６５
Ｅ􀆰 ｉｎｅｇｏｅｎｓｉｓ ＡＢ０２７３６８
Ｅ􀆰 ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｏｉｄｅｓ ＪＮ９４３３１６
Ｅ􀆰 ｐａｒａｄｏｘａ ＪＮ９４３３２４
Ｅ􀆰 ｓｕｂｓｅｓｓｉｌｉｓ ＪＸ４８８４７０
Ｅ􀆰 ｖａｌｌｉｆｏｒｍｉｓ ＡＹ２４５６４０
Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ａｇｒｉｏｔｉｄｉｓ ＪＮ０４９８１９
Ｏ􀆰 ｅｍｅｉｅｎｓｉｓ ＡＪ３０９３４７
Ｏ􀆰 ｓｉｎｅｎｓｉｓ ＥＵ５７０９６１
２　 结果和讨论
基于 ｎｒＤＮＡ ＩＴＳ 序列构建的系统发育树显
示ꎬ ６４株地衣内生真菌与大团囊虫草属真菌具
有非常近的亲缘关系 (图 １)ꎮ 地衣内生真菌与 ８
种大团囊虫草属真菌共同构成一个单系分枝ꎬ 并
得到 ９９％的自展值支持ꎬ 分枝内部所有样品之
间的进化距离均不超过 ０􀆰 ０７８ꎬ 内生真菌构成的
进化分枝均为该分枝的子类群ꎮ 表明这 ６４ 株地
衣内生真菌都属于大团囊虫草属ꎮ
６４株内生真菌之间构成了 １１ 个进化谱系
(分枝 Ａ－Ｋ)ꎬ 并且获得高强度自展值支持 (９２％
~９９％)ꎮ 这 １１ 个分枝之间的进化距离为 ０􀆰 ０１３
~０􀆰 ０３８ꎬ 而 ８个已知种类的大团囊虫草属真菌之
间的平均进化距离为 ０􀆰 ０３１ (０􀆰 ０１６~０􀆰 ０７９)ꎬ 因此
这些大团囊虫草属地衣内生真菌有可能属于不同
种类ꎮ 用于分离内生真菌的宿主地衣分别属于 ４
个目 (茶渍目、 地卷目、 黄枝衣目、 石耳目)、 ９
个属ꎬ 其分布地域覆盖了中国东北和西南地区ꎬ
甚至远至南极地区 (表 １)ꎮ 以上的结果表明:
有多个种类的大团囊虫草属真菌定植在地衣体
中ꎬ 并且分布地域极其广泛ꎮ 这些大团囊虫草属
内生真菌与药用型真菌 Ｅ􀆰 ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｏｉｄｅｓ 具有很
近的亲缘关系ꎬ 或许具有潜在的药用价值ꎮ
大团囊虫草属地衣内生真菌的发现也揭示了
内生真菌在地衣共生体中的生态学作用ꎮ 内生真
菌是指定植在宿主内部并且不会对宿主造成可见
损害的一类微生物 (Ｐｅｔｒｉｎｉꎬ １９９１ꎻ Ｓｃｈｕｌｚ和 Ｂｏｙｌｅꎬ
２００５ꎻ Ｓｔｏｎｅ等ꎬ ２０００ꎻ Ｗｉｌｓｏｎꎬ １９９５)ꎬ 事实上ꎬ 很
多植物内生真菌会提高宿主抵御逆境胁迫的能力ꎬ
对宿主的生长起到促进作用 (Ａｒｎｏｌｄ等ꎬ ２００３ꎻ
图 １　 基于大团囊虫草属内生真菌 ｎｒＤＮＡ ＩＴＳ序列构建的系统发
育树ꎬ 其中 ３种蛇形虫草属真菌作为外类群ꎮ 寄生在昆虫体内
的大团囊虫草种类用◆作为标记ꎮ 自展检验高于 ５０％的数值标
记于分枝左侧ꎮ Ａ－Ｋ代表由内生真菌之间构成的 １１个进化分枝
Ｆｉｇ􀆰 １ 　 Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｄｏｌｉｃｈｅｎｉｃ ｌｉｎｅａｇｅｓ ｏｆ Ｅｌａｐｈｏ￣
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Ｋ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｔｈｅ ｃｌａｄｅｓ ｏｆ ｅｎｄｏｌｉｃｈｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ
９４７６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 姜岱峰等: 定植于地衣体内的大团囊虫草新谱系　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　
Ａｒｎｏｌｄ和 Ｅｎｇｅｌｂｒｅｃｈｔꎬ ２００７ꎻ Ｃｏｓｔａ Ｐｉｎｔｏ等ꎬ ２０００ꎻ
Ｍáｒｑｕｅｚ等ꎬ ２００７ꎻ Ｍｅｊíａ等ꎬ ２００８)ꎮ 但是ꎬ 迄今
为止无研究表明地衣内生真菌会有利于宿主的生
长ꎮ 在地衣这个微型生态系统中ꎬ 共生真菌和内
生真菌都属于消费者ꎬ 而内生真菌生长所需营养
物质只可能来源于地衣共生真菌或者光合共生物ꎬ
因此地衣内生真菌与共生真菌之间很有可能是竞
争关系或是寄生关系ꎮ 现在已知的 ２４种大团囊虫
草属真菌绝大多数以真菌作为宿主 (Ｓｕｎｇ 等ꎬ
２００７)ꎬ 说明在地衣体中ꎬ 大团囊虫草可能是以地
衣共生真菌为食物的掠食者ꎮ 由此可见ꎬ 某些地
衣内生真菌的定植会对宿主的生长造成不利影响ꎮ
〔参　 考　 文　 献〕
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０５７　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 植 物 分 类 与 资 源 学 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 第 ３７卷